Xác định một số đặc tính sinh học của vi khuẩn pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tại cao bằng và lựa chọn vắc xin phòng bệnh

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐẶNG NGỌC LƢƠNG XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU, BÒ TẠI CAO BẰNG VÀ LỰA CHỌN VẮC XIN PHỊNG BỆNH LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC NƠNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Thái Nguyên – năm 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Tai ngay!!! Ban co the xoa dong chu nay!!! http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Chăn nuôi trâu bò Việt Nam năm qua có bước phát triển đáng kể nhằm cung cấp thịt sữa cho nhu cầu thực phẩm người dân; sức kéo cho nhu cầu sản xuất nông nghiệp, tiểu thủ công nghiệp cung cấp nguyên vật liệu cho công nghiệp chế biến, đáp ứng nhu cầu ngày tăng xã hội Bên cạnh phát triển đó, ngành chăn ni trâu bị ln phải đối mặt với bệnh truyền nhiễm bệnh ký sinh trùng, có bệnh Tụ huyết trùng trâu bị Bệnh tụ huyết trùng trâu, bò thể bại huyết (Hemorrhagic Septicemia) bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm, xảy hầu hết lứa tuổi trâu, bò Hàng năm địa bàn tỉnh miền núi phía Bắc nước ta, báo cáo tình hình bệnh tụ huyết trùng xảy trâu, bò cho thấy thiệt hại kinh tế to lớn Theo bào cáo tổng kết công tác thú y hàng năm địa phương kết nghiên cứu Đặng Xuân Bình cs (2010) [2]; tỉnh Hà Giang năm 2008 có 276 trâu, 157 bị chết bệnh tụ huyết trùng; tương tự vậy, tỉnh Cao Bằng năm 2008 có 455 trâu, bị chết năm 2009 có gần 400 trâu bị chết bệnh tụ huyết trùng Để khống chế bệnh, có số loại vắc xin tụ huyết trùng trâu, bò quan nghiên cứu, chế tạo, sử dụng để tiêm phòng cho trâu, bò bênh liên tục xảy ra, đặc biệt địa bàn tỉnh miền núi phía Bắc Đinh Duy Kháng cs (2000) [14] cho biết: Việc tiếp tục phân lập xác định vi khuẩn Pasteurella cần thiết để làm rõ đặc điểm dịch tễ bệnh để tìm quy luật lưu hành, tính gây bệnh vi khuẩn để sản xuất ứng dụng vắc xin phù hợp vùng, hạn chế tiến tới toán bệnh Lê Văn Tạo cs (1998)[32] khuyến cáo: Nên tiêm phòng bệnh tụ huyết trùng trâu bò đạt tỷ lệ cao vắc xin tương đồng kháng nguyên với chủng vi khuẩn Pasteurella gây bệnh địa phương Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Về đáp ứng miễn dịch số loại vắc xin sử dụng để phòng bệnh tụ huyết trùng trâu bò nước ta, Hoàng Xuân Nghinh cs (2004) [22] trao đổi: Hiện Việt Nam có hai loại vắc xin sản xuất nước địa phương sử dụng Tuy nhiên tỷ lệ trâu bò mắc bệnh chết không ngừng gia tăng dẫn tới phải suy nghĩ xem có phải chất lượng kháng nguyên vắc xin chưa chuẩn hố hay đặc tính kháng ngun vi khuẩn Pasteurella vùng có khác Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn sản xuất, vào sở khoa học lực quan nghiên cứu, tiến hành đề tài “Xác định số đặc tính sinh học vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng lựa chọn vắc xin phòng bệnh” Mục tiêu nghiên cứu - Xác định đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu bò huyện, thị xã thuộc tỉnh Cao Bằng - Khảo sát lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida trâu, bò khỏe trâu, bò nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Giám định đặc tính sinh vật hóa học, yếu tố gây bệnh serotype kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập - Đánh giá mức độ tương đồng kháng nguyên vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella phân lập thực địa Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài * Ý nghĩa khoa học: - Bổ sung tư liệu đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò - Bổ sung tư liệu kết phân lập, giám định đặc tính sinh vật hóa học, yếu tố độc lực kết xác định serotype kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) * Ý nghĩa thực tiễn: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn - Cung cấp tư liệu thực tế serotype kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida thực địa Cao Bằng - Cơ sở để lựa chọn vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bị