LỜI CẢM ƠN Chẳng tơi xin chân thành cẩm on:
- 15 Lê Đình Cêng Viện trưởng Vig Sốt rét Ký sinh trùng Cịn trùng Trung ' ướcg đã chỉ dạo đồng gĩp nhiều ý kiến quí béu và tạo mọi điều kiến giúp đỡ chúng tới trong quá trình thực biên để
- T5 Đồn Hạnh Nhân phĩ Viện trưởng , TS Nơng Thị Tiến Trưởng Khoa Nghiên cứu điều trị vối cết.Việt Sot eét Ký tịch trùng Cơn tring Trung wun trực :iếp chỉ dụo
p đỡ chúng tơi trong quá trình thực hiện để tài
- Cử nhân Phạm Thị Xuy guyền Thị Hướng
nb) quan ly Dy dn Viet
Nam EC Của Viên Sốt rét Ký sinh trùng Cơn trùng Trung ương, đã quan tầm giúp đỡ trong suốt quá trình thực hiện để tải
- Ban giám đốc và các khoa phịn; của Viên Sốt Rết KST- CT trung ương đã tạo
mọi điện kiện thời gián, trang thiết bị và phương tiền làm: việc, để chúg tơi
hồn thành để tài này - Ban lãch đạo và tập thể cán bd Khoa Nghién Cứu Điều trị Sốt rét, Bộ mơn Mộ học trường Đại học V Hà - ¡ Dộ mơn Sinh lý Học viên Quân y đã quan tâm giúp đỡ
“ong thời gian thực hiện thí nghiệm của để tài Chúng tơi xin chân thành cẢm ơn :
- TS Trịnh Q:
VN-EC đã cấp kinh phí va tạo điều kiện cho chúng têi :hực hiện để tài
Trang 2MỤC LỤC “Thứ tự Nội đụng 1 Bat vain dé II Tổng quan 2.1.Tình hình nghiên cứu AT và dx 2.2 Dac tinh cla ART va dx
3.3 Nghiên cứu tổng hợp ART-E 3.4 Các kết quả nghiên cứu bạn đầu
HÌL Nguyễn liệu, đối tượng và phương pháp nghiên cứu
yên liệu, đổi tượng nghiên cứu 3.2 Phương pháp nghiên cứu
hành
3.3 Phương pháp IV Kết quả nghiên cứu
4,1 Các chỉ số về hĩa sinh, huyết học
42 Anh hưởng của ART-F đến thể trạng cia thd
4.3 Ảnh hưởng cúu ART-E trên các sĩng điện tìm
4.4, Anh hưởng của ART-F trên XN mơ tế bào
4.5 Ảnh hưởng của ART-F trên một số.Chức năng TK
Vv Ban lan
VI Ket luan va dé nghi
"Tai ligu tham khảo
trang
Trang 3CÁC CHỮ VIẾT TÁT ART: artemisinin ART eh dx: rlemisinin va dẫn xuất: AS: artesunale AM: actemelker AF: arteether ART-F: 109 BC: bạch cầu CTBC: cơag thức bạch cầu “frifsoromethythydroarterisinia DHA: dihydroartemisinin HC : hồng ụ Hb: acmoglobin
iy, Nong dé úc chế 50% KST phái triển KST: ký sinh wong LD su: Liêu chết 3Õ % động vật thứ nghiệm XIIC: Nơng độ úc chế X: ngày EEG : Điện não đồ ¡thiểu Pr: protein SR: sết rết SLHC: số lượng lồng cầu sco
SGPT: serum glutamate pyruvate transmitase
Trang 41 ĐẶT VẤN ĐỀ
Bệnh sốt rét là một trong những bệnh xã hội cịn lưu hành rộng rãi trên thế
giới Hàng năm ước tính cĩ 300 triệu ca sốt rét làm sàng và khoảng từ 1 tới 2 triệu ca tử vong [4.31] Một trong những khĩ khăn hiện nay của cơng tác phịng chống sốt rét là hiện tượng ký sinh trùng (KST) kháng các thuốc vốt rét Hiện
tượng khơng các thuốc sốt rét: clloroquine, mefloquine, và thuốc phối hợp
sulfadoxire với pyrimethamine ngày riột lan rộng ra nhiều khu vực trên thế giới “Trước tình hình KSTSR kháng thuốc ngày càng nghiêm trọng Tổ chức y tế thế
giới kêu gọi các nước tập trung vào nghiên cứu tổng nợp tìm các thuốc SR mới
[32]Trong bởi cảnh đĩ, các nhà khoa học Trung Quấc đã chiết xuất được
attemisinin (ART), ti) cay Thanh hao hoa vàng[ 50, 57] ở nước ta ART được chiết xuất và sản xuất từ những năm đầu của thập kỷ 90 Thuốc được đưa vào sử
dụng điện rộng trong 10 nam qua, ART và dẫn chất cĩ hiệu lực điệt ký sinh trừng
(KSD ninh
kịú dũng đơn thuẩn là tý lệ KST tái phát sau điểu trị cịn cao (20-50%) [4,22]
xết nhanh và an tồn Song một trở ngại lớn của :XRT và dẫn chất
Để khác phục nhược điểm trên của ART và dẫn chất, trong thời gian qua ở nước ta cũng như nhiều nước trên thế giới đã và dang nghiên cứu ứng dụng các phác dỏ phối hợp ART và dẫn chất với các thuốc SR cĩ thời gian bán huỷ dài hơn Một số phối hợp thuốc nhữ : ART+Mefloquin, AS+Mefloquin,, CVS, đã đem lại kết
qua tit tror iéu tri SR
Trang 5
thấp hơn ART 3 lần Nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của ART-F 1a LO nmol/l, thấp hơn MIC cửa ART= (30 nnoll) 3
nhiệp) P berghei cho thấy ART-E cĩ tác đụng trên KST P be m1 Thực nghiệm trên chuột nhất trắng ghei nhanh, 100% chuột xạch KST san 24 giờ điều trị và tỷ lệ chỏi bệnh LOC! và kh
chưa thấy KST tái phat trong vịng 68 ngày đối vớằ cả chúng nÌ chiorcqain[3] Kết quả nghiên cứu trẻc mở ra triển vọng về một thuế: ốt rét mới Để gĩp phản ng ea cứu tien lâm sàng của ART-F, chúng tơi đặt vấn dẻ lên cứu độc tính, một it
trong những qui định cần thiết của y một thuốc mới, trước khi được đẻ nsƑj
thir Lim sang Dé tdi được Dự án phịng, chống sốt rét Việt Nam- EŒ chấp nhận và
tài :rợi
oN 'ghiên cứu thử nghiệm xác định độ an tồn của trifluoromethyl aydoartemisnin tART-F) đối với các tổ chức gan, thận, não của động vật thực nghiệm, "
Mục đích của nghiên cứu này nhằm xác định độ an tồn của thuốc đổi với gan thận, não và với một s ý chức năng hoạt động thần kinh của động vật thực nghiệm ˆ mục tiêu cụ thể:
để làm cơ sở cho các nghiên cứu tiến lâm sàng tiếp theo với
1 Đánh giá ảnh hưởng của ART-F đối với các chúc năng: gan, thân, não
của thỏ thực nghiệm
-_ Xác định các ảnh hưởng cđa thuếc đến các chỉ số hố sinh và huyết học, tim mạch, của thỏ thực nghiệm
-_ Xác định liều độc bán cấp của ART-E ảnh hưởng đến cấu trúc hình thái của
gam, thận não thổ thực nghiệm
3, Đánh giá ảnh hưởng của ART-E lên một số chức nàng của hệ thân kinh trung ương trên động vật thực nghiệm
- Xác định ảnh hưởng của ART-F đối với phản xạ cĩ điều kiện dinh dưỡng và
phản xạ cĩ điều kiện vận động tự vệ của chuột cống trắng và chuột nhất trắng
- Xác định ảnh hưởng liều độc bán cấp của ART-F trên não thỏ qua các chỉ số
Trang 6il TONG QUAN
2.4 Tình hình nghiên cứu ART va din xudt
Cây Thanh hao hoa vang cé tén khoa hoc IA Artemisia annua L họ Cúc (Asteraceae) Cay moc hoang & Trung Quéc, Iran, Mong Cổ ở Việt Nam, cây
mọc nhiều ở Lạng Sơn, Cao Bằng, Quáng Ninh, Hà Bắc [23] ‘
Nam 1972, các nhà khoa học Trung Quốc đã chiết xuất ART, sau đồ các nhà
khoa học đã bán tổng hợp các dẫn xuất tit ART va xác định được cơng thức
tạo như sau Artemisinin Dẫn xuất artemisinin - H là dihydroartensisinin - CHỊ là artemether R Ri R: - CH;CH, là arteether R R
- CO(CH;);COONa là sodium artesunate : - CH;C2H,COONA là sodium artelinate
ART và dẫn xuất là một sesquiterpen lacton cĩ cầu nổi peroxid nội phản tử, cơng thức phân tử là C¡;H;;O, trong đĩ hoạt tính chống SR đo cầu nối peroxid
Cơ chế tác dụng của ART và dẫn xuất đến nay vẫn chưa biết một cách đấy đủ Nhưng tác đụng của chúng đối kháng với aminobenzoic acid [57], chứng tỏ khác-với chloroquin và các thuốc SR khác: đưới kính hiển vi điện tử, khí điều trị bằng AS cĩ những thay đổi ở trong ty thể, ngược lại quinin lại gây ra sự biến đổi ở trong khơng bào tiêu hố [43], [57]
Cơ chế hoạt động của ART và dẫn xuất gần đây đã được Meshnick va cs
Trang 7sắt,(Fell) kích thích sự phân hủy ART va cdc chat liên quan đến 1,2,4 trioxan
hydrogen peroxid va peroxid hiu co thanh céc géc ty do (Halliwell va Gutteridge,
1989)
Các nhà nghiên cứu cho rằng heme tự do trong KST duge giải phĩng trong quá trình tiêu hố hemoglobin cĩ thể đĩng vai trị quan trọng trong tác dụng độc
tinh chon Ioc cla ART va dan xuat voi KSTSR (Meshnick va cs, 1991) [56
Các nhà nghiên cứu được động học: cho thấy ART và dẫn xuất cĩ sự hấp
thu, chuyến hĩa và thải trừ rất nhanh Đạt nồng độ đỉnh sau uống l giờ, gắn protein huyết tương trên 50% (DHA 43%) [49], T/2 ngắn sau uống ART liều 5Ù0 mg ngày | và ngày 6 trên bệnh nhân SR chưa biến chứng là 3,3 + Ú7 giờ và 2,2 +
0,6 giờ AS, AM cĩ thể qua được hàng zào mầu não và rau thai Thuốc vào cơ thể
phần bố rộng rãi ở mọi cơ quan ở chuột cống trắng, sau uống một giờ, nơng độ
thuốc giảm theo thứ tự: gan, não, huyết tương, phổi thận, cơ tím, lách [38.] Nghiên cứu ART va dan xuất ở Việt Nam: ở nước ta, tác dụng của cá
Trang 8
Trong khi dĩ, thử nghiệm với P./ulciparun nuơi cấy thì đáp ứng cita P fateiparum chúng nhạy và kháng chloroquin đổi với ART là như nhau [23]
Trương Văn Như và cs đã nghiên cứu hiệu lực của ART và AS dùng đường thấm qua đa trên mơ hình SR thực nghiêm: trên chuột nhất trắng nhiễm P.berghei diều trị ART liêu 100 mg/kg.A$ 25 mg/kg trong 5 ngày cho thấy cĩ tiệu lực tốt trên 2 chủng P.berghei nhạy và kháng chloroquin, theo đối trong 28 ngày khơng cổ tái phát [14]
'từ 1990, ART được đưa vào sử dụng ở nước ta để điều trị SR Lé Đình Cơng, Nguyễn Duy Sỹ và cs đã nghiên cứu sử đụng ART 40 mg/kg 20mg / kg, với các liệu trình 3, 5 và 7 ngày cho thấy: thời gian sạch KSTSR, cất sốt khơng cĩ khác nhau giữa các phác đồ, nhưng tỷ lệ tái phát giám cĩ ý nghĩa thống kê ở các phác đồ 5 và 7 ngày [4]
Nghiên cứu về dược động học của Viện Sốt cét-KST-CT Trung ương kết
hợp với Đại học Uppsala Thuy Dién: ART 10 mg/kg đường uống và đường đặt hau mon trén bénh nhan ohiém P falciparum chưa biến chứng cho thấy nơng độ
trong máu tỷ lệ với liễu đưa vào, thời gian đạt nỗng độ tối đa trong máu 2,3-2,8
giờ; thời gian bán thải 1,3-2,8 giờ; nổng độ thuốc trung bình của nhĩm ding đường uống cao hơn nhĩm dùng đường đặt hậu mĩn ở cả ngày 1 và ngày 5 khoảng 3 lần ; nồng độ thuốc trung bình trong máu của ngày 1 cao hơn ngày 3, ở cả 2 đường uống và đặt hậu mơn, mặc dầu liều lượng thuốc đưa vào là như nhau ở cả ngày 1 và ngày 5 [10] Trên người tình nguyện khỏe mạnh, nồng độ ART ngày
1 cao hơn hẳn ngày 5 với liều 500 rng/ngày x 5 ngày; thời gian bán thải ngắn 2.0 +0,5 giờ, độ thanh thái 321,0 + 89,5 Ugiờ (10]
Trang 9KST nhanh (2,0 # 0,7 ngày), ưu điểm là sử dụng đơn giản, liệu trình ngắn ngày (3 ngày) và cĩ tỷ lệ tái phát rất thấp (5%) {9|
2.2 Độc tính của ART và dân xuất
ART và dẫn xuất là những thuốc ít độc [40], [63] Độc tính cấp của ART và din xuất tn chuột nhất trắng t hơn chloroquin [1,14], | Liéu LDso | “Duong uống Đường tiêm 1 ART " ặ 4228 mgfkg 3840 mgíkg I AS : 1180 mg/kg T75 mg/kg AM C” | 840maas - 256 mg/kg ARTF 820mg/kg ' 410mgfkg Cloroanin ¡ 400 mg/kg 63 mg/kg
Các triệu chứng nhiễm độc cấp của ART ở trên động vật thực nghiệm là sự bổn chỗn, run giật, suy giám hơ hấp và mất phản xạ chính xúc
ở các động vật nhỏ
hon thì biểu hiện tổn thương khơng rõ ràng trên hệ thống thần kinh, nhưng trêu động vật lớn, thì biểu hiện lúc đầu là sự co giật ở cường độ cao và mất phương hướng, sau đĩ là suy hơ bấp rồi ngừmg tim, các động vật sống sĩt thì hồi phục từ từ trở lại trong vịng 10-24 giờ [37] [63]
Zhao [62] đã mơ tả các ảnh hưởng tồn thân của AS trên chuột nhất, chuột lang, thổ, chĩ và khi: ở liêu thấp, giữa 240 và 490 mg/kg thì cĩ ảnh hưởng khơng đáng kể Với liễu 700 và 1000 mg/kg, biểu hiện sự giảm hoạt động, khơng làm chủ
được cơ thể (mất thăng bằng), rung giật và co giật, suy giảm hơ hấp từ từ rồi xuất
hiện từ vong Liễu cao trên chuột lang, thỏ, chĩ và khi cho kết quả suy giảm hệ
thống thần kinh trung ương, co giật và suy hơ hấp
cho thấy thường ở liều cao hơn khoảng 100 lân liều điều trị mới tạo ra các phản
ứng cĩ hại của thuốc cho cơ thể
Các nghiên cứu về độc tính bán cấp của ART trên chuột cổng cho thấy cố
sự chịu đựng được liều cao 250 mg/kg x 14 ngày Trên khi, thấy chủ yếu cĩ sự đáp ứng nhạy Ở cơ quan tạo máu Nghiên cứu của Gu và cs, ở liêu 24 mg/kg x 14
Rgày của AM gay ra giảm hồng cấu lưới, xuất hiện sự tan máu in viro khi hồng
Trang 10
cầu được tiếp xúc với nồng độ 1 mmol/L (46] ART, DHA và AŠ cũng gây ra sự
tan máu, nhưng ít hơn AM Trên chế đùng AM biểu hiện sự vật ví
nơn và kiệt sức, cĩ sự giảm nhịp tim, giả huyết áp, nhưng các đấu hiệu độc ít
hơn các thuốc SR phổ biến khác như chioroquin {63] Xét nghiệm mơ học trên
chĩ khi nhận liều cao ART thay cĩ sự thối hố mỡ nhẹ cá: tế bào gan
Cho chuột uống ART liễu 250-500-1000 mg/kg trong L# ngày liên tục,
thấy khơng ách hường đến trọng lượng của chuột, khơng làm thay đổi điện tăm
đồ (ECG), cơng thúc máu và hình ảnh vi thể tim, phổi: gan, lách chuột thí nghiệm (411 Tiêm báp ART liêu 24-28-96 và 192 mg/kg/ ngày cho khí, thấy giám hỏng cầu lưới ở liều 24 mg/kg Một trong 6 khỉ chết sau 2 ngày tiêm liều 96 mg/kg, 3 trong 5 khi chết sau 3 ngày tiêm :iếu 192 mg/kg Tác dụng dộc chủ yếu ở tuỹ xương (tao hồng cầu) Đối với cơ tim, ART ảnh hưởng đến nguyên sinh chất và ty thể của tế bào [35], (401 Các tác dụng độc thân kinH và tim mạch của AM và AE,
đã được nghiên cứu nhiều trên chĩ và chuột cống [36] ở liều cao hơn 10 mg/kg x
28 ngày cả 2 thuốc, gày ra các dấu hiệu độc trên thần kinh và kéo dài khoảng QT trên điện tâm đồ chĩ Tuy nhiên, các thay đổi vẻ bệnh học taần kinh đã xuất hiện
ở não chĩ khi điều trị liều Š mg/kg x 28 ngày Trên in vito, tổn thương bệnh học ' thần kinh ở các tế bào u nguyên bào thần kinh là liên quan tới sự cĩ mặt của cầu buần nơn
nổi peroxid nội phân tử [44]
- Nguyễn Thị Minh Áng, Nguyễn Nghiêm Luật, Nguyễn Thị Xuyến : nghiên
cứu ART và dẫn xuất đã cơng bố kết quả nghiên cứu với liều cao > 200 mg/<g
của ÀS cĩ gay tổn thương gan, thận của chuột nhắt trắng {1] [2]
- Trương Văn Như và cs đã nghiên cứu về độc tính bán cấp của AS liều 100 mg/kg x 28 ngày trên thỏ chưa thấy ảnh hường tới tìm mạch và thể trang [6] CO
giảm số lượng hồng câu, tỷ lệ bemoglobin giảm và tăng nhẹ bạch cầu {5], tổn
thương khá nặng cấu trúc vi thể của gan, thận thỏ Những biến đổi này được hỏi
phục lại hồn tồn bình thường sau 7, 15 ngày ngừng uống thuốc [7], [8] ở liều
40 mg/kg uống liên tục x 15; 30 ngay và uống liên 3 đợt cách nhau 7 ngày, thấy
cĩ tổn thương nhẹ ở gan, thận bình thường và được hồi phục hồn tồn sau 7,L§
ngày ngừng thuốc [7J, [E], [11] AS ở liều 100 mg x 5 ngày chưa thấy ảnh hưởng,
đến các quá trình hưng phấn và ức chế lên hoạt động thần kinh cấp cao ở chuột
nhắt trắng và liều 50 mg x 5 ngày trên chuột cống trắng [15]
Trang 11
ý kiến khác nhau Các nghiên cứu về đột biến trên dong vật đã bộc lộ rang ART khong phai là chất gây đột biến [40], cũng thấy trong thử nghiệm của Ames [27] hoặc trong các nghiên cứu quái
Trung Quốc cho rằng ART độc với bào thai chuột nhất và chuột cống chủng Wistar, đặc biệt trong thời kỳ giữa và muộn của bào tai, ở liêu 1/400 của LÐ;; cĩ
một nửa cá
thai của bào thai chuột cống Một số tác giả
bao thai bi hap thụ, uống liêu 1/25 của liều LD„ gây tá mật Wố đị
lành ahư thốt vị rốn, 100% bào thai bị hấp thụ
- Các nghiên cứu của các số tác giả ở Đại Học Y Thượng Hải [40] cho thay
+ Trên chuột nhất
- Sau khi thy thai ngay chit 6 -15, tiém artemether 5.4 mg/kg, khéng thay anh
Hưởng rõ ràng với trọng lượng, độ dài, ngoại hình của thai và chuột con để ra
- Khi dua liệu 10,7 và 21,4mg / kg thì cĩ 30% và 100% bao thai bi teo, nhưng ở
liêu 21,4 mg/kg tigm vào ngày D,;- Dạ; của thời kỳ mang thai thì khong ảnh
hưởng đến sự phát triển của thai
+ Trên chuột cống và thỏ cho thấy:
~_ Với liễu bình thường 5.4 mg/kg khong ảnh hưởng đến sự phát triển của thai -_ Với liễu 21,4 mg/kg, thủ bào thai bị teo AM cho độc tính cao hơn AE đổi với phơi thai của shuột cống và chuột nhất [40], [63]
~_ Các nghiên cứu tiền làm sàng của ARTECEF BV, Maarssen The Nethelands
về Artecef (artemether) đã được ghi nhận ở liễu ding 1,2 — 2,2 mg / kg khong
gây ânh hưởng đến quá trình sinh sẵn của đơng vật thí nghiệm [28]
-_ Nghiên cứu và kết luận của cơng ty Ltd Dự án 392962 (RCC, 1995đ )
nghiên cứu trên chuột cống vé khả năng sinh sản và hiệu suất tái sinh với liểu 2, 4, 6 mg/kg Chuột đực 28 ngày, chuột cái 14 ngày Kết quá cho thấy ở chuột duc: Giảm nồng độ tình trồng, làm suy yếu hưng phấn, thay đổi hình thái Chuột
cái khơng ảnh hướng sự làm tổ của trứng[29 }
LSR, 1986: nghiên cứu về độc tính với phơi thai và sự sinh quái thai invitro trên bào thai chuột cống ở nồng độ >I mg/ml gây độc với sự lớn lên và phát triển của phơi thai [30]
Trang 12
Lan, cho thấy chưa cĩ phản ứng cĩ hại nào liên quan đến thuốc Các ác dụng phụ phổ biến đã được thịng báo sau khí sử dụng ART là đau đầu, buồn nơn, đau bụng, nơn vot và thỉnh thống cĩ tiêu chảy Các triệu chứng này cĩ mếi liên quan
mặt thiết với các triệu chíng của bệnh SR nén rất khĩ phân biệt
Các quan sát chỉ tiết trên số lựi hồ người tình nguyện đã chủ ta Khơng
cĩ phán ứng cĩ hại [42], [53lŸ Trong các nghiên cứu gần đây trên trẻ em ở Gambian bị SRAT, nhĩm trẻ em được điều tj bằng AM xuất hiện cơn co giật nhiều và thường xuyên hơn so với nhĩm trš em được điều trị bằng quinin [47] Điều tri bằng AM cũng được đánh giá vẻ thời gian thốt khỏi hơn mê là dài hơn
Các nghiên cứu ở Việt Nam cũng cho kết quả chưa thấy cĩ tác dụng phụ nghiệm
trọng nào [47]
Số liệu về việc sử dụng ART và dẫn xuất trên phụ nữ cĩ thai cịn rất hạn chế Sáu trẻ em được sinh ra từ các bà mẹ, những người đã nhận tiêm bắp ART hoặc AM vào tuần thứ 17 đến 27 của thời ky thai nghén và đã được theo dõi sau 6 đến 10 nam [59] Khơng cĩ các dị tật bẩm sinh nào được phát hiện Theo đỗi từ 3
tháng đến 10 năm của 17 trẻ em được sinh ra từ các bà mẹ, được nhận ART vio |
tuần thứ 16 đến 38 của thời kỳ mang thai đã chỉ ra khơng cĩ sự bất thường, ngoại trừ một trường hợp bị để non ở tuần thứ 34 [45] Phụ nữ cĩ thai được điều trị một
cách tình cờ trong nhiều vùng dịch tễ Các hậu quả của các trường hợp cĩ thai
khơng được cung cấp, chưa cĩ sự giám sát đầy đủ trên thương trường Hiện tại,
chưa cĩ các khuyết tật bẩm sinh trầm trọng nào được thơng báo [58]
2.3 - Nghiên cứu tổng hợp ART- F,
Hiệu quả của arternisinin bị hạn chế vì : ít hồ tan trong nước cũng như trong đụng mơi hữu cơ, thời gian bán thải trong huyết tương ngắn điều đồ gây ra
tỷ lệ tái phát đáng kể (20 - 50%) [3, 10, 34]
„Vì các lý đo trên, nhiều cố gắng đã được thực hiện để phát triển các thế hệ dẫn xuất mới bằng cách bán tổng hợp hoặc là bằng cách tổng hợp endoperoxyde cĩ cấu trúc đơn giản Những chất đồng phân đơn giản hố khơng mang lại những
Trang 13Những dẫn xuất bán tổng hợp này cho phép cải th khả năng hồ tạn trong nước hoặc trong dụng mơi hữu cơ, nhưng chúng cĩ thời gian bán huỷ ngắn và vấn để tấi phát vẫn cịn Người ta buộc phải dùng liều cao mặc dù chưa hiểu biết đầy đủ về thích ở tĩnh lâu đài của nĩ Mặt khác, ác liêu thấp hơn cĩ thể kích
ính trùng kháng nhanh hơn đối với các dẫn xuất của artemisinin ĐỀ
thay dồi dược động học và
cĩ được những thành phần cĩ dạng dược lý tốt hơn, người ta dự kiến gắn fluor vio các đẫn xuất arternisioin dựa trên cơ sở nhỡng đặc
tính nội tại do các nguyện tử flaor cĩ trong phản tử mang lai[34]-
dẫn xuất DHA bán tổng hợp cĩ một thời gian phân huỷ ngắn vì lẽ alkyÌ
oxydase bị khử nhanh bởi các enzym đối với cytochrom P450, nĩ đưa DHA 2 vào thành phần hoạt hố [33] DHIA2 tự nĩ cĩ một thời gian phân huỷ rất ngắn, mở ra mot chu kỳ bán acetalique khơng ổn định và mở ra quá trình axit hố gluccuronic.Trên thực tế, thường cĩ thể nhận biết được chất tương tự đã gắn chất
xúc tác của fluor nhờ những đại phân tử sinh học, enzym hay qua chất thu nhà
Nhưng so sánh tính ổn định chuyển hố ở chất tương tự gắn fluor thi thay lực của
mối liên kết C-F lổn hơn nhiều so với chính nĩ cĩ chất xúc tác khơng gắn fluor
(oxy hố và thuỷ phân) [34]
Mặt khác, việc thay thế các nguyên tử fluor vào những nguyên tử hydro thì cĩ thể làm thay đổi khả năng hồ tan của phân tử
Khi tính đến các đặc tính và quá trình chuyển hố của các dẫn xuất của artemisinin, nh6m BIOCIS-Chatenay đã nhận thấy cĩ hai loại dẫn xuất gắn fluor
của dihydroartemisinin [34, 34] :
Dihydroartemisinin 10c-CF,-dihydroartemisinin
Trang 142.4 Các kết quả nghiên cứu ban đảu
Một trong dẫn xuất gắn fluor của ART cĩ tắc dụng tốt với KST sốt rét là 106-Trifluoramethyl-Rydroartemisinin ( ART-E ) đã được thử nghiệm bạn đầu tại Viện Sốt rét - KST- CT TƯ năm 1999, cĩ táo dụng trên KSTSR P./eiparien nuơi
cấy và P.beÄghei nhiềm ở chuột nhấ:
dụng diệt KST mạnh và nhanh hơn ART Nồng độ ức chế 50% KST phát triển
ng [3] Kết quả rghiến cứu cho thấy tác
(C¿) là 4,4 nmol/l với chủng nhậy chloroquin và 4,6 nmol/1 với chủng kháng chloroquin, nơng độ này thấp hơn ART 3 lần Nơng độ ức chế tối thiển (MỊC) của ART-F là 10 nmol4, thấp hor MỊC của ART 3 lần Tiên chuột nhất trắng nhiễm P berghei ART-F cĩ tác dụng với liêu 50 mg/kg digi KST P berghei nhanh, 100% chuột sạch KST sau 24 giờ điều trị và tỷ lệ khơi bệnh 100%, chưa thấy KST
tái phát trong vịng 6U ngày đối với cả chủng nhậy và kháng chlaroquin {3] Những kết quả này đã được khẳng định của
BBIOI: — Đướida ED50 07mg/Kg — ED90 Đường uống EDSO 43mg/Kg — EDSO BBI102: Dudida ED50 l0mg/Kg ED90
Đường uống ED50 28mg/Kg ED90
Artesunate — Dướiđa EDSO 2.8mg/Kg ED90
Đườnguống ED3O l05mgfg ED90 153mg#g
Các liễu cĩ hiệu lực ElD50 và EÐ 90 tốt hơn đối với artcsunate loại tiêm dưới đa hoặc loại dùng đường uống đị cho độ hồ tan của sản phẩm kém: Những *kết quả này kết hợp với những kết quả sơ bộ đạt được ở Pharo trên được động học của ART-E thử nghiệm trên lợn cho thấy rõ nổng độ trong huyết tương là 30ng/mL 10 giờ sau điều trị, xác nhận giả thuyết của cơng trình và đưa cĩ chọn
lọc vào nhĩm fiuoroalkyi vào carbon 10, một vị trí chiến lược để tạo sự chuyển
hố, vừa làm chậm tốc độ chuyển hố của các dẫn xuất arternisinin,
Trang 15THLNGUYÊN LIỆU, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚU
3,1 Nguyên liệu, đối tượng nghiên cứu: 3.1.1 Chất liệu
~ Bor ART-F do Biocis upres, Chatenay- Malabry Paris (CNS) va Viện hố cơng nghiệp, Hà Nội Cung cấp
- Gơm arabic tiêu chuẩn được dụng đo Arập sản xuất dùng để pha thuốc
- Bộ kit để xét nghiệm sinh hố , huyết học của hãng Mannhein-Boehringer
3.12 Đối tượng nghiên cứu:
+ Động vật thực nghiệm;
- Thỏ trưởng thành, khơng phân biệt đực, cái (Thỏ 30 con ) cĩ trọng lượng 2
kg + 0,2 kg để nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng của ART-F đối với thể trạng và
các chức năng san, thận, não, từm mạch của thỏ
~ Thỏ trưởng thành trọng lượng 2 kg + 0.2 kg (n = 30) : để nghiền cứu đánh gia ảnh hưởng của ART-F dến chức năng hệ thân kinh Các thỏ do trong tâm dê thỏ Ba -Vì cung cấp, được nuơi trong cùng một điều kiện và cĩ chế độ ăn và nước
uống như nhau
+ Chuột nhất trắng (n = 100) do Viện Vệ sinh Dịch rễ cung cấp, trọng lượng
chuột (22g + 2), được nuơi trong cùng một điều kiện
+ Chuột cống trắng trưởng thành, do Học Viện Quân y cung cấp, trọng lượng
(100g + 10g) cũng được nuơi trong cùng một điều kiện (n= 100) 3.2 Phương pháp nghiên cứu:
3.2.1 Thiết kế mơ hình thí nghiệm : theo phương pháp ngẫu nhiên mơ, “Thực nghiệm 1 (INL): Thổ 30 con được chia thành 3 lơ:
~L6 uống ART-F liều 20 mg/kg/ngày liên tục trong 28 ngày (n= 10)
~Lơ uống ART-F liều 50 mg/kg/ngày liên tục trong 28 ngày(n= 10)
- Lơ chứng uống dung dịch gồm arabic 1% liên tục trong 28 ngày(n= 10) + Xết nghiệm hố sinh, huyết học, điện tìm thỏ vào các ngày No, Ni4, N2ẽ
“Thực nghiệm 2 (TM2): Thỏ 30 con chia thành 3 lị
Trang 16~ LơI : Thổ uống ART-F liều 20 mg x 14 ngày liên tục (n=10) ~Lơ2 : Thả tống ARTE-E liểu 50 mg/kg x 14 ngay liên tuc(n=10)
- Lơ 3: Thỏ uống gồtu 15 x 14 ngày liên tục (n= 10)
Thue nghiệm 3 (TN3): Chuột cống trắng 30 con chia thành 5 lõ
- LêI : Chuột cống trắng uống ART F liều $0 me x 5 ngãy liên tục ¡n=10)
- Lê 2 : Chuột cống trắng nống ART-F: 50 mg/kg x 5 ngày x 2đợt (n=10j - Lị 3: Chuột cổng trắng uống ART-F liều 100 mg/kg x5 liên tục (n=LƠ¡ Lê 4 : Chuột cổng trắng uống ART-F 100 mg/Kg x5 ngày x 2đợt (n= 10)
- Lo 5: Chuột cống trắng uống gơm 1% x 5 ngày'liên tục x 2đợt (n=[0), ‘TN 3 duce làm 2 lần
“Thực nghiệm 4 (TN4): Chuột nhất trắng 50 con chia thành 5 lị
- LơI : Chuột nhất trắng uống ART-F l: 50 mg x Š ngày liên tục (n=1Ơ) ắng uống ART-F: 50 mg/Kg x 5 ngày x 2đợt (n=10) ắng uống ART-F: 100 mg; ART-F 100 mg/kg - Lơ 5: Chuột nhất trắng uống gơm 1% x 5 ngày liên tực x 2đợt (n=10) TR + Thực nghiệm tiến hành tại Khoa Nghiên cứu, điều trị sốt rétVSR-KST CT TƯ - Lơ 3 ; Chuột nhái liên tục (n=10) ~ Lơ 4 : Chuột nhất trang ud 5 ngày x 2đợt (n=10) ược làm, 2 lần
+ Bộ mơn sinh lý - Học viện quân y
+ Bộ mơn Mơ học — Trường Đại học Y khoa Hà Nội 3.2.2 Các chỉ tiêu nghiên cứu:
- Đánh giá các chức năng gan thận bằng các xét nghiệm sinh hĩa ngày No, NH., Nưs bằng các kít chuẩn đo trên máy Photomcter 5010 của hãng Mannhein- Boehringer
- Ghi điện tâm 6 bing m4y Cardiofax ECG - 8820 Nihonkohden Nhat Ban
- Đánh gía những thay đổi cấu trúc hình thái tw bao cilia gan , thận và não bằng kính hiển vi quang học (H.E x100; H.E x 400)
~ Ghi điện thế vùng vỗ não cảm giác vận động và thể lưới thân não của thổ - Phản xạ vận động tự vệ cĩ điều kiện, theo dối các thơng số:
Trang 17+ Tốc độ hình thành phân xạ vận động tự vệ c6 điều kiện y (được thể hiện bằng số
lần phối hợp tia hiệu cĩ điểu kiện với tín hiệu khơng điều kiện để phản xạ đạt
được mức bền vững)
¡ Thời ian thực hiện phản xạ cịn được gọi là thời gian của phản xạ
(nh bằng giây) và tốc độ đạp tắt phân xạ cĩ điều kiện (ức chế dập tat, được thể hiệp bằng số lần khơng củng cổ tín hiệu cĩ điều kiện bằng tín hiệu khơng điều
kiện để phản xạ cĩ điều kiện mất đì)
- Phan xạ cĩ điều kiện fim thức ăn trong mè lộ cần theo dõi các :hỏi
+ Tốc dộ hình thành phản xạ tìm thức ăn trong mẻ lộ (được biểu hiện bằng số l
cần tập di 6 được phản xạ, nghĩa là chuột chạy một mạch từ chỗ xuất phát đến
chỗ để thức an) :
+ Thời gian thực hiện phản xạ là thời giau: chuột chạytừ điểm xuất phát đến đích
{chạy trong mê lộ) và tốc độ đạp tắt phản xạ (được tính bằng số lần cho chuột
chạy đếu đích nhưng khơng cho ăn)
- Tiên thĩ: Đánh giá các chỉ số điện thế đo được ở vùng vỏ não cảm giác- vận
động và thể lưới thân não
3.3 Phương pháp tiến hành:
~— Trên thỏ (TN1): chía ngẫu nhiên thành các lơ: Cho thỏ uống thuốc hàng ngày vào 9 giờ sáng, Theo đối trọng lượng thỏ, các chỉ số điện tâm đồ (nhịp tìm, sĩng P, PQ, phức bộ QRS, T, QT) , các chỉ số huyết học (số lượng hồng cầu, bạch cấu, cơng thức bạch cầu, tỷ lệ hemoglobin), chỉ số hố sinh (SGOT, SGPT, albumin, ptotein, creatinin) của lơ chứng và lơ thí nghiệm trước khi uống thuốc (No), các ngày tiếp theo (N14, N21, N28 ) Ngày cuối cùng theo từng lị nghiên cứu mổ thỗ, mỗi thỏ lấy.3 mẫu gan, thận, não, ở các vị trí khác nhau Lãm 3 tiêu bản gan, 3 tiêu bản thận , 3 tiêu bân não Nhuộm hematoxylin- eosin Đánh giá
thay đổi cấu trúc hình thái ví thể gan, thận, não
+ Trén thỏ (TN2):
Điện cực ghi điện thế các cấu trúc não bộ được làm bằng hợp kim Niken- crom cĩ đường kính 0,15 mm và bọc cách điện trừ 0,5 mm ở đầu rodii điện cực.Đạt điện
Trang 18Medicor (Hungari), theo Atlas não thỏ của Bures và cs Sau phẫu thuật đặt điện cực chờ vết mổ lành sẹo mới tiến hành TN
- Điện não dược gùi trên máy ghi điện não của hang Nihon Cobden (Nhật Bản) cĩ bộ phận phân tích điện não thành các sĩng cơ ban (alpha, beta, delta v2 theta) Tiến hãnh ghỉ điện nấp đồ trước (N0), và ngày (N14) uống thuốc
+ Phần xạ vận động tự vệ cĩ điều kiện ở chuột cống trắng được thành lập trong
lổng phán xã cĩ kích thước 40em x 40 em x 40em Kích thích cớ điểu kiện là
tiếng chuơng, kích thích khơng điều kiện là dịng điện ( lưới điện ở đậy lồng cĩ
các cơng tắc đĩng, ngất mạch điện) Phản xạ vận động tự vệ cĩ điều kiện là động
tác chuột nhảy từ đáy lồng lên bám vào một trụ gổ được cố định giữa lỗng phản
xạ và cách đáy lồng 10 em khi tín hiệu cĩ điều kiện Xuất hiện
+ Phản xạ tìm thức ăn trong mê lộ ở chuột nhất trắng được thành lập trong
chuồng mê lộ Chiều dài của đoạn đường chuột phải chạy trong ră lộ từ nơi xuất
phát đến chỗ để thức ăn 7 m Trên đoạn đường này chỉ cố một ngõ tới đích và cĩ nhiều ngõ cụt Chuột phải biết tránh các ngõ cụt để cĩ thể chạy đến đúng chỗ cĩ
thức än Thức ăn dùng làm tác nhân củng cố là bánh bích qui
- Phan xạ tìm thức ăn trong mê lộ ở chuột nhắt trắng được tập và buổi sáng sau
một đêm chuột khơng được cho ãn Mỗi buổi tap cho chuột chạy 3 lần từ nơi xuất
phát đến nơi để thức ăn Mỗi lần cho chạy cách nhau 5 phút
-Dap tắt phan xạ trong rnê lộ được tiến hành khi phản xạ đã được bên vững bằng
cách khơng cho chuột ăn khi chuột chạy đến đích Sau một số lần như vậy chuột sẽ khơng chạy đến chỗ để thức án nữa
~ Phân xạ vận động tự vệ cĩ điều kiện cũng được tập vào buổi sáng Mỗi buổi tập cho phối hợp tín hiệu cĩ điều kiện với tín hiệu khơng điều kiện 3 lần Mỗi lần
phối hợp tín hiệu như vậy cách nhau 5 phút
- Dap tit phan xa van dong lự vệ cĩ điều kiện được tiến hành khi phản xạ tự vệ đã
được bên vững, nghĩa là chuột cĩ 3 lần liên nhau nhảy lên trụ gỗ để tránh điện
giật khi xuất hiện tín hiện cĩ điều kiện là tiếng chuơng
Trang 191V KẾT QUẢ NGHIÊN CÚU:
4.1 Các chỉ số về hĩa sinh, huyết học
4.1.1 Kế! quả về hĩa sinh, huyết học của thỏ nững ART-E tiếu độc bán cấp 20 mpgilkgingay x 28 ngây Bang 1: Kữ quả XXM huyết học của thổ nối Ä 28 ngày liền tục g ART-F fidu 20 mgikgiygay
Các lrước - thí| Sau l4 ngày thí | Sau 28 ngày | puuvu | Đxsy vi
chỉ số | Lơ nghiên cứu [nghiệm (Nụ) | 28hiệm tụi | Coo |
Rĩac | LẺ Chứng lỏng 47342028 4684020 ,484+032 |»005 >005 | - z
ciuitr) | Lo udng ART-F | 4,84 +0,29 | 4,8820,22 |5,0=0,27 | >0,05 | >0.05
Hach, bo chtimg 8200 4560 75002 620 | 7640 + 740 | >0,05 | >0,05
: = Í -
câu Lõ uống ART-F ,7740‡480 |7720+660 7890+790 | >0,05 ; >0.05
Cơng Lơ | ho Be #142 “Los 113 [77.02 124 [>0.03 | >0.05 |
thúc jchứng |T,ứnh | ie s
Lbạch HE JT.UPh '233+71 | 1914113 >0,05 |>0.05
cầu lra |Lymmo [72,9 = 13,1 179.4108 ]73.7£13,5 20,05 | 0,05
Trang 214.1.2 Kếi quả về hĩn vinh, huyết học của thả uống ART-F liêu độc bán cấp 50 mgikgingay x 38 ngày
Bảng 3: Kết quả XN huyết học của thổ uống ART-E liêu 5G mgikglngày x28 ngày
,
[ee Trước thí Sau Lingàythi|[Sau 28 ngày viyyy (Bese chi sé LO nghién ctu i nghiệm (Nụ | đa) kiểng Ì Lơ chứng, 4.94£0,59 | 5/01£0,31 ¡ 4.80+0/44 >003.>0 05 jing | ‡ 2 sso cduttr) Loudng ART-F | 5,040.52 ; 5,0£0:38 | 4,20+0,42 | >003|>0,03 | Bach Le ching 6400 +702 | 63914 1409'| 6975 = 639 | >0,05 >0,05 | °#M Ì La uống ART-F | 625741127 | 39054848 ) 6098 +909 , >0,05|>0.05 | Lympho | 76,043,853 72,17+4,07 | 70,3 + 10,2 | >0,05|>0,05 | se ' Lo Meno x 5 i see : 1170/41, 1LI?£041 125z0450 >0.05 >0/05 | Cong chứng thức 7 tint 217+3/1 | 24734437 | 23,64 101 | 70,09) >0,09 0,05 | +0,08 | | TH | La, | Lymgho (774+3,17| 7394/15 | 70,947.17 | 20.05 (my) ARTE, Mono | 134048 ) 142052) 1,540.52 | 79.05 | T.ính |207+309| 2465/75 | 257471, 20-95) i , Lochimg | 12,14 40,8 , 11,5540,4 | 112720,3 | 90,05 ]>0,05 Hb L | #tcomt | 16 udng ART-F | 11,39 =0,9 | 10,10 £0,63 | 11,13+0,55 >0,05|>0,05 Nhận xét: - Số lượng HC, Hb, của lơ uống thuốc ART-Ƒ sau 28 ngày giảm khơng cĩ ý nghĩa thống kế so với lị chứng (20,05)
- Số lượng bạch cầu, lơ uống AJMT-Ƒ sau 28 ngày uống thuốc tăng, giảm khơng cĩ ý nghĩa thống kẻ so với lơ chứng (p > 0,05)
Trang 234.3 Ảnh hưởng của AWT-E trêu thể trạng của thả:
“Tiên hành cân trọng lượng thỏ tước (Ny), giữa (Đị;) và sau thí nghiệm, n ¡ TrướcTN | Sau l‡ngà 3 gầy p ngày Nạ TN: Nis | TN: Nog Lị ỨN [Ps ta ow | Paes 0/05 p0,05 Lê chứng 10 |176&0,08 | 1/76+0.07 , Lo wong ARTF 110 |202014 [2114021 [2182011 P005 b005 Xơmg/kgjngàyx28 ngày | Lê uổi somaikgi 19 | 1,7840,23 | 1,93 £0.20 b 0.05 poms P > 0,05 > 0,05 > 0.05 Nhan xét:
Sau uống thuốc liên tục 28 ngày, trọng lượng của thĩ cĩ xu hướng tăng lên của cá lơ chứng và lơ uống AI1-F, so sánh sự tăng này khơng thấy sự khác biệt cĩ ý nghĩa thống kê giữa các lơ và so với chính mỗi lơ trước vã sau (p > 0,05)
4.3 Ảnh hưởng của ART-E, trên các sĩng điện tìm thỏ:
Chức phận tím mạch được đánh giá qua các chỉ số điện tìm thỏ trên 12 chuyển
ARTLF với liêu 20
đạo ở cả lơ chứng (uống dung dịch gom arabic 1%) va 10 uối
và 50 mg/kg/ngày x 28 ngày: Điện tìm đỏ được ghỉ ở các thời điểm nghiên cứu: trước khi đưa vào nghiên cứu (Nụ), giữa giai đoạn nghiên cứu (N,,) và sau khi kết thúc nghiên cứu (Ng) Kết quả như bảng 6
Trang 24Bảng 6: Chỉ số điện tim thỏ giữa lơ chứng và lơ TN uống ART-E liều 20 mg/kg/ngày x 28 ngày và 50 mg/kg/ngày x 28 ngày "Ghỉ sốne | Nhịp tim | SĩngPQ QRS | Sĩng ST Sĩng ỢT Thời bùa ì lơTN | Lơ chứng | 25733 | 005=0.01 | 004:091 | G1001 | 0153001 LOTN 40x37 | 0055001 1 004x001 |0.nglLz66(] 0,14 +002, |_20mg/kg † Nụ SUmg/kg P9 - | 2603411 | 005+001 | 0040004] 011001 | 015+001 | P $005 > 005 $005 S005 > 005 Loching | 217432 | 0.96 40.01 | 005 001 | 011001 Ì 016+00L Lơ 1N: 225 +22 | 006£001 | 003+001 | 010= 001 | 014=02 30 mafkg Nu 50 mg/kg aw “ 253 $22 | 0,06 £001 | 0.044001 | 010+001 4 016=00L : P $005 > 005 > 005 > 005 3005 Lochimg | 231431 | 0,06 +0,01 | os #001 | 0.124 0.03 | 0,t6+0.005 | _ du i Seay | LTS | 295423 | 0063001 | 00 #061 | 04146061 Ì 0143661 i 20 mg/kg No 50 mg LoTN ™ | 242436 | 0,06 £0.01 £0.01] 0114001 | o16+0,0r P > 0,05 > 0,05 > 0,05 — > 0,05 > 0,05 a Nhân xét:
Các chỉ số điện tim thổ lơ uống ART-E với liéu 20 mg/kg x 28 ngày và 50 mmg/kg x 28 ngày và lơ chứng ở các thời điểm ngày: Nụ, N14, N;; cĩ sự khác biệt khơng cĩ ý nghĩa thống kê (> 0,03)
Trang 254.4 Ảnh hưởng lên cấu trúc hình thái của gan, thân và não thơ uống ART-F liều 20 mg/kg x 28 ngày
_ Thí nghiệm được tiến hành trên 26 thỏ: lơ chứng 10 thỏ, lơ uống ART-F liều 20 mg/kg/ngày x 28 ngày liên tục 10 thỏ Kết thúc thử nghiệm mớ thỏ đánh
giả tốt thương đại thể bằng má: thường cho thấy: gan và thân, não cĩ kích thước mầu sắc, mặt độ nhụ mơ hồn tồn bình thường khơng cĩ khác biệt giữa 2 lơ Kết quá đánh giá hình ảnh thương tổn cẩu trúc cẩu trúc gan và thận và não thỏ:
4.4.1LẢnh hưởng của thuốc đến cẩu trúc hình thấi gan, thận , não thỏ lỏ
chứng `
+444,1.1 Hình thái cấu trác gan thỏ ở lị chứng sau 28 ngày (n = 10): z Cấu trúc của gan khơng bị thay đổi: ranh giới giữa các tiểu thùy gan khổng
rõ Tiểu thủy gan cĩ cấu trúc điển hình Ở giữa là tĩnh mạch trung tâm cĩ thành mỏng Các tế bào gan tạo thành bè Remak rõ ràng Bào tương của tế bào gan bắt màu hồng, mịn, cĩ những hạt wa bazơ Nhân :ế bào hình: trịn, màng nhân rõ, cĩ í
- 2 hạt nhân Xen kế các bè Remak là các mao mạch nan họa, thành lợp bởi tế bảo
noi mo va tg bao Kupffer Khoảng cửa hẹp, chứa ít mơ liên kết, mạch máu và ổng
mat (anh 1)
Ảnh 1: Gan thẻ lơ chứng (H.E x 100)
1 Tĩnh mạch trung tâm tiểu thùy 2: Bè Remak 3 Khoảng cửa
Trang 264.4.1.2 Hình thái cấu trúc thân ở lơ chứng
Hình ảnh cấu trúc của thận cũng khơng bị thay đổi:
+ Vùng vỏ: các tiểu cầu thận cĩ kích thước khác nhau, phản biệt rõ chùm mao mạch Malpighi khoang Bowman và lá ngồi của bao Bowrnan Các ống lượn gần cĩ lịng hẹp, thành lợp bởi 5-6 rế bào biểu mơ bào tương bắt màu hồng, nhân trịn, esos ’ mảng nhân rõ và cĩ một nhân Các ống lượn xa cĩ lơng rộng hơa Bào tương của các tế ào biểu mỏ lợp ống lượn xã bất màu nhạt lớn Cấu trúc của vết đặc thấy rõ ở một số ống lượn xa (ảnh 2)
+ Vùng túy: Các ống gĩp cĩ lịng rộng, thành lợp bởi biểu mư vuơng đơn hoặc trạ đơn, ranh giối giữa các tế bào rõ, bào tương sắng màu, nhân trịn và màng nhân rõ Nhánh xuống và nhánh lên của quai Henle cấu tạo bình thường (ảnh 3)
Anh 2:Vang vo than thé lị chứng (H.E x 100) Ảnh 3: Vịng tủy than thé F ((HLE x 100)
PTigu cfu than, 2 Gng luon gin, 3 Ong leon xa 1.6nggép, 2 Quai Henle
Trang 294.4.3 Hình thái cẩu trúc gan, lơ uống ART-F liêu 20 mgÍkgíngày x28 ngày - Hình ảnh câu trúc gan: hình ảnh cấu trúc gan của 5 thỏ hồn toần bình thường, cịn 3 thỏ khác cĩ một số biến đổi: cĩ hiện tượng ứ máu ở tĩnh mạch trung tầm tiểu thùy và nh mạch cửa Các tế bào gaa trương to làm mao mạch na hoa hẹp
hấu nư khơng thấy rẽ lịng Bào tương của các tế bào gan sáng, cĩ những lụt ưa thásc, Nhân tí 1 ào cĩ cấu trúc bình thường (ảnh 7) Khoảng cửa dẫn rộng, tăng xinh mỏ liên kết và thàm nhiễm nhiều Iympho bào (ảnh 8),
Ảnh 7: Gan thỏ uống ART-F liêu 20 mg/kgíngày x 28 ngày (H.E x 280)
1 Ứhuyết tĩnh mạch trưng tâm tiểu thùy; 2 Tế bào gan trương to, bào tương sáng
Trang 30
Ảnh 8: Gan thỏ nống ART-F liều 20 mg/kg/ngày x 28 ngày (H.E.x 250) ——* Khoảng cửa dân, tăng sinh mơ liên kết và thâm nhiễm [ympho bào
+⁄4,2.2 Hình thái cẩu trúc thận, ở lơ tổng ART-F liêu 20 mgJkgingày trong 28 ngày liên tực (n = 16):
~ Hình ảnh cấu trúc thận: 5 thơ cĩ cấu trúc bình thường 5 thỏ khác :rong thận cĩ
hiện tượng xung huyết, ứ huyết ở các mạch mầu Các mao mạch của chim mao
mach Malpighi trong tiểu cầu thận dan làm khoang Bowmann hẹp hoặc khơng
thấy, Các ống lượn gần và ống lượn xa bình thường Vùng tủy khơng cĩ những
thay đổi vẻ cấu trúc của ống gĩp và quai Henle (ảnh 9)
Trang 31
2 ống lượn gần 3 ống lượn xã 4 Mạch máu chứa đầy máu
4.4.2.3 Hình thái cấn trúc não ở lơ uống ART-E liêu 20 mạlkgÍngày trong 28 ngày liên tục (n = 10):
“Tiểu não và đại não cĩ hình ảnh cấu trúc hồn tồn bình thường (ảnh 10)
Ảnh 10: Tiểu não thổ uống ART-F liều 20 mg/kg x 28 ngày {Cajal II x 250) 1 Chat wing 2.Chấtxám 3 Mach mu cia mang néo
Trang 324.4.3 Ảnh huơng lên hình thái cấu trúc của gan và than, no thé wing ART-F liéu 50 mgikg x 28 ngay
“Thứ nghiệm được tiến hành trên 10 thé; udng ART-F liéu 50 my/kg/agi
28 ngày liên tục 10 thĩ Kết thúc thứ nghiệm, mổ thỏ đánh giá tổn thương dại thể
bằng mất thường cho thấy: gan và than cĩ kích thước, nu sắc, mật độ nhu mũ
bồn tồn bình thường khơ khác biết so với lỗ nếng liêu 20 mị
gx 28 ngay và lo chứng Kết quả đánh giá hình ảnh thương tổn cấu trúc gan và thận như sau: 4.4.3.1 Ảnh hướng trên cấu trúc hình thái của gan thả uống ART-F
liêu 50 mglkg x 28 ngày liên tue
- Sầu trong 1Ơ thĩ cĩ khoảng cửa bình thường Các tế bảo gân Ở vùng trung tâm và vùng giữa tiếu thuỳ trương tớ, bào tương thối hố hốc, nhân tco, Những tế bào gan ở vùng ngoại vỉ tiểu thuỳ cĩ bào tương bình thường, nhân bình thường, mộ: số tao mạch nan hoa cĩ chứa bạch cầu đã nhân (ách L1, 12, 13)
Bốn trong TƠ thỏ, các tiếu thuỳ gan nở to khơng cĩ ranh giới Tồn bộ các tế
bào gan trương to, mất cấu trúc dãy tế bào Bào tương các tê bào gan thối hố
tốc, nhân teo (ảnh 14)
Ảnh 11: Gan thơ uống liều 50 mg/kg x 28 ngày (HE x 100)
1 Tĩnh mạch trung tâm tiểu thuỳ 2 Khoảng cửa
Trang 33
Ảnh 12: Gan thỏ uống liều Sử mg/kg x 28 ngày (HE x 250) Vùng trung tâm tiểu thuỳ
Ảnh 13: Gan thỏ uống liêu 50 mg/kg x 28 ngay (HE x 250) Vùng ngoại vi iéu thuy ——» Khoảng cửa
Trang 34
Ảnh 14 Gan thỏ uống liều 50 mg/kg x 28 ngày (HE x 250)
1 ống mật, 2.Tinh mach cita, 3 Động mạch gan
4.4.3.2 Ảnh hưởng trên cẩu trúc hình thái của thận thổ uống ART-F' liều 5U
mglkg x 38 ngày liên tực
Vùng dưới vỗ xơ khơng thấy hiện tương xung huyết mạch mơ kẽ Các đoạn ống
sinh niệu vùng dưới vỗ cĩ rất nhiều tế bào biểu mơ, nhân teo đạc, thối hố hốc bào tương
Vùng vỏ thận, cĩ hình ảnh xung huyết mơ kế "Tiểu cầu thận hầu hết khơng
cịn khoang Bowmann, tiểu cấu thận như một khối mĩo mĩ, giảu tế bào và phần
ứng tăng sinh khoảng gian bào mạnh Các ống thận nhiều vùng khơng nhận được
ranh giới giữa các ống than gan nhau Rất nhiều tế bào biểu mơ ống thận cĩ nhãn
teo đặc bao quanh bởi một vùng mất bào tương(ảnh 15)
'Vùng tuỷ thận khơng thấy hình ảnh xung huyết mao mạch kế Rất nhiều trụ
niệu (các đám tế bào) trong lịng các đoạn ống sinh niệu vịng tuỷ (ảnh 16)
Trang 35
Ảnh 15: Thận vùng vỏ, thỏ uống ART-F liêu 50 mg/kg/ngày x 28 ngày (HE x 250)
Trang 364.4.3.3 Ảnh hưởng trên cấu trúc hình thái của não thổ uống ART-F liêu 50 mgtkg x 28 ngày liên tực
- Tiểu não: ở một số vùng của màng tiểu não cĩ tình ảnh xung huyết (ánh 17) Khơcẽ thấy hiện tượng xuất huyết Mo tiểu não pha lớn các cấu trúc của lá tiểu
não khơng ghay đổi Mật độ sự phá
bố của các lớp vở tiểu não và chất trắng bình
thường, ở một vài vùng của một xố lú tiểu não (chủ yếu là lá tiểu não vùng ngoại
vi) xuất hiện những đám tế bùo lạ, mật độ và mức độ xâm nhập tơng sâu khơng đồng đều tảnh 18)
- Đại não: Màng não một vài nơi cĩ Ainh anh xung huyết nhẹ, khơng thấy hiện tượng xuất huyết,
Trang 384.5 Kếi quả nghiên cứu ảnh hưởng của ART-Fđến một số chúc nảng của hệ thần kinh trung tương
4.5 1 Phần xạ tìm thức ăn trong mê lộ:
„ Trên chuột nhất trắng được uống AlRT-E I u 50 mụ/kg và 100 mgikg tống thui và 2 đợt, mỗi đợt x 5 ngày, các đợt nghỉ cách nhau 7 ngày
Kết quả oghiên cứu guá trình hình thành phản xạ và dập tất phan xạ tìm thức án trong mé 16 ở các lơ chuột nhất trắng uống AlÈI-F được trình bẩy ở bảng 7:
Bang 7 Sa sánh tốc độ hình thành, thơi gian phản xạ và tốc độ đập tắt phản xa tùm thức ăn trong mê lộ ở chuột nhất trắng _ Chỉ số NG “Tốc đỡ hình thành pận xã Tức độ cĩ hả: xà bên võng i 3 Số ln khàne cùng
Mã cáp TA AE ĐỂ gu ga ggạmy '| TRI SH đấy | ý để đây nụ hận Ì
Exe es ¡ “ng phi x CỐ [ghe | eg
{ | |
2ä chứng tơng sêm s1 | 13 s1 6,90 |38.00 £ I0.82|60.12£728 |3208-~ 6.51 | 7.25 14.30
ARTE SO mngihy < Ledver2s LOST 11.6890 ARTF 100 rigikg x L cơi 13) ART 45.2043.01 °22.9345,73 50 maka «2 dot ia) 13.00 £9.23 39,11 £8.72 161,25 415.23 |23.63 41459] 9.25 23.61 ARTE i Io sngicg x 2 đợt tối 5.11=3.72 |26.70 + 12.12/56 " \700+408 | 13.0044.93 | pot > 0.05 > 0.05 < oot > 0.05 > 0.05 p 3 > 0.05 > 0.03 <00! ; >005 > 0.05 pat | >0 | >005 >005 >005 > 0.05 p Sel 2005 | <065 > 0.05 <0.05 <0.05 Nhận xét:
- Lõ uống ART-F liều 109 mg/kg x 2 đợt cĩ dấu hiệu bị kích thích thân kinh: thời gian phân xa giảm, số lần khơng cũng cổ để đập tắt phản xạ tăng (P< 0,05)
Trang 394.5.2 Phản xạ tư vệ cá diểu kiện;
Trên chuột cống trắng được uống ART-F liều 50 nụợkg và 100 nụ
trị 1 và 2 đợt, mỗi đợt điều trị 5 ngày, các đợt nghỉ cách nhau 7 ngày fkg điều
:Kết quả nghiên cứu quá trình hình thành phản xạ và đập tất phản xa tự vệ c6 điều kiện ở chuột cổng trắng đượcuống ART-F được thể hiện ở báng b
Tiảng 8 So sánh tốc dộ hình thành, thời gian phân tạ và tốc độ đáp tắt phán xạ
vận động tự vệ ở chuột cơng trắng giữa lơ chững và các lị nống ART-EF i iw NC Tae 4g bia thành ghan xà Tide đọ cả phần xạ bắc văng | Ỉ si ví lên ee | bài Sit ap ny | TA eH Hl Hee sera To um de meg hân sa 880) nhàn $e : | Ls ching 1290+378| 1902356 28402668 | 1254042 1590+8C6 1.5049.71 27.302 7.51 1.60 4 1.26 (8.75 + 5.36 ART E9 mgÃt x đợt? ARTE aw ongekg © Fader 13 0.88 agg Eanes 160-000 Ì i AWE ie mgky x tages] LLSD#LT] 1204042 | 24672469 | 102=007 L _ i eas | p2-l > 0.05 > 0.05 > 0.03 > 0.05 >005 pdt 20.05 > 0.05 > 0.03 > 0.05 > 0.08 pl > €.05 > 0.03 > 0.05 > O05 | < 0.05 pel > 0.05 <001 > 0.05 > 0.05 > 003 Nhận xét: Lị uống tiêu 50 mg/kg x 2 đợt và lị uống liêu 100 mạ/kg x 2 đợt cĩ đấu hiệu bị kích thích thần kinh:
- Thời gian phản xạ giảm ( P <0,01)
- Số lần khơng củng cố để dap tat phản xạ tăng ( P <0,05)
Trang 404.6 Đánh giá ảnh hưởng của ART-F lên hoạt động điện não của một số cấu trúc não bộ của thĩ thực nghiệm
Bang 9: Biên độ chung (các sĩng EEG glú từ thể lưới thản não và vỏ nào cam
giác = vận động) của các lơ thơ TN Điện thế thể lẪới thân nữo Điền thế vỏ nâu cảm giác-vận dịng Lõ thớTN Ị : 5 š [Fame wag) ST iy = thuốc (NDI Tiổng thuốc: thuốc (ND; tổng thuốc 0 j wig c | i TT i T7TT——— Ị i 0.75 |295.9-73.2 266,1241.8 | 076 l | 285,0476.9 | 262.0=48,7 O11 Lochting | 293,7490,8 | 312,9=60,5 | 0,63 | 285,1=76,2 P 0,327 P Nhận xét:
- Thỏ uống liều 20 mg/kg x 14 ngày và 3Ư mg/kg x 14 ngày liên tục cĩ biên độ chung của các sĩng điện não ghi được từ hai cấu trúc thể lưới thân não vã về não
cả giác vận động đêu khơng cĩ sự thay đổi (P>0,05)