Tổng hợp và thử nghiệm tác dụng dược lý của hợp chất nl 197 mới thuộc nhóm 43h quinazolion

ỦY BAN NHÂN DÂN TP HCM SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ BÁO CÁO NGHIỆM THU (Đã chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng nghiệm thu) TỔNG HỢP VÀ THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA HỢP CHẤT NL197 MỚI THUỘC NHÓM 4(3H)-QUINAZOLINON CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI (Ký tên) CƠ QUAN QUẢN LÝ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) CƠ QUAN CHỦ TRÌ (Ký tên/đóng dấu xác nhận) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH THÁNG 7/2010 TĨM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU Hiện dẫn chất (3H)-quinazolinon nhiều nhà nghiên cứu giới quan tâm chúng có tác động sinh học phong phú như: an thần, gây ngủ, giảm đau, chống động kinh, làm mềm cơ, kháng khuẩn, hạ đường huyết, kháng viêm, chống ung thư số đặc tính hữu ích khác Một số chất đưa vào nghiên cứu trị liệu, đó, đáng ý thuốc có tác động an thần, lợi tiểu, làm mềm chống ung thư Dẫn chất 3-(2-cloropyridin-3-yl)-2-methyl-4(3H)quinazolinon (NL 197) nhóm nghiên cứu, tác giả Nguyễn Ngọc Vinh Trương Thế Kỷ tổng hợp thử sàng lọc tác động gây ngủ Các nghiên cứu để khẳng định hợp chất NL 197 an tồn, có tác dụng trị liệu tốt tìm kiếm tác động trị liệu khác điều cần thiết Do đó, chúng tơi tiến hành thực đề tài “ Tổng hợp thử nghiệm tác dụng dược lý hợp chất NL 197 thuộc nhóm (3H)quinazolinon” với tài trợ kinh phí Sở Khoa học Cơng Nghệ thành phố Hồ Chí Minh theo hợp đồng nghiên cứu số 34/HĐ-SKHCN ngày 07/8/2008 Với hỗ trợ Sở Khoa học cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh, chúng tơi tiến hành thực nghiên cứu qui trình tổng hợp hợp chất NL 197 số dạng muổi dễ tan nước NL 197 phương pháp khác nhau, từ tối ưu hóa qui trình tổng hợp khảo sát tìm qui trình tinh chế phù hợp để sản phẩm có độ tinh khiết đạt tiêu chuẩn sở, đáp ứng cho yêu cầu phân tích phương pháp phân tích đại làm nguồn nguyên liệu để bào chế dạng thuốc hỗn dịch dung dịch dùng cho thử nghiệm khảo sát tác động dược lý Nhóm nghiên cứu xác định qui trình phù hợp cho việc tổng hợp NL 197, dạng muối HCl, H2S04, HNO3 NL 197 NL197 dạng vi tinh thể (kích thước micron) xác định điều kiện tối ưu cho qui trình tổng hợp với qui trình tinh chế sản phẩm với độ tinh khiết 95% Tiêu chuẩn sở xây dựng cho NL 197 dạng muối, làm cho việc kiểm nghiệm chất nguyên liệu sau với phương pháp phân tích đại phổ IR, phổ khối, phổ 1H NMR, 13C NMR Với qui trình tối ưu ổn định, NL 197 tổng hợp với số lượng lớn đủ cho nghiên cứu bào chế dạng thuốc dùng cho khảo sát độ an toàn tác động dược lý Về tính an tồn NL 197, độc tính cấp, liều LD50 độc tính bán trường diễn khả gây lệ thuộc tinh thần thể chất NL 197 xác định chuột nhắt trắng cho sử dụng đường uống đường tiêm tĩnh mạch Với LD50 732 mg/kg dùng đường uống chuột nhắt khơng xác định độc tính huyết học, gan thận chuột sử dụng liên tục 60 ngày liều uống 50 mg/kg, không gây tăng huyết áp mèo xác định động mạch cổ bộc lộ, NL 197 dạng bào chế cho thấy sử dụng để khảo sát tác động dược lý khác Ngoài ra, NL 197 không gây ảnh hưởng đến chức vận động tự nhiên chuột mơ hình quay rota-rod khơng liều thấp mà cịn liều cao 73 mg/kg Về tác động dược lý, NL 197 khảo sát tác động thần kinh trí nhớ - khả học hỏi, chống co giật, an thần chống trầm cảm Ngoài ra, tác động giảm đau ngoại biên trung ương gây ngủ NL197 khảo sát Về trí nhớ - khả học hỏi, NL 197 cho thấy có khả cải thiện khả học hỏi bị gây suy giảm scopolamin chuột 03 loại trí nhớ hình ảnh, khơng gian mùi NL 197 cho thấy có tác động gây ngủ - kéo dài thời gian gây ngủ chuột phối hợp với Thiopental tác động giảm đau trung ương ngoại biên bảo vệ chuột khỏi tử vong, chống lại co giật gây chất gây co giật strychnin pentylentetrazone Tuy nhiên, tác động chống lo âu chống trầm cảm chưa xác định với NL 197 mơ hình hai ngăn sáng tối, đồ hình chữ thập nâng cao, treo chuột bơi gắng sức Các kết đề tài công bố 07 báo đăng tải tạp chí chuyên ngành Dược học Y học góp phần đào tạo 01 Thạc sĩ Dược học, 06 Dược sĩ Đại học Các kết thực Chủ nhiệm đề tài TS Nguyễn Ngọc Vinh PGS.TS Trương Thế Kỷ, GS.TS Nguyễn Văn Thanh, PGS.TS Chu Đình Kính, PGS.TS Võ Phùng Ngun, ThS Phạm Ngọc Tuấn Anh, ThS Lê Thị Thu Cúc, ThS Trần Anh Vũ, ThS Phạm Thị Thanh Mỹ cộng Nhóm nghiên cứu chân thành cảm ơn Sở Khoa học Cơng nghệ Thành phố Hồ Chí Minh tài trợ cho đề tài nghiên cứu Viện Kiểm Nghiệm Đại học Y Dược TPHCM tạo điều kiện tốt cho việc thực hoàn thành đề tài ii SUMMARY OF RESEARCH CONTENT Derivatives of (3H)-quinazolinone have attracted attention of many researchers worldwide for their biological significance such as hypnotic, analgesic, anticonvulsive, muscle relaxant, antibacterial, hypoglycemic, anti-inflammatory, anticancer activities and some other useful features Some compounds have been used for therapy, notably as sedatives, diuretics, muscle relaxants and anticancer drugs 3-(2-cloropyridin-3-yl)-2-methyl-4(3H)-quinazolinone (NL197) was synthesized and screened for hypnotic effect by Nguyen Ngoc Vinh and Truong The Ky The follow-up studies are necessary to confirm that NL197 possesses good therapeutic effects and safety Objectives: The study aims to synthesize NL197 compound using different methods, to elucidate the structure of synthetic substance by modern analytical methods, to optimize the synthetic method and to establish the appropriate purification method for the products to meet the in-house specifications - Establish the in-house specifications to analyze the products - Research the synthesis procedure of micronized NL197 and determine NL197 size - Formulate the soluble preparation for pharmacological test - Formulate the suspension preparation for pharmacological test - Test some pharmacological effects of NL197 compound Results: - NL 197 synthesis procedure had been developed and optimized - Several water-soluble NL197 salts were synthesized - The appropriate purification method was established to provide the purity that meets the requirements for pharmacological analysis and research - NL 197 structure was characterized by modern analytical methods such as IR, MS, H NMR, and 13C NMR spectroscopy - Standard specifications were established to analyze the products - NL197 was synthesized enough for follow-up studies - The synthesis procedure of micronized NL 197 (micron size) was examined and NL 197 size was determined iii - The soluble formulation for pharmacological tests was researched - The suspension formulation for pharmacological tests was researched - NL 197 suspension preparation was formulated from micronized NL 197 (expected dimension is 50-50 µm) - Acute oral and intravenous toxicity and lethal dose LD50 of NL197 compound were determined in mice is 700 1650 mg/Kg bw, respectively - Sub-chronic oral toxicity of NL197 compound was evaluated in mice when given daily administered 50 mg/kg bw Histopathologically, no significant liver, kidney and blood toxicity were detected by light microscope in mice when orally administered NL 197 compound for months - The physical and psychological dependence properties of NL 197 were evaluated The psychological dependence was based on drug – seeking behaviors of mice after discontinuation of drug treatment whereas the physical dependence was based on the changes in body temperature NL197 compound at the doses of 37 mg/kg and 50 mg/kg had showed neither physical nor psychological dependence was detected in mice in both physical and psychogical dependence tests - To evaluate the effect of NL 197 compound on the mouse’s level neuromuscular coordination and spontaneously locomotor activity, accelerating rotarode and open field tests were used No neuromuscular impairment in mice was determined in mice after 30 and 60 minute treated orally NL 197 compound at the both doses 37 mg/kg and 73 mg/kg bw in rotarod test The mice’s spontaneously locomotor activity was affected by NL 197 compound at the dose 37 mg/kg and 73 mg/kg, except 12,5 mg/kg bw - The analgesic effects of NL 197 compound were analyzed using the hot plate and acetic acid -induced writhing tests in mice NL 197 had showed the antinociceptive effects in both tests at the dose 50 mg/kg when given orally The smaller dose 25 mg/kg only had analgesic effect on peripheral system - The NL197 compound given orally at the dose of 50, 100 mg/kg B.W ddY mouse prolonged the thiopental induced sleep after a single dose - NL197 has significant hypnotic effects but not anxiolytic and antidepressive effects, on central nervous system when administered oral route In the light dark, elevated plus maze; tail suspension and forced swimming tests, this compound at the dose of 12.5, 25, 50 mg/kg had not showed any anxiolytic and antidepressive effects iv - NL197 compound has significant improvement efficacy on learning and memory of mice in three types of memory depend on integrity of cholinergic system: object recognition, olfactory and space memory as well as galantamin, an acetylcholinesterase inhibitor, used in treatment of Alzheimer disease The NL197 compound given orally at the dose of 12.5 mg/kg bw abolished the amnesic effect of scopolamine in the object discrimination task, olfactory recognition test, and water maze test Treatment with NL 197 enabled the scopolamine-induced amnesia mice to perform learning and memory capacity as good as that of the control group - NL197 has potential anticonvulsant activity in pentylentetrazol or strychnine induced-seizure model in mice as well as diazepam, a standard antiepileptic drug The protective potent of NL197 againsts PTZ- or STN induced seizures is equal to that of diazepam 5mg/kg, PO at the dose of 73.2 mg/kg and 50 mg/kg, SC, respectively In PTZ induced- seizure model, anticonvulsant activity of NL197 NL was determined at the dose of 50 mg/kg, 73.2 mg/kg, and 100 mg/kg In strychnine induced- seizure model, NL 197 had anticonvulsant activity at dose of 50 mg/kg, 73.2 mg/kg No effect was determined with NL197 at dose of 37 mg/kg This agent has showed effect in inhibiting GABA-related chemoconvulsant induced seizures like other antiepileptic drugs involve in enhancement of GABAergic systems, such as valproic acid, benzodiazepines, and barbiturates - The effects on cat’s blood pressure were evaluated by comparing cat’s blood pressure before and after administering NL 197 compound into duodenum at corresponding time No effect of NL197 compound on blood pressure of cat was detected The results obtained from pharmacological studies were published in articles on Vietnam Pharmaceutics Journal and HCMC Journal of Practical Medicine and in one Master of Science thesis in Pharmaceutics and in some Bachelor of Science dissertations in Pharmacy v MỤC LỤC Trang TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN CỨU i Mục lục vii Danh mục chữ viết tắt xv Danh mục bảng xvi Danh mục hình xviii Danh mục sơ đồ xxii PHẦN MỞ ĐẦU ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Phƣơng pháp tổng hợp dị vòng 4(3H)-Quinazolinon 1.1.1 Phản ứng V Niementowski Niementowski mở rộng 1.1.2 Tổng hợp từ dẫn chất 4H-3,1-benzoxazin-4-on 1.1.3 Các phương pháp khác 1.2 Phƣơng pháp tối ƣu hóa 12 1.2.1 Phương pháp cổ điển Gauss – Geidell 12 1.2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 12 1.3 Dẫn chất 4(3H)-Quinazolinon 13 1.4 Thử nghiệm dƣợc lý 16 1.4.1 Quá trình thử nghiệm dược lý 16 1.4.2 Tại lựa chọn chuột cho thử nghiệm dược lý 19 1.4.3 Mô hình thử nghiệm tác động gây ngủ hiệp lực với Thiopental 19 1.4.4 Các mơ hình thử nghiệm tác động an thần chống lo âu 19 1.4.5 Mơ hình thử nghiệm chống trầm cảm 20 1.4.6 Mơ hình thử nghiệm giảm đau 21 1.4.7 Khảo sát chức vận động 22 1.4.8 Mơ hình thử nghiệm loại trí nhớ 23 1.4.9 Độc tính 25 vi 1.4.10 Lệ thuộc thuốc 27 1.4.11 Các mơ hình gây động kinh 28 1.4.12 Huyết áp 30 Chƣơng NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Nội dung 1: Nghiên cứu số quy trình tổng hợp NL197 32 2.1.1 Tổng hợp hợp chất trung gian 32 2.1.2 Tổng hợp NL197 32 2.2 Nội dung 2: Tinh chế NL197 34 2.3 Nội dung 3: Kiểm nghiệm cấu trúc NL197 34 2.3.1 Đo nhiệt độ nóng chảy 34 2.3.2 Kiểm tra độ tinh khiết phương pháp SKLM 34 2.3.3 Phổ hồng ngoại (IR) 35 2.3.4 Phổ 1H NMR phổ 13C NMR 35 2.3.5 Phổ khối (MS) 35 2.4 Nội dung 4: Tối ƣu hóa quy trình tổng hợp NL197 35 2.4.1 Đặt kế hoạch thí nghiệm 35 2.4.2 Thủ thuật tiến đến gần cực trị phương pháp đơn hình 35 2.4.3 Nhận định kết 36 2.5 Nội dung 5: Tổng hợp muối NL197 36 2.5.1 Muối hydroclorid 36 2.5.2 Muối nitrat 36 2.5.3 Phương pháp xác định độ tan 37 2.6 Nội dung 6: Xây dựng quy trình kiểm nghiệm NL197 37 2.6.1 Tính chất 37 2.6.2 Định tính 37 2.6.3 Kiểm tinh khiết 38 2.7 Nội dung 7: Tổng hợp đủ lƣợng NL197 cho thử nghiệm dƣợc lý 41 2.8 Nội dung (nội dung bổ sung): Nghiên cứu quy trình tổng hợp NL 197 dạng vi tinh thể (kích thƣớc micron) xác định kích thƣớc NL 197 43 vii 2.9 Nội dung 9: Nghiên cứu bào chế dạng thuốc hỗn dịch 45 2.10 Nội dung 10: Nghiên cứu bào chế dạng thuốc dung dịch để thử tác dụng dƣợc lý 45 2.11 Nội dung 11 (nội dung bổ sung): Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích hợp chất NL 197 dung dịch 46 2.11.1 Công thức điều chế cho 100g thành phẩm 46 2.11.2 Nguyên phụ liệu 46 2.11.3 Yêu cầu chất lượng 47 2.11.4 Phương pháp thử 47 2.12 Nội dung 12 (nội dung bổ sung): Nghiên cứu điều chế hỗn dịch NL 197 từ ngun liệu NL 197 có kích thƣớc micron (dự kiến kích thƣớc hạt 30-50 µm) 50 2.12.1 Dụng cụ, hóa chất 50 2.12.2 Tiến hành 50 2.13 Nội dung 13 (nội dung bổ sung): Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích hợp chất NL 197 hỗn dịch 51 2.13.1 Công thức điều chế cho 100g thành phẩm 51 2.13.2 Nguyên phụ liệu 51 2.13.3 Yêu cầu chất lượng 52 13.4 Phương pháp thử 52 2.14 Nội dung 14: Thử nghiệm xác định độc tính cấp 54 2.14.1 Mô tả nội dung 54 2.14.2 Phương pháp nghiên cứu 54 2.14.3 Các tiêu theo dõi 55 2.14.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 55 2.15 Nội dung 15: Xác định LD50 56 2.15.1 Mô tả nội dung 56 2.15.2 Phương pháp nghiên cứu 56 2.15.3 Các tiêu theo dõi 56 2.15.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 57 viii 2.16 Nội dung 16: Thử nghiệm chức vận động (tự nhiên): Môi trƣờng mở 57 2.16.1 Mô tả nội dung 57 2.16.2 Phương pháp nghiên cứu 57 2.16.3 Các tiêu theo dõi 57 2.16.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 57 2.17 Nội dung 17: Xác định độc tính bán trƣờng diễn 58 2.17.1 Mô tả nội dung 58 2.17.2 Phương pháp nghiên cứu 58 2.17.3 Các tiêu theo dõi 58 2.17.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 58 2.18 Nội dung 18: Thử nghiệm chức vận động: Mơ hình quay 58 2.18.1 Mơ tả nội dung 58 2.18.2 Phương pháp nghiên cứu 58 2.18.3 Các tiêu theo dõi 59 2.18.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 59 2.19 Nội dung 19: Thử nghiệm tác động gây ngủ - kéo dài thời gian gây ngủ Thiopental 59 2.19.1 Mô tả nội dung 59 2.19.2 Phương pháp nghiên cứu 59 2.19.3 Các tiêu theo dõi 60 2.19.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 60 2.20 Nội dung 20: Thử nghiệm tác động giảm đau trung ƣơng 60 2.20.1 Mô tả nội dung 60 2.20.2 Phương pháp nghiên cứu 60 2.20.3 Các tiêu theo dõi 60 2.20.4 Các sản phẩm nội dung cần đạt 60 2.21 Nội dung 21: Thử nghiệm tác động chống co giật 60 2.21.1 Mô tả nội dung 60 ix O N N N CHCl3 HCl Phụ lục 23: Phổ MS NL197.HCl O N N Phụ lục 24: Phổ MS NL197.H2SO4 N CHCl3 H2SO O N N N Phụ lục 25: Phổ MS NL197.HNO3 Cl CH HNO3 Phụ lục 26: Dạng hạt NL197 microsize chế độ SEM Hệ H Hệ I Hệ J Phụ lục 5: Sắc ký đồ sản phẩm 4, 5, Phụ lục 6: Phổ IR acid anthranilic Phụ lục 7: Phổ IR acid N-acetylanthranilic O O N CH3 Phụ lục 8: Phổ IR 2-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on Phụ lục 9: Phổ IR NL197 M=271,70 Phụ lục 10: Phổ MS NL197 Phụ lục 11: Phổ 1H NMR NL197 Phụ lục 12: Phổ 1H NMR mở rộng NL197 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Bộ Y tế (1994) "Dược Điển Việt Nam II, tập 3." Nhà xuất y học Hà Nội Nguyễn Thị Chung (2004) "Ứng dụng tối ưu hóa thống kê lĩnh vực nghiên cứu dược phẩm." Giáo trình sau đại học, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Ngọc Vinh (2001) "Tổng hợp số dẫn chất 4(3H)-quinazolinon có tác dụng sinh học." Luận văn Thạc sỹ Dược học, Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Ngọc Vinh (2006) "Nghiên cứu tổng hợp dẫn chất dị vịng 4(3H)-quinazolinon có tác dụng sinh học." Luận án tiến sĩ Dược học, Đại học Y Dược Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Ngọc Vinh, T T K (2002) "Tổng hợp số dẫn chất 4(3H)-quinazolinon có tác dụng sinh học từ acid N-acetylanthranilic." Tạp chí dược học 1: 19-22 Thủ Tướng Chính phủ (ngày 30 tháng năm 2006,) "Quyết định Phê duyệt Quy hoạch tổng thể phát triển hệ thống y tế Việt Nam giai đoạn đến năm 2010 tầm nhìn đến năm 2020 ." Số: 153/2006/QĐ-TTg TIẾNG ANH Akgul Y., S K., Nezire S., Esra K., Erdem Y., Erdal B., Ikhlas K, (2004) "Synthesis Anti-inflammatory and Analgesic Activity Screening of some New 4(3H)-quinazolinone Derivatives." Arch Pharm Pharm Med Chem 337: 96-104 Amin A H., M D R., Samarth S S (1970) Prog Drug Res(14): 218 Archana P R., S V K., Ramesh C., Ashok K (2002) "Synthesis of potential quinazolinonyl pyrazolines and quinazolinyl isoxazolines as anticonvulsant agents." Indian Journal of Chemistry 41 B: 2371-2375 10 Asla Pitkanen, P A S., Solomon L, Moshe (2006) "models of seizure and epilepsy." Elsevier academic Press: 126-154 11 Aysel G., B U., Nilgun K., Gulten O (2005) Turk J Chem 29: 233-245 12 Boissier J R., D C., Ratouis R, (1967) Therapie 2: 13 Connolly D J et al (2005) "Synthesis of quinazolinones and quinazolines." Tetrahedron 61: 10153-10202 14 Dinesh Dhingra, A S (2006) "Antidepressant-like activity of Glycyrrhiza glabra L in mouse models of immobility tests." Progress in Neuro-Psychopharmacology & Biological Psychiatry 30: 449 – 454 15 Eberhard Breitmaier (2002) "Structure Elucidation by NMR in Organic Chemistry." A Practical Guide, John Wiley & Sons, LTD 16 Eberhard Fuchs, G F "Experimental animal models for the simulation of depression and axiety." Pharmacological aspects: 191 – 329 17 Endicott et al (1946) J Am Chem Soc 68: 1299 18 Etienne F van Zyl (2001) "A survey of reported synthesis of methaqualone and some positional and structure isomers." Forensis Science International 122: 142-149 19 European pharmacopoeia (2004) 20 Fred W M., F T (1993) "Interpretation of Mass Spectra, University Science Books." Mill Valley, California 21 Friedlaender P., W S (1883) Chem Ber 16: 2229 22 G Amresh, P N S., Ch V Rao (2007) "Antinociceptive and antiarthritic activity of Cissampelos pareira roots." Journal of Ethnopharmacology 111: 531-536 23 Gamal A E H., M F A M., Tarek M M Z (2002) "Synthesis and reactions of 3aryl-2-thioxoquinazolin-4-(3H)-ones." Indian Journal of Chemistry 41B: 1519-1522 24 George f.koob (2004) "Neurobiological mechanisms in the transition from drug use to drug dependence." Neuroscience and biobehavioral Review 27: 739-749 25 Giddings, J M (2001) "Modeling the Behavior of Rats in an Elevated-Plus Maze." Modeling the Behavior of Rats in an Elevated-Plus Maze 26 Griess P (1869) Ber deut Chem Ges 2: p 415 27 Griess P (1878) Ber deut Chem Ges 11: 1985 28 Griffin R J., S S., Bowman K., Calvert A H., Curtin N J., Newwll D R., Pemberton L C., Golding B T (1998) J Med Chem 41: 5247-5256 29 Gujral M L., S P N., Tiwar R S, (1955) Ind J Med Res 43: 637 30 Gujral M L., S P N., Tiwar R S (1956) Ind J Med Res 10: 877 31 H.gerhard Vogel (Ed.) (2004) "Drug Discovery and Eluvation pharmacological Assay." 391 – 392, 398, 632, 633 32 H.Gerhard Vogel (Ed.) (2006) "drug discovery and evaluation pharmacology assay." Springer-verlag Berlin Heidelberg New York 51-58, 74-80, 459-493 33 Holtzman, D L B a D M (2005) "Morris water maze search strategy analysis in PDAPP mice before and after experimental traumatic brain injury." Exp Neurol 197(2): 330–340 34 Jacqueline Crawley, C G., Michal.Rogwski, David Sibley, Philskolnick, Susan Wray (2003) "current protocols in neuroscience." The McGraw-Hill Companies: 1-14 35 Jerzy Majikowski, B B., Philip patsalos, Richard Mattson (2005) "antiepileptic drugs combination therapy and interactions." Cambridge University eddition: 1-45, 139-179 36 Kacker I H., Z S H (1951) J Ind Chem Soc 28: 344 37 Kidwai M., S R., Mohan R., and Ruby, (2003) "A Novel Route to the Niementowski Reaction." Croatica Chemica Acta 76 (4): 365-369 38 Klosa J (1961) J prakt Chem 14: 84 -98 39 Klosa J (1963) "Notiz ueber Synthese von Chinazolon-4-derivaten." J Prakt Chem 20: 283-284 40 Koepfly J B., M J F., Brockman J A Jr (1947) J Am Chem Soc 69: 1837 41 Korner M (1887) J prakt Chem 36(2): 155 42 Kupferberg, H (2001) "animal models used in the screening of antiepileptic drugs." epilepsia 42(4): 7-12 43 Lufunmilayo O Adeyemi, O K Y b., Olayemi O Adebiyi (2007) "Sedative and anticonvulsant activities of the aqueous root extract of Sanseviera liberica." Journal of Ethnopharmacology 113: 111-114 44 McKee R L., B R W (1947) J Am Chem Soc 69: 184 45 Muragundla Anjaneyulu, K C (2004) "Fluoxetine attenuates thermal hyperalgesia through 5-HT1/2 receptors in streptozotocin-induced diabetic mice." European Journal of Pharmacology 497: 285– 292 46 Niementowski V (1895) J prakt Chem 51 (2): 564 47 Patel V.S., P S R (1965) "Niementowski 4-oxoquinazoline synthesis." J Indian Chem Soc 42(8) 531-535 48 Pavlidis V H., P P J (1994) Synth Commun 24: 533 49 R J Rodgers, j C C., k Aboualfa, l H Stephenson (1995) "Ethopharmacological Analysis of the Effects of Putative ‘Anxiogenic’ Agents in the Mouse Elevated PlusMaze." Pharmacology Biochemistry and Behavior, 52(4): 805 – 813 50 Robert M Silverstein, F X W (1998) "Spectrometric Identification of Organic Compounds." John Wiley & Sons, Inc 51 Rudgley (1998) "The Encyclopedia of Psychoactive Substances." Thomas Dunne Books 52 Shishoo C J., D M B., Ananthan S., Jain K S., Bhadti V S., Mohan S., Patel L J (1989) Indian Journal of Chemistry 28 B: 1039-1047 53 Sittig & Marshal (1988) "Pharmaceutical Manufacturing Encyclopedia." William Andrew Publishing/Noyes 2, 2nd Ed: 969 54 Sona J., S S., Spirkova K (2004) "In vitro antibacterial activity of ten series of substituted quinazolines." Biologia, Bratislava 59/6: 741-752 55 Vecchio; D H Guthrie; A J Pond; M E Grzelak; X Xu; W A Korfmacher; D Tulshian; E M Parker; G A Higgins, , G B V L A H R A H S X L M F M T M K R A D "Characterization of the nociceptin receptor (ORL-1) agonist, Ro646198, in tests of anxiety across multiple species." Psychopharmacology 182(1): 132-143 56 Walid F., M C., Pavel P (2001) Molecules 6: 557-573 57 Wilkins, L W (1997) "Scopolamine-induced deficits in a two-trial object recognition task in mice." Learning and Memory Neuroreport 8(5): 1173-1178 58 Z.F Yu, L D K., Y Chen (2002) "Antidepressant activity of aqueous extracts of Curcuma longa in mice." Journal of Ethnopharmacology 83: 161-165