có khả bảo hộ cao - Góp phần khống chế bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng địa bàn tỉnh miền núi phía Bắc * Những điểm đề tài - Bổ sung số đặc điểm dịch tễ lưu hành vi khuẩn Pasteurella trâu, bò khỏe; xây dựng đồ dịch tễ bệnh tụ huyết trùng địa bàn tỉnh Cao Bằng - Phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida từ trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng, so sánh tự tương đồng kháng nguyên với trâu bị khỏe mang trùng - Xác định tình trạng miễn dịch chủ động tự nhiên kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida trâu, bò ổ dịch - Đánh giá an toàn khả đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm số loại vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò lưu hành Việt Nam Đối tƣợng địa điểm nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Trâu, bò lứa tuổi, vi khuẩn Pasteurella multocida - Địa điểm nghiên cứu: Đề tài thực tỉnh Cao Bằng, Bộ môn Công nghệ Vi sinh, Viện KHSS - Đại học Thái Nguyên, Viện Thú y quốc gia, Trung tâm chẩn đoán thú y - Cục thú y Việt Nam Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc 1.1.1 Trên giới Bệnh tụ huyết trùng Bollinger phát lần bò năm 1878 Munich (Đức) Những năm bệnh phát khắp nơi giới, nhiều loài gia súc, gia cầm Năm 1885, Kitt phân lập vi khuẩn Khi nghiên cứu vi khuẩn tụ huyết trùng gây bệnh loài gia súc, nhà khoa học thấy giống tính chất gây bệnh, tương đồng kháng nguyên, khác tính gây bệnh cho lồi vật Năm 1887, Trevisan đề nghị đặt tên cho vi khuẩn Pasteurella để ghi nhớ cơng lao Louis Pasteur, người có nhiều đóng góp nghiên cứu phát loại vi khuẩn (De Alwis, 1992) [50] Vi khuẩn pasteurella gây bệnh cho nhiều loài gia súc nên tên chúng gắn với tên loài vật mà chúng gây bệnh: Pasteurella suiseptica gây bệnh lợn Pasteurella boviseptica gây bệnh bò Pasteurella oviseptica gây bệnh dê, cừu Pasteurella aviseptica gây bệnh gà… Đến năm 1939, Rosenbush Merchant [79] đề nghị đặt tên cho vi khuẩn Pasteurella multocida, để khả gây bệnh cho nhiều loài vật chúng, tên cơng nhận thức giới sử dụng ngày Lignieres (1900)[62] cho rằng: bệnh tụ huyết trùng có lồi vật nuôi khác Hai thuật ngữ bệnh Haemorrhagic septicaemia Pasteurellosis xem đồng nghĩa Tuy nhiên, gần theo qui ước tổ chức FAO (FAO/WHO/CIF, 1970), tài liệu quốc tế súc sản, hai thuật ngữ dùng phân biệt, Haemorrhagic septicaemia dùng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn bệnh P multocida thuộc serotype I Roberts gây ra, Pasteurellosis dùng bệnh vi khuẩn Pasteurella gây Ở Châu Á, bệnh tụ huyết trùng trâu, bò P multocida gây thường hai thể chủ yếu: Nhiễm trùng máu - xuất huyết (Haemorrhagic septicaemia - HS) viêm phổi bò (Bovine pneumonic pasteurellosis) Ngày nay, sau trăm năm kể từ phát lần đầu, P multocida nguyên nhân gây bệnh tụ huyết trùng cho nhiều lồi gia súc gia cầm Tuy có tính thích nghi gây bệnh loài vật khác nhau, P multocida có đặc tính giống 1.1.2 Ở Việt Nam Bệnh tụ huyết trùng Việt Nam phát vào năm cuối kỷ 19: Cudamie thông báo bệnh trâu thuộc tỉnh Bà Rịa Long Thành năm 1868, sau Gemain (1869) phát bệnh Gị Cơng, Yersin phát bệnh ở tỉnh miền Trung vào năm 1889-1895 Năm (1901) Shein phương pháp phân lập tiêm truyền qua động vật thí nghiệm xác nhận ổ dịch trâu, bò xảy Tây Ninh vi khuẩn P multocida (Phan Đình Đỗ Trịnh Văn Thịnh, 1958) [4]) Theo Đoàn Thị Băng Tâm (1987)[31], Việt Nam bệnh thường xảy Nam đặc biệt miền tây Nam bộ, vào năm 1910, 1919, 1920, 1933, 1935 dịch xảy lớn mạnh Bệnh gây thiệt hại lây lan nhiều vùng đất trũng, thấp, khí hậu ẩm ướt Bùi Quý Huy (1998) [11] cho biết: Trước bệnh tụ huyết trùng xảy mạnh tỉnh phía Nam xảy lẻ tẻ tỉnh phía Bắc Trong năm 70 có 80% số ổ dịch tụ huyết trùng 84% số thiệt hại gia súc bệnh tụ huyết trùng thuộc tỉnh phía Nam Đến năm 90 phân bố địa lý bệnh nghiêng tỉnh phía Bắc, số địa phương có dịch tụ huyết trùng tăng lên nhiều, hàng năm có 20 - 25 tỉnh thơng báo có bệnh lưu hành Ở nước ta khí hậu nóng ẩm, miền Bắc - Trung - Nam