Nghiên cứu thuốc điều trị bệnh sỏi tiết niệu từ bài cổ phương ngũ linh tán

Trang 1

BỘ KHOA HỌC, CƠNG NGHỆ VÀ MƠI TRƯỜNG Viện dược liệu- 3® Quang Trung Hà Nội

Báo cáo tổng kết khoa học và kĩ thuật dé tai :

NGHIÊN CỨU THUỐC ĐIỀU TRỊ BỆNH SƠI TIẾT NIỆU

TỪ BÀI CỔ PHƯƠNG NGŨ LINH TÁN

TS Phạm Thanh Trúc

Hà nội, 07-2004

Ban thao viét xong 11-2001

Tài liệu này được chuẩn bị trên cơ sở kết quá thực hiện Để rài Độc lập cấp Nhà

nước

5162 - 5

Trang 2

DANH SÁCH NHỮNG NGƯỜI THỤC HIỆN

1 Nghiên cứu hĩa học, chiết xuất, xây dựng tiêu chuẩn & theo đối độ ổn định thuốc (Chương II-mục 2.1 Chương TV- mục 1, 5, 6 Chương V- mục 1 )

«PGS.TS Bùi Thị Bảng, Trưởng khoa PTTC- Viện dược liệu

«_ DS Nguyễn Thị Dung, khoa PTTC Viện được liệu

CN Nguyễn Văn Tài, khoa PTTC- Viện được liệu

D§ Lã Kim Oanh, Trưởng khoa cơng nghệ & chiết xuất- Viện được liệu —_ + CN, Trương Vĩnh Phúc, phố khoa cơng nghệ & chiết xuất: Viện dược liệu 3 Nghiên cứu bào chế & theo dõi độ ổn định thuốc (chương Ï-mục 1 Chương 11-mục 1, 2 Chương II1-mục 182 Chương IV-mạc 4, 6 Chương V,VI )

= TS Pham Thanh Trúc, Trưởng khoa bào chế & chế biến - Viện dược liệu «_ DS Nguyễn Thanh Bình, khoa bào chế & chế biến - Viên dược liệu

©_ KTV Nguyễn Văn Doanh, khoa bào chế & chế biến - Viện dược liệu 3 Nghiên cứu dược lý, độc tính (chương HH- mùục 2.3, 2.4 Chương IV- mục 2,3 Chương Vi- muc 2)

* BS Nguyễn Chí Mai - khoa nội Viện YHCT Vietnam

»_PGSTSKH Đỗ Trung Đầm , khoa dược lí-sinh hĩa- Viện dược liệu

«_ DS Nguyễn Kim Phượng, Trưởng khoa dược lí-sinh hĩa- Viện được liệu + DS Nguyễn thị Dung, khoa được lí-sinh hĩa- Viện được liệu

+ _BS Nguyễn Kim Phương, khoa được lí-sinh hĩa Viện dược liệu « DS 5 thi Phuong , khoa dược lí-sình hĩa Viện được liệu

4 Nghiên cứu và theo đối lâm sàng ( chương LI- mục 1 Chương HỊT- mục 3.7 Chương IV- mục 7)

+ TS Quách Mai Loan, Trưởng phịng Quản lí KH & ĐT- Viện dược liệu «BS, CK II Trân Thị Loan, Trưởng khoa nội - Viện YHCT Viet-nam

Trang 3

BAITOM TAT

1 Lời nĩi đầu:

Bệnh sỗi đường tiết niệu hay gặp trên thể giới và rất phổ biến ở Việt nam Theo y học hiện đại để điều trị bệnh này, thường chỉ định phẫu thuật khi sỏi to, gây biến chứng Bệnh nhẹ hơn cĩ thể dùng phương pháp tần sỏi ngồi cơ thể, tán sỏi qua da, lấy sỏi qua ống soi niệu quản Theo y học cổ truyền cĩ nhiễu bài thuốc cổ phương &- kinh nghiệm đân gian đã được sử dụng, nhằm làm bài tiết ra sơi Để tài đã chọa một trong những bài cổ phương được dùng nhiều tại Viện YHCT Việt nam là bài Ngũ linh tán gồm 5 vị là Trư lính, Bạch linh, Bạch truật, Trạch tả, Quế chỉ, gia them Kim tiền thảo, Cối xay, Kê nội kim Mục đích cđa để tài nhằm chứng minh tác đụng bài sơi của thuốc, hiện đại hĩa dạng thuốc cổ truyền để đưa ra thị trường một loại thuốc uống dùng phịng và điều tị bệnh sỏi tiết niệu, thuốc đễ uống, cĩ hiệu lực, an tồn, cĩ thể kiểm sốt được về chất lượng Thuốc cĩ tên thương rại là viên bao Sotinin

2,Tổng quan tài liệu:

Nguyên nhân sinh bệnh cĩ rất nhiều, nhưng nguyên nhân chính là do rối loạn

chuyển hĩa cơ thể, khiến tăng lượng canci, phosphat, urat Thuốc tân được ding điều

trị nội khoa để cho ra sỗi hiện chưa cĩ, thuốc từ được liệu chủ yếu sử dụng theo một vài bài cổ phương hoặc kinh nghiệm dân gian, chưa được nghiên cứu đầy đú

Căn cứ vào những tài liệu đã cơng bố cho thấy hầu hết các vị dược liệu sử dụng trong bài Ngũ linh tán cĩ tác dụng sinh học liên quan đến trị bệnh như hạn chế hình thành sỏi thận, tăng đào thải các yếu tố tạo sơi, chống viêm, lợi tiểu

3.Kết quả nghiên cứu & bàn luận :

a Nghiên cứu hĩa học & Nghiên cứu phương pháp chiết xuất;

Phát hiện thêm một số nhĩm chất như coumarin trong Bạch truật, flavonoid trong Cối xay, saponin trong trong Tru linh, Bạch linh & sterol trong Kẻ nội kim

Qua khảo sát hàm lượng chất tan của các vị thuốc trong dung mơi nước và cthanol, đã cải tiến phương pháp điều chế cao Sotinin, làm giảm được khối lượng cao 24⁄4 so với phương pháp cổ truyền, đồng thời nâng cao được chất lượng của cao thuốc

b.Nghién citu sinh học

Đã chứng minh trên súc vật thực nghiệm tác dụng lợi tiểu, chống viêm, bài mịn sơi & giãn cơ của cao Sotinin chiết được

Trang 4

c Nghiên cửu bào chế:

Nghiên cứu dạng bào chế thích hợp là viên bao, nghiên cứu bao bì đồng gối và theo đối độ én định thuốc „ thuốc nghiên cứu cĩ tuổi thọ là 24 tháng

4 Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn cao bán thành phẩm &: viên bao Sotinin, các chỉ tiêu ảo sắt theo qui định chung của DOVN,

e Nghiên cứa lâm sàng :

"Thuốc được nghiên cứu trên 45 bệnh nhân, đối chiếu theo nghị định số 371/QĐ- BYT, thuốc đã được thử lâm sàng ở giai doan 1&2

Xết quả nghiên cứu lam sàng đã chứng mình thuốc cĩ tác dụng chống viêm, bài mồn sỏi và ra sồi rất tốt Với sơi thận tỉ lệ ra sơi và nhỏ đi đạt 71,89%, với sồi niệu

quản là 84.1% Thuốc khơng cổ tác dụng phụ, am tồn cho người sử dụng 4 Kết luận:

~ Để tài đã hồn chính tồn bộ nội dung nghiên cứu theo dúng hợp đồng và để cương, xây dựng

- Đã chứng mủnh được tác dụng độc đáo của bài thuốc cổ phương, đã đưa ra được dạng bào chế hiện đại, thuốc cĩ thể kiểm sốt được về mặt chất lượng, cĩ thể sản xuất dược

ở qui mơ cơng nghiệp, thuốc để sử dụng, vận chuyến và bão quản

- Trong quá trình thực hiện nội đung nghiên cứu của đề tài đã giúp 2 cán bộ bảo vệ

học vị sau đại học (1 thạc sŸ & 1 bác sỹ chuyên khoa 2.)

Trang 5

d Dinh tinh sterol

Nội dung Trang

CHƯƠNG I: LỚI MƠ ĐẦU 1

Mục tiêu 2

Nội dung

CHUGNG I: TONG QUAN

1-Tổng quau về bệnh sỏi đường tiết niệu at

1.1 Theo quan niém y hoc hién dai 3

1-2 Theo quan niệm ÿ học cổ truyền 6

1.3 Những nghiên cứu về thuốc điều trị sơi từ dược liệu 7

2 Khao sat tu ligu vé thanh phan hĩz học, tác dụng sình hoc và cơng| 9 dụng của các vị thuốc trong bài thuốc trị sơi thận

2.1 Kim tiên thảo 9 2:2 Cổi xay 5 Ị 2.3 Bạch linh a; F 2.4 Trạch tả ot 2.5 Bạch truật 10 ị 2.6 Trư linh 10 i 2.7 Ké ni kim 10 2.8 Quế ij CHƯƠNG HI: NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG| 1Š PHÁP NGHIÊN CỨU :

1 Nguyên liệu & trang thiết bị 13

2 Phương pháp nghiên cứu 14

|2-1 Nghiên cứu hĩa học & Nghiên cứu qui trình chiết xuất =

lata Nghiên cứu hĩa học 14

| a Đinh tính nhĩm chất flavonoid lo)

b Định tính nhĩm chất saponin By

Trang 6

{2.1.2 Nghiên cứu quy trình chiết xuất t6

2.2 Nghiên cứu tác đựng được lý 18

2.3 Nghiên cứu độc tính cấp 21

2.4 Nghiên cứu đạng bào chế 21

2.5.Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn bán thành phẩm& thành phẩm 2

2.6 Nghiên cứu độ ổn định thuốc 22

2.7 Nghiên cứu lâm sàng 2

2.7.1 Thử thuốc Sotinin trên người tình nguyện (giai đoạn 1) 22

277.2 Thử thuốc Sotinin trên 35 bệnh nhân (giai đoạn 2) 2i

CHUONG IV: KET QUA NGHIEN CUU VA BAN LUAN 26

1 Nghién ctu héa hoc & Nghién cin chiết xuất 6 |

2.Nghiên cứu tác đụng được lý 29

2.1 Nghiên cứu tác dụng lợi tiểu 29 |

3.2 Tác dụng làm mịn sơi in-vitro 3Ĩ ị

2.3 Tác dụng chống viêm cấp tính 33

2.4 Nghiên cứ tác dụng của thuốc trên cơ trơn a4

3 Nghiên cứu độc tính cấp 36 |

4: Nghiên cứu dạng bào chế 37 ị

4.1 Xây dựng cơng thức viên nếu 37 :

42 Viên bao 39

4.3 ˆ Nghiên cứu bào chế viên nang at

44 Nhan xét chung 4

3, Nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn 45

6 Nghiên cứu độ ổn định thuốc 49

7 Nghiên cứu lâm sàng 52

i 7.1 Nghiên cứu thuốc trên 10 người tình nguyện 52

7.2 Nghiên cứu thuốc trên 35 bệnh nhân 5ã 7

CHƯƠNG V : KẾT LUẬN oe

Trang 7

PHAN PHU LUC : 71

Báo cáo kết quả nghiên cứu độc tính cấp

TCCS cao Sotinin

TCCS viên bao Sotinin

Quy trình sẵn xuất cao Soinin

Trang 8

NHUNG CHU VIET TAT

YHCT y học cổ truyền

YHHD y học hiện dai

STN sơi tiết niệu

SKLM sắc kí lớp mỗng

DĐVN được điển Việt nam

KIT kim tiền thảo

Na.CMC natri cacboxymethylcellulose

DST natri starch glycolate HPMC hydroxypropylmethylcellulose ct cơng thức Cao Sotinin cao khé Sotinin ad dung dich HC hồng cầu BC bạch cầu

HA(TT) huyết áp tâm thu

HA(TTr) huyết áp tâm trương

Trang 9

CHUONGI LỜIMỞ ĐẦU

Sỏi đường tiết niệu bao gồm sỏi thận, sơi niệu quản, sỏi bằng quang, sỏi niệu đạo là một bệnh hay gập trên thế giới và rất phổ biến ở Việt Nam, thơng thường chiếm tý lệ 3-4% tổng số bệnh nhân phải nhập viện Khoảng 80% các viên sỏi ở đường tiết

niệu cấu tạo bởi canci phối hợp với gốc phosphat hoặc oxalat Một số ít là sơi hữu cơ cấu tạo bởi acid uric hay một acid amin là cystine Sỏi tiết niệu nếu khơng được điều

tri dé đưa đến biến chứng viêm thận, suy thận, cĩ thể dẫn đến tử vong [4.27,31] Trong vịng vài thập kỉ gần đây phương pháp điều trị bệnh sỏi tiết niệu trên thế giới cĩ nhiều biến đổi to lớn, nhờ những tiến bộ trong lĩnh vực quang học, siêu âm và laser

Sưi tiết niệu cĩ thể được lấy ra bằng các phương pháp hiện đại như: tán sỏi ngồi cơ thể, lấy sỏi thận qua da, lấy sỏi qua ống soỉ niệu quản hoặc mổ iấy sỏi khi sỏi to, gây

biến chứng nặng, như đường bài riết nước tiểu bị tắc, nhiễm khuẩn nặng gây suy thân, vơ niệu hoặc đe đọa tính mạng bệnh nhân [26] Cịn điểu trị nội khoa chủ yếu là nàng cao thể trạng như dùng kháng sinh trong trường hợp nhiễm khuẩn, đặc biệt đối với

loại vi khuẩn tác động tren uré niệu, thuốc giảm đau, giảm co bĩp [4, 27]

Theo y học cổ truyền, sỏi đường tiết niệu do thấp nhiệt kết Ở hạ tiêu gây ra Cĩ nhiều bài thuốc cổ phương và kinh nghiệm dân gian được sử dụng nhằm làm đái ra sối, bào miịn sỏi, hay tan sỏi và cồn cĩ thể làm thay đổi cơ địa để sỏi khơng tái phát

[12.25] Tuy vậy những cơng trình nghiên cứu tồn điện thuốc điểu trị bệnh sỏi tiết niệu cồn rat ft

Bài “Ngũ linh tán gia vi" xuất phát từ bài thuốc cổ phương “Ngũ linh tán” gồm năm vị Trư linh, Bạch trật, Trạch tả, Phục linh, Quế chỉ gia thêm Kim tiên thảo, Kẻ nội kim, lá Cối xay đã được dùng trên lâm sàng tại Viện Y Học Cổ Truyền Việt Nam trong nhiều năm qua để điều trị bệnh sỏi đường tiết niệu, bài thuốc cho kết quả cao, nhìmg dùng dưới dạng thuốc sắc, nẻn khơng thuận lợi cho bệnh nhân sử đụng và cũng khĩ phổ biến đại trà

Trong cơng trình này chứng tơi áp dụng các nghiên cứu khoa học hiện đại để chứng minh tác dụng bài sỏi của bài thuốc cổ phương “gỡ fnh sân", hiện đại hố

đạng thuốc cổ truyền nhằm đưa ra được một loại thuốc dùng uống để phịng và điều trị bệnh sỏi tiết niện cĩ hiệu lực , an tồn , cĩ thể kiểm sốt về chất lượng ;

thuận tiện khi sử dụng, cĩ thể sản xuất ở gửi mơ cơng nghiệp, thuốc cĩ tên

Trang 10

MỤC TIÊU CỦA ĐỂ TÀI

Nghiên cứu thuốc phịng và điểu trị bệnh sỏi tiết niệu từ bài thuốc cổ phương Ngũ linh tán

NOI DUNG NGHIÊN CỨU

1 Nghiên cứu về hĩa học: xác định thành phần hĩa học, nghiên cứu phương phấp

chiết xuất cao bán thành phẩm 5

2 Nghiên cứu được lý: nghiền cứu tác dụng lợi tiểu, bài mịn sỏi, chống viêm và tác

dụng trên cơ trơn cửa cao chiết từ dược liệu Nghiên cứu độc tính cấp của thành phẩm

3 Nghiên cứu bảo chế nghiên cứu dạng bào chế thích hợp, theo dõi tuổi thọ của thuốc

4 Xây dựng tiêu chuẩn : cao bán thành phẩm, thành phẩm

5 Nghiên cứa lâm sảng : nghiên cứu lâm sàng giai đoạn 1 & 2 (theo qui chế

371/QD-BYT), trên tổng số 45 bệnh nhân,

~ Đánh giá hiệu quả của thuốc trên các triệu chứng lâm sàng và cận lâm sàng

bệnh sơi đường riết niệu

Trang 11

CHUONG I TONG QUAN

1 Tổng quan về bệnh sỏi đường tiết niệu [ 4, 27, 31, 32, 33, 40 ]

Sỏi đường tiết niệu là bệnh thường gặp ở nước ta và ở nhiều nước trên thế giới

“Theo thống ké của Bệnh viện Việt Đức thì hàng năm số người mổ sỏi chiếm từ 3-4%

bệnh nhân phẫu thuật Đây là bệnh vừa viêm lại vừa cĩ sỏi Bệnh tuy hai nhưng vẫn là

một, vì khi bị viêm đường tiểu lâu ngày sẽ là điều kiện để phát sinh sối & khi cĩ sồi sẽ

dễ gay viêm đường tiểu

'Viêm sỏi đường tiết niệu gồm viêm sơi ở thận, ở niệu quản, ở bàng quang, ở niệu đạo Sơi là sự tích tụ của các chấnhư calei, phosphate, oxalat, urat, cystin, tiểu cầu, mơ mỡ làm tắc nghẽ sự lưu thơng của nước tiểu

Bệnh thường gặp ở tuổi trung niên đo chế độ án uống khơng hợp lý (quá nhiều

đạm, hydratcarbon, natri, oxalat ), do nhiễm khuẩn tiết niệu hoặc đo điều kiện sống ở

vùng khơ, vịng nhiệt đới thường là những yếu tố thuận lợi để bệnh sối dễ phát sinh

1.1 Theo quan niệm y học hiện đại,

1.1.1 Nguyên nhân sinh bệnh:

Nguyên nhân sinh bệnh đến nay cịn nhiều bàn cãi, nhưng tất cả các nhà khoa học dễu nhận thấy cĩ những nguyên nhân chính như sau:

* Nguyên nhân tồn thâm: do sự rối loạn chuyển hố, đặc biệt là sự tăng calci trong

nước tiểu Bình thường lượng calci trong nước tiểu 24h là 150mg-200mg Calci tăng trong các trường hợp áp dụng chế độ ăn lạm dụng các thức ăn, nước uống cĩ quá

nhiều calci hoặc rối loạn chức nâng tuyến cận giáp trạng, hoặc rối loạn nội tiết, do

tổn thương xương, do bị viêm da, do cơ thể thiếu vitamin A, làm sừng hĩa các tổ chức

liên bào ở đài, bể thận và niêm mạc tiết niệu

* Nguyên nhân tại chỗ: một số tác giả nhận thấy sự hình thành sỗi từ trong lịng cđa hệ tiết niệu Sự hình thành này qua các giai đoạn: hình thành nhân sơi, kết tụ các nhân

sối, sbi được cố định ở một vị trí nhất định, từ đĩ đân dân phát triển to lên Lý thuyết

về sự hình thành này được áp dụng cho tất cả các loại sỏi Nguyên nhân này bao gồm:

- Do cĩ tổn thương hay viêm niêm mạc đường tiểu tạo điểu kiện hình thành những đám vơi Sỏi sẽ phát sinh từ những đá vơi này

Trang 12

- Đo các ống thận bị tổn thương nhiễm trùng, trong nước tiểu sẽ xuất hiện nhiền microprotein, néuyidc này mà calci trong nước tiểu tăng sẽ là điều kiện để sinh sồi - Do ứ đọng nước tiểu gây nhiễm trùng sinh sơi & do pH nước tiểu đối vì nhiễm trùng

1.1.2 Tác hại của sơi đ biến chứng :

Sỏi thường gây nhiều biển chứng đo tắc đường niệu, làm giãn to thận, làm như mơ thận bị mỏng, xơ hĩa, làm nhiễm khuẩn đường tiểu Nếu khơng được điều trị kịp

thời chức năng thận số bị suy giảm do ứ nước, nhiễm khuẩn, biểu hiện làm viêm bể

than, viêm niệu đạo, viêm bàng quang, viêm tấy quanh thận gây sốt dao động, phù nề,

gây vị niệu sỏi cịn gây răng huyết áp, biến chứng nhiễm khuẩn huyết, chống,

7 Tu 06 thé gay tk vong

1.L3 Thanh phn hod hoc cua sot tiết niệu:

“Trong sỏi cĩ 90% trọng lượng là tỉnh thể, cdn lai 10%: nude (5%), protein (3%)

và các ví lượng khác

a Séi calei: là loại sơi hay gặp nhất, chiếm từ 60% đến 80%, gồm hai loại: Oxalat calci thường cĩ màu vàng hoặc den, bể mặt lởm chữm nhiêu gai, rất rắn hay gập ở nam giới Phosphat calei thường cĩ màu trắng, kích thước lớn, cĩ nhiều lớp, đễ vỡ Ở nước ta hay gặp loại sỗi này

b Sổ Amonie-magie photphat (struvit): IA sdi két hop véi nhiễm khuẩn, hình san hơ,

manu tring ngà, cản quang, hay gặp ở phụ nữ Các vi khudn proteus, pseudomonas,

klebsiella, staphylococcus rác động trên urê niệu làm nước Hểu biến thành kiếm

(BH>7) và làm tăng các thành phần bicarbonat và ioq artonium gây ra sơi struvit,

¢ Séi Acid uric: chiém từ 1% đến 20% các loại sỗi, cĩ màu nâu, rắn chắc, khong cin

quang, hay kết hợp với sỏi calci oxalat, thường gặp ở nam giới tuổi cao, gặp ở châu

Âu nhiều hơn châu Á, ở nước ta ít gặp

d Sdi Cystin: chiếm từ 1% đến 2%, màu trắng ngà, hay kết hợp với sỏi — calci

photphat, thường gặp ở người trẻ

“Trên thực tế các thành phân này thường phối hợp với nhau để cấu tạo thành sơi hỗn

hợp

1.1.4 Số lượng, khối lượng, vị trí

Trang 13

+ Vj trí của sơi khá quan trọng vì nĩ quyết định lâm sàng, biến chuyển và cách điều

trị Sơi nằm trong nhu mơ thận thường bé cố định và ít phát triển Séi bể than hay gặp

và nguy hiểm nhất, Sơi niệu quản thường chỉ cĩ 1-2 viên nhưng cĩ trường hợp xếp

thành chuỗi

1.1.5 Triệu chứng lâm sàng

Quá trình hình thành sỏi là quá trình tiém tầng, âm thầm, sưi thường được phát

hiện lần đầu bởi cơn đau quận thường xuất hiện sau khi vận động mạnh như chạy

nhảy, đi xe trên đường xấu hoặc xe quân sự lắc xĩc nhiều v.v ) do sồi di chuyển tới

chỗ chít hẹp gây tắc đường niệu tạo nên cơn đau đột ngột, đữ dội ở vùng thất lưng lan

xuống vùng hạ vị, đến vùng bẹn và sinh đục Cơn đau thường lui dẫn sau khi được nghỉ ngơi và đi tiểu được

Kam theo đau là đái buốt, nước tiểu cĩ máu tùy thuộc mức độ rổn thương dường

niệu, mầu từ mầu hồng nhạt đến đỏ tồn bãi Vì thận cĩ khả năng hoạt động bù trừ rất tốt nên cĩ trường hợp chỉ phát hiện ra bệnh sỏi khi cĩ đấu hiệu của viêm đài bể thận do ứ nước tiểu như đái dục, đau vùng lưng-thắt lưng

Đại đa số trường hợp viêm đài bể thận cĩ sốt cao, rết run kèm theo đau vùng lưng

— thất lưng, nếu muộn cĩ thể cĩ phù, nơn mửa, án khơng ngon miệng v.v

1.16 Điền trị: a Nội khoa:

- Uống nước đầy đủ để đảm bảo bài tiết 1,5I nước tiểu trong 24h - Hạn chế nguồn thức ăn sinh ra những tính thể gây sỏi

nhiều calei, hạn chế thức ăn nhiều oxalat (socola, cafe, , hạn chế purin cĩ nhiễu trong cá lên men (các loại cá khơ, tơm khơ ), lịng lợn, lịng bị

~ Nâng cao thể trạng và đùng kháng sinh trong trường hợp nhiễm khuẩn, đặc biệt đối với loại vi khuẩn tác động trên nrẻ niệu Thuốc sử đụng như Negram, Nalisina,

Mictasol bleu, Gentamicin, Penieilin G, Spiamicin, Sulfamid

: thức ăn, nước ống cĩ quá

~ Thay đối pH nước tiểu: Tùy theo từng loại sỏi mà sử đụng thuốc Như loại sơi urat ding Piparizin, Zyleric Sơi loại phosphare dùng Methionin, Amoni chlorua

~ Thuốc lợi tiểu : Hypothyazit, Furosemid

- Giải quyết nguyên nhân: ví dụ cắt bỏ u tuyến cận giáp

b Ngoại khoa: tuỳ trường hợp cụ thể cĩ thể áp đụng một trong những phương pháp sau:

~ Mổ lấy sơi khi cĩ biến chứng

Trang 14

- Ding faser hay ndi soi dé tan sdi

- Tần sơi qua da

- Lấy sði niệu quản qua ống soi niệu quản

- Tần sơi ngồi cơ thể

1.2 Theo quan niệm Y học cổ truyền [L, 2, 5, 7, 20, 21, 25, 41]

1.2.1 Phân loại:

'YHCT gọi viêm sỏi đường tiết niệu là Ngũ lam- Lung bế & Nhị trọc, gọi như thế vì YHCT lấy triệu chứng mà đạt tên và luận trị theo khí hĩa

* Aleii lâm : là các chứng đái sốn, đái lâu, đái ra sỏi, đái ít, đái gất buốt, đái ra máu,

đái đục Tùy theo tính chất nước tiển mà chia làm 5 chứng: - Khí lâm : đái gắt buốt, đau bạng, đái cịn sĩt lại mấy giọt

~ Thạch lâm : đát ra sỏi, sối nhỏ như hạt cát gọi là sa lâm, sỗi to gọi là thạch

lâm

~ Huyết lâm : đái ra mầu

- Cao lâm : đái ta nước đục (đái mủ), như cao, như mỡ (nhục lâm)

- Lao lâm : đái đau, gắt buốt sau khi lao động: nặng hay sau khi giao hợp

* Tung bế: là đái gất buốt, nhỏ giọt, bụng đây tức, bế tắc *- Ähƒ trọc : cĩ hai loại: - Bạch trọc là tiểu đục (đái mủ) - Xích trọc là tiểu đỏ (cĩ hồng cầu) _ Nguyên nhắn:

Trong sách “ Kim quỹ yếu lược” bàn vệ nguyên nhân của bệnh lâm là do nhiệt

kết ở hạ tiêu Sách " Chư bệnh nguyên hậu luận” cổng cho rằng mọi chứng lâm là do

thận hư, bằng quang nhiệt Thận hư thì tiểu tiện đi luơn, bằng quang nhiệt thì nước chay sit, 1.2.3 Điều trị: cĩ ba cách a Trị theo triệu chứng: - Khí lam : dùng Bổ trung ích khí để thơng lâm bổ khí hay Trầm hương tán để sơ lợi thơng khí,

~ Thạch lâm : dùng Thạch thảo tần để thanh giải tích nhiệt

- Huyết lâm ; dùng Xích đạo tần để thanh nhiệt lương huyết, hay Tây căn cần để

dưỡng âm thanh nhiệt

Trang 15

- Cao lâm : Dùng Tỳ giải phân thanh ẩm để thơng lâm hĩa trọc, Thổ ty tử hồn để ích khí cố tính

b Trị theo hư thực:

- Thực chứng : người khỏe mạnh thì dùng Bát chánh thang, Chỉ từ tán, Ngũ lâm

thang Tùy chứng mà gia thêm thuốc lợi tiểu, tiêu ứ, chỉ huyết như Mộc thơng,

Sa tiên, Ơ dước, Thanh bì, Ngưu tất, Biển súc, Hồ phách

- Hư chứng : người hư yếu dùng Tỳ giải phân thanh ẩm hay Thận khí hồn, gia

thêm cáo vị thơng lâm lợi tiểu hay tiêu viêm cảm máu

e Trị theo kính nghiệm dân gian : nhân dân thường đùng một vài vị thuốc để chữa

viêm sỏi đường tiết niệu được sắp xếp theo các nhĩm san:

~ Thanh nhiệt lợi thấp: Rau ngơ, rễ đứa đại, ý đĩ, thổ phục linh, mã để, râu mèo, trạch tả

~ Tan đ hoạt huyết: Uất kim, đào nhân, hồng hoa, chỉ xác, xuyên khung

~ Tiêu viêm cẩm máu: Ngổ, cỏ mực, vỏ mù u, bổ hồng

- Điều hịa pH nước tiểu: chuối hột, quả đứa, me đất

- Bào mịn sỏi: Kim tiền thảo, Kẻ nội kim

1.3 Những nghiên cứu về thuốc điêu trị sối [1, 2, 5, 19, 20, 25, 29 ]

Từ trước tới nay, tây y cũng như đơng y nỗ lực rất lớn tìm kiếm thuốc làm tan sơi nhưng đều khơng thành cơng Đối với những viên sỏi nhỏ, đưới đồng chảy của nước tiểu, chúng khơng to thêm thậm chí nước bào mịn dân viên sỏi và tống ra ngồi

chứ khơng phải tác dụng làm tan sĩi của thuốc Chỉ cĩ loại sỏi urat mới cĩ thể làm tan

được bằng cách gây kiểm hĩa nước tiểu như dùng thuốc Piparizin, hay Zylerie ( sỗi

uraf Ở nước ta ít gặp, chủ yếu hay gap 6 Châu Âu.)

“Thuốc nhập vào nước ta được giới thiệu là điểu trị viêm và co thất đường tiểu kết hợp với sỏi niệu, đùng hịa tan, tống sỏi trong hệ thống thận niệu , đĩ là biệt dược Rowatinex của Rowa-Wagner GmbH Co KG,Germany Thành phẩn mỗi viên nang mém_ bao tan trong rut chéa: Pinene (& © ) 31mg, Camphene 15 mg, Cineol 3 mg & Fenchone 4 mg, Bomeol 10 mg, Anethol 4rng Ngày uống 3-10 viên chỉa 2lân Nhìn vào cơng thức chúng ta thấy thành phần là của tỉnh dâu, nghĩa là xuất phát điểm cũng từ được liệu, nhưng giá thành rất cao, 1 viên giá 2500 đ (một đợt điểu trị 60 ngày hết 1.500.000 đ) Thuốc hĩa dược dùng bài sơi chưa cĩ

Trang 16

Viện y học cổ truyền Nam-Kinh Trung quốc [41] va trong sich “Phuong thuốc cổ

truyền “ của Viện Y học cổ truyền Việt nam [1] đã giới thiện bài “Ngữ tinh tấn” Đức kết kinh nghiệm trong quá trình điều trị, cáo thày thuốc khoa nội Viện Y học cố truyền Việt-nam gia thêm kim tiễn thảo, lá cối xay, kế nội kim và dùng điều trị sỏi tiết niệu đã mang lại kết quả cao Bài Ngũ linh tấn gia vị gồm thành phần như sau : trư linh 12g, bach truạt12g, trạch tả 12g, phục linh 12g, quế chỉ 4g, gia thêm kim tiền thảo 16g, kê nội kim 12g, lá cối xay 40g Người bệnh sắc uống ngày | thang, mot dot

điều trị 60 ngày

Năm 1998 Dương Mình Sơn Trần Thuý, Trân Quán Anh,Trần Lưu Vân Hiển

đã tổng kết tấc dụng của cao thuốc Thạch Kim Thang trên những bệnh nhân cĩ sối

niệu quan Mot vai cơng ty trong nước cũng nghiên cứu và đưa ra thị trường vài loại

thuốc bài sỏi như : Viên Kim tiền thảo của Cơng ty cổ phần được phẩm TW 26, trong

1 viên cĩ 0,14 ø cao tồn phần Kìm tiên thảo, ngày nống 15 viên đến 20 viên chia 3 lan Cong ty dược phẩm TW 25 sản xuất trà Nisoni gồm kim tiền thảo, thài lài tía, lá cối xay, sả hạt chuối hột Cơng ty cổ phần dược phẩm TW 5 ( Đà nắng) cĩ viên bao

đường Bài thạch gồm Kim tiền thác ứu, hồng cẩm, uất kím, bình lang, chỉ thực,

hạu phác, mộc hương, đại hồng Một viên tương đương với 1027 được liệu Liễu

uống ngày ĩ-10 viên, chía 2 lần

Vien Dược liệu cũng nghiên cứu thuốc điều trị sỏi mật từ bài thuốc cổ phương của Trung Quốc “Đớm đạo bài thạch thang” gồm 5 vị kim tiên thảo, nghệ, chỉ xác, đại

hồng, nhân trần Đề tài đang được tiếp tục nghiên cứu lâm sàng giai đoạn 3

“Trong dân gian giới thiệu rết nhiều bài thuốc, vị thuốc điều trị sỏi tiết niệu như

trái chuối hột, nước của cây chuối hột, trái đứa với phèn chua, mật vịt, kim tiền thảo,

rổ đứa dai, cay râu mèo, day bịng bong, cĩ bg, quả đười ươi, lá sẻ, lá dành

dành nhưng mới chỉ là những kinh nghiệm, chưa cĩ nghiên cứu khoa học chứng minh

Nhin chung, trên thị trường dược trong nước, thuốc trị bệnh sỏi đường tiết niệu khơng nhiều, cũng cĩ một vài thành phẩm như đã nêu ở tren, song da phần những

Trang 17

2 Khảo sát tư liệu vẻ thành phần hĩa học, tác dụng sinh học va cơng dụng của các vị thuốc trong bài thuốc trị sơi thận [ 5, 7, 9, L1, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 25, 29, 30]

2.1 Kim tiền thảo (Herba Desmodii): là thân, cành mang lá của cây Kim tiên thảo

(Desmodium styracvfotium (osbeck) Merr., Fabaceac/

* Thành phân hĩa học: Trong kim tiền thảo (KTT) đã phát hiện được các nhĩm chất sau: Flavonỏid, saponin, coutarin, acid hữu cơ, alcaloid, phytosterol, đường khử, hợp

chất uronic

Các tác giả Nhật Bản đã xác định cấu trúc hĩa học và tên khoa hợc của 2 saponin

chiết tách từ KTT là soyasaponin ì và 1saponin mới là 3-O {-L-rhamnopyranosyl-(1- 2)-D-galactopyranosyl-(1-2)-D-giucuropyranosyt

soyasapogenol E ]

* Tác dụng sinh học: Kết quả nghiên cứu về tác dụng trên sự hình thành sởi tiết niệu

cho thấy saponin KTT cĩ tác dụng ức chế quá trình hình thành sỗi Canei oxalat trên chuột gây sỏi tiết niệu bằng ethylen glycol (EG) và 1 — (OH)D¿ Kết quả: 81% chuột ding EG va 1 — (OH)D; c6 sỏi tiết niệu trong khi đỏ ở nhĩm chuột dùng saponin KTT chi cĩ 29% số chuột cĩ sỏi tiết niệu Nỗng độ Canei trong huyết tương chuột

ding saponin KTT tăng lên đáng kể Sự bài tiết citrat (yếu tố ngăn chặn sự hình thành

sdi tiết niệu) phospho và nước tiểu tăng lên đáng kể ở nhĩm chuột đùng saponin KTT, Ngoai ra su dao thai creatinin-24 git ở nhĩm chứng thấp hơn nhiều so với nhĩm dùng

saponin KTT Căn cứ vào những kết quả này các tắc giả cho rằng saponin KTT cĩ tác

dụng ức chế sự hình thành sỏi tiết niệu bằng cơ chế tăng đào thải citrat cùng nước

tiểu, tăng bài tiết nước tiểu và giảm bài tiết canci Vì vậy KTT cĩ thể cĩ tác dụng ngăn

ngừa sự tái phát sơi canci oxalat trên làm sàng

Ngồi ra, saponin va flavonoid KTT cịn cĩ các tác dựng khác cĩ liên quan đến

bệnh sỏi thận: Tác dụng giảm đau nội tạng, lợi tiểu, lợi mật, kháng khuẩn đối với một

số chủng vi khuẩn gram (+) là: Bacillus cereus, B pualus, Sarcina lutea,

Staphylococcus aureus Nước sắc KTT khong độc qua đường uống Cho chuột uống nước sắc với liễu ~ 20g/kg chuột nhưng khơng cĩ chuột chết Hàm lượng saponin tồn phần trong KTT là 3,1% và flavonoid tồn phần là 0,46% [5,6] Theo một số tác giả flavonoid KTT cĩ tác dụng phịng bệnh sồi tiết niệu Các hợp chất coumarin và

Trang 18

* Cơng dụng: KTT được dùng theo kinh nghiệm nhân đân làm thuốc chữa bệnh sỏi túi mật, sơi chan, bang quang, sỏi đường tiết niệu, bệnh về thận, phù thũng, bệnh hồng dan va làm thuốc lợi thủy (8,91

2.2 Céi xay (Herba Abutilo indici): Ya than, canh mang 14 và quả của cây cối Xay

[Abutilon indicum (L} Sweet, Malvaceae]

* Thành phẩn hĩa học: lá chứa nhiều chất nhây Cây chứa tỉnh đầu bao gồm nhiều thành phẩn: - pinen, caryophyllen, caryophyllen oxyd, cineol, gerario(, gerany| acetat,

elemen, eudesmol, famesol, bomeol Hat chifa glycerid của các acid palmitic, acid

stearic, acid oleic, acid linoleic, acid linolenic Gan day, bang sdc ky lép méng chuing

tơi phát hiện trong lá cối xay cĩ flavonoid

* TÁc dụng sinh học: Dịch chiết cơn cối xay cĩ tấc dụng hạ nhiệt trên súc vật thí nghiệm Cối xay cịn cĩ tác dụng chống viêm rất ruạnh Thử nghiệm với chuột nhất trắng gây viêm bằng dịch treo kaolin, cối xay đã ức chế phù nề được 84,4% sau 5 giờ

* Cơng đụng: Cối xay được sử dụng theo kinh nghiêm nhàn dân làm thuốc chữa cảm sốt, đau đầu, bí tiểu, tiểu tiện đỏ dưới dạng nước sắc,

3.3 Bạch linh (Poria): là được liệu khơ của lồi nấm bạch lĩnh {(Poria cocos (Schw) Wolf, Polyporaceace]

* Thành phẩm hĩa học: Đã phát hiện các hợp chất sau đây trong Bạch linh: đường pachyman, 2 din xuất lanostan tritecpen là pachvrnic acid và dehydrotumulosic acid cùng các acid tritecpen carboxylic khác như: l6 - hydroxytrametanolic acid, poricoic

acid va cdc uitecpen - amyrin acetat, Q-acetyl pachymic acetat

* Tác dụng sinh học: Đường pachyman cĩ tác dụng ngăn ngừa bài tiết protein cùng nước tiểu, làm giảm mức độ bệnh lý của tế bào và mơ như độ thẩm thấu qua màng tế

bào, giảm sự kết dính của các chất béo vào thành mao mạch, kháng viêm thận tiểu cầu

- Bạch linh cĩ tác dụng kháng độc do kanamycin gây ra trên chuột - Các hợp chất tritecpen cĩ tác dụng chống viêm mạnh

* Cơng dụng: Bạch lình được dùng làm thuốc lợi tiểu, bổ tỳ [8,9]

2.4 Trach td (REhlzoma Alsmadis; là rễ cũ khơ của cây trach ta [Alisma plantago aquatica L., Atismataceae]

* Thanh phiin héa hoc: Trong trach ta o6 tinh déu véi cde thanh phiin alisol A, B, C, epialisol A, nhya 7%, protit, tỉnh bột 23% [8]

* Tác dụng sinh bọc: Trạch tả cĩ tác dụng lợi tiểu, giảm cholesterol trong máu, tăng

lượng urê và natri clorua trong nước tiểu

Trang 19

* Cơng dụng: Trạch tả được dùng làm thuốc lợi tiểu, thuốc thơng tiển, chữa bệnh thủy thững, viêm thận, bí tiểu tiện, đái ra máu, đái dắt, đái buốt, sỏi thận

2.5 Bach tradt (Rhiuoma œmactlodes macrocephala): là thần rễ khị của cây

Alractylodes macrocephala Koidz, Asteraceae

* Thành phẩn hĩa học: Bach truật cĩ các hợp chất triecpen như Bạch linh: acid

pachymic, acid tumuloric, acid eburicoic, acid pi

colic và đường pachyman Ngồi ra

trong bạch thuật cịn cổ 1,4-1,5% tỉnh dấu với các thành phân như atractylon,

atratylenolid I, II, HI, - eudesmol Ngồi ra chúng tơi dã phát hiện trong bạch truật cĩ

hợp chất coumarin

* Tác dụng sinh học: Tương tự như bạch lĩnh, bạch truật cĩ tấc dụng chống viêm mạnh nhờ các hợp chất tritecpen và các thành phần atratylenolid và atractylon của tính

dầu

~ Atractylon cĩ tác dụng chống suy giảm chức năng gan

- Bạch truật cĩ tác đụng lợi tiểu làm giảm phù nhẹ

* Cơng dụng: Đơng y coi bạch truật là vị thuốc bổ, chủ yếu bổ rỳ, kiện vị, hĩa thấp,

chỉ tả, chữa viêm loét dạ dày, suy giảm chức phận gan, ăn chậm tiêu, viêm ruột mãn tính, lợi tiểu, trị đái tháo đường

2.6 Tru link (Polyporus): là được liệu khơ của lồi nấm trư linh [Polyporus umbellatus (Pers) Fires, Polyporaceae]

* Thành phần hĩa học: Trư linh cĩ các hợp chất tritecpen tương tự như bạch linh * Tác dụng sinh học: Các hợp chất tritecpen cĩ tác dựng chống viêm

* Cơng dụng: Tru lĩnh cĩ tác dụng lợi tiểu, chống viêm

2.7 Ké noi kim (Chirium Stomachichum galli): 1a \ép ming mau vang phi mat trong của dạ đầy hay cịn gọi là mề gà

* Thành phân hơa học: Trong kê nội kim cĩ protit, chất vị kích tố, cholesterol [ * Tác đụng sinh học : Kê nội kim cĩ tác đụng tiêu thủy cốc, lý t vi

* Cong dung: Ke ni kim dùng trong trường hợp ăn khơng tiêu, tiểu tiện ra máu, viêm

ruột già

2.8 Qué (Cortex Cinamomi): là vỏ thân, vỏ cành khị của cây quế (Cinnamomum cassia Presl, lourerii Nees, Lauraceae)

* Thành phân hĩa học: Trong quế cĩ tinh dau, coumarin, glycoprotein, polysaccharid, tình bột, tanin, chất màu, đường Thành phần chính của tỉnh dầu là aldchyd cínnamic

Trang 20

Ngồi ra cịn cĩ các thành phẩn khác như acid cinnamic, cinnamylacetat, 2’- hydroxycinnamaldehyd

* Tác dụng sinh học: nh dâu quế cĩ tác dụng kháng khuẩn, kích thích tuần hồn máu, kích thích hị hấp Quế cịn gây co bĩp tử cung và tăng nhụ động ruột Polysaccharid chiết xuất từ vỏ quế cĩ tác dụng kháng bổ thể Các glycoprotein chiết xuất từ vơ quế cĩ tác dụng kích thích sự tăng sinh các tế bào lympho T người trên thực nghiệm in viro làm tăng hoạt tính của các tế bào lympho T gây độc, kích thích tế bào lympho B ché tiét immunoglobulin (Ig), kích thích các tế bào mono chế tiết

irterleukin -\ (IL-1)

* Cơng dụng: Trong tây y quế được coi là vị thuốc cĩ tác dụng kích thích làm cho máu huyết lưu thơng và hơ hấp mạnh lên Đơng y coi qué là vị thuốc bổ dùng bơi bổ cho phụ nữ sau khí sinh nở, bệnh đau bụng đi tả nguy hiểm đến tính mạng Quế và

tinh đầu quế là vị thuốc kích thích tiêu hĩa, hơ hấp, tuần hồn và bài tiết

Nhán xét chung: Theo quan niệm của VHCT bài thuốc Ngũ linh tán trong

sách “Thuong hàn luận” với các vị thuốc: Trư linh, trạch tả, bach teat, phục linh, quế

chỉ cĩ tấc dụng lợi thuỷ, thảm thấp, ơn dương, hố khí Trạch tả cổ vị ngọt tính lạnh vào thận, bàng quang làm lợi tiểu tiện trừ thấp, thanh nhiệt Bạch linh, trư linh tăng cường tác dụng lợi tiểu hố thấp Bạch truật kiện tì khí nhằm vận hố thuỷ thấp Quế

chi trợ giúp quá trình khí hố của bàng quang Kê nội kim trợ giúp quá trình vận hố

thuỷ cốc ở tỳ Cộng them tác dụng thanh nhiệt lợi tiểu của lá cối xay, kim tiền thảo

tàm cho thấp nhiệt bị loại trừ, nước tiểu khơng ứ đọng, quá trình hình thành sỏi bị cản

trờ, Lá cối xay, kim tiễn thảo là những vị thuốc được dùng rộng rãi trong nhân đân dễ

điều trị đái đục, đái rất

“Theo quan niệm của YHHĐ : căn cứ vào những tài liệu nghiên cứu cho thấy

hầu hết các vị trong bài thuốc điểu trị sỏi đường tiết niệu cĩ tấc dụng sinh học liên

quan đến trị bệnh như hạn chế hình thành sỏi thận, tăng đào thải các yếu tố tạo sỏi,

chống viêm, lợi riểu Vị thuốc cĩ tác dụng chính cĩ thể là kim tiền thảo Các vị hỗ trợ

quá trình điều trị là cối xay, bạch linh, trạch tả, quế là những vị cĩ thành phần hoạt

chất cĩ tác dụng chống viêm mạnh Ngồi ra cồn cĩ các vị cĩ tác dụng tăng lực, bơi

bổ sức khỏe cho người bệnh trong quá trình điều trị như bạch truật, kê nội kim, bạch

Trang 21

CHUONG II NGUYEN LIRU, TRANG THIET BI

VA PHUONG PHAP NGHIEN CUU

1 Nguyên liệu & trang thiết bị * Nguyên liệu:

+ Dược liệu : ( Do cơng tí cổ phần DLTW 2 cùng cấp )

- Bach uuat (Rhizoma atractylodes macrocephatae) dat TCDĐVN TI trang 319 ~ Bach linh (Poria cocos Wolf — Polyporaceace) đạt TCDĐVN TH trang 441

- Taw linh (Polyporus umbellatus — Potyporaceae) DDTQ 97, trang 130

- Trạch tả (Rhizoma Alismatis} dat TCDDVN M1 wang 493

- Kim tiên thảo (Herba Desmodii Merr — Fabaceae) dat TCDDVN TI wang 395 - Ke noi kim (Chirtum Stomachichum galli) dat TCDDVN TH trang 390

- Cối xay (Herba Abunilo indiei Malvaceae) đạt TTDĐVN TH trang 339

- Qué {Cinnamomum cassia L Lauraceae} dat TCDDVN TD trang 443

+ Chuột thí nghiệm (ảo Viện Vệ sinh dịch tễ cung cấp)

- Chuột cống trắng trưởng thành, khoẻ mạnh cĩ trọng lượng từ I10-180g, khơng phản biệt đực cái ~ Chuột lang khỏe mạnh, khơng phân biệt đực cái cĩ trọng lượng 250-300g ~_ Chuột nhất trắng cĩ trọng lượng 19-23g + Hĩa chất thí nghiệm: - Magnesi cacbonat, tale, Magnesi stearat, tinh bột, cthanol 969: đạt Tiêu chuẩn DDVN I

- Na.CMC, HPMC, TiO,._.: dat BP 93

+ Opadry chống 4m, Opadry O1-S-73354 & Erytrosin lake E127: đạt tiêu chuẩn nhà sản xuất

~ Các bộ Kit do hãng Human cùng cấp

+ Cao khơ Sotinin chiết xuất dùng trong nghiên cứu dược lí, bào chế, tiêu chuẩn cĩ tỉ lệ 1g cao tương đương với 14,92 ø dược liệu, hoặc 10g dược liệu tương đương với 067g cao

* Trang thiết

~ Máy chiết đa nang ( Touraire France), dung tich 250 tít, chạy bằng hơi rước

- Máy cơ màng mỏng( Toarnaire France S.A Grasse), dung tich 250 lit, chay

bằng hơi nước

Trang 22

- Te sdy chan khong (Toumaire France) ~ Mấy dập viên 14 chay Korsch- Germany

- May do do dim Precisa HA300, Swezerland - May do do 14 Logan Instrument Corp-USA

- Máy bao phim FC20 ( Cay Tién Tudn-Viet Nam)

- May déng nang: BomBay 40098, Pharmachem industries - Máy phun sương: Buchi mirispray dryer B191, Swezerlan ~ Phù kế Plethysmometer (No 7140-Hãng Ugo-Basile-Ttaly ~ Mấy biến năng đẳng trương (để đo độ giãn cơ)

~ Máy định lượng sinh hĩa bán tự động ScouL

2 Phương pháp nghiên cứu

3.1 Nghiên cứu hĩa học & Nghiên cứu quy trình chiết xuất [T, 9, 10, 11, l6, 18, 23, 24,29, 38 ]

2.1.1 ~ Phân tích sơ bộ thành phần bĩa học xác định sự cĩ mặt của các nhĩm hoạt chất flavonoid, saponin, coumarin sterol theo phương pháp phân tích sơ bộ hĩa thực vật của Viện được liêu & Trường đại học Dược Hà-nội, bộ mơn được liệu [7, 9, 10,

LL 18,29 }

* Chiét xudt cdc nhém chất cĩ hoạt tỉnh sinh học:

~ Các được liệu được loại tạp rửa sạch,chặt nhỏ, sấy đến khơ ở nhiệt độ 45*50”

C xay thơ nếu cần

-Chiết xuất dược liệu được tiến hành trong các bình Soxhlet, ding ethanol 70%, trong thời gian khoảng 8 h Cơng việc chiết xuất kết thúc khi phần địch chiết mới trở thành khơng màu hoặc cĩ màu vàng nhạt, Dịch chiết cồn từ các bình Soxhilet khác nhau được gớp chung, lọc qua giấy lọc, loại bã Làm bay hơi dung mời bằng cách cất đưới áp lực giảm đến khi nhận được d.d A cĩ nồng độ khoảng 1g d.liệu/ 1ml

D.d A được chế biến theo các phương pháp khác nhau dể tiến hành các phản ứng định

tính

* Định tính:

a- Định tính nhĩm chat flavonoid :

Dung dich Á được bay hơi đến khí hết hồn tồn dung mơi ở ấp suất giảm, lọc qua giấy lọc, thu được d.d B, (chlorophyl và một số tạp chất sẽ ở lại trên giấy lọc.) D.d, B đùng để định tính flavonoid Cho 100ml d.d.B vào bình chiết, chiết 4 lần x 20

Trang 23

ml ethylacetat Gop cde dich chiét ethylacetat vào bình nĩn, thêm Sg natri sulphate

khan để loại nước, lọc qua giấy lọc Làm bốc hơi hồn tồn ethylacetat của địch lọc, hịa tan cắn trong ethanol, thu duge dich C dé lam phan ứng định tính flavonoid

+ Định tính trong ống nghiệm : d.d C được thừ bằng các phần ứng với kiểm, phần

ứng Cyanidin, phản ứng Diazo hĩa, phản ứng với FeC13 [7 ]

+Định tính bằng SKLM: phương pháp tiến hành SKTM theo dược điển Việt nam

- Hệ dung mơi khai triển : EthylacetaL: a formic : nước (66:14:20)

- Thuốc thử hiện màu ÌỀ iốn hợp dụng dịch acid bori 1046 : oxaliet0% (3:1)

- Đánh giá sắc ký đổ dưới đèn tử ngoại ở bước sĩng 366nm „ tua:

TRE VỆ,

b„ Định tính nhơm chất sapon

Thủy phân d.d.A trong bình đun hỏi lưu với a chlohydric 5% Don*néng d.d thủy phân trên bếp cách thủy sơi trong 4 giờ Rữa cắn thu được bằng nước đến phản

ứng trung tính Hịa tan cắn trong ethanol được dung dịch D để tiến hành các phản ứng

định tính (Riêng đối với phản ứng tạo bọt thì đùng d.d B sau khi đã loại bỏ hết cồn) + Dinh tink cde saponin tritecpen & steroid trong ống nghiệm (1, 18]

Quan sất hiện tượng tạo bọt, phá huyết, phản ứng tạo mầu với thuốc thử Liberman- Burchard, phản ứng phân biệt saponin steroid & saponintritecpenic

+ Định tính bằng SKLM: phương pháp tiến hành SKLM theo dược điển Việt nam

- Hệ dung mơi khái triển: toluen : ethylacetat (95 : 5)

- Thuốc thử hiện màu: d.d vanilin 1% / acid sunfurie đặc : ethanol (L: 201

Ẵ Xác định nhậm chdt coumarin:

Dung dịch A được chế hĩa nhanh bằng benzen để loại chlorophyl trong bình chiết D.d E thu được sau chế hĩa dùng để định tính coumarin

+Định tính trong ống nghiệm: bằng các phân ứng đĩng mở vịng lacton & phản ứng huỳnh quang [7, 29 ]

+ Định tính bằng SKLM : phương pháp tiến hành SKLM theo dược điển Việt nam

- Hệ dung mơi khai triển : Toluen : Ethylacetat : a formie (Š: 4: 1)

~ Thuốc thử hiện màu là dưng dịch KOH 2N/ ethanol

~ Đánh giá sắc ký đồ dưới đèn tữ ngoại ở bước sĩng 366nm trước và sau khi phun

thuốc thử

d Dinh tinh sterol:

Trang 24

Lấy 10ml d.d A vao cé, them vao 46 dd chi acetat 20% cho tới khí hết tủa Lọc Chuỷen dịch lọc vào bình gan, ding 30 ml chloroform dé chiét sterol BOe hoi cách thiy chloroform tới khơ Hịa tan cần thu dugc vao 5 mi ethanol 90%, duge d.d F dé lam các phản ứng Liberman — Bocsa, phan ting Legal, phan ting Raymon ~

Mactu | 10 ]

2.1.2 Nghién ctu quygrinh chiét wttdt gi “uyện

+ Phương pháp 1: phương phép cổ phương (phương phúp sắc)

+

Trang 25

+ Phương pháp 2: Dung dung mơi chiết là nuéc & ethanol 70%

#* Chiết bằng phương pháp ngâm :_

Chiết cao bạch linh, bạch truật, trạch tả bằng phương pháp ngâm với cttanoi 80% * Chiết bàng phương pháp sắc với kim tiền thảo, cối xay, trư linh, kê nội kim, qué

Kim tiến thảo Cot xay x "Re Ethanol 80% ` Nước Nhiệt độ phịng Nhiệt độ L0ỢC (48 giờ x 2 lần) (3 giờ x 1 lần) (24 giờ x 1 lần) (2 giờ x 2 lần) _- F—

+ Ba duoc | Dich | Dich Ba duge

liệu | chiết cơn chiết : eel liệu Ị Loại tạp ja hỏi cơn Bốc hơi nước Toại tạp q 1 |

Cén Cao Cao Nước

Trang 26

3.2 Nghiên cứu tác dụng được lý cœo khĩ Sotinin

Liêu dùng cho chuột tÌM nghiệm được tính theo : lg cao khơ Sotinin tương đương với 14.93 gam được liệu ( hay 108 được liệu tương dương với 0.67gcà)

3.2.1 Nghiên cứu tác dụng lợi tiểu

* Động vật thí nghiệm: chuột cống trắng cĩ trọng lượng từ 180g trở lên (khơng phân biệt đực cái), tổng số 4 con, chia 4 16, mdi 10 10 con

*Thuốc và liêu sit dugg: x

cho chuột uống Atay đữ@È-địch NaC1 0,9%/100g chuột

- Lơ tham chiếu : cho chuột uống Hypethiazit với liều 3mŠ/{kg chuột Hypothiazit được pha trong dung địch NaC1 0,9% với độ lỗng đủ để cho uống 4 Tht để typottiazit

/100g chuột

- Lơ thuốc liểu 1; cho chuột uống cao thuốc nghiên cứu với Liểu 10g dược liệu/Ikg chuột.( Cân 1,675g cao Sotinin hda trong dd NaCl 0,9% vừa đủ 10Ơml) Cho chuột ung 4 ml dd cao Sotinin /100g chugt

~ Lõ thuốc liều 2: cho chuột uống thuốc nghiên cứu với liều 20g dược liệu/1 kg chuột (Can 3,35g cao Sotinin hịa trong để NaC1 0,9: vừa đã 100mÐ Cho chuột uống 4 mÌ

đá cao Sotinin /100s chuột

*Céich tidh hành

+ C4416 chudt cho uéng 1 lần duy nhất vào sáng sớm trước khi tiến hành thí nghiệm

- Chuột thí nghiệm được cho nhịn đối 18h trước khi thí nghiệm (nước vẫn cho uống

bình thường) _

* Các chỉ số theo đốt:

~ Lượng nước tiểu bài xuất trong 6h (tinh cho 100g chudt), dam vi - ml - Số mmol Đa* bài xuất ra nước tiểu trong 6h (tính cho 100g chuột)

+ S6 mmol K* bai xuất ra nước tiể trong 6h (tính cho 100g chuột)

* Định lượng Na &K:

+ Lượng Na Trong nước riếu được định lượng bằng phương pháp so màu Thực hiện

trên máy định lượng sinh hĩa bán tự động ScouL Kit dùng do hãng Human cung cấp

+ Lượng KĨ trong nước tiểu được định lượng bằng phương pháp đo độ đục của huyền

trọc Kalitetra phenylboron Thực hiện trên máy định lượng sinh hĩa bán tự động

Scout, Kit ding do hing Human cong cap

Trang 27

2.2 Nghién cứu tắc dung bai min séi

* Các mẫu sĩi riết niệu được chọn ỡ khoa tiết niệu Bệnh viện 03 theo cắm quan:

hình đáng, cấu tạo bên ngồi, trọng lượng to nhổ được chia thành 3 10:

~ Lơ chứng được đặt trong bình thủy tinh cĩ chứa dựng dịch nước tiểu nhân tao

~ Lơ thử thuếc: cĩ 2 lị , với 2 tiểu khác nhau để so sánh tác dụng

- Các mẫu sơi này trước khi tiến hành thí nghiệm đã được đánh số l,2,3,4 rữa và

sấy ở 60°C đến trọng lượng khơng đổi

* we

*Moi trường để thử: `š, "2

a Dung dịch A: NaCl 0,5M (pH=5.8) Cách pha: cân 294258 muối tính khiết hồ

thành lít với nước cất uo

b Dung dịch B: KH,PO 0,1M Cách pha : cân 13,6g muối KH,PO loq tinh khiết

hồ thành | lít dựng dịch với nước cất

e Dung địch chứng C: hồ 2 dung dịch A và B với tỷ lệ 1:1 dùng HCI 0,1N trang hịa đến pH=5.8 (5.5-6,0), lọc qua giấy lọc

d Dung dịch thứ thuốc Ð: cân và pha thuốc thành dung dịch rồi thêm dung dich C

vào cho đủ lượng bằng lị chứng

* Tiến hành thí nghiệm:

a Tới đụng dịch chứng C: tấy 5 bình thủy tình cĩ dụng tích 200ml cho vào mỗi bình 3

viên sỏi đã được sấy và can chính xác Sau đĩ cho vào mỗi bình 75ml đưng dịch C đã

được pha như trên Lắc đều các bình trong 5 phút rồi đặt trong tủ ấm 37°C

b Vớt lĩ thuốc: cao Sonin được pha theo tỷ lệ L:L và 2:1 (đối với dược liệu khỏ) + Cách pha thuốc: - Can 6,7 g cao Sotnin hịa với nước cất vừa đủ thành 100 mi ta được đụng dịch thuốc wlelal + Can 13,4 g cao Sotinin hda véi nước cất vừa đủ thành 100 ml ta được dung dịch thuốc tỷ lệ 2:1

+ Lơ thử thuốc 1: lấy 3 bình thủy tỉnh dung tích 200ml đánh số từ 1 đến 5 (như ở lị

chứng) cho vào mỗi bình 25ml dung dịch thuốc cĩ

lệ 1:1 và 50ml dụng địch C, sau đĩ trang hịa bằng acid HCI 0,1N đến pH=5,8 Bỏ vào mỗi bình 3 viên sồi tương ứng

lắc đều trong 5 phút rồi để vào tủ m 37°C

+ L6 thử thuốc 2: lấy 7 bình thủy tỉnh dung tích 200ml đánh số từ 1 đến 7 (như ở lở chứng), cho vào mỗi bình 25ml dung dịch thuốc cĩ tỷ lệ 2:1 và 50ml dung dịch C, sau

Trang 28

đĩ trung hịa bằng acid HCI 0,1N đến pH=5.8 Bỏ vào mỗi bình 3 viên sỏi tương ứng

tác đều trong 5 phút rồi để vào tủ ấm 372C

203 Nenien van mecme chingmen ip tak

- Nguyên tắc thí nghiệm: là gây nên sự phù nề cấp tính chân chuột bằng tác nhan hen

ngồi, san đĩ dùng thuốc làm giảm sự phù nể, do thể tích chân chuột trước và sau khi

gây viêm, trên cơ sở đĩ tính tỉ lệ phân trăm ức chế phùf+37 -Phương pháp thí nghiệm

thành, khoẻ mạnh, khơng phân giệt tự <ái, cĩ trọng lượng từ 1108-1208

+_ Chuột được gây viêm bằng cách tiem dui da gan bin char say mBi con 0,1rn[ nhữ

dich carragenin 1% , chân chuột sẽ bị phù nề và sau 3h thì độ phù nể Ï3 lớn phất

thí nghiện được tiến hành trên chuột cổng trắng trường

+ Độ phù nể của chân chuột được đo bằng dụng cụ chuyên biệt (phổ kế Plethy

smorneter), vào các thời điểm trước và sau khi gây viêm 3h để sơ sánh kết quả

+ Thuốc được pha theo tỷ lệ 1:1 ( cân 6,7g cao Sotinin hịa với nước muối sình lí vừa đủ thành 100 mI ), cho chuột dùng bằng đường tiêm và uống, chia dùng 3 lần:

# Trước khi gây viêm 1h30 phút +

#_ Trước khi gây viêm 30 phút # Sau khi gây viêm 30 phút

* Chuột được chia thành 2 lơ với 5 nhĩm thử, mỗi nhĩm 5 con

a Lơ chứng: chuột được cho uống nước muối sinh lý

b, Lơ dùng thuốc : thuốc được cho bằng đường tiêm và đường uống với liều:

- Cho uống với liều 15g/ kg

~ Cho uống với liễu 10g / kg

~ Cho tiêm với liều 10g / kg

- Cho tiêm với liều 5g / kg

* Độ phù nể của chân chuột ( M4 %) được tính theo cơng chức:

{V.~ Vạ)

M& = TW — X00

Trong đĩ - Vạ là thể tích chân chuột trước khi gây viêm

- V, là thể tích chân chuột sau khi gây viêm

* Tác dụng chống viêm của thuốc được đánh giá bằng khả năng ức chế phù Tÿ lệ ức chế phù ( X6) chân chuột được tính theo cơng thức sak :

M.-M,

X4 = _ xI00

Trang 29

Trong đĩ: - M, là độ phù trung bình lơ đối chứng

~ M; là độ phù trưng bình lơ thử thuốc

* Thống kẻ xác suất thí nghiệm được tính the cơng thức t-student

3.2.4 Nghiên cứu tác dụng giãn cơ

- Thí nghiệm được tiến hành trên hồi tràng chuột lang cơ lập theo phương pháp Magnus

- Để nghiên cứu tác dụng của thuốc tên sự co bĩp của hồi tràng phải gây tăng cĩ bĩp Iegjolin, BaCl, ở đây chúng tơi đùng BaCl,

- Chuột lang khoẻ mạnh khơng phân biệt đực cái cổ trọng lượng từ 250-300g

bằng các dung địch histamin, aget

Sau khi cố định được ¡ đầu của đoạn hỏi tràng đã cơ lập tỂ¿ chuột làng vào

đáy ống nuồi đầu kia nối với cân của máy biến năng đẳng trương, máy Này được nối

với máy ghi đa năng cĩ bút ghỉ trên giấy

Bình nuơi đựng dung địch tyrode ở 372C, cĩ sục khơng khí Để hồi tràng cĩ

bĩp ổn định trong vịng 20 phút rồi ghỉ nhu động ruột bình thường.Sau đĩ tiến hành

thử thuốc với các liêu khác nhau (cĩ tiêu bán kèm theo) và ghỉ nhu động sau mỗi lần

thử

Thuốc nghiên cứu được dùng trước hoặc ngay sau khi dùng BaC1; để nghiên

cứu tác dụng phịng ngừa hoạc ức chế sự táng co bĩp hồi tràng đo BaC], gây ra

2.3 Nghiên cứu độc tính cấp:

- Tiến hành thử trên chuột nhất trắng khoẻ mạnh, cả đực và cái nặng từ 1§-

21g, chia thành 3 lo x 5 con và 1 lơ x 10 con, được uống liều cao Sotinin pha thành

dịch treo trong nước, cơ đến đậm độ thích hợp Thí nghiệm được thực hiện với những

liêù cũa cao Sotinin từ 40s đến 709/ kg thé trọng, là liễu thuốc tối đa cĩ thể cho chuột

nhất tống

~ Đường dùng: Cho dịch thuốc vào dạ dày chuột bằng kim cong đầu tù

~ Theo đối số lượng chuột chết ở mỗi nhĩm trong thời gian 72 giờ Tĩnh LD¿y theo cơng thức Karber

2.4 Nghiên cứu dạng bào chế

"Thuốc được bào chế đưới 2 dạng :

Trang 30

- Bao đường qua 3 giai đoạn: bao 161, bao nhấn, bao mầu

- Bao phim: Sử dụng phương pháp bao màng mỏng bẳng hỗn hợp địch Opadry - 01-8-73354 trong dung moi ethanol 85% `

- Bao kết hợp:

+ Giai đoạn bao lốt, bao nhãn : giống như bao đường + Bao mẫu, bao bĩng : giống như bao phẩm

3.4.1, Phương phúp do ché vien nang:

- Tạo cốm bằng phương phánchun sương (phương pháp 1)

- Tạo cốm bằng cách trộn đều đơn giản (phương phấp: 2) £

2.5 Nghiên cứu xây dựng tiều chuẩn bán thành phẩm và Thành phẩm viên bs

Sotinin tà

Xây dựng các chỉ tiêu theo các yêu cầu chung đối với cao thuốc và viên bao đã được quy định trong Dược điển Việt Nam

2.6 Nghiên cứu độ én định thuốc thành phẩm

3.6.1 Điều kiện bảo quản: Các mẫu thuốc được bảo quan - Nhiệt độ: 30°C +2°C

- Độ ẩm tương đối: 754 + 5% tránh ánh sáng

Bao bì đồng gi

- Thuốc viên bao được đồng trong lọ nhựa PVC, phía trên cùng của lọ cĩ lĩt bơng mỡ và 1 gĩi silicagen nhỏ, lọ cĩ 2 nắp đậy kín,

3.6.3 Thời gian theo dõi: 12 năm

3.6.4 Các chỉ tiêu khảo sát:

Hình thức, độ rẽ, độ đồng đều khối lượng, giám khối lượng do làm khơ, định

tính, định lượng, giới hạn nhiễm khuẩn

2.6.5 Phương pháp khảo sát Theo tiêu chuẩn cơ sở 1

hiên cứu lâm sàng

Theo qui định số 371/BYT-QĐ ngày 12/3/1996 của Bộ Y tế vẻ đánh giá tính an tồn và hiệu lực của thuốc cổ truyền, trước khi thử lâm sàng trên bệnh nhân, đã tiến

hành đánh giá sơ bộ hiệu lực thuốc trên 10 người tình nguyện khoẻ mạnh

3.7.1 Thử thuốc Sotinin trên người nh nguyện (giai đoạn 1)

* Đối tượng nghiên cứu:

~ Khám chọn 10 người khoẻ mạnh khong cĩ biểu hiện bệnh lý, kiểm tra mạch, nhiệt

độ, huyết áp ở hằng số bình thường và siêu âm khơng cĩ bệnh hệ tiết niệu

Trang 31

~ Tuổi từ 20-30 khong phan biệt giới tính và nghề nghiên

~ Khơng nhận những người cĩ thai, nghiện rượu, nghiện ma túy

- Phương pháp nghiên cứu: mù kép và so sánh trước sau:

# 10 bệnh nhân được uống thuốc ngày 3 lần (sáng, trưa, chiều) mỗi lần 7 viên với

200ml nước chín sau ăn 1h

# Thời gian dùng thuốc 10 ngày

# Chỉ Chỉ tiêu quan su á

+ Về lâm sảng: theo đồi hằng rgày

YHHĐ: theo dõi mạch nhiệt độ, huyết áp, cân nặng (ch:

fp, met mồi, nhức dau,

mất ngũ, chĩng mật buồn nơn, mắn ngứa, phù, chảy máu)

YHCT: ăn uống, màu sắc da, cơ nhục, chất lưỡi, rêu lưỡi, mạch, nhị tiện

«_ Vổ cận lâm sàng: làm xĩt nghiệm trước khi đùng thuốc và sau khi uống thuốc 10 ngày:

Cơng thức cháu: Số lượng hồng cầu Số lượng bạch cầu, Tỉ lệ huyết sắc tố Lam trên máy huyết học Celfly1-1700 hãng ABBOT Mỹ

Sinh húa máu (urẻ, creatinin, acid uric, men gan, điện giải đỏ) tmáy Protometer 4010 hãng Bochryger Đức

Nước tiểu ( 10 thơng số)

Lam trén may Clinitch 100 hang Bayer M¥ Lm trẻ * Tiêu chuẩu dánh giá kết quả: được chủa làm 3 loại = Loại Á trêu © Logi B (kha) » Loai C (Kémj

~ Loại À: khịng cĩ biểu hiện gì về rối loạn cơ năng, khơng ảnh hưởng đến chức năng

sinh lý và các thơng số xét nghiệm đều bình thường ~ Loại B: Khơi

ảnh hưởng đến chức năng sinh lý, cĩ một vài biểu hiện về rối loạn cơ năng (šn ngủ kếm hoặc mệt mỗi nhức đầu) và các thơng số xét nghiệm đều bình thường

- Loại C: cĩ rối loạn cơ năng, các xét nghiệm cĩ ảnh hưởng

Trang 32

2.72 Nghiên cứu tác dụng của thude Sotinin trén 35 bệnh nhân sdi điết niệu

( Giai đoạn 2) :

2.7.2.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân:

a Theo y học hiện đại:

Benh nhân từ 18 tuổi trở lên, khơng phân biệt nam nữ, nghề nghiệp, cĩ các biểu hiện

sau:

Về lâm sang re

~ _ C6 cơn đau vùng thất Bing H@je’doc theo nien quản

~_ Đau đữ đội một bên lan xuống vùng bẹn —

-_ Cĩ đái máu hoặc đái đục

- _ Đây bụng chướng hơi, buồn nơn

Vẻ cận lam sang

-_ Siêu âm thận niệu quản cĩ sỏi đường kính nhỏ hơn 1cm

- Chup X quang khơng chuẩn bị cĩ hình ảnh cản quang

~_ Chụp LTV cĩ hình sơi cần quang

b Theo ý học cổ truyền: 2 thể

+ Thể thấp nhiệc triệu chứng: bụng, lưng đau kịch liệt, đau lan lên vùng hạ vị

hay lan xuống vùng bộ phận sinh dục, đái nhiều lần, mốt đái, đái đau, nước

tiểu xuống khơng hết thường kèm theo đái ra máu Chất lưỡi đỏ, rêu lưỡi vàng

Mạch huyền sác hay hoạt sác

-_ Thể ứ trệ: cĩ triệu chứng đau lưng tiên miên, dau tức vùng hạ vị đẩy chướng,

dai khĩ khơng đứt, đái ra máu Chất lưỡi đỏ, rêu lưỡi mỏng Mạch huyền sác

3.7.3.2 Tiêu chuẩn loại trừ

-_ Sỏi to (đường kính lớn hơn ism) đã cĩ biến chứng thận, biểu hiện ứ nước hế

thận hoặc dãn niệu quản

~ _ Chức năng thận đã bị ảnh hưởng (urè cao, nhiễm khuẩn nặng, huyết áp cao hơn 160mmHg) - _ Dị đạng đường tiết niệu, lao thận, K thận, đái đưỡng chấp -3 Cách tiến hành: * Cách sử dụng thuốc: a Liểu dùng: 21 viên/ngày

b Cách đùng: Uống mỗi lần 7 viên sau bữa ăn, ngày uống 3 lân

Trang 33

* Tiến hành theo dõi hàng ngày: Bệnh nhân được thăm khám hàng ngày, các chỉ số

sau được ghỉ vào phiếu điều trị: a Các chỉ số sinh học: Mạch Nhiệt độ Huyết áp Lượng nước tiểu Các biểu hiện khác | SE

Các chỉ số cận lam sàng: Làm trước và sau điều trị ‡ +

Huyết học: hồng cẩu, bạch cầu, tiểu cầu, tỉ lệ huyết sắc tố `”

Sinh hố máu: urẻ, creatinin, axit uric, điện giải đổ, men gan (SGOT, SGPT) Nước tiểu: tỉ trọng, pH, protein, héng cau, bach cầu, cặn

Siêu âm đường tiết niệu: thận, niệu quản, bàng quang

Chụp X-quang: chụp lại những trường hợp ra sỏi để xác định khơng cịn sơi trong đường tiết niệu

3.7.2.4 Đánh giá kết quả: (chia làm + loại A, B, C, D)

Loại A: Hết đau, đái ra sơi Siêu am khơng cịn sỏi trong đường tiết niệu, các xét nghiệm cận lâm sàng bình thường

Loại B: Giám hoặc hết đau, tiểu thơng, Siêu âm thấy sỏi nhỏ di Loại C: Đau giảm ít Siêu âm thấy sỏi giảm ít, khơng đáng kể

Loại D: Đau khơng giảm Siêu âm thấy sỏi to lên, phải đổi phương pháp điều

trị

3.7.2.5 Phương pháp nghiên cứa:

Nghiên cứu mở So sánh trước và sau điều trị

Số liệu thu được được sử lý bảng tốn thống Kê y học

Trang 34

CHƯƠNGIV KẾT QUÁ VÀ BÀN LUẬN

1 Nghiên cứu thành phần hĩa họé &: phương pháp chiết xuất

- Nghiên cứu thành phân hĩa học: Kết quả phan tích sơ bộ định tính của chúng tơi cho thấy hầu hết các nhĩm chất đã cơng bổ trong các tài liệu { 5, 7, 15, 16, 29, 34, 35, 36, 37 ] đều được tìm thấy trong các vị thuốc và trong cao souinin, Ngồi ra chúng tơi cịn phát biện thêm một số nhĩm chất mà chưa cĩ tài liệu cơng bố như: hợp chất

coumarin trong bạch Hạt, flavonoid ưong cối xay, các hợp chất tritecpen và saponin

trong tru linh, saponin trong ti Son ii cholesterol trong kẻ nội kim

- Nghiên ca phương pháp chiết xuất: Thuốc Sotinin xây ats Trengeo sb bai thude ob

phương Ngũ lình tín được dùng dưới dạng thuốc thang, sắc uống hành ngày nên

nghiên cứu đầu tiên của chúng tơi tơn trọng cách chiết cổ truyền dùng dung mơi là nước (sơ đồ trang+e) Cao bán thành phẩm cịn lẫn nhiêu tạp chất, thể hiện cao dễ chảy

nhão khi bị ẩm Khối krong cao khá lớn sơ với được liệu, nên nếu sử đụng cao này

hàng ngày người bệnh phải uống một lượng lớn thuốc, ngồi ra cao Sotnin điều chế

bằng phương pháp cổ phương thì một số chất để bay hơi như tinh đầu của bạch truật

cồn lại khơng đáng kể mà chính nĩ là một trong số các thành phần cĩ tác dụng trong, quá trình điều trị các bệnh về thận

Để tìm hiểu ảnh hưởng của các vị thuốc đến khối lượng cao Sotinin chúng tơi tiến hành khảo sắt hàm lượng chất tan trong nước (là dung mơi chiết cao theo phương pháp cổ truyền ) và trong cthanol (là dung mơi dự kiến để chiết một số vị theo phương pháp 2) Hàm lượng chất tan trong nước và trong cồn của các vị thuốc được xác định theo DĐVN Kết quả thu được trình bẩy ở băng 1

Bảng 1: Hàm lượng chất tan trong nước và trong etanol của các vị thuốc

Hàm lượng chất tan {% so với khối lượng khơ tuyệt Tên vị thuốc đối của được liệu)

| Ì Chất tan rong etanol 80% | Chat tan trong nutic

Trang 35

Căn cứ vào kết quả phân tích sơ bộ, định tính các nhĩm chất trong được liệu,

cũng như trong cao bán thành phẩm và căn cứ vào những tài liệu khoa học đã cơng bố

vẻ thành phần hĩa học và cơng dụng của từng vị thuốc trong bài thuốc Chúng tơi nhận thấy các vị trong bài thuốc đêu cĩ chứa các hợp chất cĩ tác dụng sinh học, liên quan đến tác dụng trị bệnh như hạn chế hình thành sơi, tăng đào thải các yếu tố tạo sồi, chống viêm lợi tiểu Chúng là các hợp chất flavonoid cĩ trong Kim tién thảo, Cối xa, hoặc là hợp chất saponin cĩ ruết trong hấu hết các dược liệu của bài thuốc như Kim tiên thảo, Bạch tinh, Tgachr-qŠ Bạch ruật, Trơ linh, Quế, hoặc là hợp chất coumarin cĩ trong Kím tiễn thảo, Bạch truật, Quế, hoặc là hợp chất sterof cĩ trong Ke

nội kim Các hợp chất trên ở đạng kết hợp glycosid, nên cĩ Thế hạn dược 48 dang

trong nước hoặc ethanoi Cũng chính vì vậy khi người bệnh chỉ dùng thấŠŠ duới dang

sắc, thuốc cũng rất cơng hiệu

Dựa trên những cơ sở đĩ, chúng tơi đã lựa chọn dung mơi là nước và ethanol để chiết cao Sotinin Hai dùng mới này vừa dễ kiếm, rẻ tiên, mà vẫn đảm bảo chiết

được những nhĩm hoạt chất cần thiết

Bảng 2: So sánh hiệu suất và chất lượng cao Sotinin điều chế bằng 2 phương pháp ( mẽ chiết : 500 ø được liệu x 3 lân )

- “Mãn cao Khối lượng cao Í Hàm lượng chất tan trong ()

Trang 36

~_ Phương pháp L: Dung mơi chiết là nước

- _ Phương pháp 2: Dung mơi chiết là nước và ethanol 80%

Can cứ vào nghiên cứu khảo sit him lượng chất tan trong nước và cthanol (bảng!) Bạch truật cĩ hàm lượng chất tan trong cao nước gấp 3.2 lân trong ethanol Ngồi các hợp chất triteepen coumarin bạch truật cịn cĩ 1,4-1,5% tỉnh dầu với các

thành phần như atactylon, atratylenoid 1, II, HL,-eudesmol, hợp chất này cĩ tác dụng chống viêm mạnh và chống suy giảm chức năng gan, nên nếu chiết ding nude thi khơng chiết được tỉnh dầu, ` được“H@b⁄lại thường phải tiếp xúc với nhiệt độ cao, nên cao chiết sẽ khơng đảm bão chất lượng Bạch linh eố hàm£lượng chất tan trong cao

nước gấp 9.2 Tần trong ethanol, thinh phân hĩa học của Bạch lnh đẳng nhự Bạch truật

cĩ các hợp chất triecpen cĩ tác dụng chống viêm mạnh, ngồi ra đt cĩ đường

pachyman, cĩ tác dụng ngăn ngừa bài tiết protein cùng nước tiểu, làm giảm mức độ bệnh lý của tế bào và rơ Cịn Trạch tả thì cĩ hàm lượng chất tan trong cao nước chỉ hơn 2 lần trong edianol nhưng trạch tả cĩ tỉnh đầu với các thành phân alisol A, B, C, epialisol A nén chigt bing dung moi ethanol thi thich hợp hơn Cịn đối với các dược liệu khấc thì hàm lượng chất tan trong hai loại dung mơi khơng chènh lệch nhau

nhiều, như đã trình bày ở trên các hợp chất cĩ hoạt tính sinh học trong thành phần được liệu đều cĩ thể chiết được bằng nứợc Nên chúng tơi chỉ thay đổi dung mơi chiết của 3 vị là bạch linh trạch tả và bạch truật từ nước sang cổ (phương pháp 2, xem

trang 1z) Qua chiết tham dị ở nhiều mẻ nhỏ với ethanol cĩ độ cồn từ 50 2 đến 90%, chúng tơi chọn dung mơi chiết 1a ethanol 80%, cho chất lượng cao là tốt hơn cả Kết quả thụ được cho thấy khối lượng cao chiết được theo phương pháp 2 đã giảm 24% (trung bình của 3 mẻ chiết) so với khối lượng cao điều chế bằng phương pháp cổ truyền (bảng 2) Trong đĩ hàm lượng các nhĩm hoại chất chính là flavonoid (chất tan trong ethyl acetat) va saponin (chất tan trong butanol) trong cao điên chế bằng phương pháp 2 cao hơn phương pháp cổ phương (phương pháp 1)

Qui trình chiết xuất đã được thực hiện ở qui mỏ pilot (mỗi mẻ chiết 150 kg được liệu x 3 lần) tại khoa Cơng nghệ chiết xuất- Viện dược liệu, với trang thiết bị chiết xuất tien tiến, nên cao chiết đảm bảo chiết kiệt được các nhĩm hoạt chất chính

trong được liệu Cơng đoạn thu hỏi dưng mơi cũng shư khi cơ đến cao đặc được thực

hiện trên máy cơ màng mỏng, với áp suất giảm nên dịch chiết Khơng bị tiếp xúc với

nhiệt độ cao Ở cơng đoạn sấy, cáo đặc được sấy trong th sấy chân khơng, nhiệt độ

sấy 5ˆ55”C, dưới áp lực giảm, cao được đàn ra, thànH lớp mồng trên khay sấy, đặt vào

tủ Tủ cĩ hai thành, giữa cĩ chứa nước đun lên đến nhiệt độ yêu cầu Trong quá trình

Trang 37

sấy cao trương phống lèn rồi xẹp xuống, sau đồ khỏ đi thành một chất xốp & nứt rạn,

cĩ thể tần thành bột rất để đàng

Với những thiết bị trèn,qui trình chiết cao của chúng tơi được tiến hành đồng

bộ , khơng mất nhiều thời gian mà chất lượng cao được đảm bảo (xem qui trình chiết

cao trong phần phụ lục)

Đánh giá chất lượng cao, ngồi phần được thể hiện bằng tiêu chuẩn xây dựng,

con duge chứng mủnh bằng kết quả~nghiên cứu được lí & lâm sàng Các kết quả nghiên cứu thử nghiệm dưỡng tínhnhận được,một lần nữa chứng tỏ phương pháp chiết

xuất hoạt chất từ dược liệu đã lựa chọn là hợp lí fog

C6 một thực tế, chúng tơi muốn sau khí chiết đợợc sapbnosid, đavonoid,

¿oumarin tồn phần bằng dụng mơi nước, hay ethanol 80%, cất thụ RưỄ dụng mơi dưới áp lực giấm sẽ loai tap bing chloroform, hay benzen và sau đĩ tỉnh chế các nhĩm hoạt chất chiết được bằng dung mơi hữu cơ thích hợp như n-butanọ bão hịa nước, hay ethylacetat am cho các nhĩm hoạt chất chiết được tỉnh chế hơn và nhự vậy sẽ giảm bớt khối lượng thuốc uống cho bệnh nhân, song với kinh phí cĩ hạn,

chút # tơi mới tham dị tính chế thử nghiệm ở qui mơ nhỏ trong phịng thí nghiệm, chưa nghiên cứu triển khai ở qui mo pilot được Mặt khác, với cao tình chế thứ nghiệm này, giá thành thuốc cũng sẽ cao hơn nhiều người bệnh khĩ chấp nhận Ngồi ra chưa tính đến tá dụng tương hỗ của các thành phân trong được liệu, cĩ thể khơng phải bất cứ tạp chất nào cũng là vơ bổ,

Két tua

Đã nghiên cứu cải tiến phương pháp diéu ché cao Sotinin, ding ethanol thay thế nước để chiết xuất 3 vị bạch truật, bạch linh, trạch tả làm giảm khối lượng cao 24% so với phương pháp cổ truyền, đồng thời năng cao chất lượng cúa cao thuốc Phương pháp cải tiến đã được thực hiện trên quy mị pilot và sân phẩm cao thu được đã được nghiên cứu dược lý

bào chế, và thử nghiệm trên lâm sàng đạt kết quả tốt

2 Nghiên cứu tác dụng dược lý cao Sotinin ( liều đùng thuốc thử nghiệm đều qui về được liệu khơ)

2.1 Nghiên cứu tác dụng lợi tiểu

* Một trong những nguyên tắc diéu trị bệnh sồi tiết niệu, mà thay thuốc

thường yêu cầu là bệnh nhân cẩn uống nhiều nước Khi uống nhiễu nước, lượng nước tiểu bài tiết sẽ nhiễu hơn, cĩ nhiều trường hợp sỏi bị bào mịn nhỏ lại và được tống ra

ngồi Trên cơ sở đĩ, mà một trong những nghiên cứu tác đựng dược lí đầu tiên của

để tài là nghiên cứu tác dụng lợi tiểu của thuốc

Trang 38

* Thuốc được thử nghiệm trên chuột cống trắng, mỗi lơ 10 con Thuốc chọn

làm tham chiếu là thuốc lợi tiểu tân duge hypothyazit Thuốc nghiên cứu được sử

dụng ở 2 liều khác nhau: ‘

- Lo thude 1: Liéu Og duge ligu /lkg chugt

~_ Lê thuốc 2: Liễu 20g được liệu /Ikg chuột

* CHỈ số theo đối là thể tích nước tiểu trong 6h /100g chuột, được so sánh giữa

các lơ thử với lơ tống táng 3} #

- Lo tham chiếu, thé ich quée-yép tang là 110,89%

- Lơ thuốc 1, thể tích nước tiểu tăng là28/63% „+

-_ Lơ thuốc 2, thể tích nước tiểu táng là 82,30% l

* Số mmol Na* và K* bài xuất ra nước tiểu cũng tăng, đáng lưu ý"! Pat la a 10 thuốc 2, s6 mmol K* tang rất cao, tới 166,39 %,

* Nhưng trong nghiên cứu lâm sàng, chỉ số mmol K* của nước tiểu người bệnh cĩ tăng, song tăng khơng đáng kể và vẫn nằm trong phạm vi cho phép (xem trang$Q)

"hả

Đây cũng là một trong những ưu việt của thuốc cĩ nguồn gốc từ dược liệu, khác với thuốc lợi tiểu cố nguồn gốc hĩa dược

* Tác dụng lợi tiểu của thuốc là nhờ trong bài thuốc cĩ các vị kìm tiên thảo, cối

xay, trạch tả, trư linh Điều này phù hợp với kinh nghiệm từ xa xưa của cha Ơng ta

dùng các dược thảo trên để điều trị bí tiểu Bảng 3 : Các chỉ số theo dõi

Trang 39

* Kết luận: Với liêu 20/1kg chuột, thuốc nghiên cứu cĩ tác dụng lợi tiểu tối Thể

tích nước tiểu trong 6 giờ tăng 82,3% so với lơ chứng 2.3 Tác dụng làm mịn sỗi invitre Bảng 4 ; Tác dụng làm mịn sỏi invitro ở lơ chứng

- STT | Trọng lượng sối | Trọng lugngsdi | Chenhléch | Phan tram do

Trang 40

Bảng 6: Tác dụng làm mịn sỏi invitro ở lỏ thuốc tỷ lệ 2 : I

STT | Trọng lượng sỏi | Trọng lượng sơi Chênh lệch Phần tram độ Ị

Xúc suất tính theo cong tute t-student tra bảng p<0,03 cĩ ÿ nghĩa thống kế

Thương pháp nghiên cứu tác dựng làm mịn sỏi trình bày trèn chỉ là nghiên cứu in-vitro, phương pháp này do khoa được lf của viện xây dựng

Phương pháp nghiên cứu in-vivo : trước đây khoa dược lí của viện cũng đã xây dựng mơ hình bệnh sỗi tiết niệu ia-vivo., bằng cách cấy sỏi bệnh lí vào đường tiết niệu của súc vật nghiên cứu, nhưng phương pbáp thử nghiệm này tuy tốn nhiều thời gian và kính phí, song kết quả cũng cịn hạn chế Trong khuơn khổ thời gian và kinh phí cĩ hạn của để tài chúng tơi chi bước đầu thăm đị tác dụng của thuốc, chứ cơ chế bài mịn

sỏi trong cơ thể khơng chỉ đơn giản như trọng thử nghiệm, mà phức tạp hơn rất nhiều * Nhận xét: ~ Cao thuốc nghiên cứu cĩ tác dụng làm mịn sỏi tốt so với lị chứng ỏ dưng địch thuốc cố tỷ lệ 1:1 (19,82%) trong 5 ngày — - Khí tăng liêu (thuốc cĩ tỷ lệ 2:1) tác dụng làm mịn sỏi tăng khơng đáng kế (19,97%)

~ Trong thời gian tiến hành thí nghiệm, chúng tơi nhận thấy thuốc cĩ tác dụng tốt trên sối than và niệu quả, ở sưi bàng quang tác dụng khơng rõ rệt

-Khi tiến hành thí nghiệm để kéo dài thêm 5 ngày nữa (sau khi đã sấy và cân) nhưng tác dụng mịn sỗi cũng khơng (ăng thêm nhiều