Nghiên cứu quy trình công nghệ oxy hóa glucose thành gluconic acid và chế tạo các muối kali natri và canxi gluconat chuyên đề

BỘ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHCN TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CƠNG NGHIỆP HỐ DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “Nghiên cứu quy trình cơng nghệ oxy hóa glucose thành gluconic acid chế tạo muối kali-, natri- calci gluconat ” Mã số: CNHD.ĐT.007/09-11 Chủ nhiệm đề tài : PGS.TS Trần Thị Như Mai Cơ quan chủ trì đề tài: Trường ĐHKHTN - ĐHQG Hà Nội 9801-1 HÀ NỘI – 2012 BỘ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHCN TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CÔNG NGHIỆP HOÁ DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI “Nghiên cứu quy trình cơng nghệ oxy hóa glucose thành gluconic acid chế tạo muối kali-, natri- calci gluconat ” Mã số: CNHD.ĐT.007/09-11 Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì đề tài PGS.TS Trần Thị Như Mai BAN ĐIỀU HÀNH CHƯƠNG TRÌNH HĨA DƯỢC HÀ NỘI - 2012 BỘ CÔNG THƯƠNG ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN CHƯƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHCN TRỌNG ĐIỂM QUỐC GIA PHÁT TRIỂN CÔNG NGHIỆP HOÁ DƯỢC ĐẾN NĂM 2020 ĐỀ TÀI: Nghiên cứu quy trình cơng nghệ oxy hóa Glucose thành Gluconic acid chế tạo muối Kali, Natri Calci Gluconat Mã số: CNHD.ĐT 007/09-10, 10-11 BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Chủ nhiệm đề tài Người thực PGS.TS Trần Thị Như Mai PGS.TS Trần Thị Như Mai XÁC NHẬN CỦA CƠ QUAN CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI Hà nội, – 2009 CHUYÊN ĐỀ 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Axit gluconic muối gluconat - Tính chất lý hóa tính chất dược dụng 1.1.1 Một số tính chất hóa lý axit gluconic Axit gluconic hợp chất hữu có cơng thức phân tử C6H12O7, công thức cấu tạo HOCH2(CHOH)4COOH, tên danh pháp IUPAC (2R,3S,4R,5R)2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoic acid Trong dung dịch nước pH gần trung tính, axit cacboxylic tạo ion gluconat muối axit gluconic gọi chung gluconat Cấu trúc hoá học axit gluconic bao gồm chuỗi sáu cacbon với năm nhóm hydroxi kết thúc nhóm chức axit cacboxylic (COOH) Trong dung dịch nước, axit gluconic tồn cân động với dạng este vòng glucono delta lacton (C6H10O6) (a) (b) Hình 1: (a) Mơ hình axit gluconic (b) dạng cân Axit gluconic axit không bay hơi, không độc, axit yếu, phân ly nước đặc trưng giá trị pKa nằm khoảng 3.5 đến 3.8 Do phân ly gluconat nước dự đốn hồn tồn Glucono-deltalacton thuỷ phân chậm dung dịch nước đến đạt cân với axit gluconic Ở nồng độ 10% trạng thái cân axit gluconic/lacton 80/20 Axit gluconic dẫn xuất chất có mặt tự nhiên Axit gluconic có mặt loại quả, mật ong, trà kombucha (nấm hồng trà) rượu vang Trong thể động vật có vú, axit D-gluconic 1,5-lacton chất trung gian quan trọng q trình chuyển hóa cacbohydrat [119,126, 133] Một số thơng số vật lý, hố học quan trọng axit gluconic, glucono-delta-lacto số muối gluconat dẫn bảng 1: Bảng 1: Các thông số vật lý, hoá học quan trọng axit gluconic số dẫn xuất Chất Nhiệt độ nóng chảy (0C) Nhiệt độ sôi (0C) Khối lượng riêng (g/cm3) (ở 200C) Độ tan nước g/l 250C pKa Axit gluconic 131 417.1 1.23 1000 3.70 Glucono-deltalacton 153 398.5 1.68 590 3.70 Natri gluconat 205-209 (phân huỷ ≥ 210°C) 613.1 1.789 590 3.70 Canxi gluconat 120 731.1 0.3-0.65 35 3.70 174-176 (phân huỷ 180°C) 613.1 0.8 450-1000 3.70 Kali gluconat Trong cơng nghiệp axit gluconic sản xuất q trình oxi hố DGlucozơ với sản lượng khoảng 1.000.000 tấn/năm [133] 1.1.2 Các ứng dụng tính chất dược dụng axit gluconic Axit gluconic chất không ăn mịn, khơng bay hơi, khơng độc, axit hữu êm dịu Do có mùi thơm mát đặc trưng nên áp dụng nhiều cơng nghiệp thực phẩm, chế biến đồ uống giải khát, rượu, nước trái [111, 119]… Axit gluconic muối natri gluconat có khả tạo phức vịng (chelator) hiệu môi trường pH kiềm, đánh giá tốt cấu tử tạo phức truyền thống EDTA, NTA chất tạo phức khác Đặc trưng khai thác ứng dụng làm kim loại, q trình gia cơng nhơm sắt, đặc biệt vật liệu bao bì đựng thực phẩm, dược phẩm làm chất tẩy rửa Sản phẩm muối natri gluconat thô sản phẩm phụ q trình oxi hóa cịn sử dụng làm phụ gia chậm đông betong dùng xây dựng Trong ngành công nghiệp thực phẩm, axit gluconic sử dụng phụ gia điều chỉnh độ chua, ức chế lên men Dung dịch đậm đặc axit gluconic có tính khử trùng hiệu quả, đặc biệt khả hạn chế tạo thành nấm mốc thực phẩm Axit gluconic xếp vào danh sách chất phụ gia thực phẩm phép sử dụng Châu Âu (E574) Tại Mỹ, Cục quản lý Thực phẩm Thuốc USA-FDA chấp nhận coi axit gluconic natri gluconat phụ gia an toàn sử dụng cho thực phẩm với lượng không hạn chế [52, 106] Dạng vòng axit gluconic, sản phẩm glucono-delta lacton sử dụng làm phụ gia chế biến bánh nướng, chất làm đông protein sữa đậu nành, sữa chua, phomát, sản xuất bánh mỳ…[126] Các muối axit gluconic, giống axit tự do, tạo nên phức với ion kim loại độ bền phức tăng lên đáng kể tăng pH Các ứng dụng điển hình chất phân loại thành dạng phân tán không phân tán, phụ thuộc vào khả gluconat phân tán môi trường Các ứng dụng không phân tán chủ yếu ứng dụng làm công nghiệp, xử lý bề mặt kim loại, làm chất ổn định tẩy trắng dùng công nghiệp dệt, ứng dụng q trình gia cơng nhơm, làm chậm đông cứng xi măng, … ứng dụng thường sử dụng sản phẩm công nghiệp thô Ngược lại, gluconat tinh khiết thành phần sản phẩm chăm sóc sức khoẻ người, thực phẩm dược phẩm, Các ứng dụng làm phụ gia thực phẩm chất hỗ trợ gia công thưc phẩm: Với vai trị tác nhân hố, natri gluconat ứng dụng rộng rãi dung dịch làm cơng nghiệp thực phẩm, bình sữa tươi, … Natri canxi gluconat sử dụng chất phụ gia dinh dưỡng sản phẩm xúc xích dùng để làm tăng tính chất liên kết nước sản phẩm Mười năm trở lại có nghiên cứu đáng ghi nhận Nhật Bản sử dụng natri gluconat để bổ sung cho natri clorua protein chiết từ thịt cá Natri gluconat sử dụng chất thay photphat q trình gia cơng Surimi (thịt cá thái nhỏ) để làm tăng độ trắng tính đàn hồi sản phẩm cá Một trình nhằm cải thiện độ mềm thịt phát triển nhà khoa học trung tâm nghiên cứu thịt động vật US Q trình làm mềm hoạt hố canxi sử dụng sản phẩm tiêm canxi để hoạt hoá enzym làm mềm Trước người ta thường dùng canxi clorua, nghiên cứu gần cho thấy canxi gluconat cho hiệu tương tự Natri kali gluconat có ảnh hưởng độc đáo lên vị giác: tính chất khơng làm đắng sử dụng chất làm nhân tạo, chẳng hạn saccarit, đường hố học aspartam Natri gluconat đơi sử dụng sản phẩm thay đường dùng đồ uống ăn kiêng Các chất làm nhân tạo, Aspartam, dùng có nhược điểm làm lâu có xu hướng lưu lại lâu lưỡi, chất lượng vị giác cải thiện để giống đường mía cách thêm natri gluconat Kali gluconat cho thấy làm vị lactozơ thuỷ phân mà không gây vị đắng hay làm hương vị Các ứng dụng thực phẩm lĩnh vực tiềm góp phần vào việc phân bố gluconat glucono-delta-lacton vào thực tế, sản phẩm thêm dạng bột hay tinh thể vào thành phần thức ăn thịt, sữa hay nước đậu nành với lượng 5% w/w Tuy nhiên, từ sản phẩm cuối gây hại với người hầu hết ăn vào bụng khơng có khả cụ thể để phân bố môi trường gluconat từ ứng dụng - Các ứng dụng dược phẩm: Các muối natri, kali canxi gluconat sử dụng làm chất bổ sung khoáng chất dung dịch tiêm dược phẩm với nồng độ lên đến 55 g/l Là thành phần chủ yếu thuốc điều trị bệnh tim mạch, nội tiết, bệnh xương, cơ, …Ngoài canxi gluconat sử dụng điều trị bỏng gây axit flohidric Còn kali gluconat dùng để chữa huyết áp cao, làm thuốc lợi tiểu với ưu điểm: có vị tự nhiên, sẵn có bề mặt sinh học, hoạt tính sinh học, có tính chất chịu nén trực tiếp tốt Có thể thấy, axit gluconic muối tham gia vào nhiều lĩnh vực, đặc biệt dược phẩm trình công nghệ ứng dụng Do vậy, nhu cầu sản xuất axit gluconic công nghiệp lớn Ứng dụng quan trọng axit gluconic muối gluconat lĩnh vực y dược Axit gluconic muối gluconat dễ tan nước, nên thuận tiện cho mục đích sử dụng dược phẩm dạng uống tiêm Mặt khác khả tương hợp tốt sản phẩm với nhũ tương làm cho chúng dễ hấp thu Các ứng dụng dược phẩm axit gluconic số muối gluconat thống kê bảng 2: Bảng Các ứng dụng dược phẩm axit gluconic dẫn xuất Hợp chất Ứng dụng dược phẩm Là tiền chất để tổng hợp vitamin C dẫn xuất gluconat Là Axit gluconic thành phần dung dịch thuốc tiêm Một số thuốc thị trường: Gluconic DMG, Gluco- Solution, Là chất cân điện giải cho người, thành phần thuốc chống cao huyết áp Bổ sung khoáng chất dạng tiêm với nồng độ Muối natri gluconat lên đến 55g/l thành phần với sắt gluconat dung dịch làm tĩnh mạch, … Một số thuốc thị trường: Chamber Brite, Sodium gluconate solution, … Là chất cân điện giải cho người Bổ sung khoáng chất dạng Muối kali gluconat tiêm với nồng độ lên đến 55g/l Thành phần thuốc lợi tiểu, thuốc chữa viêm loét miệng, hỗ trợ chống ung thư ruột kết, … Một số thuốc thị trường: Kaligluconat 595 Muối canxi gluconat liệu pháp canxi cho bệnh thiếu canxi thơng qua liều thuốc bổ xung canxi, chống giịn xương, chữa bệnh cứng cơ, chữa còi xương, suy dinh dưỡng, thuốc trợ tim, Muối canxi thuốc điều trị bỏng gây axit flohidric Đặc biệt nay, gluconat số nghiên cứu khả sinh kháng thể chống ung thư ruột kết, trực tràng muối [61] Một số thuốc thị trường: Siro Davita Solusol, Canvit-D, Calcium gluconate 10 % Muối sắt gluconat Muối kẽm gluconat Thành phần thuốc chữa bệnh thiếu máu thiếu sắt, bổ xung sắt cho thể Một số thuốc thị trường: Ferovit Là thành phần thuốc cảm thông thường, chữa vết thương sâu, bệnh liên quan đến thiếu kẽm cho người             Hình 2: Một số thuốc có thành phần muối canxi-, natri- kali- gluconat - Loài: chuột nhắt trắng giống Swiss Viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp - Cân nặng: 18-20g - Số lượng: 70 - Nguồn gốc cung cấp: Viện vệ sinh dịch tễ trung ương - Điều kiện chăm sóc: ĐVTN ni điều kiện chuồng thoáng mát, đảm bảo vệ sinh, chế độ ăn uống theo nhu cầu chuột - Cân nặng: Tất ĐVTN để ổn định trước tiến hành thử nghiệm theo dõi cân nặng tiến hành thử nghiệm Mẫu thử: 2.1 Thử sơ bộ: - Cách xử lý chuẩn bị mẫu thử: Dùng hỗn dịch có chứa 0, 6g mẫu thử/ml dung dịch hồ tinh bột 5,0% (hd A) - Thăm dò mức liều khơng làm chết chuột thí nghiệm: Cho 10 chuột uống hỗn dịch A, chuột 0,5ml (tương đương mức liều 15,0g mẫu thử/kg chuột) Sau 24 theo dõi chuột thí nghiệm bị chết - Thăm dị mức liều làm chết 100% số chuột thí nghiệm: Cho 10 chuột uống hỗn dịch A, chuột 0,70 ml chia lần, lần cách (tương đương mức liều 21,0g mẫu thử/kg chuột) Sau 24 theo dõi 100% chuột thí nghiệm bị chết 2.2 Thử nghiệm thức: - Các mức liều thử nghiệm: Mức liều 1: 15,0g mẫu thử/kg chuột Mức liều 2: 16,5g mẫu thử/kg chuột Mức liều 3: 18,0g mẫu thử/kg chuột Mức liều 4: 19,5g mẫu thử/kg chuột Mức liều 5: 21,0g mẫu thử/kg chuột - Cách xử lý mẫu chuẩn bị mẫu thử: Cân xác lượng mẫu thử, nghiền kỹ, cho từ từ dung dịch hồ tinh bột 5,0% nghiền thành hỗn dịch đồng nhất, thêm dung dịch hồ tinh bột 5,0% vừa đủ để thu hỗn dịch chứa 0, 6g mẫu thử/ ml dung dịch hồ tinh bột 5,0% (hỗn dịch thử) Tiến hành: - Chuột nhịn ăn 15 trước thí nghiệm, nước uống theo nhu cầu Kiểm tra cân nặng trước thử nghiệm Chuột đạt yêu cầu cân nặng đưa vào thử nghiệm - Cách dùng: Đưa mẫu thử dạng hỗn dịch theo đường uống Lấy thể tích mẫu thử theo quy định đưa thẳng vào dày chuột kim cong đầu tù - Dựa kết thăm dò thử nghiệm sơ bộ, tiến hành thử nghiệm thức 50 chuột, chia thành nhóm thử theo mức liều dự tính Các nhóm thử uống hỗn dịch thử mức liều số lần đưa mẫu thử theo bảng 3.1: Bảng 3.1: Thể tích đưa mẫu thử liều thử nghiệm chuột Liều dùng Liều dùng Số chuột (ml hỗn dịch thử/20g chuột) (g mẫu thử/kg chuột) thí nghiệm Mức liều 0,50 ml hd thử 15,0g mẫu thử/kg chuột 10 Mức liều 0,55 ml hd thử 16,5g mẫu thử/kg chuột 10 Mức liều 0,60 ml hd thử 18,0g mẫu thử/kg chuột 10 Mức liều 0,65 ml hd thử 19,5g mẫu thử/kg chuột 10 Mức liều 0,70 ml hd thử 21,0g mẫu thử/kg chuột 10 Nhóm chuột - Lịch theo dõi: Theo dõi biểu chuột sau uống, 24, 48 theo dõi hoạt động ĐVTN thời gian ngày sau uống Theo dõi: 4.1 Tiêu thụ thức ăn uống chuột: Sau uống hỗn dich thử mức liều chuột ăn uống, hoạt động bình thường Ở mức liều 2, 3, 5, sau uống hỗn dịch thử, chuột có biểu giảm hoạt động Số chuột không chết mức liều có biểu mệt mỏi thời gian theo dõi 4.2 Quan sát dấu hiệu ngộ độc: Sau uống hỗn dich thử mức liều 2, 3, 5, chuột có biểu nằm mệt, tốt mồ hơi, co giật, giảm hoạt động Chuột chết khoảng thời gian 24 48 Chuột mức liều khơng nhận thấy có biểu ngộ độc Kết quả: Theo dõi tỷ lệ chuột chết/ sống uống hỗn dịch thử mức liều thử nghiệm theo bảng 3.1 thể bảng 5.1 biểu đồ 5.2 5.1 Bảng số liệu: Mức Liều thử Số chuột chết/ Số chuột chết/ liều (g mẫu thử/kg chuột) sống thực tế sống kỳ vọng 15,0 0/10 0/23 16,5 3/7 3/13 18,8 18,0 6/4 9/6 60,0 19,5 8/2 17/2 89,5 21,0 10/0 27/0 100 5.2 Vẽ đồ thị theo số liệu bảng % Chết % chết 100 96 92 88 84 80 76 72 68 64 60 56 52 48 44 40 36 32 28 24 20 16 12 13.5 15 16.5 18 19.5 21 22.5 Mức liều (g/kg chuột) 5.3 Tính LD50 theo Behrens ( 50 – a) x d LD50 = A + -b–a Trong đó: A - Liều gây chết a% ĐVTN a - % ĐVTN chết sát 50% cho a < 50% b - % ĐVTN chết sát 50% cho b >50% d - khoảng cách liều (g) Theo bảng trên, ta có: a = 18,8% b = 60,0% A = 16,5g mẫu thử/ kg chuột d = 1,5g mẫu thử/ kg chuột ( 50 – 18,8) x 1,5 LD50 = 16,5 + = 17,64 g mẫu thử/kg chuột 60,0 – 18,8 5.4 Tính sai số chuẩn: kSd (SLD50)2 = n Trong đó: k: hệ số Behrens = 0,66 n: Số chuột nhóm LD84 - LD16 S = -2 Theo đồ thị, ta có: LD16 = 16,35 g mẫu thử/ kg chuột LD84 = 19,20 g mẫu thử/ kg chuột 19,20 – 16,35 S = - = 1,43 g mẫu thử/ kg chuột kSd 0,66 x 1,43 x 1, Sai số chuẩn: (SLD50)2 = - = n 10 → SLD50 = 0,38 g mẫu thử/ kg chuột Vậy LD50 = (17,64 ± 0,38) g mẫu thử/ kg chuột Kết luận: Mẫu thử Natri gluconat gửi tới yêu cầu thử độc tính cấp chuột nhắt trắng có kết sau: Sau uống thuốc, chuột có biểu ngộ độc sau: mức liều thấp (15,0g/kg chuột) khơng nhận thấy có biểu ngộ độc, mức liều khoảng từ 16,5g đến 21,0g/ kg chuột, chuột có biểu nằm mệt, tốt mồ hơi, co giật, giảm hoạt động Chuột bị chết khoảng thời gian 24 48 theo dõi tỷ lệ chết tùy theo mức liều uống Trong thử nghiệm này, chúng tơi tìm liều không gây chết chuột 15,0g mẫu thử/ kg chuột Liều gây chết 100% số chuột thử nghiệm 21,0g mẫu thử/ kg chuột Dựa số liệu thực tế, chúng tơi tìm liều LD50 (17,64 ± 0,38) g mẫu thử/kg chuột B THỬ NGHIỆM ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN Thời gian thử nghiệm: từ ngày 13/12/2011 đến ngày 11/01/2012 Động vật thí nghiệm: - Thỏ khỏe mạnh, giống, cân nặng 2,0- 2,5 kg - nhóm thử nghiệm (1 nhóm chứng nhóm uống thuốc), nhóm - Nguồn gốc: Trung tâm G1- Viện kiểm nghiệm thuốc Trung ương - Thỏ cho ăn uống nước đầy đủ suốt trình thử nghiệm Phương pháp thử nghiệm: 2.1 Chuẩn bị mẫu thử: - Lựa chọn mức liều thử nghiệm: Chúng dựa liều dự kiến dùng người 50mg mẫu thử/ kg người/ ngày bảng ngoại suy liều để đưa mức liều thử có ý nghĩa, hợp lý chuyển đổi Bảng Bảng ngoại suy liều Chuột nhắt trắng Chuột cống Chuột nhắt Thỏ Chó Người 0,55 0,25 0,15 0,085 1,82 0,45 0,27 0,15 Thỏ 2,20 0,60 0,34 Chó 6,67 3,67 1,67 0,57 Người 11,76 6,47 2,94 1,67 trắng Chuột cống - Cách xử lý chuẩn bị mẫu thử: + Nhóm thử 1: Cân khoảng 18,0g mẫu thử, nghiền kỹ, trộn với nước cất vừa đủ 120 ml làm thành hỗn dịch (Hỗn dịch A: chứa khoảng 0,15g mẫu thử/ ml nước cất) + Nhóm thử 2: Pha lỗng lần hỗn dịch A với nước cất (Hỗn dịch B: chứa khoảng 0,03g mẫu thử/ ml nước cất) 2.2 Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm tiến hành 21 thỏ, chia nhóm (1 nhóm chứng nhóm thử), nhóm thỏ bố trí thí nghiệm thử với mức liều bảng sau: Nhóm Số thỏ thí Thể tích cho uống Liều dùng nghiệm (ml/kg thỏ) (g hoạt chất/kg thỏ) Chứng 5,0 ml nước/ kg thỏ - Nhóm thử 5,0 ml hỗn dịch A/kg thỏ 0,75 g/ kg thỏ Nhóm thử 5,0 ml hỗn dịch B/kg thỏ 0,15 g/ kg thỏ Thỏ ni điều kiện thí nghiệm nhau, đủ chế độ dinh dưỡng 2.3 Theo dõi đánh giá: Theo dõi thỏ hàng ngày mức độ tiêu thụ thức ăn, khả hoạt động, tình trạng phân, lơng Trước thí nghiệm, xác định cân nặng thỏ, dấu hiệu toàn thân, lấy máu xét nghiệm đánh giá số huyết học (số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, hemoglobin, hematocrit), số sinh hóa (GOT, GPT, creatinin, urea, protein tồn phần) Theo dõi cân nặng thỏ hàng tuần Sau 28 ngày uống thuốc, xác định cân nặng thỏ lấy máu để làm xét nghiệm So sánh kết nhóm thử nhóm chứng theo phương pháp thống kê Kết 3.1 Tình trạng thỏ: Trong thời gian thí nghiệm, tất thỏ hoạt động bình thường, ăn uống tốt, phân khơ, lơng mượt Khơng có tượng rụng lơng lông bị khô cứng Kết theo dõi cân nặng thỏ: Kết cân nặng (kg) Nhóm Trước Sau Sau TN (m0) tuần tuần (m2) Sau P Sau tuần(m3) tuần (m4) (m1) Chứng 2,16±0,12 2,20±0,13 2,28±0,14 2,32±0,18 2,40±0,16 (C) U(mt- Ptrướcsau=0,010 0,04±0,04 0,12±0,04 0,16±0,08 0,22±0,10 m0) Thử 2,27±0,15 2,19±0,13 2,16±0,13 2,13±0,11 2,17±0,15 (T1) U(mtm0) Ptrướcsau=0,310 - - - - 0,07±0,04 0,10±0,06 0,14±0,07 0,09±0,06 PC-T1 trước=0,194 PC-T1 sau=0,024 Thử 2,12±0,20 2,14±0,12 2,09±0,09 2,10±0,12 2,16±0,14 (T2) U(mtm0) Ptrướcsau=0,654 0,01±0,09 0,00±0,10 - - 0,03±0,10 0,02±0,14 PC-T2 trước=0,694 PC-T2 sau=0,016 Kết luận: Theo dõi cân nặng thỏ q trình thí nghiệm cho thấy, cân nặng trung bình thỏ nhóm thử trước đưa vào thí nghiệm khơng có khác biệt so với lơ chứng (PC-T1 trước PC-T2 trước > 0,05) Sau 28 ngày thử nghiệm, thỏ tăng cân nhóm chứng, cịn nhóm thử nhóm thử 2, trọng lượng trung bình thỏ tăng giảm khơng đáng kể, có khác biệt so với lơ chứng uống nước (PC-T1 sau PC-T2 sau < 0,05) 3.2 Kết theo dõi số huyết học a Trước thí nghiệm: Chỉ tiêu n Nhóm Nhóm T1 chứng Hồng cầu (x 1012/ lit) Bạch cầu (x 109/ lit) Tiểu cầu (x 109/ lit) Hematocrit (%) Hemoglobin (g/dL) PC-T1 Nhóm T2 trước PC-T2 trước 5,8 ± 0,5 6,0 ± 0,4 0,554 5,7 ± 0,4 0,569 9,0 ± 2,1 10,7 ± 3,3 0,304 10,5 ± 2,9 0,313 430,7 ± 531,0 ± 69,7 97,8 37,0 ± 0,8 38,2 ± 1,6 0,140 37,8 ± 1,3 0,272 11,5 ± 0,7 11,9 ± 0,4 0,285 11,5 ± 0,4 0,932 0,066 433,7 ± 102,2 0,954 b Sau thí nghiệm: Chỉ tiêu Hồng cầu n Nhóm chứng 5,7 ± 0,6 Nhóm T1 PC-T1 Nhóm T2 sau 5,0 ± 1,2 0,237 PC-T2 sau 5,7 ± 0,4 0,869 (x 1012/ lit) Bạch cầu (x 109/ lit) Tiểu cầu 10,7 ± 1,4 9,7 ± 0,7 455,9 ± 555,9 ± 83,6 114,3 35,8 ± 1,9 36,0 ± 2,6 0,899 37,3 ± 2,1 0,212 10,7 ± 0,5 10,9 ± 0,8 0,670 11,4 ± 0,6 0,068 (x 109/ lit) Hematocrit (%) Hemoglobin (g/dL) 9,0 ± 1,5 0,162 490,3 ± 0,112 45,2 0,063 0,393 Kết luận: Trước thử nghiệm, thỏ kiểm tra số huyết học cho thấy có khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê nhóm chứng nhóm thử (PC-T trước > 0,05) Sau thử nghiệm, không nhận thấy khác biệt có ý nghĩa nhóm chứng nhóm thí nghiệm (PC-T sau>0.05) 3.3 Kết theo dõi số sinh hóa a Trước thí nghiệm: Chỉ tiêu n Nhóm Nhóm T1 chứng SGOT PC-T1 Nhóm T2 trước PC-T2 trước 45,9 ± 12,5 42,9 ± 8,8 0.945 42,7 ± 11,0 0,653 62,6 ± 14,1 58,0 ± 11,0 0,540 54,7 ± 10,5 0,297 91,3 ± 8,8 110,3 ± 0,336 95,6 ± 9,5 0,435 0,701 6,4 ± 1,0 0,702 (UI/ lit) SGPT (UI/ lit) Creatinin 33,0 (µmol/lit) Urea 6,6 ± 1,0 6,4 ± 1,2 (mmol/lit) Bilirubin toàn 3,7 ± 0,2 3,4 ± 0,5 0,826 4,0 ± 0,8 0,346 63,0 ± 3,7 63,6 ± 3,3 0,872 60,9 ± 6,5 0,499 136,4 ± 1,8 136,0 ± 1,6 0,961 137,7 ± 1,8 0,250 phần (µmol/lit) Protein tồn phần (g/ lit) Na+ (mmol/lit) b Sau thí nghiệm: Chỉ tiêu n Nhóm chứng 50,7 ± 11,7 80,9 ± 16,3 76,9 ± 10,2 6,7± 0,6 Bilirubin toàn 4,9 ± 0,8 SGOT (UI/ lit) SGPT (UI/ lit) Creatinin (µmol/lit) Urea (mmol/lit) phần Nhóm T1 PC-T1 Nhóm T2 sau PC-T2 sau 39,9 ± 17,2 0,226 37,0 ± 12,8 0,077 76,4 ± 25,2 0,724 66,0 ± 25,7 0,255 89,4 ± 23,3 0,250 81,6 ± 9,6 0,427 6,4 ± 1,0 0,559 6,3 ± 0,6 0,225 4,7 ± 1,4 0,796 4,8 ± 1,7 0,855 58,1 ± 4,5 0,593 59,7 ± 6,4 0,881 137,9 ± 2,3 0,697 138,9 ± 1,4 0,086 (µmol/lit) Protein tồn 59,3 ± 2,4 137,4 ± 1,3 phần (g/ lit) Na+ (mmol/lit) Kết luận: Trước thí nghiệm, khác biệt số sinh hóa nhóm thử nhóm chứng khơng có ý nghĩa thống kê (PC-T trước > 0,05) Chỉ số sinh hóa thỏ thời điểm thí nghiệm sau thí nghiệm, kết thu cho thấy khơng có khác biệt đáng kể nhóm chứng nhóm thử (PC-T sau > 0,05) 3.4 Quan sát đại thể: Khơng nhận thấy có biểu khác thường hình dạng bên ngồi, màu sắc tổ chức tim, gan, thận, phổi, dày, ruột thỏ nhóm thử so với nhóm chứng sau thí nghiệm Kết luận chung: Mẫu Nguyên liệu Natri gluconat đề tài cấp nhà nước mang mã số CNHD ĐT 007/09-10/09-11gửi tới u cầu thử độc tính bán trường diễn có kết sau: Sau cho thỏ uống dung dịch mẫu thử nước liên tục 28 ngày với mức liều 0,15g mẫu thử/ kg thỏ/ ngày 0,75g mẫu thử/ kg thỏ/ ngày (tương ứng với liều lâm sàng liều gấp lần liều lâm sàng), kết thu cho thấy khơng có khác sinh hóa huyết học nhóm chứng nhóm thử Cân nặng thỏ thí nghiệm nhóm thử so với nhóm chứng sau thí nghiệm có khác biệt có ý nghĩa thống kê Khơng nhận thấy bất thường hình dạng bên ngoài, màu sắc tổ chức tim, gan, thận, phổi hệ tiêu hóa thỏ nhóm chứng nhóm thử sau thí nghiệm CHUN ĐỀ 7.3: Phân tích sản phẩm natri gluconat, kali gluconat, calci gluconat theo tiêu chuẩn dược điểm Mỹ USP30/NF25 7.3.1 Nguyên liệu a) Nguyên liệu Natri gluconat Lô SX: 07 (Ngày sản xuất: 06/05/2011): 0,1kg b) Nguyên liệu Kali gluconat Lô SX: 05 (Ngày sản xuất: 10/05/2011): 0,1kg c) Nguyên liệu Calci gluconat Lô SX: 03 (Ngày sản xuất: 04/05/2011): 0,1kg Nơi gửi mẫu: Trường Đại học Khoa học Tự nhiên (Sản phẩm đề tài CNHD.ĐT.007/09-10; 10-11) 7.3.2 Kết xác định mẫu kali gluconat Stt Chỉ tiêu tiêu chuẩn áp Kết Yêu cầu dụng Tính chất Tinh thể màu trắng Định tính: Đúng -Dung dịch thử phải cho -Phương pháp SKLM Đúng vết có Rf có màu sắc -Phản ứng hóa học tương ứng với vết Kali gluconat chuẩn -Phải cho phép thử định tính Kali Mất khối lượng sấy (Sấy áp Đạt Không 3% suất giảm 1g/1050C/4 giờ) (1,7%) Kim loại nặng (pp so màu) Đạt Không 0,002% Các chất khử (cđ iod) Đạt (0,3%) Không 1,0% Định lượng (pp AAS) Đạt Hàm lượng kali chế (97,8%) phẩm phải đạt từ 97,0 – 103,0 % chế phẩm sấy khô 7.3.3 Kết xác định mẫu natri gluconat Stt Chỉ tiêu tiêu chuẩn Kết Yêu cầu áp dụng Tính chất Tinh thể màu trắng Định tính: Đúng -Dung dịch thử phải cho vết có Rf -Phương pháp SKLM Đúng có màu sắc tương ứng với vết -Phản ứng hóa học Natri gluconat chuẩn -Phải cho phép thử định tính Natri Clorit Đạt Không 0,07% Sunfat Đạt Không 0,05% Kim loại nặng Đạt Không 0,002% Các chất khử (chuẩn độ Đạt (0,4%) Không 0,5% iod) Định lượng (Chuẩn độ Đạt Hàm lượng Natri chế phẩm phải môi trường khan) (99,1%) đạt từ 98,0 – 102,0 % 7.3.4 Kết xác định mẫu canxi gluconat Stt Chỉ tiêu tiêu Kết Yêu cầu chuẩn áp dụng Tính chất Tinh thể màu trắng Mất khối lượng Đạt (0%) Không 3% Đúng Phải cho phép thử định tính sấy (Sấy áp suất giảm 1g/1050C/16 giờ) Định tính Canxi Kim loại nặng Đạt Giới hạn Magnesi Đạt Không 0,001% Không 0,4% kim loại kiềm Các chất khử (chuẩn Đạt (0,4%) Không 1,0 % độ) Clorit Đạt Không 0,07% Sunfat Đạt Không 0,05% Phosphat Đạt Không 0,01% 10 Định lượng Đạt (99,9%) Hàm lượng Natri chế phẩm phải đạt từ 98,0 – 102,0 % tính theo chế phẩm khan Kết luận chung: Đã phân tích sản phẩm natri gluconat, kali gluconat calci gluconat theo tiêu chuẩn Dược điển Mỹ USP30/NF25 Các sản phẩm đạt tiêu chuẩn Dược điển Mỹ USP30 /NF25 Giấy chứng nhận đưa Bộ hồ sơ kết