có điều kiện khí hậu hệ sinh thái khác Các tác giả (Nguyễn Vĩnh Phước Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn (1978)[25], Nguyễn Ngã (1996)[21], Nguyễn Thiên Thu (1996)[34]) nhận định bệnh tụ huyết trùng trâu, bò xảy thường trùng với mưa vùng kéo dài đến hết mùa mưa Nhiều tác giả sâu nghiên cứu đặc tính sinh vật hoá học vi khuẩn P multocida, phương pháp chẩn đốn, phân lập chế tạo vắc xin phịng bệnh Trần Xuân Hạnh Tô Thị Phấn (2007)[8] tiến hành nghiên cứu số đặc tính vi khuẩn P multocida phân lập từ trâu, bò, lợn Phan Thanh Phượng (1986 - 1990)[28] nghiên cứu, chế tạo sử dụng vắc xin nhũ hố cơng nghệ lên men sục khí để phịng chống bệnh tụ huyết trùng trâu, bị, lợn gia cầm có nhiều ưu việt vắc xin cũ Dương Thế Long (1995)[18] phân lập vi khuẩn P multocida gây bệnh cho loài vật ni (trâu, bị, lợn gà) tỉnh Sơn La Nguyễn Ngã (1996)[21], Nguyễn Thiên Thu (1996)[34] phân lập vi khuẩn P multocida từ trâu, bò mang trùng khu vực miền Trung xác định tính tương đồng kháng nguyên chủng vi khuẩn phân lập với chủng vắc xin Iran Trong năm gần có số nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng Bùi văn Dũng (2000) [3] nghiên cứu tình hình bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn P multocida phân lập từ dịch ngốy mũi trâu, bị khỏe tỉnh Lai Châu Hoàng Đăng Huyến (2004) [12] nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, yếu tố ảnh hưởng đến bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Bắc Giang Nguyễn Đăng Minh (2005) [20] nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh THT xác định tỷ lệ mang trùng Pasteurella đàn trâu, bò tỉnh Hà Tây Đỗ Ngọc Thúy cs (2007) [35] ứng dụng kỹ thuật PCR để xác định Type chủng vi khuẩn P multocida phân lập từ vật nuôi 1.2 Dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng 1.2.1 Nguồn bệnh phương thức lây lan Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguồn lây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, lợn gia cầm bị bệnh mang trùng Trong thể gia súc khỏe mạnh, P multocida điều kiện định, vi khuẩn thường tồn đường hô hấp vật chủ, quan hệ cộng sinh Khi sức đề kháng thể giảm, vi khuẩn tăng độc lực tác động gây bệnh Cho đến không rõ vi khuẩn tồn cách truyền số dãy cá thể quần thể hay cịn tồn lâu dài số Có nhiều cách lây bệnh khác nhau: Nhiễm qua đường hô hấp, đường tiêu hóa, qua vết xước da, bệnh lây từ ốm sang khỏe qua tiếp xúc Bệnh lây lan việc giết mổ gia súc ốm, chó mèo số côn trùng hút máu ruồi, mịng… vật mơi giới truyền mầm bệnh xa (Nguyễn Vĩnh Phước, 1978) [25] Trong giai đoạn đầu bệnh, vật lại được, vi khuẩn từ nước dãi, phân, nước tiểu xung quanh Ổ dịch rộng hay hẹp tùy theo điều kiện tồn vi khuẩn sức miễn dịch đàn (Phan Thanh Phượng, 1994) [29] 1.2.2 Loài mắc bệnh Trong tự nhiên hầu hết loài gia súc, gia cầm, lồi có vú lồi chim mẫn cảm với bệnh Theo Lignieres (1900) [62] có dạng bệnh tụ huyết trùng khác nhau: Ở gà, trâu, bị, lợn, cừu, dê, ngựa chó, dạng bệnh thấy thỏ Bệnh thấy trâu, bị, lợn, thỏ, chó, mèo, hươu, ngựa, chồn, khỉ, dê cừu (Carter, 1959[44]) Bệnh thấy bò rừng, nai, sơn dương, lợn rừng, thỏ rừng, voi, lạc đà báo tuyết Hymalaya (De Alwis, 1982[48]) Nhiều tác giả khẳng định: Nơi có bệnh tụ huyết trùng trâu, bị người ta phát bệnh động vật hoang dã De Alwis (1982) [48] cho loài vật cảm nhiễm mạnh bệnh tụ huyết trùng trâu, bị trâu mẫn cảm bị Tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết loài vật với bệnh tụ huyết trùng trâu, bò phụ thuộc vào nhiều yếu tố mức độ cảm nhiễm vùng, mức độ bùng nổ vụ Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn dịch trước đó, mức độ miễn dịch tồn đàn, đặc biệt phụ thuộc vào lứa tuổi mắc bệnh Ở Việt Nam, trâu dễ bị nhiễm mắc bệnh nặng bị Trâu, bị rừng mắc bệnh (Đồn Thị Băng Tâm, 1987) [31] Trâu thường chết gặp thể cấp cấp tính 1.2.3 Tuổi mắc bệnh De Alwis (1984)[49] cho biết mức độ cảm nhiễm động vật non mạnh động vật già, kết nghiên cứu tác giả cho thấy bò trâu tỷ lệ mắc bệnh lứa tuổi tháng 3,5%, trâu, bị lứa tuổi từ tháng đến năm 30 - 32%, ngược lại trâu, bò năm tuổi tỷ lệ mắc bệnh chiếm từ - 5% toàn đàn Nghiên cứu cho thấy tỷ lệ chết trâu, bò ổ dịch 84 91% tập trung vào lứa tuổi tháng đến 18 tháng Bệnh xảy hầu hết lứa tuổi, bú mẹ mắc trưởng thành Trâu, bò 1-3 tuổi dễ mắc trâu bò già mắc tỷ lệ chết cao Trâu bò béo, khỏe, trẻ dễ mắc bệnh tỷ lệ chết cao Bê, nghé tháng tuổi mắc bệnh (Bùi Quý Huy, 1998) [11] Cao Văn Hồng (2002) [9] Đắk Lắk cho thấy lứa tuổi cảm nhiễm với bệnh 36 tháng tuổi Hoàng Đăng Huyến (2004) [12] cho biết Bắc Giang trâu, bò nhỏ năm tuổi mẫn cảm với bệnh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.2.4 Mùa vụ phát bệnh Bệnh tụ huyết trùng phụ thuộc lớn vào thời tiết, khí hậu Mustafa cs (1978)[64 ] nghiên cứu ảnh hưởng mùa vụ tới bệnh tụ huyết trùng nhận xét bệnh thường liên quan tới điều kiện khí hậu ẩm ướt Theo Yeo Mukhtar (1992)[83] nghiên cứu dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng phải quan tâm đến điều kiện thời tiết, khí hậu địa lý vùng yếu tố ảnh hưởng đến tồn phát triển mầm bệnh môi trường sinh sống động vật cảm nhiễm Mùa phát bệnh tụ huyết trùng nước Châu Á tập trung vào tháng mùa khác năm Ở Lào bệnh phát từ tháng đến tháng 8; Ở Pakistan bệnh xảy rải rác quanh năm song thường tháng đến tháng hàng năm (FAO, 1991[54]) Ở đảo Java (Indonesia) bệnh xuất vào cuối mùa khô, đầu mùa mưa (Natalia cs, 1992[71]), bệnh xảy tháng 8, Malaysia (Yeo Mukhtar, 1992[83]) Yeo Mukhtar (1992)[83] theo dõi dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò đảo Sabah Malaysia từ 1983 - 1991 cho biết số lượng ổ dịch số lượng trâu, bò chết hàng năm huyện khác nhau: Một số huyện xảy dịch từ tháng giêng đến tháng 3, phần lớn lại xảy dịch từ tháng đến tháng 11 Từ số liệu theo dõi mình, tác giả so sánh vùng đất nước loài vật mắc bệnh, tuổi mắc bệnh, thời gian xảy bệnh cho có khác điều kiện thời tiết khí hậu có khác vùng, đồng thời phương thức chăn nuôi vùng khác Từ kết nghiên cứu cho thấy địa phương, quốc gia nghiên cứu dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng trâu, bò phải quan tâm đến điều kiện thời tiết, khí hậu địa lý vùng, yếu tố ảnh hưởng tới tồn tại, phát triển mầm bệnh môi trường sinh sống động vật cảm nhiễm Ở nước ta bệnh xuất khắp nơi, có ổ dịch nhỏ, lẻ tẻ bắt đầu vào mùa mưa, khí hậu nóng ẩm bệnh lây lan thành dịch, Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 29 Phan Thanh Phượng (1994), Ba bệnh đỏ lợn, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 59-91 30 Quy trình kỹ thuật kiểm nghiệm vắc xin dùng thú y (1994) NXB Nông nghiệp Hà Nội 31 Đoàn Thị Băng Tâm (1987), Bệnh động vật nuôi, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 1, tr 51 - 79 32 Lê Văn Tạo cs (1998), Khả gây bệnh thực nghiệm chủng Pasteurella sp phân lập từ dê nuôi tỉnh miền núi phía bắc, tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, số - 1998 33 Nguyễn Như Thanh (2001), Dịch tễ học thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 34 Nguyễn Thiên Thu (1996), Nghiên cứu số đặc tính vi sinh vật kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu, bò mang trùng khu vực miền Trung Việt Nam, Luận án Phó tiến sỹ khoa học Nơng nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội 35 Đỗ Ngọc Thúy, Âu Xuân Tuấn, Cù Hữu Phú, Lê Xuân Tạo (2007), “Ứng dụng kỹ thuật PCR để định Type giáp mô chủng vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ vật nuôi”, Tạp chí KHKT thú y, tập XIV, số 36 Nguyễn Đình Trọng (2002), Phân lập, xác định đặc tinh sinh học vi khuẩn Pasteurella sp trâu, bò ni tỉnh Bắc Kạn, lựa chọn vắc xin phịng bệnh thích hợp, Luận án Tiến sỹ khoa học Nơng Nghiệp, Hà nội 37 Đỗ Quốc Tuấn (2008), Nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng lợn số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam, Luận án Tiến sỹ Nơng nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội II Tài liệu tham khảo nƣớc 38 Bain R V S., De Awis M C L., Carter G R and Guppa B K (1982), “Haemorrhagic septicaemia”, Animal Production and Health, Paper No 33, FAO, Rome Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 39 Bahnemann H G (1990), Vắc xin, No 8, pp 299-303 40 Bauer A W., Kirby W M M., Sherris J C., Turck M (1966), Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method Am J Clin Pathol; Vol45, pp 493-496 41 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings company 42 Carter G R (1952), “Type specific capsular antigens of Pasteurella multocida”, Canadian Journal of Medican Science, 30, pp 48-53 43 Carter G R (1955), “Studies on Pasteurella multocida I A Haemagglutination test for idetification of Serological types”, Americal Journal Veterinary Research, 16 44 Carter G R (1959), “Studies on Pasteurella multocida VI, a serological types from species other cattle and swine”, American Journal of Veterinary, Reseach 21, pp 173-175 45 Carter G R (1961), “A new serological type of Pasteurella multocida from central Africa”, Veterinary Record, 73, pp 1052 46 Carter G R (1967), “Pasteurellosis: Pasteurella multocida and Pasteurella haemolytica”, In Advences in Veterinary Science, 11, 331 Academic press New York 47 Carter G R (1984), Pasteurella, Yersinia and Francisella page: 111 - 121, in Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology th ed (Carter G R ed) Charles C Thomas Publisher Springfield 48 De Alwis M C L (1982), “Pasteurella multocida serotype 6:B infection from an elephant”, Sri Lanka Veterinary Journal, 18, pp 28 49 De Alwis M C L (1984), Haemorrhagic septicaemia in cattle and buffaloes, Rev sci tech Off int Epiz., 3, pp 707-730 50 De Alwis M C L (1992a), “A review, Pasteurellosis in production Animal”, ACIAR proceedings, No 43, pp 11-20 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 De Alwis M C L and Sumanadasa MA (1982), “Naturally acquired immunity to haemorrhagic septicaemia among cattle and buffaloes in Sri Lanka”, Tropical Animal Health and Production, 14, pp 27-28 52 Donachie W (2000), Pasteurellosis Diseases of the respiratory sytem Diseases of sheep, Third Edition by W.B Martin and I.D Aitken Blackwell Science Ltd, pp 191-198 53 Egerton J R (2005), Gene-based vắc xin development for improving animal production in developing country, Application of gene-based technologies for improving animal production and health in developing countries, Edited by Harinder P S: makkar and Gerrit J Viljoen, pp 199210 54 FAO (1991), Proceeding of the FAO/APHHCA workshop on haemorrhagic septicaemia, February, Kandy, Sry LanKa 55 Gupta B K (1980) Int sym On dis Of Liv., 13, pp 45-53 56 Heddleston K L (1966), “Immunologic and serologic comparison in the poultry with analysis of biochemical activity in Pasteurella multocida strains during three years”, Cornell Veterinary, V52, No2, pp 235-241 57 Heddleston K L., Roberts P A and Ritchie A E (1966), “Immunizing and toxin properties of particulate antigens from two immunogenic types of Pasteurella multocida of A vian origin”, Journal of Immulogy, 96, pp 124-133 58 Heddleston K L., Gallagher J E and Roberts P A (1972), “Fowl cholera: Gel diffusion precision test for serotyping Pasteurella multocida avian species”, Avian disease, 16, pp 925-936 59 Horadagoda N U., Hodgson J C., Monon G M., Eckersall P D (2001), “Role of endotoxin in the pathogenesis of heamorrhagic septicaemia in the buffalo”, Micro Pathog 33 (3), pp 171-179 60 Hunt M L., Adler B., Townsend K M (2000), “The molecular biology of Pasteurella multocida”, Vet Microbiology, 72(1), pp 3-25 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 Lane E P, Kock N D, Hill F W G and K Mohan (1992), “An outbreak of haemorrhagic septicaemia (septicaemic pasteurellosis) in cattle in Zimbabwe”, Tropical Animal Health and Production, Volume 24, Number / June, 1992, pp 97-102 62 Lignères J M (1900), Contribution L’étude et la classification des septicaemia haemorrhagique des Pasteurella Ann Inst Pasteur (Paris), 15:734 63 Mohammad R H H., Masood J., Masood R.S.A, Arya R and Hamid J (2006), Occurrence of Pasteurella multocia in the nasopharynx of healthy buffaloses and their immunity statutus, Bull Vet Inst Pulawy, vol 50, p.435438 64 Mustafa A A., Ghalib H W and Shigidi M T (1978), “Carrier rate of Pasteurella multocida in cattle associated with an outbreak of haemorrhagic septicaemia in Suda”, British Veterinary Journal, 134, p 375-378 65 Nakai T and Kume K (1987), “Purification of three fragments of the dermonecrotic toxin from Pasteurella multocida”, Research in Veterinary, Science 42, pp 232-237 66 Namioka S (1978), “Pasteurella multocida: Biochemical characteristic and serotype”, In: Methods in microbiology, vol.10, Academic Press New York, 11, pp 274 - 292 67 Namioka S and Murata M (1961a), “Serological studies on Pasteurella multocida I A simplified method for capsule typing of the organism”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 498-507 68 Namioka S and Murata M (1961b), “Serological studies on Pasteurella multocida II Charaeteristic of somatic “O” antigen of the organism”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 507-512 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 69 Namioka S and Murata M (1961c), “Serological studies on Pasteurella multocida III: '0' antigen analysis of cultures isolated from various animals”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 522-528 70 Namioka S and Murata M (1964), “Serological studies on Pasteurella multocida V: Some epizootiological findings resulting from '0' antigen analysis”, Cornell Veterinarian, Vol 54, pp 520-534 71 Natalia L., Patten B and Syansudin A (1992), “Evaluation of bovine antibody responses to haemorrhagic septicaemia vắc xin using ELISA and PMPT Pasteurellosis in production animal international workshop”, Sponsores by ACIAR proceeding, No 43, Indonesia, 10 - 13 August, pp 219-223 72 OIE Manual (2008), Principles of Veterinary Vắc xin Production, Chapter 1.1.8 73 Price G H and Smith J E (1966), “Antigenic studies on Pasteurella multocida using immunodiffusion techniques I Identification and nomenclature of the soluble antigens of a bovine Haemorrhagic septicaemia strain”, Journal of comparative Pathology, 76, pp 303-314 74 Quinn P J., Carter M E., Markey B K., Carter G R (1994), Pasteurella species In: Quinn, P.J; Carter, M.E; Markey, B.K; Carter, G.R (Eds.), Clinical Veterinary Microbiology Mosby, Edinburgh, pp.254-259 75 Ramdani, Dawkins H J., Johnson R B., Spencer T L., Adler B (1990), “Pasteurella multocida infections in mice with refence to haemorrhagic septicaemia in cattle and buffalo”, Immunol Cell Biol 68(1), pp 57-61 76 Reed L.J., Muench H (1938) "A simple method of estimating fifty percent endpoints", The American Journal of Hygiene 27: 493-497 77 Rimier R B and Rhoades I R (1987), “Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella multocida”, Journal of Clinical Microbiology, 25, pp 615-618 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 78 Robers R S (1947), “An immunologycal study of Pasteurella septicaemia”, Journal of comparative pathology, 57 79 Rosenbush C T and Merchant I A (1939), “A study of the Haemorrhagic septicaemia Pasteurella”, Journal of Bacteriology, 37, pp.69 80 Seleim R S (2005), “Review: Major pathogenic components of Pasteurella multocida and Mannhemia (Pasterella) haemolytica isolated from animal origin”, Bacteriology Department, Animal Health Research Institute, Nadi El-Seed St Dokki, 12311 Cairo, Egypt 81 Smith H (1990), “Pathogenicity and the microbe in vivo”, Journal of General Microbiology, Vol136, pp.371 - 383 82 Van Oirschot J T (1993), “Efficacy of porcine vắc xins”, Keynot lectures, pp.15-19 83 Yeo B K and Mokhtar (1992), “Haemorhagic septicaemia of buffalo in sabah, Malaysia, Pasteurellosis in Production Animal”, proceedings No43, pp.112-115 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ACIAR i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng: - Các kết nghiên cứu luận văn trực tiếp nghiên cứu hướng dẫn PGS.TS Đặng Xuân Bình, giúp đỡ cán Trung tâm chẩn đoán thú y - Cục Thú y - Các số liệu kết trình bày luận văn hoàn toàn trung thực, khách quan, rút từ tình hình thực tế Cao Bằng năm qua chưa sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 10 năm 2012 Tác giả Đặng Ngọc Lương Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt năm học tập, với nỗ lực thân, giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể, đến luận văn tơi hồn thành Nhân dịp này, cho phép tơi tỏ lịng biết ơn cảm ơn chân thành tới: - PGS.TS Đặng Xuân Bình - Giám đốc trung tâm liên kết đào tạo quốc tế - Đại học Nông Lâm Thái Nguyên - Người thầy uyên bác, mẫu mực, tận tình chu đáo cổ vũ tinh thần, động viên, hướng dẫn bảo cho suốt q trình nghiên cứu hồn thành luận văn - Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, khoa Sau Đại học, khoa Chăn nuôi - Thú y, thầy cô giáo giúp đỡ, tạo điều kiện để học tập, tiếp thu kiến thức chương trình học - Các cán chi cục thú y tỉnh Cao Bằng, cán thú y trạm thú y huyện tỉnh Cao Bằng, đặc biệt cán thú y - trạm thú y huyện Hòa An - Cán trung tâm chẩn đoán thú y - Cục thú y Việt Nam Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên giúp đỡ tơi vượt qua khó khăn suốt trình học tập, nghiên cứu, thực đề tài Một lần xin bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới tập thể, cá nhân tạo điều kiện giúp đỡ hồn thành chương trình học tập Thái Ngun, tháng 10 năm 2011 Tác giả Đặng Ngọc Lƣơng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình MỞ ĐẦU Đặt vấn đề 2 Mục tiêu nghiên cứu 3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Đối tượng địa điểm nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Ở Việt Nam 1.2 Dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng 1.2.1 Nguồn bệnh phương thức lây lan 1.2.2 Loài mắc bệnh 1.2.3 Tuổi mắc bệnh 1.2.4 Mùa vụ phát bệnh 10 1.2.5 Vùng phát bệnh 11 1.3 Đặc tính sinh học mầm bệnh 12 1.3.1 Phân loại 12 1.3.2 Hình thái đặc tính ni cấy 12 1.3.3 Đặc tính sinh hóa 15 1.3.4 Kháng nguyên vi khuẩn 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.3.5 Độc lực vi khuẩn P multocida 19 1.3.6 Sức đề kháng 21 1.4 Đặc điểm bệnh tụ huyết trùng trâu, bò 21 1.4.1 Cơ chế sinh bệnh 23 1.4.2 Biểu hiện đặc trưng trâu bò mắc bệnh tụ huyết trùng 23 1.5 Những hiểu biết vắc xin phòng bệnh 25 Chƣơng NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Nội dung nghiên cứu 27 2.1.1 Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu bò Cao Bằng 27 2.1.2 Phân lập xác định đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng 27 2.1.3 Đánh giá hiệu lực bảo hộ số loại vắc xin phòng bệnh tụ huyết trung trâu, bò thực địa 27 2.1.4 Lựa chọn vắc xin đề xuất biện pháp khống chế bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng 28 2.2 Vật liệu dùng cho nghiên cứu 28 2.2.1 Mẫu bệnh phẩm dùng phân lập vi khuẩn 28 2.2.2 Động vật thí nghiệm 28 2.2.3 Hóa chất dụng cụ nghiên cứu 28 2.2.3.1 Hóa chất thí nghiệm 28 v 2.2.3.2 Dụng cụ thí nghiệm 29 2.3 Phương pháp nghiên cứu 30 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học 30 2.3.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập xác định vi khuẩn P multocida 30 2.3.2.1 Phương pháp nuôi cấy, phân lập 30 2.3.2.2 Phương pháp xác định tính chất sinh vật, hóa học P multocida 31 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.2.3 Phương pháp xác định serotype kháng nguyên vi khuẩn P multocida 32 2.3.3 Kiểm tra độc lực vi khuẩn P.multocida phân lập 33 2.3.3.1 Kiểm tra độc lực vi khuẩn chuột bạch 33 2.3.3.2 Phương pháp kháng sinh đồ 34 2.3.3.3 Xác định tình trạng miễn dịch trâu, bị khỏe ổ dịch cũ phương pháp ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay) 34 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 35 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Đặc điểm dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng trâu bò Cao Bằng 36 3.1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, lợn địa bàn tỉnh Cao Bằng từ năm 2008 - 2011 36 3.1.2 Tình hình mắc bệnh tụ huyết trùng đàn trâu bò Cao Bằng từ năm 2008 đến năm 2011 38 3.1.3 Tần suất dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò huyện từ năm 2008 - 2011 39 3.1.4 Kết điều tra trâu, bò ốm chết bệnh tụ huyết trùng theo mùa vụ Cao Bằng 41 3.2 Triệu chứng, bệnh tích bệnh tụ huyết trùng trâu, bị địa bàn tỉnh Cao Bằng 43 3.2.1 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ vi Cao Bằng 45 3.2.2 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bị khỏe theo tính biệt địa bàn tỉnh Cao Bằng 46 3.2.3 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bò khỏe theo theo lứa tuổi địa bàn tỉnh Cao Bằng 47 3.2.4 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella từ bệnh phẩm gia súc nghi mắc bệnh tụ huyết trùng Cao Bằng 48 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 3.2.5 Kết giám định số đặc tính sinh vật - hoá học chủng vi khuẩn Pasteurella phân lập 49 3.2.6 Xác định serotype kháng nguyên chủng P multcida phân lập 51 3.2.7 Xác định độc lực chủng P multocida phân lập 52 3.2.8 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn P multocida phân lập với số loại kháng sinh hóa dược 54 3.3 Kiểm tra an toàn hai loại vắc xin chuột thí nghiệm 55 3.4 Xác định tình trạng miễn dịch chủ động tự nhiên bệnh tụ huyết trùng trâu, bò ổ dịch cũ 57 3.5 Đánh giá đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng tháng; tháng; tháng tháng 59 3.6 Lựa chọn vắc xin đề xuất biện pháp khống chế bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 66 Kết luận 66 Đề nghị 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 I Tài Liệu tham khảo nước 69 II Tài liệu tham khảo nước 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Kết điều tra tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc Cao Bằng từ năm 2008 - 2011 36 Bảng 3.2 Tình hình mắc bệnh tụ huyết trùng đàn trâu bò Cao Bằng từ năm 2008 đến năm 2011 38 Bảng 3.3 Tần xuất xuất dịch tụ huyết trùng trâu bò Cao Bằng 40 Bảng 3.4 Kết xác định tỷ lệ trâu bò mắc bệnh, chết bệnh tụ huyết trùng theo mùa vụ Cao Bằng 41 Bảng 3.5 Kết theo dõi triệu chứng lâm sàng trâu, bò mắc bệnh 44 Bảng 3.6 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida từ dịch ngoáy mũi trâu bò khoẻ 45 Bảng 3.7 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bị khỏe theo tính biệt địa bàn tỉnh Cao Bằng 47 Bảng 3.8 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bò khỏe theo tuổi địa bàn tỉnh Cao Bằng 48 Bảng 3.9 Kết phân lập Pasteurella từ bệnh phẩm gia súc nghi mắc bệnh tụ huyết trùng 48 Bảng 3.10 Kết giám định số đặc tính sinh vật, hố học vi khuẩn Pasteurella phân lập từ dịch ngoáy mũi 49 Bảng 3.11 Kết giám định số đặc tính sinh vật, hố học vi khuẩn Pasteurella phân lập từ bệnh phẩm 50 Bảng 3.12 Kết xác định serotype kháng nguyên chủng P multocida phân lập 51 Bảng 3.13 Kết thử độc lực viiichủng P multocida phân lập từ dịch ngoáy mũi 52 Bảng 3.14 Kết thử độc lực chủng P multocida phân lập từ bệnh phẩm 52 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Bảng 3.15 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh chủng P multocida phân lập từ dịch ngoáy mũi 54 Bảng 3.16 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh chủng P multocida phân lập từ bệnh phẩm 55 Bảng 3.17 Kết kiểm tra an toàn hiệu lực loại vắc xin sử dụng 56 Bảng 3.18 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 58 Bảng 3.19 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 60 Bảng 3.20 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 61 Bảng 3.21 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 61 Bảng 3.22 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 62 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ix DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida 34 Hình 3.1 Hiệu giá kháng thể trâu bò sau 1; 2; tháng tiêm vắc xin tụ huyết trùng 64 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn