Tổng hợp và thử nghiệm hoạt tính kháng ung thư của một số dẫn xuất của acid usnic

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TỔNG HỢP VÀ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN XUẤT TỔNG HỢP CỦA ACID USNIC Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Phạm Đức Dũng Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ (TỔNG HỢP VÀ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN XUẤT TỔNG HỢP CỦA ACID USNIC (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 14/6) Chủ nhiệm nhiệm vụ: (ký tên) Chủ tịch Hội đồng nghiệm thu (Ký ghi rõ họ tên) Phạm Đức Dũng Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Đồn Kim Thành Thành phố Hồ Chí Minh- 2019 _ THÀNH ĐOÀN TP HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ CỘNG HỒ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc TPHCM, ngày 16 tháng năm 2019 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: TỔNG HỢP VÀ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƯ CỦA MỘT SỐ DẪN XUẤT CỦA ACID USNIC Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Vườn ươm Sáng tạo Khoa học Công nghệ trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Phạm Đức Dũng Ngày, tháng, năm sinh: 12/11/1985 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Tiến Sĩ Chức danh khoa học: Chức vụ: Giảng viên Điện thoại: Tổ chức: Nhà riêng: Mobile: 0979394373 Fax: E-mail: pddung01@gmail.com Tên tổ chức công tác: Đại học Sư Phạm Thành phố Hồ Chí Minh Địa tổ chức: 280 An Dương Vương, Phường 4, Quận 5, Thành phồ Hồ Chí Minh Địa nhà riêng: 504/14/20A Phạm Văn Hai, Phường 3, Quận Tân Bình, TPHCM Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ trẻ Điện thoại: 028.38.230.780 Fax: E-mail: Website: Địa chỉ: Số Phạm Ngọc Thạch, P Bến Nghé, Q1, Tp Hồ Chí Minh Họ tên thủ trưởng tổ chức: Đoàn Kim Thành Số tài khoản: 3713.0.1083277.00000 Kho bạc: Nhà nước Q.1 – Tp Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng năm 2018 đến tháng 12 năm 2019 - Thực tế thực hiện: từ tháng năm 2018 đến tháng năm 2019 - Được gia hạn (nếu có): - Lần từ tháng… năm… đến tháng… năm… - Lần … Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 90 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 90 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: ……………….tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT … Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 8/2018 45 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 8/2018 45 Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Trả công lao động (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, lượng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng Theo kế hoạch Tổng NSKH 52.871 000 52.871 000 27.148 000 0 27.148 000 0 9.981 000 9.981.0 00 90.000 000 90.000.00 Thực tế đạt Nguồn khác 0 0 Tổng NSKH 52.871 000 52.871 000 27.148 000 0 27.148 000 0 9.981 000 9.981.0 00 90.000 000 90.000.00 Nguồn khác 0 0 - Lý thay đổi (nếu có): Đối với dự án: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Thiết bị, máy móc mua Nhà xưởng xây dựng mới, cải tạo Theo kế hoạch Tổng NSKH Nguồn khác Thực tế đạt Tổng NSKH Nguồn khác Kinh phí hỗ trợ cơng nghệ Chi phí lao động Nguyên vật liệu, lượng Thuê thiết bị, nhà xưởng Khác Tổng cộng - Lý thay đổi (nếu có): Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số TT … Số, thời gian ban hành văn Tên văn Ghi Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Tên tổ chức tham gia thực Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Phạm Đức Dũng Dương Thúc Huy Tên cá nhân Nội dung tham tham gia thực gia Phạm Đức Dũng -Xây dựng thuyết minh -Phân lập acid usnic -Aldol hoá acid usnic với số aldehyde thơm -Viết bào khoa học -Viết báo cáo nghiệm thu Dương Thúc -Phân lập acid Huy usnic Sản phẩm chủ yếu đạt -Thuyết minh đề tài -Acid usnic -Dẫn xuất acid usnic -Bài báo khoa học -Báo cáo nghiệm thu -Acid usnic -Dẫn xuất Ghi chú* Trần Thị Minh Định Đinh Minh Hiệp Nguyễn Kim Phi Phụng -Aldol hoá acid usnic với số aldehyde thơm -Viết báo cáo nghiệm thu Trần Thị Minh -Thử nghiệm Định hoạt tính sinh học Đinh Minh Hiệp -Thử nghiệm hoạt tính sinh học -Viết báo khoa học -Viết báo cáo nghiệm thu Nguyễn Kim Phi -Viết báo Phụng khoa học -Viết báo cáo nghiệm thu acid usnic -Báo cáo nghiệm thu -Giá trị hoạt tính sinh học -Giá trị hoạt tính sinh học -Bài báo khoa học -Báo cáo nghiệm thu -Bài báo khoa học -Báo cáo nghiệm thu - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Số (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa TT điểm ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, cơng việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế Thực tế đạt hoạch Acid usnic Acid usnic Phân lập acid usnic từ lồi Các nội dung, cơng việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Người, quan thực Phạm Đức Thực phản ứng oxi hóa Dakin biến đổi acid usnic thành sản phẩm thoái phân 2-(7acetyl-4,6-dihydroxy-3,5dimethylbenzofuran-2-yl)acetic acid Dẫn xuất thối phân acid usnic Dẫn xuất thoái phân acid usnic Dũng Dương Thúc Huy Phạm Đức Dũng Dương Thúc Huy Từ sản phẩm thối phân, tiến hành phản ứng aldol hóa với số aldehyde thơm nhằm tổng hợp dẫn xuất benzylidene có khung sườn carbon 10-15 Dẫn xuất benzylidene acid usnic 19 Dẫn xuất benzylidene acid usnic Phạm Đức Dũng Dương Thúc Huy Thử nghiệm hoạt tính kháng ung thư dịng tế bào ung thư gan HepG2 ung thư máu K562 Giá trị IC50 dẫn xuất benzylidene Trần Thị Minh Định Đinh Minh Hiệp Viết kết thành báo khoa Bài báo khoa học học đăng tạp chí ISI Giá trị IC50 tế bào ung thư máu K562 dẫn xuất benzylidene Đang gửi chờ đăng địa y thuộc chi Usnea Phạm Đức Dũng Đinh Minh Hiệp Nguyễn Kim Phi Phụng - Lý thay đổi (nếu có): Dẫn xuất benzylidene sản phẩm thối phân acid usnic có hoạt tính yếu so với acid usnic, khó đăng báo Do đó, chúng tơi thay đổi tổng hợp dẫn xuất benzylidene trực tiếp từ acid usnic mà từ sản phẩm thoái phân acid usnic III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt Dẫn xuất benzylidene acid Chất usnic 19 10-15 19 Dữ liệu hoạt tính kháng ung thư 19 10-15 19 - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Giá trị IC50 Số TT Yêu cầu khoa học cần đạt Tên sản phẩm Theo kế hoạch Thực tế đạt Phổ NMR Quy trình phân lập usnic Dữ liệu NMR acid usnic acid từ loài địa y thuộc tinh sạch, đạt chi Usnea >98% Báo cáo tổng kết Báo cáo Ghi Báo cáo thể nội dung nghiên cứu - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Bài báo khoa học Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt Bài báo ISI Bài báo chờ đăng Số lượng, nơi công bố (Tạp chí, nhà xuất bản) 1, Natural Product Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt 1 Ghi (Thời gian kết thúc) 2018 - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) Kết sơ Đánh giá hiệu nhiệm vụ mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: (Nêu rõ danh mục công nghệ mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ cơng nghệ so với khu vực giới…) b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra nhiệm vụ: Số TT I II III Nội dung Báo cáo tiến độ Thời gian thực 2/2019 Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Hoàn thành nội dung đề xuất Lần … Báo cáo giám định Lần … Nghiệm thu sở …… Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Phạm Đức Dũng Thủ trưởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu sơ lược acid usnic 1.1.1 Tổng quát 1.1.2 Hoạt tính sinh học acid usnic 1.2 Các nghiên cứu tổng hợp dẫn xuất imine hợp chất acid usnic 1.3 Các nghiên cứu tổng hợp aldol hóa hợp chất acid usnic 14 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM 18 2.1 Hóa chất thiết bị 18 2.1.1 Hóa chất 18 2.1.2 Chất nền: acid usnic 18 2.1.3 Thiết bị 19 2.2 Quy trình tổng hợp 19 2.2.1 Tổng hợp dẫn xuất acid usnic với o-chlorobenzaldehyde 19 2.2.2 Tổng hợp dẫn xuất acid usnic với m-chlorobenzaldehyde 20 2.2.3 Tổng hợp dẫn xuất acid usnic với p-bromobenzaldehyde 20 2.2.4 Tổng hợp dẫn xuất acid usnic với p-methylbenzaldehyde 20 2.2.5 Tổng hợp dẫn xuất acid usnic với p-methoxylbenzaldehyde 20 2.2.6 Tổng hợp dẫn xuất acid usnic với p-chlorolbenzaldehyde 21 2.3 Cấu trúc sản phẩm 21 2.4 Thử hoạt tính sinh học 24 2.4.1 Nuôi cấy tế bào ung thư 24 2.4.2 Nguyên tắc 24 2.4.3 Mục đích 24 2.5.4 Quy trình 24 Phụ lục 20a Phổ 1H-NMR acid usnic Phụ lục 20b Phổ 13C-NMR acid usnic Synthesis and Cytotoxic Evaluation of Usnic Acid Benzylidene Derivatives as Potential Anticancer Agents Van-Kieu Nguyena, Jirapast Sichaemb, Huu-Hung Nguyenc, Xuan Hieu Nguyend, Thi-Thu-Loi Huynhd, Thi-Phuong Nguyenc, Nakorn Niamnonte, Dinh-Hung Macf, Duc-Dung Phamd, Warinthorn Chavasiria, Kim-Phi-Phung Nguyeng,Thuc-Huy Duongh,i a Center of Excellence in Natural Products Chemistry, Department of Chemistry, Faculty of Science, Chulalongkorn University, Pathumwan, Bangkok 10330, Thailand b Faculty of Science and Technology, Thammasat University Lampang Campus, Lampang 52190, Thailand c Faculty of Biotechnology and Environment, Nguyen Tat Thanh University, 300A Nguyen Tat Thanh, District 4, Ho Chi Minh City, Viet Nam d Department of Chemistry, Ho Chi Minh City University of Education, 280 An Duong Vuong Street, District 5, Ho Chi Minh City 748342, Vietnam e Organic Synthesis, Electrochemistry & Natural Product Research Unit, Department of Chemistry, Faculty of Science, King Mongkut's University of Technology Thonburi, Bangkok, 10140, Thailand f Department of Organic Chemistry, University of Science, Ha Noi National University, 19 Le Thanh Tong Street, Hoan Kiem District, Ha Noi City 748355, Vietnam g Department of Organic Chemistry, University of Science, National University−Ho Chi Minh City, 227 Nguyen Van Cu Street, District 5, Ho Chi Minh City 748355, Vietnam h Department for Management of Science and Technology Development, Ton Duc Thang University, Ho Chi Minh City, Vietnam i Faculty of Applied Sciences, Ton Duc Thang University, Ho Chi Minh City, Vietnam duongthuchuy@tdtu.edu.vn warinthorn.c@chula.ac.th Graphical abstract OH Me Me O Me O HO O O OH (+)-Usnic acid IC 50 51.1  M Me OHC R R OH Me Me OH O O HO O O OH Me HO CH O OH (II) OH Me O R Me O Me O O OH O (III) R R R = 4-Me, IC50 10.0  M R = 4-tBu, IC50 5.6 M O O O (I) Me t R = 4- Bu, IC50 8.8 M R = 3-Cl, IC50 4.5 M R = 4-Cl, IC50 8.4 M R = 4-OMe, IC50 11.9  M ABSTRACT: A series of usnic acid benzylidene derivatives (groups I-V) were designed, synthesized and evaluated for their anticancer activity in the search for potentially new anticancer agents Compounds 1a, 5b, 2b, 2e and 2f exhibited the most potent cytotoxcity against K562 cell line with IC50 values of 10.0 ± 3.6, 5.6 ± 0.4, 8.8 ± 1.0, 4.5 ± 0.1 and 8.4 ± 0.4 M, respectively Key words: usnic acid; benzylidene derivative; aldol condensation; cytotoxicity Introduction Synthetic transformation of plant metabolites is a significant area of medicinal chemistry that can create new and potential drugs One of these compounds is usnic acid that exhibits a broad spectrum of biological properties such as antibacterial (Muller et al 2001), antiviral, antiprotozoal, antiproliferative, anti-inflammatory and analgesic activities (Boustie et al 2011; Ingoífsdotir et al 2002), anticancer (Ebrahim et al 2017; Luzina et al 2015; Sokolov et al 2012; Bazin et al 2008) Usnic acid, a dibenzofuran derivatives, is found only in lichens and is especially abundant in lichen genera such as Alectoria, Cladonia, Usnea, Lecanora, Ramalina and Evernia (Ingoífsdotir et al 2002) As a pure substance, it is used in creams, toothpaste, mouthwash, deodorants and sunscreen products (Ingoífsdotir et al 2002) Several years, the triazole, imine, enamino, enamine, pyrazole and chalcone derivatives from usnic acid were reported with strong activity such as anticancer, antivirus (Bazin et al 2008; Sokolov et al 2012; Shtro et al 2014; Vanga et al 2017) Previously, Ebrahim et al have reported the synthesis of usnic acid benzylidene derivatives The results showed that they have good cytotoxic activities against breast cancer cells (Ebrahim et al 2017) Herein, we described a synthesis of new benzylidene derivatives from usnic acid with different aromatic aldehydes Moreover, all synthesized compounds were evaluated for their cytotoxicity against K562 cells Results and discussion 2.1 Chemistry In this study, we successfully synthesized 27 usnic acid benzylidene derivatives, including 15 new analogues 1a-1f, 2d, 2g, 3b-3c, 3e-3f, 4a-4b and 5a-5b The optimization condition of the reaction to give high yield and high selectivity of the benzylidene derivatives of (+)-usnic acid with different aromatic aldehydes, including 4-methylbenzaldehyde, 4-tertbutylbenzaldehyde, 4methoxybenzaldehyde, 2-chlorobenzaldehyde, 3-bromobenzaldehyde, was carried out in ethanol, using KOH as a catalyst and stirred at 55oC formed five main product groups (I–V) Ebrahim and co-workers performed the same procedure at ambient temperature and provided two groups (II and III) Attempting to obtain more groups of derivatives due to two ketone groups of the starting material, the reaction condition was modified As the results, the unprecedented groups I, IV, and V were formed Compounds 1a-4a were obtained from the aldol condensation reaction between (+)-usnic acid and 4-methylbenzaldehyde The identification of compound 1a was readily confirmed on the basis of its 1H and 13C NMR spectra The 1H NMR spectrum showed three singlets of signals at δH 14.08, 11.23 and 6.09 ppm representing 8-OH, 10-OH and H-4, respectively, indicated the maintaining of the dibenzofuran of starting material as well as further supported by the comparison with those of usnic acid (Nguyen et al 2018) Eight aromatic protons appeared at δH 7.25-8.30 ppm strong-minded dichalcone formed from both of C-2 and C-6 acetyl group and confirmed with the occurrence of four vinyl protons at δ 8.26 (d, J = 15.5, 1H), 8.04 (d, J = 15.5, 1H), 7.93 (d, J = 15.5, 1H) and 7.86 (d, J = 15.5, 1H) with the value of coupling constant (J = 15.0 Hz) implied to a trans orientation of the vinyl protons The structure of compounds 2a, 3a, and 4a were elucidated on the basis of their 1H and 13C NMR spectra as well as comparison with literature (Ebrahim et al 2017) In addition, other synthetic compounds 1b-1f, 2b-2h, 3b-3g, 4b and 5a-5b gave satisfactory analytical and spectroscopic data, which were in full accordance with their depicted structures The synthesis routes are outlined in Scheme R OH OH H3 C HO OH Me Me O Me O HO O O OH (I) O O O (III) R Me 3a : R = 4-Me 3b : R = 4-OMe O 3c : R = 2-Cl 3d : R = 3-Cl OH 3e : R = 4-Cl 3f : R = 3-Br 3g : R = 4-Br R R R OH Me O Me O H2 SO4 Me (+)-Usnic acid (1) 1a : R = 4-Me O 1b : R = 4-OMe 1c : R = 2-Cl OH 1d : R = 3-Cl 1e : R = 4-Cl 1f : R = 4-Br O O KOH, EtOH, 55 o C CHO O H3 C O Me Me OH Me HO Me O O (II) O Me 2a : R = -Me t O 2b : R = 4- Bu 2c : R = 4-OMe OH 2d : R = 2-Cl 2e : R = 3-Cl 2f : R = 4-Cl 2g : R = 3-Br R 2h : R = 4-Br O O O R 4a : R = 4-Me 4b : R = 2-Cl OH (IV) R OH Me Me O O HO O O 5a : R = 4-OMe 5b : R = 4-tBu OH Me (V) Scheme General synthesis route towards analogues 1a-1f, 2a-2h, 3a-3g, 4a-4b and 5a-5b 2.2 Cytotoxicity The cytotoxicity of all usnic acid benzylidene derivatives (1a-1f, 2a-2h, 3a-3g, 4a-4b and 5a-5b) against K562 cell line was evaluated (Table 1) Most of the all derivatives displayed lower IC50 values against against K562 cell line than its original, (+)-usnic acid (IC50 51.1 ± 4.3 M) Compound showed the most powerful cytotoxicity (IC50 4.5± 0.1 M), while compounds 2a, 3a, 1b, 2c and 2g exhibited only moderate cytotoxicity (IC50 10.1-26.3 M) The chlorobenzylidene analogues 2d-2f (Group II) were more potent cytotoxicity than bromobenzylidene analogues 2g-2h against K562 cell line The 3-chlorinated analogue 2e was relatively more active than the other chlorinated analogues 2d and 2f (Table 1) This indicated the activity preference for the meta position of chloro substituents on the benzylidene moiety as well as the electron-withdrawing property of aromatic substituents On the other hand, the pt butyl substitution of dichalcone moiety of Group II (2b, IC50 8.8 ± 1.0 M) exhibited more cytotoxicity than group V (5b, IC50 5.6 ± 0.4 M), consistent with those of electrophilic effect Table Anticancer activity (IC50, μM) of compounds 1a-1f, 2a-2h, 3a-3g, 4a-4b and 5a-5b against K562 cell line No Compound IC50 (μM) No Compound IC50 (μM) 1a 10.0 ± 3.6 15 3a 22.4 ± 0.4 1b 32.6 ± 5.3 16 3b 11.9 ± 0.6 1c >100 17 3c >100 1d >100 18 3d 69.1 ± 2.8 1e 21.9 ± 9.0 19 3e 83.5 ± 25 1f >100 20 3f >100 2a 22.6 ± 6.0 21 3g >100 2b 8.8 ± 1.0 22 4a 29.0 ± 5.8 2c 56.9 ± 18.2 23 4b >100 10 2d 20.1 ± 0.6 24 5a 41.5 ± 7.1 11 2e 4.5± 0.1 25 5b 5.6 ± 0.4 12 2f 8.4 ± 0.4 26 (+)-Usnic acid 51.1 ± 4.3 13 2g 35.3 ± 1.6 27 Doxorubixin 4.1 ± 0.1 14 2h >100 Experimental 3.1 Chemistry (+)-Usnic acid was isolated from dichloromethane fraction of Usnea baileyi (Stirt.) Zalbr according to the previously reported procedure (Nguyen et al 2018) Solvents were distilled before use All reagents were purchased from Sigma-Aldrich All reactions were monitored by silica gel 60 F254 TLC plates (Merck) Column chromatography was performed on silica gel 60120 mesh 1H and 13C NMR spectra were recorded on Bruker 500 MHz spectometers using TMS as internal standard Mass spectra were obtained on Agilent ESI-QTOF instrument 3.2 General procedure for the synthesis of derivatives 1a-1f, 2a-2h, 3a-3g, 4a-4b and 5a-5b To a solution of usnic acid (70 mg, 0.20 mmol) in ethanol (3 mL) was added appropriate aromatic aldehyde (0.57 mmol), KOH (0.18 g, 3.28 mmol) Mixture was heated at 60oC for 90 minutes under stirring The reaction was periodically monitored by TLC The mixture partitioned between ethyl acetate – water (5 mL each) Organic layers were pooled, washed with brine, and dried over anhydrous Na2SO4 The residue was purified by normal phase silica gel column chromatography, eluted with n-hexane-chloroform-ethyl acetate-acetone (10:10:4:2.5) to yield products The 1H and 13 C NMR and ESIMS spectra data of all compounds were supplied as supplementary material (2E,2'E)-1,1'-((R)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-1-oxo-1,9b-dihydrodibenzo[b,d]furan2,6-diyl)bis(3-(p-tolyl)prop-2-en-1-one) (1a): Light yellow powder, yield: 2.1%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz)δH 14.08 (1H, s), 11.23 (1H, s), 8.25 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.92 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.85 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.60 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.56 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.27 (2H, s), 7.25 (2H, s), 6.09 (1H, s), 2.42 (9H, s), 2.17 (3H, s), 1.83 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 198.7, 193.6, 190.4, 188.0, 178.3, 165.4, 157.8,154.9, 147.9, 145.0, 142.6, 141.6, 132.4, 132.2, 130.1, 130.0, 129.5, 128.9, 124.0, 120.5, 109.6, 104.6, 104.5, 102.1, 100.1, 59.1, 32.2, 21.9, 21.8, 7.8; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C34H28O7: 547.1762; found 547.1759 (2E,2'E)-1,1'-((R)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-1-oxo-1,9b-dihydrodibenzo[b,d]furan2,6-diyl)bis(3-(4-methoxyphenyl)prop-2-en-1-one) (1b): Light yellow powder, yield: 1.8%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 14.15 (1H, s), 11.26 (1H, s) 8.19 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.06 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.92 (1H, d, J = 15.0 Hz), 7.79 (1H, d, J = 15.0 Hz), 7.67 ( 2H, d, J = 8.5), 7.62 (2H, d, J = 8.5), 6.98 (2H, s), 6.97 (2H, s), 6.08 (1H, s), 3.89 (3H, s), 2.17 (3H, s), 1.83 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 198.8, 193.7, 190.3, 188.7, 178.3, 165.0, 160.7, 157.3, 154.6, 147.8, 144.8, 131.5, 130.7, 128.1, 127.7, 122.7, 119.0, 114.8, 114.7, 110.6, 107.9, 104.6, 102.9, 100.1, 59.1, 55.7, 55.6, 32.3, 7.9; HRESIMS m/z [M+Na]+ calcd for C34H28O9: 603.1626; found 603.1635 (2E,2'E)-1,1'-((R)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-1-oxo-1,9b-dihydrodibenzo[b,d]furan2,6-diyl)bis(3-(2-chlorophenyl)prop-2-en-1-one) (1c): Light yellow powder, yield: 3.1%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.91 (1H, s), 11.12 (1H, s), 8.47 (1H, d, J = 16.0 Hz), 8.30 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.25 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.89 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.85 (1H, s), 7.75 (1H, s), 7.47 (2H, s), 7.37 (4H, s), 6.08 (1H, s), 2.16 (3H, s), 1.83 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 198.7, 193.5, 190.0, 187.9, 178.5, 165.5, 158.0, 154.9, 142.7, 140.6, 136.2, 135.9, 133.4, 133.0, 132.2, 131.5, 130.7, 130.5, 128.5, 128.3, 127.5, 127.5, 127.3 124.0, 109.8, 105.0, 104.5, 102.1, 100.0, 59.6, 32.2, 7.8; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C32H22O7Cl2: 587.0669; found 587.0678 (2E,2'E)-1,1'-((R)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-1-oxo-1,9b-dihydrodibenzo[b,d]furan2,6-diyl)bis(3-(3-chlorophenyl)prop-2-en-1-one) (1d): Light yellow powder, yield: 4.1%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.84 (1H, s), 11.08 (1H, s), 8.18 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.90 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.79 (1H, s), 7.79 (1H, s), 7.60 (1H, s), 7.57 (1H, s), 7.50 (1H, d, J = 7.5 Hz), 7.45 (1H, d, J = 7.0 Hz), 7.32-7.37 (4H, m), 6.05 (1H, s), 2.10 (3H, s), 1.78 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 198.8, 193.5, 190.0, 187.9, 187.8, 165.9, 158.2, 154.6, 145.6, 144.7, 143.5, 143.1, 140.4, 136.9, 136.6, 131.3, 130.7, 130.5, 128.9, 128.4, 127.4, 127.0, 126.3, 123.1, 109.9, 107.0, 104.6, 102.1, 100.0, 59.8, 32.2, 7.8; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C32H22O7Cl2: 587.0669; found 587.0669 (2E,2'E)-1,1'-((R)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-1-oxo-1,9b-dihydrodibenzo[b,d]furan2,6-diyl)bis(3-(4-chlorophenyl)prop-2-en-1-one) (1e): Light yellow powder, yield: 3.0%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.95 (1H, s), 11.16 (1H, s), 8.25 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.00 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.89 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.84 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.63 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.59 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.44 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.43 (2H, d, J = 8.0 Hz), 6.10 (1H, s), 2.17 (3H, s), 1.84 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 197.4, 193.7, 190.3, 188.2, 178.6, 165.7, 158.9, 155.1, 146.2, 143.7, 136.0, 135.8, 133.9, 133.6, 130.7, 130.2, 129.9, 129.8, 125.8, 122.5, 108.8, 105.2, 105.1, 102.3, 100.3, 59.5, 32.5, 8.1; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C32H22O7Cl2: 587.0669; found 587.0681 (2E,2'E)-1,1'-((R)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-1-oxo-1,9b-dihydrodibenzo[b,d]furan2,6-diyl)bis(3-(4-bromophenyl)prop-2-en-1-one) (1f): Light yellow powder, yield: 4.20%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.95 (1H, s), 11.16 (1H, s), 8.27 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.98 (1H, d, J = 16.0 Hz), 7.86 (2H, s), 7.60 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.59 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.56 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.51 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.10 (1H, s), 2.16 (3H, s), 1.84 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) C 198.7, 193.5, 190.0, 187.9, 179.2, 165.4, 158.0, 155.2, 146.0, 143.5, 135.0, 133.7, 132.6, 132.5, 130.6, 130.1, 126.2, 125.6, 125.3, 122.3, 109.5, 106.6, 103.4, 102.6, 100.0, 59.2, 32.2, 7.8; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C32H22O7Br2: 674.9654; found 674.9597 (R,E)-2-acetyl-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyl-6-(3-(p-tolyl)acryloyl)dibenzo[b,d]furan1(9bH)-one (2a): Light yellow powder, yield: 8.2%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 14.04 (1H, s), 11.07 (1H, s), 7.93 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.82 (1H, d, J = 15.0 Hz), 7.55 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.25 (2H, s), 6.05 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.80 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 201.8, 198.1, 191.7, 190.2, 179.3, 164.1, 157.6, 154.7, 145.0, 141.5, 132.2, 129.8, 128.7, 123.8, 118.0, 116.3, 109.7, 105.3, 104.1, 102.0, 98.3, 59.0, 32.1, 27.9, 21.6, 7.7 (R,E)-2-acetyl-6-(3-(4-(tert-butyl)phenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2b): Light yellow powder, yield: 10.2%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 14.06 (1H, s), 11.09 (1H, s), 7.93 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.84 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.60 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.48 (2H, d, J = 8.0 Hz), 6.06 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.79 (3H, s), 1.36 (9H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) C 202.0, 198.2, 191.8, 190.3, 179.4, 165.4, 157.7, 154.8, 154.7, 145.0, 132.3, 128.7, 126.2, 124.2, 109.8, 105.4, 104.3, 102.1, 98.4, 59.2, 35.2, 32.3, 31.3, 28.1, 7.8 (R,E)-2-acetyl-3,7,9-trihydroxy-6-(3-(4-methoxyphenyl)acryloyl)-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2c): Light yellow powder, yield: 7.4%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 14.12 (1H, s), 11.06 (1H, s), 7.91 (1H, d, J = 15.0 Hz), 7.74 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.60 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.96 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.05 (1H, s), 3.88 (3H, s), 2.68 (3H, s), 2.14 (3H, s), 1.79 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 201.7, 198.0, 191.6, 189.9, 179.2, 165.2, 161.9, 157.3, 154.5, 144.7, 130.4, 127.6, 122.3, 114.5, 109.5, 105.2, 104.0, 101.9, 98.1, 58.9, 55.4, 32.0, 27.8, 7.6 (R,E)-2-acetyl-6-(3-(2-chlorophenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2d): Light yellow powder, yield:10.3%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.90 (1H, s), 11.13 (1H, s), 8.30 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.87 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.74 (1H, dd, J = 6.5, 3.0 Hz), 7.47 (1H, dd, J = 6.5, 3.0 Hz), 7.34-7.38 (2H, m), 6.03 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.79 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 202.1, 198.2, 191.9, 190.0, 179.4, 165.4, 158.0, 155.0, 140.6, 135.8, 133.3, 131.5, 130.7, 128.3, 127.5, 127.3, 109.9, 105.5, 104.4, 98.6, 59.1, 32.3, 28.0, 7.8; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C25H18O7Cl: 465.0746; found 465.0754 (R,E)-2-acetyl-6-(3-(3-chlorophenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2e): Light yellow powder, yield: 11.7%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.90 (1H, s), 11.16 (1H, s), 7.85 (2H, s), 7.63 (1H, s), 7.51 (1H, d, J = 7.0 Hz), 7.41 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz), 7.38 (1H, d, J = 8.0 Hz), 6.07 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.80 (3H, s).13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 209.2, 196.8, 191.8, 189.5, 179.2, 165.4, 158.1, 155.3, 143.2, 140.7, 136.9, 130.7, 130.5, 128.4, 127.0, 126.3, 109.9, 106.5, 104.3, 102.1, 98.7, 59.1, 32.3, 28.0, 7.8 (R,E)-2-acetyl-6-(3-(4-chlorophenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2f): Light yellow powder, yield: 12.0%;1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.92 (1H, s), 11.12 (1H, s), 7.88 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.82 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.57 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.42 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.05 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.79 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 201.8, 198.0, 191.7, 189.8, 179.1, 165.3, 157.8, 154.7, 143.3, 136.7, 133.4, 129.8, 129.4, 125.3, 109.8, 105.3, 104.3, 101.9, 98.4, 59.0, 32.1, 27.9, 7.6 (R,E)-2-acetyl-6-(3-(3-bromophenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2g): Light yellow powder, yield: 11.7%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.89 (1H, s), 11.16 (1H, s), 7.83 (2H, s), 7.79 (1H, s), 7.55-7.57 (1H, m), 7.33 (1H, t, J = 8.0 Hz), 6.06 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.80 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 206.0, 198.2, 193.9, 190.8, 181.0, 165.4, 158.1, 155.0, 143.0, 137.2, 133.6, 131.4, 130.7, 127.4, 126.3, 123.3, 110.8, 106.7, 103.9, 102.0, 98.7, 59.1, 32.3, 28.0, 7.8; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C25H19O7Br: 509.0241; found 509.0233 (R,E)-2-acetyl-6-(3-(4-bromophenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (2h): Light yellow powder, yield: 8.40%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.94 (1H, s), 11.14 (1H, s), 7.85 (2H, s), 7.58 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.50 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.05 (1H, s), 2.68 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.79 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 202.0 198.2, 191.8, 189.9, 179.2, 165.4, 158.0, 154.8, 143.5, 134.0, 132.5, 130.1, 125.5, 125.3, 109.9, 105.4, 104.4, 102.0, 98.6, 59.1, 32.3, 29.8, 28.1, 7.8 (R)-8-acetyl-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-3-(p-tolyl)-2,3-dihydro-1H-benzofuro[2,3f]chromene-1,7(6bH)-dione (3a): Light yellow powder, yield: 9.1% ; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 11.12 (1H, s), 7.36 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.24 (2H, d, J = 8.0 Hz), 6.08 (1H, s), 5.48 (1H, m), 3.01 (1H, m), 2.89 (1H, m), 2.66 (3H, s), 2.34 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.76 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 202.0, 198.3, 192.0, 189.4, 180.9, 161.5, 157.5, 153.8, 138.7, 135.8, 129.6, 126.1, 110.1, 107.2, 105.3, 102.8, 98.8, 79.4, 59.0, 44.8, 32.2, 28.2, 21.4, 8.4 (R)-8-acetyl-6,9-dihydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-5,6b-dimethyl-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (3b): Light yellow powder, yield: 8.9%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 11.07 (1H, s), 7.40 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.96 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.09 (1H, s), 5.40 (1H, m), 3.84 (3H, s), 3.02 (1H, m), 2.88 (1H, m), 2.66 (3H, s), 2.14 (3H, s), 1.75 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 202.2, 198.6, 192.2, 189.7, 181.2, 161.8, 160.3, 157.8, 154.2, 131.1, 127.9, 114.6, 110.5, 107.5, 105.6, 103.1, 99.1, 79.5, 59.3, 55.8, 44.9, 32.5, 28.4, 8.7; HRESIMS m/z [M+H]+ calcd for C26H22O8: 643.1388; found 463.1344 (R)-8-acetyl-3-(2-chlorophenyl)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (3c): Light yellow powder, yield: 14.2%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H 11.14 (1H, s), 7.74 (2H, m), 7.44 (2H, m), 6.10 (1H, s), 5.83 (1H, m), 3.01 (1H, m), 2.86 (1H, m), 2.66 (3H, s), 2.16 (3H, s), 1.77 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) C 202.2,198.9, 192.3, 192.0, 180.0, 169.5, 156.8, 154.7, 136.8, 136.6, 129.9, 129.7, 127.5, 127.0, 98.8, 76.4, 61.5, 44.0, 32.4, 28.2, 8.0; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C25H19O7Cl: 465.0746; found 465.0754 (R)-8-acetyl-3-(3-chlorophenyl)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (3d): Light yellow powder, yield: 15.6%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H 11.15 (1H, s), 7.50-7.30 (4H, m), 6.10 (1H, s), 5.46(1H, m), 2.91 (m, 2H), 2.66 (3H, s), 2.18 (3H, s), 1.76 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) C 201.9, 200.2, 198.1, 191.8, 189.9, 180.9, 160.9, 157.6, 153.8, 140.7, 134.9, 130.2, 128.8, 126.1, 124.0, 107.4, 105.7, 102.6, 98.8, 78.7, 58.8, 44.7, 32.0, 28.6, 8.3 (R)-8-acetyl-3-(4-chlorophenyl)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (3e): Light yellow powder, yield:12.5%; 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δH 11.09 (1H, s), 7.47 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.40 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.09 (1H, s), 5.44 (1H, m), 3.03 (1H, m), 2.90 (1H, m), 2.66 (3H, s), 2.16 (3H, s), 1.76 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 202.0, 198.2, 192.0, 188.7, 180.8, 161.1, 157.7, 154.0, 137.3, 134.7, 129.4, 127.3, 110.2, 107.5, 105.3, 102.8, 99.0, 78.7, 58.9, 44.8, 32.2, 28.2, 8.4; HRESIMS m/z [M+Na]+ calcd for C25H19O8ClNa: 489.0712; found 489.0711 (R)-8-acetyl-3-(3-bromophenyl)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (3f): Light yellow powder, yield:14.3%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 11.14 (1H, s), 7.65 (1H, m), 7.52 (1H, m), 7.33 (1H, m), 7.30 (1H, m), 6.08 (1H, s), 5.45 (1H, m), 2.94 (2H, m), 2.66 (3H, s), 2.19 (3H, s), 1.77 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 202.0, 198.2, 192.0, 188.5, 180.8, 161.0, 157.8, 154.0, 141.1, 131.9, 130.6, 129.2, 124.6, 123.1, 110.2, 107.4, 105.3, 102.7, 98.9, 78.6, 58.9, 44.6, 32.3, 28.2, 8.4; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C25H18O8Br: 509.0241; found 509.0222 (R)-8-acetyl-3-(4-bromophenyl)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (3g): Light yellow powder, yield: 13.7%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) H 11.13 (1H, s), 7.56 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.35 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.09 (1H, s), 5.44 (1H, m), 3.00 (2H, m), 2.66 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.75 (3H, s) 125 MHz) C 13 C NMR (CDCl3, 201.9, 198.1, 192.1, 188.2, 181.0, 161.0, 157.5, 153.4, 137.5, 131.7, 127.5, 122.5, 110.1, 106.8, 104.6, 102.3, 98.3, 78.5, 58.5, 44.8, 31.5, 27.6, 7.6 (R,E)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-3-(p-tolyl)-8-(3-(p-tolyl)acryloyl)-2,3-dihydro-1Hbenzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (4a): Light yellow powder, yield: 1.8%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 11.22 (1H, s), 8.24 (2H, d, J = 15.5 Hz), 8.04 (2H, d, J = 15.5 Hz), 7.59 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.37 (4H, m), 7.25 (2H, s), 6.13 (1H, s), 5.45 (dd, J = 27.0, 12.5 Hz), 2.89 (m, 1H), 2.65 (dd, J = 27.0, 9.0 Hz, 1H), 2.42 (3H, s), 2.40 (3H, s), 2.16 (3H, s), 1.81 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 198.8, 193.8, 189.4, 188.2, 179.8, 161.5, 157.6, 154.1, 147.6, 142.4, 138.7, 135.9, 132.2, 130.0, 129.6, 129.5, 126.1, 120.7, 110.1, 107.5, 104.6, 102.8, 100.5, 79.4, 58.9, 44.8, 32.2, 21.8, 21.4, 8.4 (R,E)-3-(2-chlorophenyl)-8-(3-(2-chlorophenyl)acryloyl)-6,9-dihydroxy-5,6b-dimethyl-2,3dihydro-1H-benzofuro[2,3-f]chromene-1,7(6bH)-dione (4b): Light yellow powder, yield: 2.1%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 11.16 (1H, s), 8.50 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.28 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.89 (1H, m), 7.77 (1H, m), 7.38 (6H, m), 6.19 (1H, s), 5.85 (1H, m), 3.06 (1H, m), 2.87 (1H, m), 2.68 (3H, s), 2.20 (3H, s), 1.85 (3H, s) 13 C NMR (CDCl3, 125 MHz) C 198.6, 193.7, 188.9, 186.8, 182.1, 165.6, 157.5, 154.3, 142.5, 136.7, 136.2, 135.9, 133.1,132.1, 130.5, 130.0, 129.8, 128.5, 127.6, 127.4, 127.2, 124.3, 110.1, 107.8, 104.9, 102.8, 100.3, 76.7, 58.7, 43.4, 32.1, 8.4; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C32H21O7Cl2: 587.0669; found 587.0641 (R,E)-6-acetyl-3,7,9-trihydroxy-2-(3-(4-methoxyphenyl)acryloyl)-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (5a): Light yellow powder, yield: 1.8%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.35 (1H, s), 11.23 (1H, s), 8.18 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.05 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.67 (2H, d, J =8.5 Hz), 6.97 (2H, d, J =8.5 Hz), 6.00 (1H, s), 3.89 (3H, s), 2.70 (3H, s), 2.13 (3H, s), 1.80 (3H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 200.9, 199.0, 193.9, 188.0, 178.6, 164.3, 163.1, 158.1, 155.8, 148.1, 131.7, 127.9, 119.2, 115.1, 109.5, 104.7, 104.7, 102.0, 100.4, 59.4, 55.9, 32.5, 31.7, 8.0; HRESIMS m/z [M+Na]+ calcd for C26H22O8Na: 485.1207; found 485.1191 (R,E)-6-acetyl-2-(3-(4-(tert-butyl)phenyl)acryloyl)-3,7,9-trihydroxy-8,9bdimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bH)-one (5b): Light yellow powder, yield: 2.3%; 1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH 13.35 (1H, s), 11.17 (1H, s), 8.25 (1H, d, J = 15.5 Hz), 8.06 (1H, d, J = 15.5 Hz), 7.64 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.48 (2H, d, J = 8.5 Hz), 6.01 (1H, s), 2.70 (3H, s), 2.14 (3H, s), 1.81 (3H, s), 1.36 (9H, s) 13C NMR (CDCl3, 125 MHz) δC 200.4, 198.7, 193.7, 188.0, 178.5, 164.0, 157.8, 155.7, 155.5, 147.7, 132.1, 129.4, 126.3, 120.8, 109.3, 106.5, 104.6, 101.7, 100.1, 59.2, 32.2, 31.5, 31.3, 29.9, 7.7; HRESIMS m/z [M-H]¯ calcd for C29H27O7: 487.1762; found 487.1766 3.2 Cytotoxicity assay All usnic acid benzylidene derivatives were subjected to cytotoxic evaluation against K562 (chronic myelogenous leukemia) tumor cell line using doxorubixin as the positive control (Skehan et al 1990) The cell line was cultured in RPMI 1640 medium or in DMEM medium, respectively, supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 100 IU/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin and maintained at 37 °C and 5% CO2 with 95% humidity Viable cells were counted and inoculated in 96-well plate with density of 105 cells/100 μL/well for K562 After 24 hours, the cells were treated with the compounds and doxorubicin (positive control) diluted in culture media at 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125 and µg/mL concentration containing 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0.03125, 0% dimethyl sulfoxide (DMSO), respectively DMSO in culture media was used as negative control In addition, culture medium without cells was used as blank All experiments were done in triplicate The plates were incubated in 5% CO2, 95% humidity at 37 °C for 72 h 10 µL of 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT, mg/ml stock solution) was added into each well and incubated in 37 °C in 5% CO2 for 3.5 hours 70 µL of Detergent Reagent (10% SDS) was added into each well and the plate was maintained in 37 °C for 16 h The optical density of each well was read by using a scanning multiwall spectrophotometer (Sunrise) at wavelength of 595 nm Cell survival was measured as the percentage absorbance compared to the negative control (DMSO-treated cells) Conclusion In an effort to produce new agents of potential use in the treatment of chronic myelogenous leukemia, a series of usnic acid benzylidene derivatives were synthesized and evaluated for their cytotoxicity It is worth noting that compound 2e displayed potent cytotoxicity against K562 cells with IC50 values of 4.5 ± 0.1 μM This result suggests the potential of 2e for future application in the treatment of cancer In addiation, further investigation is needed to determine mechanisms underlying this effect and the most effective concentrations Disclosure statement No potential conflict of interest was reported by the authors Funding The study was supported by Science and Technology Incubator Youth Program, managed by the Center for Science and Technology Development, Ho Chi Minh Communist Youth Union, the contract number is " 03/2018 / HĐ-KHCN-VƯ " References Bazin MA, Lamer ACL, Delcros JG, Rouaud I, Uriac P, Boustie J, Corbel JC, Tomasi S 2008 Synthesis and cytotoxic activities of usnic acid derivatives, Bioorg Med Chem 16:6860– 6866 Boustie J, Tomashi S, Grube M 2011 Bioactive lichen metabolites: alpine habitats as an untapped source, Phytochem Rev 10:287–307 E b r a h i m HY, Akl MR, Elsayed HE, Hill RA, Sayed KAE 2017 Usnic Acid Benzylidene analogues as potent mechanistic target of rapamycin inhibitors for the control of breast malignancies, J Nat Prod 80:932–952 Ingoífsdotir K 2002 Molecules of interest usnic acid, Phytochemistry 61:729 – 736 Luzina OA, Sokolov DN, Pokrovskii MA, Pokrovskii AG, Bekker OB, Danilenko VN, Salakhutdinov NF 2015 Synthesis and biological activity of usnic acid enamine derivatives, Chem Nat Comp 51:4–10 Muller K 2001 Pharmaceutically relevant metabolites from lichens, Appl Microbiol Biotechnol 56:9–16 Nguyen VK, Duong TH, Nguyen KPP, Sangvichien E, Wonganan P, Chavasiri W 2018 Chemical constituents of the lichen Usnea baileyi (Stirt.) Zahlbr, Tetrahedron Lett 59:1348– 1351 Skehan P, Storeng R, Scudiero D, Monks A, McMahon J, Vistica D, Warren JT, Bokesch H, Kenney S, Boyd MR 1990 New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening JNCI-J Natl Cancer I 82:1107-1112 Sokolov DN, Zarubaev VV, Shtro AA, Polovinka MP, Luzina OA, Komarova NI, Salakhutdinov NF, Kiselev OI 2012 Anti-viral activity of (-)- and (+)-usnic acids and their derivatives against influenza virus A (H1N1) 2009, Bioorg Med Chem Lett 22:7060–7064 Shtro AA, Zarubaev VV, Luzina OA, Sokolov DN, Kiselev OI, Salakhutdinov NF 2014 Novel derivaties of usnic acid effectively inhibiting reproduction of influenza A virus, Bioorg Med Chem 22:6826–6836 Vanga NR, Kota A, Sistla R, Uppuluri M 2017 Synthesis and anti-inflammatory activity of novel triazole hybrids of (+)-usnic acid, the major dibenzofuran metabolite of the lichen Usnea longissima, Mol Divers 21:273–282