BC hóa dược DKSJUJDN,CLKEUJOJIEWKNM,MXZMCNKJSBHUFCESKLVKC,MV LKJEIUFEKFN,DM C,MN KSHEFI8WFJLED KJVCN ,MNIEUEWILAKMCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC
BÁO CÁO THỰC TẬP ĐỊNH TÍNH AMOXICILLIN VÀ KIỂM ĐỊNH STREPTOMYCIN SULFAT Họ tên: Đỗ Quang Hưng MSSV: 217720201014 Họ tên: Hồ Huỳnh Kiều My MSSV: 217720201020 Họ tên: Nguyễn Thị Mỹ Nghệ MSSV: 217720201024 Họ tên: Cao Hồng Ngọc MSSV: 217720201025 Lớp: D2021 Buổi thực tập: Sáng Tiểu nhóm: A BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH KHÁNG SINH NHĨM PENICILLIN Thử nghiệm Chỉ tiêu Định tính Vịng β-lactam lactam Phản ứng với H2SO4 đậm đặc Kết Kết luận (Đúng hay không đúng) Tủa xanh ngọc Vàng –> Tạo màu vàng vàng nhạt Tủa xanh ngọc Đúng Đúng Phản ứng với formaldehyd Vàng –> vàng Tạo màu vàng Đúng H2SO4 đậm Phản ứng với thuốc thử Fehling Tạo màu đỏ Góc quay cực riêng Từ +290o đến +315o, tính theo chế phẩm khan Xanh -lactam > tím Đúng (Đạt hay khơng đạt) KIỂM ĐỊNH STREPTOMYCIN SULFAT Thử nghiệm Tên mẫu:……… Chỉ tiêu Kết Định tính Kết luận (Đúng hay khơng đúng) Phản ứng nhóm guanidin Tạo NH3↑ Tạo NH3↑ Đúng Phản ứng nhóm streptose Tạo màu tím Tạo màu tím Đúng Phản ứng nhóm sulfat Tạo tủa trắng Tạo tủa trắng Đúng Định lượng Ít 100 mcg streptomycin base mg chế phẩm (Đạt hay khơng đạt) 593.53 mcg/ mg Đạt Tính tốn kết định lượng Khối lượng cân: p = 70 mg Mật độ quang dung dịch đo: E = 0.2882 B NHẬN XÉT Giải thích màu thực tế quan sát định tính kháng sinh nhóm penicillin? Phản ứng định tính vịng B-lactam lactam có màu xanh ngọc + Vòng B-lactam lactam tác dụng với hydroxylamin tác nhân nhân tạo dẫn chất hydroxamic , dẫn chất tác dụng với Cu(II) tạo tủa màu xanh ngọc Phản ứng với H2SO4 đậm đặc dung dịch formaldehydehyd acid sulfuric : có màu vàng cam: +Do thời lượng đun lâu + Lấy nhiều chế phẩm Phản ứng với thuốc thử Fehling : màu đỏ tím + Kháng sinh bảo quản lâu ngày ,chịu tác động nhiệt độ , độ ẩm, ánh nắng làm mẫu thay đổi ,khơng đạt chuẩn + Thao tác sai ,lượng kháng sinh lấy lần không Giải thích kết thu định lượng streptomycin sulfat? Những điểm cần lưu ý? a Giải thích: Cách tính kết định lượng: Hoạt lực streptomycin sulfat tính theo cơng thức: a 250p đó: a: nồng độ tìm từ công thức a = 594 x E -lactam 5, tính bằng microgram 1ml p: khối lượng mẫu thử lấy ban đầu, tính bằng mg E: mật độ quang dung dịch cần đo (nên lấy giá trị 0,24 < E < 0,56) Hoạt lực streptomycin đạt giá trị phải đạt 100 mcg streptomycin base mg chế phẩm b Những lưu ý tiến hành định lượng: Đun cách thủy phải đủ thời gian 30 phút để thủy phân hồn tồn streptomycin Khơng dùng dư NaOH vì tạo Fe(OH) tủa nâu đỏ làm sai lệch kết Mẫu trắng cần phải tiến hành song song cùng điều kiện Sau cho phèn sắt amoni, lắc để yên 15 phút để ổn định màu Cần tráng cuvet trước thêm dung dịch mẫu cần phân tích Lau cuvet bằng khăn giấy trước cho máy đo, mặt láng cần lau cẩn thận (chấm nhẹ) để tránh trầy xước Khi cầm cuvet phải cầm mặt nhám, không nên đụng vào mặt láng để tránh lưu lại vân tay Đặt cuvet vào máy bằng lực vừa phải chạm đến đáy giá đỡ, không mạnh để tránh làm vỡ cuvet Nên để mẫu ở nhiệt độ phòng trước cho vào máy đo Đặt cuvet cho mặt nhám hướng vào người thực để ánh sáng qua mặt láng, tráng ảnh hưởng đến kết thực Khi thực cân chế phẩm phải cân xác phải dùng cân phân tích C TRẢ LỜI CÂU HỎI Đề nghị chế phản ứng giữa amoxicillin với thuốc thử Fehling -lactam Amoxcillin tạo phức với Cu2+ -lactam > tạo phức màu tím (các nhóm chức tham gia tạo phức: amin bậc O khung beta-lactam lactam) -lactam Màu phản ứng thay đổi theo thời gian: Tím -lactam > tím đỏ -lactam > đỏ tím -lactam > xanh đen -lactam > xanh lục (màu sắc thay đổi tùy lượng chế phẩm cho vào ban đầu) -lactam Ngoài amoxicillin có tính khử, cịn Cu2+có tính oxi hóa -lactam > nên để lâu amoxicillin bị oxy hóa thành sản phẩm có màu -lactam -lactam Giải thích phản ứng định tính amoxicillin với hydroxylamin? Vịng B-lactam lactam tác dụng với Hydroxylamin tác nhân nhân tạo dẫn chất hydroxamic, dẫn chất tác dụng với Cu(II) tạo tủa màu xanh ngọc Các tiêu chuẩn kiểm tinh khiết amoxicillin trihydrat theo DĐVN V? Độ màu sắc dung dịch pH: từ 3,5 đến 5,5 Góc quay cực riêng: Từ +290° đến +315°, tính theo chế phẩm khan Tạp chất liên quan: N,N-lactam Dimethylanilin: không 20 phần triệu Nước: 11,5% đến 14,5% Tro sulfat: khơng q 1,0% Vai trị phèn sắt amoni H2SO4 định lượng streptomycin sulfat phương pháp nêu bài thực tập? Cung cấp môi ion Fe 3+ cho mơi trường trung hịa NaOH Streptomycin sulfat bị thủy phân NaOH tạo maltol chất phản ứng với muối Fe3+ tạo phức có màu tím bền xác định nồng độ bằng phương pháp đo quang Phép định lượng streptomycin sulfat bài xác hoạt lực kháng sinh này hay khơng? Khơng đủ xác, vì phương pháp định lượng bằng việc phá hủy cấu trúc streptomycin sulfat, nên có tạp chất có cấu trúc tương tự định lượng Tra cứu Dược điển Việt Nam V, Dược điển Anh 2016 và Dược điển Mỹ USP 41, trình bày giống và khác nguyên tắc, cách thực việc kiểm định kháng sinh sau đây: Khán g sinh DĐVN V BP 2016 USP 41 Penicillin G Định tính Thử tinh khiết A Phổ hấp thụ hồng ngoại (Phụ lục 4.2) chế phẩm phải phù hợp với phổ hấp thụ hồng ngoại benzylpenicilin kali chuẩn B Tiến hành sắc ký lớp mỏng theo định tính penicillin (Phụ lục 8.2) C Phản ứng màu: Chế phẩm phải cho phản ứng B phép thử phản ứng màu penicilin cephalosporin (Phụ lục 8.3) D Chế phẩm phải cho phản ứng (A) kali (Phụ lục 8.1) pH: Từ 5,5 đến 7,5 (Phụ lục 6.2) Hịa tan 2,0 g chế phẩm nước khơng có carbon dioxyd (TT) pha loãng thành 20 ml với cùng dung mơi Góc quay cực riêng: Từ +270° đến +300°, tính theo chế phẩm làm khơ (Phụ lục 6.4) Hịa tan 0,500 g chế phẩm nước khơng có carbon dioxyd (TT) pha lỗng thành 25,0 ml với cùng dung mơi Độ hấp thụ: Hịa tan 94,0 mg A Phổ hấp thụ hồng ngoại , Phụ lục II A , phù hợp với phổ benzylpenicillin kali EPCRS benzylpenicillin natri EPCRS thích hợp B Tiến hành phương pháp sắc ký lớp mỏng, Phụ lục III A C Phản ứng nhường Một đặc trưng muối kali phản ứng Một đặc trưng muối natri , Phụ lục VI , thích hợp A Phổ IR/B Cho phản ứng định tính chung natri Độ chua độ kiềm: pH dung dịch chứa benzylpenicilin tương đương 10,0% w / v, 5,5 đến 7,5, Phụ lục VL Những chất liên quan: Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng , Phụ lục III D , sử dụng dung dịch sau chuẩn bị trước sử dụng (1) Hòa tan lượng chất chứa hộp kín có chứa tương đương 80 mg benzylpenicillin 20 mL nước , lắc đều, lọc sử dụng phần nước lọc (2) 0,0040% trọng lượng / thể tích Tinh thể: đạt yêu cầu pH: 5,0-lactam 7,5 60 mg/mL Mất khối lượng làm khô: