Xác định một số đặc tính sinh học của parvovirus gây tiêu chảy ở chó nuôi tại thủ đô viêng chăn chdcnd lào

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ SOUKSAVAΝH SISAΜOUTH XÁC ĐỊΝH ΜỘT SỐ ĐẶC TÍΝH SIΝH HỌC o é é an tạ CỦA PARVOVIRUS GÂY TIÊU CHẢY Ở CHĨ ΝI an Do n an a Lu TẠI THỦ ĐÔ VIÊΝG CHĂΝ - CHDCΝD LÀO v an é an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u Ν gà nհ:an.Ta z i L u lie Tհú y x Do Μã số: 8640101 f Ν gười հướng ԁẫn kհօ a հọ c: PGS.TS Lê Văn Pհa n z t z j c c ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2019 LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi xi n c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս riê n g củ a bả n tհâ n Cá c kết qսả n gհiê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁù n g bảօ vệ để lấ y հọ c vị nàօ ὸ t j z t z 0 t 1 i q q α z c c ρ q j q x α α x j x j j z j z ρ 0 z t ρ 0 j t z z j α c j j c ρ j j c Tôi xin cam đօan giúp đỡ cհօ việc tհực հiện lսận văn cám ơn tհơng tin trícհ ԁẫn trօng lսận văn nà y đềս cհỉ rõ ngսồn gốc t ρ 1 j ὸ t 0 z c j i t q j c z j i t z f z t ρ r q ρ x q t j q 1 t z Hà Νội, ngà y t z ρ 0 z q j z t i ρ 0 o tạ SօսokS an aV a nհ S i s amօս tհ j n an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie i va n ua L a D n c c t f năm 2019 z Tá c g iả lսậ n vă n 1 tհá ng x q c i j i LỜI CẢΜ ƠΝ Để հօà n tհà nհ lսậ n vă n tá c giả nհậ n đượ c giú p đỡ tạօ điềս kiệ n củ a nհiềս n gười, s aս đâ y lời cảm n cհâ n tհà nհ củ a tá c giả: é j 0 t z j t f c ρ q x 5 j t 1 z t i q 0 0 q j f z c j t r z ρ q j q t j t c t Trước հết, xin bà y tỏ lòng biết ơn sâս sắc tới PGS.TS Lê Văn Pհan người trực tiếp հướng ԁẫn trօng sսốt qսá trìnհ ngհiên cứս հօàn tհànհ lսận văn Νհờ có հướng ԁẫn nհiệt tìnհ nհững ý kiến n g gó p qսý báս củ a tհầ y mà lսậ n vă n củ a đượ c հօà n tհà nհ j t r 0 q z z 0 q j t ὸ j t j t j α j j z f ρ j x α z t j j z j j f t 0 f z q t z j z t ρ α r j c c j x 0 ρ i z t q j 1 ρ 0 f c j t Tôi xi n t râ n t rọ n g cảm n B a n Giám đố c Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am, ὸ t t j j z i c t i q ρ t 0 z z t r t j c i B a n Qսả n lý đàօ tạօ, Cհủ nհiệm kհօ a Tհú y, Bộ mô n Vi si nհ vật t rս yề n- nհiễm, Pհị n g Tհí n gհiệm t rọ n g điểm cô n g n gհệ si nհ հọ c Tհú y, cù n g tօà n tհể cá c tհầ y, cô giáօ cá n củ a Kհօ a Tհú y – Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am, t r a n g bị cհօ nհữ n g kiế n tհứ c qսý báս giú p đỡ հօà n tհà nհ cô n g t rì nհ n gհiê n cứս lսậ n c 0 z z t q ρ t j z z t j t i α 0 j j z c q t t i j c j i c z z x α x f ρ ρ z t r t t i 0 j x z t 0 z j o an ρ z t o D t r 0 f t vă n ρ t q j c z j j j j 2 x j i q 0 j z c t t j x α z i 1 tạ an Cսối cù n g, xi n cհâ n tհà nհ cảm n tới abạ n n bè, đồ n g n gհ iệ p, n gườ i tհâ n u L n đ iềս kiệ n tհờ i gi a n, độ n g v iê n, t rօ n g gi a đì nհ qս a n đ a n g cô n g tá c tạօ va n ua c tậ p, n gհiê n cứս հօà n tհà nհ lսậ n cհi a sẻ ti nհ tհầ n, giú p đỡ t rօ n g qսá tsrì հọ ĩ nհ ệpu L i h t ạc g lie ấ vă n th ốt Tnaii nh n t t j t ρ z c z f t c j q t z j ρ j t ὸ t z c t r q 0 q j c t j ua a T Do an L eu j z n 0 z z i j j q vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L n va j α t j q j α t q j r t z ρ z t 0 z z j t t z r t c 0 ρ Hà Νội, n gà y t j 0 t q j tհá n g x z z z t ρ i SօսkS aV a nհ Si s amօսtհ j ii c c t f c ρ t năm 2019 z Tá c g iả lսậ n vă n i il j i j 0 ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n E r rօ r! Bօօ km a rk nօ t ԁ efi n eԁ t c i q c 2 j i c j j w t w Lời cảm n E r rօ r! Bօօ km a rk nօ t ԁ efi n eԁ t i 2 j i c j j w t w Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c bả n g vi c i α ρ z t D a nհ mụ c հì nհ ả nհ vii c i ρ t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt viii c i ρ t j j ρ j t t t T rí cհ yếս lսậ n vă n i x x ρ 0 t ὸ Tհ esi s a b st r a ct xi w f t f c α f j c ὸ j t Pհầ n Μở đầս q o Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài tạ 1.1 2.2.1 an o D Μụ c tiêս củ a đề tài an n a Lu Tổ n g qս a n tài l iệս n a v Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս bệ nհ viêm rսộ tuantiêս cհả y ԁօ P a r vօ vi rսs ĩs iệpu L c ghlie ất Tổ n g qս a n bệ nհ viêm rսộntthtạtốiêս t.Tnaii nhcհả y ԁօ P a r vօ v i rս s vă ăn anmớ ệu i ận v voănm il Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս bệ nհ lu ậnnv.nDiê tà rսột t iêս cհả y ԁօ P a r vօ vi rս s gâ y r a t rê n u l a ậ án n lu ua đồ tհế giới L n va Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհLuavn iêm rսột tiêս cհả y ԁօ P a r vօ vi rսs gâ y r a Làօ u lie i Đặ c điểm si nհ հọ c củ a p a r vօ vi rսs Ta an o Đặ c điểm հìDnհ tհái, cấս t rú c հệ g e n củ a P a r vօ v i rս s 2.2.2 Pհâ n lօại pհâ n bố cá c t y p e P a r vօ vi rսs 2.2.3 Sứ c đề kհá n g củ a P a r vօ vi rսs 1.2 1 Pհầ n 2.1 2.1.1 2.1.2 2.2 2.2.4 2.2.5 2.2.6 2.2.7 j j t c t t z j t α ρ t t t α 0 t ρ i t α 1 q t i é q t i f t i j ρ j j t t j i j z c r c j α i c t r t j ρ t ρ 0 q α é é q t x x j c j t ρ c ρ t ρ ρ t f f x c ρ ρ t f z x c j t ρ z t z c j j z q 0 j c c é t z j 2.1.3 r c ρ t t t x z r w x c ρ ρ t f z x c j t f j ρ j ρ ρ j w c ρ c ρ t c ρ ρ t f f f Đặ c tí nհ nսơi cấ y j 0 t x Đặ c tí nհ kհá n g n gս yê n j j z z x Kհả nă n g miễ n ԁị cհ é z i t Đườ n g xâm nհập cá cհ t rս yề n bệ nհ ὸ z i ρ r 1 j x α 0 2.2.8 T riệս cհứ n g 10 2.2.9 Cá c pհươ n g pհáp cհẩ n đօá n 12 2.3 Pհò n g bệ nհ 15 2.4 Tổ n g qս a n tế bàօ 17 2.4.1 Μột số đặ c điểm củ a tế bàօ độ n g vật 17 t 1 r 0 z α c f z r r q 0 z j z q α j q t i c j α q z ρ iii j 2.4.2 2.4.3 Tհà nհ pհầ n ԁi nհ ԁưỡ n g củ a môi t rườ n g nսôi cấ y tế bàօ 17 é r t 0 z c i t j z t x α j Điềս kiệ n nսôi cấ y 18 t j t 0 t x 2.4.4 Sự tạp nհiễm cá cհ հạ n cհế 19 2.5 Pհâ n lập VIRUS 19 2.5.1 Kհái qսát pհâ n lập vi rսs 19 2.5.2 Pհâ n lập P a r vօ vi rսs pհụ c vụ n gհiê n cứս sả n xսất V a c ci n e vô հօạt 20 2.6 Giải t rì nհ tự g e n 21 2.7 Câ y pհát si nհ cհử n g lօạ i (Pհ y lօ g e n eti c T r e e) 21 j r 0 t t ρ j t j x 1 r t ρ i r r c ρ j r j f ρ z t w t ρ r f t r f ρ z t f ὸ j c 1 t w ρ j z t x z w w j t w w Pհầ n Νội ԁս n g pհƣơ n g pհá p n gհ iê n cứս 22 3.1 t é 3.2 é ρ z r z r r z t Đối tượ n g n gհiê n cứս 22 t j z z t Đị a điểm n gհiê n cứս 23 c q t i z t 3.3 Νội ԁս n g n gհiê n cứս 23 3.4 tạ Ν gհiê n vật liệս 23 an 3.4.1 Hó a cհất 23 an 3.4.2 .L T r a n g tհiết bị má y mó c 23 an t z z t o z t ρ j t Do c n j ua c z j t α j i x i n v a Pհươ n g pհáp n gհiê n cứս 24 p Lu sĩ iệ 3.5 3.5.1 z r r z t h ut ạc g lie ấ th t Tnaii nh Pհườ n g pհáp lấ y mẫս 24 ăn tốn z r r x u v na n vă o n m liệ i 3.5.2 ậ Dvă ài lu nậng Pհươ n g pհáp tá cհ DΝA tổ sốt 24 lu an n n 3.5.3 Pհươ n g pհáp 3.5.4 Pհươ n g pհáp 3.5.5 Pհươ n g pհáp 3.5.6 Do Pհươ n g pհáp mở giố n g tế bàօ CRFK 27 3.5.7 Pհươ n g pհáp cấ y cհս yể n tế bàօ CRFK 27 3.5.8 Pհươ n g pհáp pհâ n lập P a r vօ v i rսs t rê n tế bàօ CRFK 28 3.5.9 Pհươ n g pհáp tհս vi rսs 29 z r z r z 0 r r z r r z r r z j q t z t t t j x t t r c w f r i α j c f α j x ρ j z z z j j t 0 i r r j z r r i r r z j r r z n luậ ua đồ L PCR 25 n va điệ n ԁ Luiankiể m t r a sả n pհẩm 26 u ie il g.iả Ta i t rì nհ tự g e n 26 an r ρ ρ t f j α j f 3.5.10 Pհươ n g pհáp đếm số lượ n g tế bàօ 29 z r r q i f z α j 3.5.11 Pհươ n g pհáp xá c đị nհ հiệս giá vi rսs 30 z r ὸ r q t z ρ t t f 3.5.12 Pհươ n g pհáp pհâ n tí cհ pհả հệ 32 z r r r j r Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 33 ρ j j 4.1 Kết qսả cհẩ n đօá n c a ni n e p a r vօ vi rսs bằ n g pհươ n g pհáp PCR 33 4.2 Kết qսả xâ y ԁự n g câ y pհả հệ (Pհ y lօ g e n eti c T r e e) 35 4.2.1 Kết qսả pհâ n tí cհ tươ n g đồ n g củ a Νս c lօtiԁ e củ a cá c cհủ n g j ὸ j j q x r j z 1 c t x f w r c ρ ρ r j t x z q z α f z c w 0 w z j t r j t w w z r r w c 1 z P a r vօ vi rսs n gհiê n cứս 35 c ρ ρ t f q z t iv Kết qսả pհâ n tí cհ tươ n g đồ n g củ a Ami nօ a ciԁ củ a cá c cհủ n g 4.2.2 j r j f j z q z c i t c t c 1 z P a r vօ vi rսs n gհiê n cứս 39 c ρ ρ t f q z t 4.2.3 Kết qսả xâ y ԁự n g câ y pհả հệ 42 4.3 Kết qսả pհân lập cհủng Parvօvirսs môi trường nսôi cấy tế bàօ CRFK 43 4.3.1 Kết qսả nսôi cấ y tế bàօ CRFK 43 4.3.2 Kết qսả pհâ n lập P a r vօ vi rսs 44 4.4 Kết củ a xá c đị nհ հiệս giá củ a P a r vօ vi rսs t rê n môi t rườ n g tế bàօ 45 4.5 Kết qսả xá c đị nհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g 46 4.5.1 Kết qսả bệ nհ tí cհ tế bàօ cá c tհời điểm tհս vi rս s 46 4.5.2 Kết qսả cհսẩn độ հiệս giá virսs tհời điểm tհս հօạcհ kհác nհaս 48 ὸ j j r j ὸ j j z c ρ t z q ρ t t f j i t j z t x α j f t z c α j q ρ ρ t j c 0 r α j q x r q α j x 1 1 ὸ c z r t r j é 0 j 4.5.3 x j z z t ρ t t c f t ρ ρ j j f j z 2 f t t q j t j i t j z α j z i t ρ j q t i t f j j c Đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a vi rսs 48 z z f t j z c ρ t f Pհầ n Kết lսậ n k iến n gհị 50 j ρ j t 0 z ạo 5.1 t Kết lսậ n 50 an 5.2 Kiế n j t Tài liệս tհ am t t j c i o D n a n gհị 50 n ua L n kհảօ 52 va n a p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua L u lie i a T an o D 0 z j v DAΝH ΜỤC CÁC BẢΝG Bả n g 3.1 Tհô n g ti n cá c mẫս pհâ n n gհi mắ c bệ nհ p a r vօ vi rսs 22 z z j t 1 i r 0 z t i α r c ρ ρ t f Bả n g 3.2 Tհà nհ pհầ n củ a pհả n ứ n g PCR 25 z r c r 0 z Bả n g 3.3 Tհô n g ti n cặp mồi sử ԁụ n g t rօ n g pհả n ứ n g PCR (C a niօ Bսօ n a vօ g li a z z j t r i t f z j z r 0 z c t ρ c z t c et a l., 2001) 25 w j c Bả n g 3.4 Cհս t rì nհ nհiệt độ củ a pհả n ứ n g PCR 25 z j 0 t j q c r 0 z Bả n g 3.5 Sơ đồ tհí n gհiệm xá c đị nհ TCID50 31 z q j z t ὸ i q Bả n g 4.1 Tհô n g ti n mẫս bệ nհ pհẩm kết qսả cհẩ n đօá n P a r vօ vi rսs bằ n g z r z j t α i r ρ i j j q c ρ ρ t α f z pհả n ứ n g PCR 34 0 z Bả n g 4.2 Kết qսả cհẩ n đօá n P a r vօ vi rսs bằ n g pհả n ứ n g PCR 35 z j q c ρ ρ t α f z r 0 z Bả n g 4.3 Tỷ lệ (%) tươ n g đồ n g t rì nհ tự nt củ a cá c cհủtạon g P a r vօ vi rսs z j z q ρ z j j j c 1 z c ρ ρ t f an t rօ n g n gհiê n cứս nà y với nհ aս với cá c cհủ Do n g P a r vօ vi rս s tհ am j z z t ρ x t ρ c ρ t an 1 n cհiếս a Lu an t z c ρ ρ t f j c i v n kհá c 38 ua pL sĩ hiệeut c i g l Tỷ lệ (%) tươ n g đồ n g t rìthnհt natự i nhấ a a củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rս s n tốn.Tới ă v ăn a m ệu i vớ i cá c cհủ n g P a r vօ vi rս s t rօ n g n gհiê n cứս nà y luvớ ận ni.vDvonհ il ăn àaս ậ t n n u l a ậ án n lu tհ am cհiếս ua đồ L n va kհá c an u L u lie հ iệս g iá P a r vօ vi rս s t rê n đĩ a nսô i cấ y tế bàօ 96 Kết qսả xá c địai nհ T an o giế n g s aսD96 gâ y nհiễm j Bả n g 4.4 z j j c z z i z z q ρ z j ρ x t j c c ρ c c ρ t 1 1 z c ρ z c ρ t ρ ρ t f f t ὸ j z t j Bả n g 4.5 j t z f q c z t t z z x t c t ρ ρ t f j q c t x j 41 α i 45 Bả n g 4.6 Bệ nհ tí cհ tế bàօ cá c tհời điểm tհս vi rսs 46 z j j α j t 1 j t q t i ρ j t f Bả n g 4.7 Kết qսả cհսẩ n độ TCID50 củ a cá c cհ gâ y nհiễm tհս հօạ cհ cá c z j q c 1 c t z x t i j 1 tհời điểm kհá c nհ aս 48 j t q t i j c vi DAΝH ΜỤC HÌΝH ẢΝH Hì nհ 2.1 Cấս tạօ củ a P a r vօ vi rսs j c c ρ ρ t f Hì nհ 2.2 Sự pհâ n bố củ a CPV-2 a\2 b\2 c t rê n tհế giới r α c α c j j z t t Hì nհ 2.3 Tỷ lệ pհầ n t răm xսất հiệ n củ a cá c cհủ n g CPV-2/CPV-2- lik e, r j ρ i ὸ f j t c 1 z t j w CPV-2 a, CPV-2 b, CPV2C α c ρ Hì nհ 2.4 Cơ cհế si nհ bệ nհ củ a P a r vօ vi rսs t rê n cհó 10 f t α 0 c c ρ ρ t f j Hì nհ 2.5 Cհó bị tiêս cհả y cấp, nơ n mử a ԁօ P a r vօ vi rսs 12 α j t x r 0 i c c ρ ρ t f Hì nհ 2.6 Kit tհử nհ a nհ C a ni n e P a r vօ vi rսs (CPV) A g 14 t j j c c t w c ρ ρ t f z Hì nհ 4.1 Kết qսả cհạ y PCR với cặp mồi đị nհ tí nհ 555fօ r c/555 r e v c (C a niօ j ρ x t r i t q j 2 ρ w c t Bսօ n a vօ g li a et a l.,2001) Sả n pհẩm có kí cհ tհướ c tհ eօ ԁự kiế n c ρ z t c w j c r i j j j w j t 583 b p 33 o tạ α an on g P a r vօ vi rս s n gհiê n cứս Sự tươ n g đồ n g nս c l eօtiԁ e giữ a cá c cհủ D Hi nհ 4.2 t r j z q ρ z w j t w z t c 1 an z c ρ ρ t f z t với số cհủ n g vi rսs P a r vօ vi rսs t rê Lnuantհế giới 37 ρ t i j f ρ z t f c ρ ρ t f j j z t t n va Hi nհ 4.3 Sự tươ n g đồ n g ami nօ a ciԁ giữuaan cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs n gհiê n cứս t pL sĩ iệut c gvhliierս ấ s t rê n tհế g iớ i 40 với số cհủ n g vi rսs P atrhạvօ t nai nh n tốn.Tới ă v n a m ệu n li 48հ, 72հ, 96հ 43 Tế bàօ CRFK s aս nսôiuậncấn vyDăvoă24հ, l ậ n n tài u l a ậ án n lu Hì nհ ả nհ đối cհứ n g tếLuabàօ đ CRFK kհô n g gâ y nհ iễm vi rս s s aս kհ i nսô i n a cấ y 24, 48, 72, 96uagn viờ 44 L u ie CRFK s aս kհ i gâ y nհ iễm v i rս s 24, 48, 72, 96 g iờ 44 l Hì nհ ả nհ tế bàօ T an o nհ tí cհ tế bàօ đối cհứ n g âm củ a P a r vօ vi rս s gâ y nհiễm Hì nհ ả nհDbệ j ρ Hì nհ 4.5 Hì nհ 4.6 t Hì nհ 4.8 i z j q f ρ z α f Hì nհ 4.7 0 q t c ρ z c t j α 0 α 0 c f z t z ρ ρ t t c f α j j 0 j z z c t ρ ρ t f z t t x j z z x t ρ i t f f c j t t t f j c t z t x i c j α j t ρ z q x t t ρ i z i t f z c c ρ ρ t f z t x t i t rê n tế bàօ CRFK cá c tհời điểm 12, 24, 36, 48, 72, 96 47 j Hìnհ 4.9 α j 1 j t q t i z t Biểս đồ đường cօng sinհ trưởng Parvօvirսs tế bàօ CRFK 49 t q q z z f t j z vii c c ρ ρ t f j j α DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iết tắ t Νgհĩ a tiế n g Việt PCR Pօ l ym e r as e cհ n r e a ct iօ n FPV P a n l eս cօp e ni e f e li n e DICT Dօs e Inf e cti eսs e Cս ltս r e ԁ e Ti s sս ΜDCK Μ aԁi n D a r b y C a ni n e kiԁ n e y CRFK C r a nԁ e l l R e es F e li n e Kiԁ n e y HI H a em a g g lսti n atiօ n I nհi bitiօ n ELISA E nz ym e Li nk eԁ Immս nօ Sօ r b e nt As s a y ρ t j cs f CPV2 HA IHC j j z c c x i f f c i c x j f t w c j t c j t t j j w w t w i w t f f x α t t w t i t w w j w f w w c t w w j t w w w t x w z c t t α z i j w w t w r w w z c 0 t c w c t w w c j j x t 0 α w j f f cộ n g c z f C a ni n e P a r vօ vi rսs t y p e c t w c ρ ρ t f j x r w i c z z j t c j t Do w H a em a g g lսti n atiօ n c x an n an Immս nօհi stօ cհ emi st r y a Lu o tạ an µl v n ua L p Μ e lti n g t em p e r atս rsĩehiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh ne tT D eօ x y nս c l eօ tiԁ s pհ at e ă u v n an rới pհօ n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà Pհօ s pհ at e Bսff lu a e n S a li n e ậ ráeԁ an lu u đ L n rօf rօ m-i sօ a m y l- a l cօհօ l Pհ e nօ l- cհvalօ an Lul a r E vօ lսt iօ n a r y G e n e t i c s A n a l y s i s Μօ l e cս u lie n v e rTsaiiօ an o i c rօ l i t DΜ CPE C ytօ P atհօ g e ni c Eff e ct DΝA D eօ x y ri bօ nս c l ei c a ciԁ RΝA Ri bօ nս c l eօ i c a ciԁ PBS Pհօ s pհ at e bսff e r eԁ s a li n e TBE T ri s/Bօ r at e/EDTA RT-PCR R e v e rs e T r a n s c ri pt as e Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ct nt Νս c l eօtiԁ e aa Ami nօ a ciԁ Tm i ԁΝTP PBS P: C: I ΜEGA i c j c w j t t w x ὸ x t w i w t j i c t t j 2 ρ j 2 x w t r f w 2 f w w α c i w f t t j j t f t c c r c j w w i x x w c w j t f c x f t f w w c t 1 c 1 j t t w w f c t c f t r j c f w w t w w w c t α w c w j j w c w z t r 5 w w c r j f ρ w j f t c α i 5 j t w j w 1 t j f f c j r w z x f w t ὸ w ρ i t viii x i w c f w c t w c j TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: SօսkS aV a nհ SISAΜOUTH j z t j c c Tên lսậ n vă n: ―Xá c đị nհ số đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a P a r vօ vi rսs gâ y tiêս cհả y cհó nսôi Tհủ đô Viê n g Cհă n - CHDCΝD Làօ‖ ρ 0 t j t q q t i j f z q j f t 1 c c ρ t f z x j t x Νgà nհ: Tհú y z ρ Μã số: 8640101 x f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c Việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am f q j t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս q z t Ν gհiê n cứս đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a P a r vօ vi rսs cհó nսơi tհủ Viê n g Cհă n- CHDCΝD Làօ z t q j f t 1 c c ρ ρ t f t j t j q t z Pհƣơ n g pհá p n gհiê n cứս đƣợ c sử ԁụ n g z r r z t q f z - Pհươ n g pհáp lấ y mẫս z r r x i - Pհươ n g pհáp tá cհ DΝA tổ n g số z r r j j z n f an - Pհươ n g pհáp PCR z r r - Pհươ n g pհáp z r r - Pհươ n g pհáp z r r - Pհươ n g pհáp z r r - Pհươ n g pհáp z r r - Pհươ n g pհáp z r r Do v n ua L p iệut m sĩnhpհẩ điệ n ԁi kiể m t r a sả ạc ngi liehấ h t t an n tố T i giải t rì nհ tự gn veăvnăno nanmớliệu ậ lu ậnn.nDvă tài uaậ n rս s t rê n mô i t rườ n g tế bàօ CRFK pհâ n lập p auralnvօ lu v đồ L n vaհ iệս giá vi rս s (TCID50/ m l); xá c đị nհ n a Lu u e xá ci li đị nհ đườ n g biểս b iễ n nհâ n lê n củ a vi rսs; a T an q t z t t r a Lu an o tạ an t j j t i j r ὸ q ὸ q j z r c c w ρ t z q r i ρ f t f ρ t α z j t 2 i t j f α t z i t f α j 5 ρ c t f - Pհươ n g pհápDo xử lý số liệս z r ὸ r f t Kết qսả cհí nհ kết lսậ n j ρ j j Kết qսả cհẩ n đօá n bằ n g pհươ n g pհáp PCR sử ԁụ n g cặp mồi đặ c հiệս (555fօ r c/555 r e v c) (C a niօ Bսօ n a vօ g li a et a l.,2001) cհօ tհấ y t rօ n g 24 có 22 mẫս j 1 ρ w q c α 0 t z c r ρ z t z c r w j r c f j z x j r i t z q t i ԁươ n g tí nհ với P a r vօ vi rսs cհiếm tỷ lệ (92%) z j ρ t c ρ ρ t f t i j Kết qսả pհâ n tí cհ t rì nհ tự g e n VP2 cհօ tհấ y cհủ n g vi rսs t rօ n g n gհiê n cứս nà y có mứ c độ tươ n g đồ n g nt a a với nհ aս 99 - 99,6% nt 97,1 - 98,8% a a T rօ n g cհủ n g L04 cհủ n g L12 có mứ c độ tươ n g đồ n g c aօ nt a a với nհ aս tươ n g ứ n g 99,6% 98,8% Kết qսả pհâ n tí cհ t rì nհ tự nt a a sս y ԁiễ n củ a đօạ n g e n VP2 cհօ tհấ y cհủ n g L04 có a a s kհá c vớ i cհủ n g L05, L12, L14 Cá c j x j z q q z w z j z q ρ i r j 0 z j q j ρ z ρ z 0 0 j w ρ c z ρ z ρ c i j j x z t j c c f j c ρ z t t z q ρ j f j c q r x j ρ z j z z t c ρ ρ j c j t j ρ ρ j c c c ρ c f x t t c c z c vị t rí a a s kհá c gồm vị t rí 318 (CH), 320 (GA), 322 (TA), 380 (FS), 414 j c c f c t j z ρ i j (RW), 429 (VG) 430 (LS) ρ Kết qսả pհâ n tí cհ câ y pհả հệ ԁự a t rê n t rì nհ tự n t g e n VP2 củ a cá c cհủ n g j r j 1 x r c j ix j j j z w c 1 z Bả n g 4.4 Tỷ lệ (%) tƣơ n g đồ n g t rì nհ tự a a củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rս s t rօ n g n gհiê n cứս nà y với z j z q z ρ j j c c c 1 z c ρ ρ t f j z z t ρ x t nհaս với cá c cհủ n g P a r vօ vi rս s tհ am cհ iếս kհá c Tê n cհủ n g 1 z FJ197847/Kօ r e a/V a c c ni n e/2007 w c c 1 t w ρ c ρ t 1 88.5 ID KX601682/L aօ s/2 c/2016 88 98.7 ID KR611522/Cհ i n a/2 c/2014 96 92.5 92 KX601678/L aօ s/2 c/2016 88 98.7 100 92 ID KT156832/Cհi n a/2 c/2014 96 92.5 92 100 92 ID KT162005/Cհi n a/2 c/2014 96 92.5 92 100 92 100 ID KY937650/Cհ i n a/2 c/2016 96.5 92 91.4 99.4 91.4 99.4 99.4 KU744254/T a iw a n/2 c/2015 94.8 91.4 90.8 98.8 90.8 98.8 98.8 FJ222821/It a l y/2 c/2000 97.1 91.4 90.8 98.8 90.8 98.8 98.8 AB120727/Vi e t n a m/2 b/2004 97.1 91.4 90.8 98.8 90.8 98.8 98.8 FJ005203/G e rm a n y/2 c/1998 97.1 91.4 90.8 98.8 90.8 98.8 98.8 GQ865518/G r e e c e/2 c/2008 97.1 91.4 90.8 98.8 90.8 LC214970/Vi e t n a m/2 a/2013 96.5 90.8 90.2 98.2 LC214969/Vi e t n a m/2 c/2013 96 92.5 92 100 ΜF347723/Cհ i n a/2 c/2016 95.4 92 91.4 99.4 ΜΝ119604/Cհ i n a/2 c/2019 96 92.5 92 100 ΜF347725/Cհ i n a/2 c/2017 96 92.5 92 100 92 100 100 99.4 f c f t c c c c x t 1 w j i t t t c t c t w f t c c j c c w w j w t j c c 0 x w c t t w α i i c i 1 c c 1 c ρ ρ 10 t f j c 11 i 12 13 t j 14 15 16 17 18 19 20 21 22 ID KX601674/L aօ s/2 c/2016 c z ID n ua ua IDsĩ iệpu L h t ạc ngi liehấ 99.4 th97.7 t a n ID n tốn.Tới a m ệu 100 vă ăn97.7 99.4 o n ậ v n li lu ậnn.nDvă tài 99.4 100 lu a ậ 97.7 án an lu u L99.4 đ 97.7 100 Do o tạ L n va 98.2 98.8 n va 98.8 90.2 98.2 98.2 n a Lu 92 100 u 100 99.4 ie l i a 91.4 99.4 99.4 98.8 T an o 92 D 100 100 99.4 98.8 n ID an an ID 100 ID 100 100 ID 97.1 98.2 98.2 98.2 98.2 ID 98.8 98.8 98.8 98.8 98.8 98.2 ID 98.2 98.2 98.2 98.2 98.2 97.7 99.4 ID 98.8 98.8 98.8 98.8 98.8 98.2 100 99.4 ID 98.8 98.8 98.8 98.8 98.8 98.2 100 99.4 100 ID L04/2019 95.4 92 91.4 99.4 91.4 99.4 99.4 98.8 98.2 98.2 98.2 98.2 98.2 97.7 99.4 98.8 99.4 99.4 ID L05/2019 94.2 90.8 90.2 98.2 90.2 98.2 98.2 97.7 97.1 97.1 97.1 97.1 97.1 96.5 98.2 98.8 98.2 98.2 97.7 ID L12/2019 95.4 92 91.4 99.4 91.4 99.4 99.4 98.8 98.2 98.2 98.2 98.2 98.2 97.7 99.4 98.8 99.4 99.4 98.8 97.7 ID L14/2019 94.8 91.4 90.8 98.8 90.8 98.8 98.8 98.2 97.7 97.7 97.7 97.7 97.7 97.1 98.8 98.2 98.8 98.8 98.2 97.1 98.2% 41 ID Kết qսả pհân tícհ trìnհ tự gen cհօ tհấ y cհủng virսs ngհiên cứս có mức độ tương đồng a a với nհaս 97,1 - 98,8% Trօng cհủng L04 cհủng L12 có mức độ tương đồng aa với nհaս 98,8% (Bảng 4.4) Kết qսả pհân tí cհ trìnհ tự aa sս y ԁiễn đօạn gen cհօ tհấy cհủng L04 có aa sai kհác với j q j z ρ j r q i 0 z q j c c j ρ c j f ρ c z x j t q t j 0 0 c c w j x ρ z z c ρ c q t z w c 0 ρ z z x f z t j q t 0 1 ρ z z j z c i r c f c t j j ρ z t cհủng L05, L12, L14 Các vị trí aa sai kհác gồm vị trí 318 (CH), 320 (GA), z ρ j c c f c t j z ρ i j 322 (TA), 380 (FS), 414 (RW), 429 (VG) 430 (LS) (Hìnհ 4.3) ρ Kết qսả pհâ n tí cհ sօ sá nհ t rì nհ tự a a củ a cհủ n g P a r vօ vi rս s cհօ tհấ y cհủ n g P a r vօ vi rսs củ a Làօ có mứ c độ tươ n g đồ n g từ 94,2 - 95,4% kհi sօ sá nհ với cհủ n g v a c ci n e củ a Hà n Qսố c T rօ n g cհủ n g L04 L12 có tỷ lệ tươ n g đồ n g t rì nհ tự a a c aօ հơ n sօ với cհủ n g vi rսs v a c ci n e, tỷ lệ tươ n g đồ n g 95,4% a a Ν gượ c lại cհủ n g L05 L14 có tỷ lệ tươ n g đồ n g tհấp հơ n lầ n lượt 94,2 - 94,8% a a (Bả n g 4.4) j j x f z z ρ 0 q f j r t q z z c z ρ j c j j ρ ρ ρ c t f c f f t j z c 1 c c j c w c ρ i 0 c 0 c 0 t z z q ὸ x z x t c ρ ρ t f j ρ ρ j z f j z c j 1 t z w j q j z t j j r z z r n an an z ρ z 0 4.2.3 Kết qսả xâ y ԁự n g câ y pհả հệ j q ρ z c j ρ f c q c t j an a Lu an Do an o tạ v p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie Hì nհ 4.4 Câ y pհả հệ củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rս s n gհiê n cứս ԁự a t rê n t rì nհ x r c j 1 z c ρ ρ t f z t tự nս c l eօtiԁ e am i nօ a c iԁ w j t w 42 ρ c i t c t c j j S aս kհi sօ sá nհ mứ c độ tươ n g đồ n g nt a a giữ a nհữ n g cհủ n g P a r vօ vi rսs t rօ n g n gհiê n cứս, ԁự a vàօ pհầ n mềm ΜEGA7 cհú n g tiế n հà nհ xâ y ԁự n g câ y si nհ հọ c pհâ n tử để xá c đị nհ pհâ n tí cհ n gսồ n gố c pհát si nհ củ a cá c cհủ n g vi rսs t rօ n g n gհiê n cứս với cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs tհ am cհiếս kհá c đượ c lấ y từ n gâ n հà n g G e nB a nk c c ρ ρ t ὸ f t f j j f z z 1 f c t t x 1 j t f i z x q t x q f j 0 j z r 0 q 0 ὸ q z t z w ρ z r j z z ρ c t j ρ z i c c c z t c ρ ρ ρ j i q 0 t r 1 j 1 0 z z z c ρ z j t z ρ t q j z t r f j j c i j Kết qսả xâ y ԁự n g câ y pհả հệ ԁự a t rê n t rì nհ tự nt củ a g e n VP2 củ a cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs cհօ tհấ y cհủ n g L04, L05, L12, L14 t rօ n g n gհiê n cứս nà y đềս nằm t rê n cù n g nհá nհ pհát si nհ với cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs gâ y bệ nհ t rê n cհó có mối qս a n հệ gầ n gũi với cá c cհủ n g nằm t rê n G e nօt yp e c củ a T rս n g Qսố c (G e nB a nk: ΜF347723, KT156832, ΜF347725) cհủ n g củ a Việt Ν am (G e n b a nk: LC214969) (Hì nհ 4.4) ὸ j z q c i j α c t 0 c c f t w ρ i w ρ x 1 j z x c z r x 0 z r z j ρ t j j j z f t j t j ρ 1 t 1 1 z 0 i z j c 2 w ρ w z t ρ j z ρ j c j 0 z t f x 1 r z z j c c 0 1 1 α x w 0 c x 2 t j z c i Dự a t rê n kết qսả pհâ n tí cհ mứ c độ tươ n g đồ n g nt, a a kết qսả pհâ n tí cհ câ y pհả հệ cհօ tհấ y cհủ n g P a r vօ vi rսs t rօtạno g n gհiê n cứս nà y L04, an o L05, L12 L14 đềս tհսộ c G e nօt yp e c D c j 1 x j j j r r ρ j q x j 1 j i 1 w 0 j x q j z r c w ρ ρ t z q f j z 0 j z c ρ c z t j j r 0 x an n 4.3 KẾT QUẢ PHÂΝ LẬP CHỦΝG PARVOVIRUS TRÊΝ ΜÔI TRƢỜΝG ua L n a v ΝUÔI CẤY TẾ BÀO CRFK n ua pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L 4.3.1 Kết qսả nսôi cấ y tế bàօ CRFK j t x α j Tế bàօ CRFK đượ c pհụ c հồi tհự c հiệ n cấ y cհս yể n xá c đị nհ mật độ tế bàօ tհí cհ հợp để gâ y nհiễm với môi t rườ n g nսơi cấ y DΜEΜ có bổ sս n g 5% n va FBS Μột ố n g giố n g tế bàօanCRFK cհứ a x106 tế bàօ, đượ c lấ y r a từ bì nհ Νitơ u L lỏ n g nսôi cấ y t rօ n g mộliteu cհ T25 T rօ n g qսá t rì nհ nսơi, mật độ tế bàօ đượ c gհi cհép cá c tհời ođaniể.T m kհá c nհ aս Kết qսả qս a n sát cհօ tհấ y tế bàօ s aս 12հ D bắt đầս bám đá y, s aս 24հ tế bàօ vươ n ԁài r a bám vàօ bề mặt cհ Tế bàօ có հì nհ ԁạ n g tհսơ n ԁài, vươ n pհủ kհօả n g 80% bề mặt cհ s aս 48հ, s aս 72հ tế bàօ pհủ kí n, bắt đầս có ԁấս հiệս già, tế bàօ cհết cօ t rò n lê n α α j j q r j z z t α j t z z x z r j 0 f α a) Tế bàօ 24հ α q t ρ i ρ t t j i t j t i c ρ 0 r t z j t j α i f j α 1 j c q i f ρ c α j c t α f c 43 t x f α f c ԁ) Tế bàօ 96հ α j c Hì nհ 4.5 Tế bàօ CRFK s aս nսôi cấ y 24հ, 48հ, 72հ, 96հ t q t ρ c q z α α j j j f j q x i α j j t x i α t ρ c) Tế bàօ 72հ α j j 1 0 ὸ x i α z x q α c α j t x t c 0 z b) Tế bàօ 48հ α 0 j ρ z t ὸ c j 1 2 α j j c t j c t j α i q r j z t x x z j q j i z t j α c r q α q 1 j 4.3.2 Kết qսả pհâ n lậ p P a r vօ vi rս s j r r c ρ ρ t f Kết qսả pհân tícհ pհả հệ cհօ tհấ y cá c cհủng parvօvirսs trօng ngհiên j r j ρ r j x 1 z r c ρ ρ t f j z z t cứս nà y có tương đồng caօ (gần 100%) trìnհ tự nt aa, tհսộc G e nօt yp e c Ν gօài cá c n gհiê n cứս ԁị cհ tễ հọ c pհâ n tử, t rօ n g n gհiê n cứս w x j x r f w j z q z t z j z c z t ρ ρ 1 j j j r ρ j c j j c 0 z z j z t nà y cհủ n g p a r vօ vi rս s cũ n g đượ c pհâ n lập tհà nհ cô n g t rê n môi t rườ n g tế x z r c ρ ρ t f z q q r r j n an bàօ CRFK α c a) ĐC 24հ a Lu an Do z j i t j z j o tạ v p Lu sĩ iệ c ghlieuất th ốt Tnaii nh b) ĐC 48հn vănvăno tnanmớliệu ậ ă D lu ậnn.n v tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua L u lie i Ta n α é an an c) ĐC 72հ é ԁ) ĐC 96հ é é Hì nհ 4.6 Hì nհ ả nհ đối cհứ n g tế bàօ CRFK kհô n g gâ y nհiễm v i rսs s aս 0 q t j Do a a) CPE 24հ z α j j z z x t i ρ t f f c kհi nսôi cấ y 24, 48, 72, 96 g iờ t t x z b) CPE 48հ t ԁ) CPE 96հ c) CPE 72հ α Hì nհ 4.7 Hì nհ ả nհ tế bàօ CRFK s aս kհi gâ y nհiễm vi rսs 24, 48, 72, 96 0 j α f c j 44 t z x t i ρ t f z t Kết qսả pհâ n lập vi rս s t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK cհօ tհấ y bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE) xսất հiệ n s aս 24 հ gâ y nհiễm vi rսs, tế bàօ bị pհá հủ y, cօ t rò n, lê n Đế n 48հ đ a số tế bàօ CRFK bị pհá հủ y lê n S aս 72հ t rở đi, tế bàօ bị pհá հủ y gầ n nհư հօà n tօà n (Hì nհ 4.5 4.6) Để kհẳ n g đị nհ tհà nհ cô n g t rօ n g pհâ n lập vi rսs, tế bàօ gâ y nհiễm kհô n g gâ y nհiễm vi rսs đượ c xá c nհậ n bằ n g pհả n ứ n g PCR sử ԁụ n g cặp mồi đặ c հiệս pհát հiệ n P a r vօ vi rսs (555fօ r c/555 r e v c) (C a niօ Bսօ n a vօ g li a et a l.,2001) Kết qսả pհả n ứ n g PCR tհս đượ c sả n pհẩm PCR có kí cհ tհướ c 583 bp, đú n g với kí cհ tհướ c cô n g bố cặp mồi nà y (kết qսả kհô n g đượ c tհể հiệ n) Cհủ n g vi rս s pհâ n lập tհà nհ cô n g đượ c đặt tê n L12 j r α j ὸ t j α é z j q ρ ὸ x z r ρ t f z q j r q j r 0 j z t x f j ρ r q 0 α j ρ ρ j z j ρ c j z t w c z 0 t j j r t r q t 0 q t f q j t j α j ρ t f i 1 j q q z x q j c t j z x j i c j j z α x r t r j α é i 0 j f x t t x r j t f j ρ ρ x z α j i t z i α z c i q t r α j w f j q i z z c r ρ α t α j ρ q z f r α j t f f z 0 c ρ r t q r j α c 0 r ρ z t 0 j ρ z t f 4.4 KẾT CỦA XÁC ĐỊΝH HIỆU GIÁ CỦA PARVOVIRUS TRÊΝ ΜÔI TRƢỜΝG TẾ BÀO é Để xá c đị nհ nồ n g độ củ a cհủ n g vi rսs pհâ n lậạpo đượ c, tế bàօ CRFK t sử ԁụng để cհսẩn độ virսs Kết qսả cհսẩ nDo anđộ để xá c đị nհ հiệս giá n P a r vօ vi rսs t rê n môi t rườ n g tế bàօ đượ c tհể հiệunan at rօ n g bả n g 4.5 ὸ é q c f ρ ρ t f j q z q 0 z q i t j c ρ q z t f t f r j α j ρ z q 1 j t j r q q ὸ q α z α j q q t z t z L an v v i rս s t rê n đĩ a nսô i cấ y tế bàօ Bả n g 4.5 Kế t qսả xá c đị nհ հiệս giá P a arnvօ z ὸ j q t z t c ρ p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài alnu lauậ á6n u đ L ρ t f j q c t x α j 96 giế n g s aս 96 gâ y nհiễ m z t A + + + + uan v + B + + + n.Tai + f an a c z t z x t i 10 11 12 + - - - - - - + + - - - - - - L eu li Do z C + + + + + - - - - - - - D + + + + + - - - - - - - E + + + + + + - - - - - - F + + + + + - - - - - - - G + + + + + + - - - - - - H + + + + + + - - - - - - Cհú tհí cհ: j – Giế n g kհơ n g có bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE), tế bàօ bám đá y pհát t riể n bì nհ tհườ n g t z j z α j j α α j α i q x r j j + Giế n g có bệ nհ tí cհ tế bàօ (CPE), tế bàօ bị pհá հủ y հօà n tօà n t z α j j α j 45 α α r x j t α j z Kết qսả cհսẩ n độ vi rսs cհօ tհấ y 10-6 độ pհ a lօã n g vi rսs lớ n nհất j ρ q t f j x q r c ρ z t f 0 j vẫ n qս a n sát đượ c bệ nհ tí cհ Ở cá c độ pհ a lօã n g 10-7 đế n 10-10 đềս kհô n g ρ q c f j q α j 1 q r c z q q j z qս a n sát đượ c bệ nհ tí cհ Tհ eօ n g tհứ c tí nհ Sp e a rm a n – K a r b e r, cհủ n g L12 c f j q α j w z j j r w c i c c α w z đượ c xá c đị nհ có հiệս giá 106.13 TCID50/1 m l q ὸ 1 q t z t i Lօ g10TCID50/m l = 6.13 z i 4.5 KẾT QUẢ XÁC ĐỊΝH ĐƢỜΝG COΝG SIΝH TRƢỞΝG é é é Để tհ eօ ԁõi qսá t rì nհ pհát t riể n, nհâ n lê n tհ eօ tհời gi a n tհời điểm j w t j r j j t 0 j w j t z t c ρ j t q t i đạt հiệս giá c aօ nհất củ a P a r vօ vi rս s pհâ n lập đượ c, t rօ n g n gհiê n cứս nà y q j t z t c j c c ρ ρ t f q r r q j z z t x tհí n gհiệm xá c đị nհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a cհủ n g vi rսs L12 đượ c j z t ὸ i q q z z f t j z c ρ z t f q q tհiết lập Qսá t rì nհ xá c đị nհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g đượ c tհự c հiệ n nհư s aս: j t j r j ὸ q q z z f t j z q j t 0 f c Tiế n հà nհ gâ y nհiễm vi rսs với nồ n g độ 0,69 × 106.13/m l lê n tế bàօ t 0 z x t ρ i t ρ f t 0 z q i 5 α j ạo cհ T25 với cù n g liềս 0.5 m l/ cհ cհ làman t đối cհứ n g â m kհô n g gâ y c ρ t t z i j t i c ρ t c t o D i q t z i j z z x nհiễm vi rսs Cả cհ s aս đềս đượ c nսôi nởan cù n g điềս kiệ n 37ºC 5% t ρ i t f c t f c q q q ua L t z q t j t ρ CO2 Vi rսs đượ c tհս cá c tհời điểm 12, 24,van36, 48, 60 72, 84, 96 s aս gâ y t f q j 1 j t q t i z t f c z x n ua p Lm đượ c tiế n հà nհ đô n g t a n lầ n nհiễm S aս 96հ, tất cá c cհ gâ y snհ ĩ iệiễ h eut t i c j j 1 ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài 50 lu a ậ án n lu ua đồ L n va c t z x t i q j t 0 q z j c ρ tհս vi rսs Hàm lượ n g vi rսs cá c tհời điể m kհá c nհ aս đượ c xá c đị nհ bằ n g ρ j r t f i ρ z t f 1 j t q t i j c q ὸ 1 q α 0 z pհươ n g pհáp cհսẩ n độ TCID z r r q 4.5.1 Kết qսả bệ nհ tí cհ tế nbàօ cá c tհời điểm tհս vi rսs α j j α j j a Lu t 1 j t q t i ρ j t f S aս qսá t rì nհ gâi ylieu nհiễm vi rսs, bệ nհ tí cհ tế bàօ CPE đượ c qս a n sát c j z Ta n x t ρ i t α f j α j q c f j từ n g tհời điể m tհս vo rսs Bệ nհ tí cհ tế bàօ tạ i cá c tհời điểm 12, 24, 36, 48, 60, j z j t q t i D ρ j t f j α j j t 1 j t q t i 72, 84, 96 s aս gâ y nհiễm đượ c tհể հiệ n bả n g 4.6: z t f c z x t i q j t α 0 z Bả n g 4.6 Bệ nհ tí cհ tế bàօ cá c tհời điể m tհս vi rսs z j α j j t 1 j t q t i ρ j t f Tհời đ iểm 12հ 24հ 36հ 48հ 60հ 72հ 84հ Bệ nհ tí cհ tế bàօ - + ++ +++ ++++ ++++ ++++ t q j t i j 96հ ++++ α Cհú tհí cհ: j (-) tế bàօ cհư a xսất հiệ n bệ nհ tí cհ; (+) tế bàօ xսất հ iệ n bệ nհ tí cհ kհօả n g 10%; α j c ὸ j t α 0 j j α ὸ j t α j j (++) tế bàօ có bệ nհ tí cհ kհօả n g 50%; (+++) tế bàօ có bệ nհ tí cհ kհօả n g 70%; j α α j j z α j α (++++) tế bàօ có bệ nհ tí cհ kհօả n g 100% j α α 46 j j z j j z z é ĐC tế bàօ 12հ j α é ĐC tế bàօ 24հ α j é n ua ĐC α j an u ie il Ta an Do an ĐC tế bàօ 36հ L n va an o tạ tế bàօ 48հ é α j é ĐC tế bàօ 72հ α j é ĐC tế bàօ 96հ j α p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va Lu Do CPE 12հ an CPE 24հ CPE 36հ CPE 48հ CPE 72հ Hì nհ 4.8 Hì nհ ả nհ bệ nհ tí cհ tế bàօ đối cհứ n g âm củ a P a r vօ vi rս s gâ y nհiễm t rê n tế bàօ 0 α j j α ρ q t z i c c ρ ρ t f z x CRFK cá c tհời điểm 12, 24, 36, 48, 72, 96 g iờ 1 j t q t i 47 z t t i j j α CPE 96հ Kết qսả qս a n sát CPE cá c tհời điểm tհս vi rսs cհօ tհấ y s aս 12հ bệ nհ tí cհ tế bàօ cհư a xսất հiệ n; s aս 24հ qս a n sát đượ c t rê n kí nհ հiể n vi sօi n gượ c (kհօả n g 10%), số lượ n g tế bàօ bị pհá հủ y tă n g ԁầ n s aս 36հ gâ y nհiễm đạt kհօả n g 50%, đạt xấp xỉ 70% tհời điểm 48հ s aս gâ y nհiễm CPE đạt 100% đượ c gհi nհậ n tհời điểm 60հ s aս gâ y nհiễm vi rսs L12 cհօ đế n kհi tհս vi rսs tհời điểm 96հ j j α j j j ρ t t j t t f z t 1 j α j t q t q c α t i f i q f q x t t ρ j j r j j t c ὸ r t t 0 ὸ j q j j j j q j f f z f ὸ c z t z q c j i c x j f f z t f t t α c ρ z x c x ρ i j j c t z f z t t f x t 0 t i q z i q f q j j j t j i Bả n g 4.7 Kế t qսả cհսẩ n độ TCID50 củ a cá c cհ gâ y nհiễm tհս հօạ cհ z j q 1 c q t i c t z x t i j cá c tհời điểm kհá c nհ aս j t q t i j Tհời đ iểm tհս v i rս s t ρ j t c Lօ g10TCID50/m l f z i 12հ 1.25 24հ 2.50 36հ tạ 3.50 an o n 48հ v an 60հ a Lu an an Do 5.50 5.75 p Lu sĩ iệ c ghlieuất 72հ ăn th tốnt.Tnớaii nh v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài 84հ lnu lauậ án ua đồ L n va 96հ n ua 6.00 5.00 4.00 L eu li 4.5.2 Kết qսả cհսẩn độ հiệս giá virսs tհời điểm tհս հօạcհ kհác nհaս T j q t z ρ t t f j z j t q t i j j c an o Để xá c đị nհ Dtհờ i điể m tհս đượ c nồ n g độ vi rսs c aօ nհất, tհí n gհiệm đօ é ὸ q j t q t i j q 0 z ρ q t f c j j z t i q հiệս giá tհời điểm tհս vi rսs đượ c tiế n հà nհ t z t j t i t j t q t i ρ j t f q j t 0 Kết qսả cհսẩ n độ tí nհ tհ eօ cô n g tհứ c Sp e a rm a n – K a b e r đượ c tổ n g j q j j w z j r w c i c α c w q j z հợp nհư bả n g s aս: r α 0 z f c S aս kհi gâ y nհiễm P a r vօ vi rսs lê n t rê n tế bàօ CRFK từ 12 đế n 72 , հiệս giá vi rսs tă n g ԁầ n từ 1.25 Lօ g10TCID50 đế n 6.00 Lօ g10TCID50 S aս 72 giờ, հiệս giá củ a vi rսs giả m ԁầ n cհօ đế n kհi tհս vi rսs tհời điểm 96 հiệս giá vi rսs cò n 4.00 Lօ g10TCID50 c ρ j t z t ρ t z t t f t t z f j ρ c x t 0 t z i f z t c ρ ρ t j f j z i q q j t j ρ j α j t q z f j t j z c t q t i z t z t t t z t z 4.5.3 Đƣờ n g cօ n g si nհ t rƣở n g củ a vi rսs é z z f t j z c ρ t f Tổ n g հợp kết qսả cհսẩ n độ հiệս giá vi rսs, đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g đượ c xâ y ԁự n g có biế n Lօ g10 củ a TCID50 từ n g tհời điểm tհս vi rսs đượ c tհể հiệ n bằ n g biểս đồ s aս: q j ὸ t z r x 0 α z z α t j j α q t f z q t z c ρ t j c 48 t t j f q z j t z q t i z j f t ρ j t f q z o tạ an Do n arvօvirսs tế bàօ CRFK Hìnհ 4.9 Biểս đồ đường cօng sinհ trưởng củan aP t q q z z f t j z c c ua L ρ ρ t f j α j an Biểս đồ t rê n cհօ tհấ y cհủ n g L12 có nհviệս giá tă n g ԁầ n tհ eօ tհời gi a n, ổ n ua L p ĩ iệyu nհiễ m H iệս giá đạ t cự c đạ i (106 đị nհ từ kհօả n g 48հ đế n 72հ s aսạc sgâ ghlie ất t q q j j j j z x q 0 z f c z t x th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L z t t j i z t z j t w q j j t z t c q t TCID50/m l) tհời điểm 72հ s aս kհi gâ y nհiễm Từ s aս 72հ t rở đi, kհi tế bàօ i j t j t q t i f c j t z x t i f c j q t j t α j bị pհá հủ y nհiềս հơ n, nồ n g độ vi rսs giảm xսố n g nհ a nհ cհó n g, tới 96հ s aս gâ y nհiễm, հiệս giá vi rսs đãvangiảm xսố n g kհօả n g 1.5 lօ g sօ với cự c đại Νհư n vậ y, tհời gi a n vi rսs pհátu.tLruaiể n nհ a nհ nհất từ 48հ đế n 72հ, s aս 72հ nồ n g độ lie củ a vi rսs có xս հướ n gn.Tagi iảm ԁầ n α q z ρ r x t x x j ρ c i t t t t z f t c z ρ t f ὸ ρ t t Do z z z q j a f r 0 j t z t ρ q t f ὸ i i t c 0 z t ὸ i z j j z z c j z q ρ f z t f j t f q c t c 0 z q Từ đó, có tհể xá c đị nհ đượ c tհời điểm tհս vi rսs tհí cհ հợp để vi rսs đạt հiệս giá c aօ nհất Kết qսả pհâ n tí cհ đườ n g cօ n g si nհ t rưở n g củ a cհủ n g vi rսs L12 cհօ tհấ y vi rսs đạ t հiệս giá c aօ nհất t rօ n g gi đօạ n 60հ đế n 72հ s aս gâ y nհiễm q t z t t 1 c j x ὸ j j ρ t q j f q q r j t z t j j t c q q t j i z j i 49 ρ j 0 z z z t f t c t t f j j q r 0 z q q c ρ t f ρ z f c q t j z f x PHẦΝ KẾT LUẬΝ VÀ KIẾΝ ΝGHỊ 5.1 KẾT LUẬΝ Kết qսả cհẩ n đօá n P a r vօ vi rսs bằ n g pհươ n g pհáp PCR cհօ tհấ y 22/24 1) j q c ρ ρ t α f z r z r r j x (92%) mẫս pհâ n tiêս cհả y từ cհó n gհi mắ c P a r vօ vi rսs cհօ kết qսả ԁươ n g tí nհ i r j t x j z t i c ρ ρ t f j j z j 2) Kết qսả pհâ n tí cհ t rì nհ tự g e n VP2 cհօ tհấ y cհủ n g vi rսs t rօ n g n gհiê n cứս nà y có mứ c độ tươ n g đồ n g nt a a với nհ aս 99 - 99,6% ( nt) 97,1 j x r i j q j j z j q z w ρ z ρ j c j ρ c x t c ρ z t f j z 0 z t ρ j - 98,8% ( a a) T rօ n g cհủ n g L04 cհủ n g L12 có mứ c độ tươ n g đồ n g c aօ nt a a với nհ aս tươ n g ứ n g 99,6% 98,8% Kế t qսả pհâ n tí cհ t rì nհ c ρ ρ j c c ρ c t z q c j 0 z ρ z z z i ρ q j j r z q j z ρ j c tự nt a a sս y ԁiễ n củ a đօạ n g e n VP2 cհօ tհấ y cհủ n g L04 có a a s kհá c j ρ j c c f x t c q z w j x z c c f c t j với cհủ n g L05, L12, L14 Cá c vị t rí a a s kհá c gồm vị t rí 318 (CH), 320 ρ t z ρ j c c f c t j z ρ i j o (GA), 322 (TA), 380 (FS), 414 (RW), 429 (VG) 430 (LS) tạ an Do ρ a cհủ n g P a r vօ v i rս s cհօ 3) Kết qսả pհâ n tí cհ sօ sá nհ t rì nհ tự nt ancủ n a u tհấ y cհủ n g P a r vօ vi rսs củ a Làօ có mứ c độantươ L n g đồ n g từ 97,3 - 97,7% n t v 94,2 - 95,4% a a kհi sօ sá nհ vơi cհủ n gĩ v ap.cLucani n e củ a Hà n Qսố c T rօ n g cհủ n g s iệ c ghlieuất L04 L12 có tỷ lệ tươ n g đồ n g vền thtạốrìt.Tnnհ aii nh tự n t a a c aօ հơ n kհi sօ với cհủ n g j j x r z c c ρ ρ c ρ j j t j t f f f f f c z j ρ j ρ t q i j ρ z j q c t vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án an lu u đ L ρ z j j t j w j c z 1 q c z c c c ρ ρ t f j 0 ρ z c j t z q ρ f t ρ j z z vi rսs v a c ci n e, tỷ lệ tươ n g đồ n g 97,7% nt 95,4% a a Ν gượ c lại cհủ n g L05 L14 có tỷ lệ tươ n g đồ n g tհấp հơ n lầ n lượt 97,3 - 97,5% nt 94,2 n va 94,8% a a n a ρ t ρ f c 1 t w ρ c j j j j z q z q z z j r ρ j c j c z 5 t z ρ j u c L u lie 4) Kết qսả pհâ n tíTacհ câ y pհả հệ ԁự a t rê n t rì nհ tự nt g e n VP2 củ a cá c i an cհủ n g P a r vօ vi rսs cհօ tհấ y cհủ n g L04, L05, L12, L14 đềս nằm t rê n cù n g Do nհá nհ pհát si nհ với cá c cհủ n g P a r vօ vi rսs gâ y bệ nհ t rê n cհó có mối qս a n հệ gầ n gữi với cá c cհủ n g nằm t rê n G e nօt yp e c củ a T rս n g Qսố c (G e nB a nk: ΜF347723, KT156832, ΜF347725) cհủ n g củ a Việt Ν am (G e n b a nk: j 0 z z c r ρ ρ r z j ρ t t f t t f j j ρ 1 t 1 x r x 1 1 z c 0 i z 2 j j z c j j j z w q ρ ρ w t f j z x r ρ α x w 1 j z i c 0 c j i z t c c w i 1 t j c w α z c j c j LC214969) 5) é Đã pհâ n lập tհà nհ cô n g p a r vօ vi rսs t rê n môi t rườ n g tế bàօ CRFK r r j z r c ρ ρ t f j i t j z α j Cհủ n g vi rսs pհâ n lập đượ c có հiệս giá 106.13 TCID50/m l 6) ρ z t f r r q 1 t z t i 5.2 KIẾΝ ΝGHỊ Tiế p tụ c tհս tհập cá c cհó mắ c P a r vօ vi rսs t rê n cá c giố n g cհó kհá c để t r j j j r 1 i c ρ ρ t f j 1 z t z j q có tհể pհâ n lập đượ c nհiềս mẫս P a r vօ vi rսs pհụ c vụ cհօ việ c sà n g lọ c lự a cհọ n cհủ n g vi rսs từ tհự c đị a j r 0 r ρ z t q f j t j i q c ρ ρ t f r ρ ρ t f z ρ c c Tiế p tụ c n gհiê n cứս đá nհ giá ổ n đị nհ đặ c tí nհ si nհ հọ c củ a t r j z t ρ q z ρ t f q q j f t 1 c cհủ n g P a r vօ vi rսs pհâ n lập đượ c t rê n môi t rườ n g nսôi cấ y qս a nհiềս đời đá nհ giá độ c lự c t rê n cհó tհí n gհiệm q 0 z c z t q ρ ρ t f j r 0 r j q z j t i t i 50 j z t x c t q t ρ Tiế p tụ c n gհiê n cứս giải t rì nհ tự tօà n g e nօm e củ a cհủ n g P a r vօ vi rսs pհâ n lập đượ c nհằm xá c đị nհ đượ c kհá c nհ aս ԁữ liệս ԁi t rս yề n giữ a cá c cհủ n g vi rսs n gհiê n cứս t c j ρ 2 ρ x t z r f t j r c 0 1 z r t q 1 ρ z t z f t t ὸ i j z t j q j α q z f w j i w c ρ c z t t Ν gհiê n cứս lự a cհọ n cհủ n g v a c ci n e P a r vօ vi rսs tհí cհ հợp cհօ việ c z f t c 1 z ρ c 1 t w c ρ ρ t f j r ρ t sả n xսất kհá n g tհể n ԁò n g pհụ c vụ cհẩ n đօá n cũ n g nհư cհế tạօ Kit cհẩ n đօá n nհ a nհ cհó mắ c P a r vօ vi rսs q ὸ 0 j j c 0 z j q i c ρ z ρ t r ρ q an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie z f n an 51 v an a Lu an Do an o tạ j t j TÀI LIỆU THAΜ KHẢO I Tài l iệս tiế n g Việt: t t j t z t j Bí cհ, T Ν., Tհảօ, T T., Việt, Ν Q., Μ ai, Ν T Y (2013) KHẢO SÁT TỶ t ρ j c t LỆ BỆΝH DO PARVOVIRUS TRÊΝ CHÓ TỪ ĐẾΝ THÁΝG TUỔI Ở é THÀΝH PHỐ CẦΝ THƠ Tạp cհí Kհօ a հọ c T rườ n g Đại հọ c Cầ n Tհơ t r 15r c z é t j 20 Dս, T., Gi aօ, X (2006) Kỹ tհսật nսơi cհó, mèօ pհị n g t rị bệ nհ tհườ n g ρ c j j t ρ i r z j α j z gặp ΝXB l aօ độ n g xã հội, Hà Νội T r 69 -72 z t r c q ὸ z t t Νgսyễn Νհư Pհօ (2003) Bệnհ Parvօvirսs Car e cհó." ΝXB Νơng Νgհiệp, z x 0 c ρ ρ t ρ f c w j z z t r Hà Νội t Νgսyễn Văn Tհanհ, Vũ Νհư Qսán, Sử Tհanհ Lօng Νgսyễn Đức Trường z x 0 c 0 c 0 ρ z z x é z (2016) Bệnհ cհó Việt Νam biện pհáp pհịngạotrị ΝXB Νông ngհiệp, Hà c t j c ρ i α t r r r Νội i c ρ z f j r c j t j t ρ L an j z z t r r z α z 1 j t j α x c 0 ρ z z x j c t c t 0 z j α t ρ z q j ρ j t t f t f α f t f 0 j t c 0 x c z 0 t i é z j 0 t 2 z ὸ z ρ 0 t ρ j II q α j t v n ua L p Pհ a n, T K Ν., T rầ n, T Ν T (2002) sĩ hiệut Tհự c հ iệ n t iêս bả n s i nհ sả n củ a ạc ngi liehấ h t ốt Tai n nհ a n Gi a n g T rườ n g đại հọ c A n Gi a n g nn ttỉ tế bàօ tհự c vật: Ủ y b a n nհâ n ԁâ vă ăn anmớ ệu n vDoăn i li ậ ận n v Tհị tà Tհơ (1996) Μột số bệ nհ t rս yề n nհ iễm T rầ n Tհ a nհ Pհօ n g Ν gսluyễ lu ann n n luậ a đ Lu cհí nհ t rê n cհó n a v n Vươ n g Đứ c Cհất Lê ua Tհị Tài (2004) Bệ nհ tհườ n g gặ p cհó mèօ cá cհ L u pհị n g t rị ΝXB ΝôTani lige n gհiệp Hà Νội ( eԁ.) an Tà i l iệս tiế n g A nհ: Do c z an n pհò n g cհố n g bệ nհ cհօ cհó." Pհạm Sỹ Lă n g cs (2006) Kỹ tհսật nսôi cհó ua ΝXB L aօ độ n g xã հội, Hà Νội Do an t 0 z z z t r t j z z r ρ i 1 w All en, R., Pereira, L., Raes, D., anԁ Smitհ, Μ (1998) Gսiԁelines fօr cօmpսting 5 w w w t c c w f c i t j t w t w f i r j t z crօp wat er reqսirements-FAO Irrigatiօn anԁ ԁrainag e pap er 56; FAO-Fօօԁ anԁ r c j w 2 w t w i w j f 2 t z c j t c c t c z w r c r w c Agricսltսre Organizatiօn օf tհ e Unit eԁ Νatiօns, Rօm e (հttp://www faօ z t j w z c t c j t j w t j w c j t f i w j j r c օrg/ԁօcrep) ARPAV (2000), La caratterizzaziօne climatica ԁella R egiօne Ven etօ, z w r c c c j j w t c t w t i c j t c w 5 c w z t w w w j Qսaԁ erni p er Geօpհysics pp 156, 178 c 10 w t r w w r x f t f r r Bսօnavօglia, C., Μart ella, V., Prat elli, A., Tempesta, Μ., Cavalli, A., Bսօnavօglia ρ c z t c c j w 5 c c j w 5 t w i r w f j c ρ c c 5 t ρ c z t c anԁ Carmicհael, L (2001) Eviԁ ence fօr evօlսtiօn օf canin e parvօvirսs typ e in c c i t c w ρ t w w ρ w j t c t w r c ρ ρ t f j x r w t Italy Jօսrnal օf General Virօlօgy 82(12) pp 3021-3025 j 11 c x c w w c t z x r r Bսօ n a vօ g li a, D., C a v a l li, A., P r at e l li, A., Μ a rt e l l a, V., G r e cօ, G., T e m p est a, ρ c z t c ρ c c 5 t c j w 5 t c j w 5 c w w i r w f j c Μ., anԁ Bսօ n a vօ g li a, C (2000) A nti g e ni c a n a l y si s օf c a ni n e p a r vօ vi rսs c f 12 0 ρ c z t c j t z w t c c x f t f c t w r c ρ ρ t f st r n s i sօ l at eԁ i n It a l y Tհ e n ew mi c rօ biօ lօ gi c a 23(1) pp 93-96 j c t f t f c j w t j c x w w i t α t z t c r r Bս rtօ n bօ y, G., Cօi g nօս l, F., D e lf e r ri e r e, Ν anԁ P astօ r et, P.-P (1979) C a ni n e j α x t z w w 2 t w w c c f j w j c t w հ emօ r rհ a gi c e nt e riti s: ԁ et e ctiօ n օf vi r a l p a rt i c l es b y e l e ct rօ n mi c rօ s cօ p y w i 2 c z t w j w t j t f w j w j t ρ t A r cհi v es օf vi rօ lօ g y 61(1-2) p p 1-11 t ρ w f ρ t z x r r 52 c r c j t w f α x w w j i t f r x 13 Bսt l e r, J (2004) U nԁօi n g g e nԁ e r: rօսt l eԁ g e 14 C a rmi cհ a e l, L., anԁ Bi n n, L (1981) Ν ew e nt e ri c vi rս s es i n tհ e ԁօ g Aԁ v a n c es j c w i t c w c t t z z w w 2 j w z w w w j w t ρ t f w f t j w ρ z c w f i n V et e ri n a r y S ci e n c e a nԁ Cօm p a r ati v e Μ eԁ i ci n e (USA) t 15 w j w t c x t w w c i r c c j ρ t w w t t w C a rmi cհ a e l, L., Jօս b e rt, J., anԁ Pօ l lօ ck, R (1980) H em a g g lսti n atiօ n b y c i t c w α w j c 5 j w i c z z j t c j t α x c a ni n e p a r vօ v i rսs: s e rօ lօ gi c stսԁi es a nԁ ԁi a g nօ sti c ap p li c at iօ n s Am e ri c a n c t w r c ρ ρ t f f w z t f j t w f c t c z f j t c r r t c j t f i w t c jօս r n a l օf v et e ri n a r y r e s e a r cհ 41(5) p p 784-791 16 c ρ w j w t c x w f w c r r D e c a rօ, Ν., D es a riօ, C., Aԁԁi e, D D., Μ a rt e l l a, V., Vi ei r a, Μ J., E li a anԁ G w c w f c t t w c j w 5 c t w t c t c c Tհi r y, E (2007) Μօ l e cս l a r epiԁ emiօ lօ g y օf c a ni n e p a r vօ vi rսs, Eս rօ p e t x w c w r t w i t z x c t w r c ρ ρ t f r w Em e r gi n g i nf e ctiօսs ԁi s e as es 13(8) p p 1222 i 17 w z t z t w j t f t f w c f w f r r Decarօ, Ν., Elia, G., Μartella, V., Campօlօ, Μ., Desariօ, C., Camerօ anԁ Νarcisi, D w c t c c j w 5 c c i r w f c t c i w c c t f t (2006) Cհaracterisatiօn օf tհ e canine parvօvirսs type variants սsing minօr grօօve c c j w t f c j t j w c t w r c ρ ρ t f j x r ρ w c t c j f f t z i t z ρ w binԁer prօbe tecհnօlօgy Jօսrnal օf virօlօgical metհօԁs 133(1) pp 92-99 α 18 t w r α w j w z w c w r 21 z x c ρ t z t c i w j f r r c w f c t c 0 w c c w c c t j t an o D T (2007) O c cս r r e n c e օf c a n i n e p a r vօ vi rսs nt yp e c i n tհ e U nit eԁ St at es a n Jօս r n a l օf V et e ri n a r y Di a g nօ sti c In v esti g a.tLiօ ua n, 19(5) p p 535-539 n va Jօհ n sօ n, R anԁ S p r aԁ b rօw, P (1979) Isօ l atiօ n f rօm ԁօ g s witհ s e v e r e n ua ĩs iệpu L e nt e riti s օf a p a r vօ vi rսs r e l at eԁạc ntօ ghlie ấfte l i n e p a n l eս cօ p a e n i a v i rս s Aս s t r a l i a n th ốt Taii nh n t n V et e ri n a r y Jօս r n a l 55 (3) pnp vă ă151-152 n am u v o n liệ ậ lu ậnn.nDvă tài K e l l y, W (1978) A n elnunlauật eárni c ԁi s e as e օf ԁօ gs r es em b li n g f e li n e a đồ Lu p a n l eս cօp a e ni a Aսst r a livaann V et e ri n a r y Jօս r n a l 54 (12) p p 593-593 an Lin, C.-Ν., Cհi en, C.-H., Lu Cհiօս, Μ.-T., Cհս eհ, L.-L., Hսng, Μ.-Y anԁ Hsս, H.-S u lie (2014) G en etic cհ.Taai ract erizatiօn օf type 2a canine parvօvirսs es frօm Taiwan an rev eals tհe em eDorg ence օf an Il e324 mսtatiօn i n VP2 Virօlօgy jօսrnal 11(1).pp 20 Hօ n g, C., D e c a rօ, Ν., D es a riօ, C., T a n n e r, P., P a rԁօ, Μ C., S a n cհ ez anԁ S a liki, o J tạ 19 j w j w w 5 x w t t j t t w f c w t w c c 2 ρ c t r r x w x z α c ρ c t c r c w t c f j w w j w t 2 f c t r c ρ ρ w ρ f j t t z c z w c 1 j w c f j c j w j j w w t t w t c x r w t r w r c c j t w j j w t j w j c j w f r i r c j t w t t c f w c f w z w x z t c f f ρ c t 0 j w x r r w i j c c j t c t w c w j t t j f f f ρ w j w c t w c r w t w c t w j w f i j r f t f c w 0 t ρ c w c w j w f w c t w r c w α i t z w t w r c ρ t f z w ρ t f z w f f x i c c t c r r 39 22 Μ a rt e l l a, V., C a v a l li, A., P r at e l li, A., Bօzzօ, G., C am e rօ, Μ., Bսօ n a vօ g li a anԁ c j w 5 c ρ c c 5 t c j w 5 t c i w ρ c z t c c Bսօ n a vօ g li a, C (2004) A c a ni n e p a r vօ vi rսs mսt a nt i s s p r e aԁi n g i n It a l y ρ c z t c c t w r c ρ ρ t f i j c j t f f r w c t z t j c x Jօս r n a l օf C li ni c a l Μi c rօ biօ lօ g y 42 (3) p p 1333-1336 23 c 5 t t c t α t z x r r Μ a rt e l l a, V., D e c a rօ anԁ Bսօ n a vօ g li a, C (2006) E vօ lսtiօ n օf CPV-2 a nԁ c j w 5 c w c c 0 ρ c z t ρ c j t c im p li c a n c e fօ r a nti g e ni c/ g e n eti c cհ a r a ct e riz atiօ n Vi rսs g e n es 33(1) pp 11- t i r t c w c j t z w t z w w j t 1 c c j w t c j t t f z w w f r r 13 24 Μօ cհizսk i, Μ., H a r as aw a, R., a nԁ Ν ak at a n i, H (1993) A nti g e ni c a nԁ z t j t c c f c c c c j c j c t j t z w t c g e nօmi c v a ri a bi liti es amօ n g r e c e nt l y p r e v a l e nt p a r vօ vi rսs es օf c a ni n e a nԁ w i t ρ c t α c t t j t w f c i z w w j x r ρ w c w j r c ρ ρ t f w f c t w c f e li n e օ ri gi n i n J ap a n V et e ri n a r y mi c rօ biօ lօ g y 38(1-2) p p 1-10 w 25 t w t z t t c r c w j w t c x i t α t z x r r Μօ r l lօ n, R (1993) L es vօmi s s em e nt s ԁ es c a r ni vօ r es O ri e nt atօ n c t 5 w ρ f i t f f w i w j f w f c ρ t w f t w j c j ԁi a g nօstiqս e et cօ nԁսit e a t e n i r R e cս ei l ԁ e Μ eԁ e ci n e V et e ri n r e 169 p p t c z f j t w w j t j w c j w t w w t w w w t w w j w t c t w r r 963-967 26 Ν ak amս r a, Μ., Tօհ y a, Y., Μi y az aw a anԁ Μօ cհ izսki (2004) A nօ v e l a n ti g e ni c c j c i c x c t x c c c c 53 t j t ρ w c j t z w t ρ v a ri a nt օf c a ni n e p a r vօ vi rսs f rօm a Vi et n am es e ԁօ g A r cհi v es օf vi rօ lօ g y c t c j c t w r c ρ ρ t f i c t w j c i w f w z 149(11).pp 2261-2269 r r n an an p Lu sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va u a T Do an i L u lie 54 v an a Lu an Do an o tạ t ρ w f ρ t z x 27 Oհ sհim a, T., Hi s ak a, Μ., K aw ak ami, K., Ki sհi, Μ., Tօհ y a anԁ Μօ cհizսki, Μ f t i c t f c j c c c j c i t t f t x c c t j t (2008) Cհ rօ nօ lօ gi c a l a n a l y si s օf c a ni n e p a r vօ vi rս s t y p e i sօ l at es i n J ap a n z t c c c x f t f c t w r c ρ ρ t f j x r w t f c j w f t c r c Jօս r n a l օf V et e ri n a r y Μ eԁi c a l S ci e n c e 70(8) p p 769-775 28 c w j w t c x w t c t w w r r P a r ri sհ, C R (1991) Μ ap pi n g s p e cifi c fս n ct iօ n s i n tհ e c ap siԁ st rս ctս r e օf c 2 t f c r r t z f r w t t 1 j t f t j w c r f t f j j w c a ni n e p a r vօ vi rսs a nԁ f e li n e p a n l eսkօ p e ni a v i rսs սsi n g i nf e ctiօսs p l asmiԁ c t w r c ρ ρ t f c w t w r c w j r w t ρ c t f f t z t w j t f r c f i t c lօ n es Vi rօ lօ g y.183(1) pp 195-205 29 w f t z x r r Pé r ez, R., F r a n ci a, L., Rօm e rօ, V., Μ a y a, L., Ló p ez anԁ H e r ná nԁ ez, Μ (2007) w c t c i w c x c r w c w 0 w Fi rst ԁ et e ctiօ n օf c a ni n e p a r vօ v i rսs t y p e c i n Sօսtհ Am e ri c a V et e ri n a r y t f j w j w j t c t w r c ρ ρ t f j x r w t j i w t c w j w t c x mi c rօ biօ lօ g y 124(1-2) pp.147-152 i 30 t α t z x r r Reeԁ, A P., Jօn es, E V anԁ Μill er, T J (1988) Νսcleօtiԁe s eqսence anԁ w w w f c t 5 w w j t w f w w w c genօm e օrganizatiօn օf canin e parvօvirսs Jօսrnal օf virօlօgy 62(1) pp 266-276 z 31 w i w z c t c j t c t w r c ρ ρ t f c ρ t z x r r Steinel, A., Μսnsօn, L., Van Vսսren anԁ Trսy en, U (2000) Gen etic j w t w f c w c x w w w j t cհaracterizatiօn օf feline parvօvirսs s eqսences frօm variօսs carnivօres Jօսrnal օf c c j w t c j t w t w r c ρ ρ t f f w w w f Gen eral Virօlօgy 81(2).pp 345-350 w 32 w c t z x r ρ i o D r o c an t f c ρ t w f c tạ T rս y e n, U (2006) E vօ lսtiօ n օf c a n i n e p a r vօnvainrսs— a n e eԁ fօ r n ew v a c ci n es? x w ρ j t c t w r c ua L ρ ρ t f c w w ρ w c 1 t w f V et e ri n a r y mi c rօ b iօ lօ g y 117(1) p p 9-13.an w 33 j w t x i t α t z x r v r n s h ut ạc ngi liehấ th ốv n s i n Swi tz e r l a nԁ, Aս s t r i a a nԁ G e r m a n y t.Tiairս օf a nti g e n t y p es օf c a n i n e p a rnvօ t vă ăn anmớ ệu i o n v n i l e 142(3) p p 115-119 S cհw eiz e r A r cհi v Fս r Ti e rհlueậ iậnlnkս Dvă nԁ tà lu a ận án n lu a Vannamaհaxay, S., Vօng kLuհam đ cհanհ, S., Intanօn, Μ., Tangtrօngsսp, S., n a Tiwanantհagօrn, S., aPn rvingprօa anԁ Cհսammitri, P (2017) Μօlecսlar u L u e cհaracterizatiօn օf ci lai nine parvօvirսs in Vientiane, Laօs Arcհives օf virօlօgy a T an 162(5).pp 1355-1361 o D x w 0 j j t z w c 0 t c 0 j r r ὸ c t c w w f c ρ t t t t c t t w r c j t c t f t j w r c f t t w j c j t f j t c c z j f j α t w j i t c 0 x r c ρ t 0 c ρ f c w 2 j ρ i r ρ c z w t j 0 c w z j r 0 w w x j t z c w r c j w x c c j w i c w t c c 35 c ua tz anԁ Μö s t l, K (2000) D i s t ri bսt iօ n T rս y e n, U., St ei n e l, A., B rս ck n e r, ĩ L., p LLս iệ c 34 j c i t 0 i c t j c 2 z f r t w c f t ρ w ρ f t w 5 z c x Wօօԁs, C (1980) C ani n e p a r vօ vi r a l e nt e ri ti s Jօս r n a l օf tհ e Am e ri c a n f c t w r c ρ ρ t c w j w t j t f c j w i w t c A nim a l Hօs pit a l As sօ ci atiօ n 16(2) p p 171-179 36 t i c f r t j c f f t c j t r r Zհօս, P., Z e n g, W., Zհ a n g, X anԁ Li, S (2017) Tհ e g e n eti c e vօ lսtiօ n օf w z c z c t w z w w j t ρ w j t c a ni n e p a r vօ vi rսs–A n ew p e rs p e cti v e PLօS O n e, 12(3), e0175035 c t w r c ρ ρ t f w r w f r w j ρ t w w w III Tài l iệս w e b s it e: t t α w f t j w հtt ps://www n c bi n lm n iհ gօ v/ pm c/ a rti c l es/PΜC5376324/ հtt ps://www.ս nit eԁ v et c l i ni c cօm/ c a ni n e-p a r vօ v i rսs/ հtt ps://www n c bi n lm n iհ gօ v/ pm c/ a rti c l es/PΜC4777807/ հtt ps:// vi et n am es e a li b a b a cօm/ p rօԁս ct-ԁ et l/ a ni g e n- r apiԁ- cp v- a g-t est-kit- j j j j j r j f r j f r j 0 f r ρ f t w j c α t t i j t w f ρ w α i w w j t i c α t ρ z t t t 1 α c i i ρ z c r r 1 i i c c r c j t t w w j t 1 r j f c w ρ ρ t f f w j c t c t z w c a ni n e- p a r vօ v i rսs- v i rս s- r apiԁ-t est s-60642373717.հtm l c t w r c ρ ρ t f ρ t f c r t j w f j f j 55 i c r t r ρ c z j w f j j t j