Nghiên cứu quy trình phân tích triglixerit chứa gốc axit béo không no liên hợp trong dầu hạt và định hướng ứng dụng trong sản xuất sữa thực vật

ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH SỞ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH PHÂN TÍCH TRIGLIXERIT CHỨA GỐC AXIT BÉO KHƠNG NO LIÊN HỢP TRONG DẦU HẠT VÀ ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT SỮA THỰC VẬT Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Nguyễn Văn Anh Thành phố Hồ Chí Minh - 2022 ỦY BAN NHÂN DÂN THÀNH ĐỒN TP HỒ CHÍ MINH THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TRẺ CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP THÀNH PHỐ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH PHÂN TÍCH TRIGLIXERIT CHỨA GỐC AXIT BÉO KHÔNG NO LIÊN HỢP TRONG DẦU HẠT VÀ ĐỊNH HƯỚNG ỨNG DỤNG TRONG SẢN XUẤT SỮA THỰC VẬT (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày 03/12/2022) Chủ nhiệm nhiệm vụ: Chủ tịch Hội đồng nghiệm thu (Ký ghi rõ họ tên) Nguyễn Văn Anh Cơ quan chủ trì nhiệm vụ Đồn Kim Thành Thành phố Hồ Chí Minh- 2022 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KH&CN I THÔNG TIN CHUNG Tên nhiệm vụ: Nghiên cứu quy trình phân tích triglixerit chứa gốc axit béo khơng no liên hợp dầu hạt định hướng ứng dụng sản xuất sữa thực vật Thuộc: Chương trình/lĩnh vực (tên chương trình/lĩnh vực): Vườn ươm Sáng tạo Khoa học Công nghệ trẻ Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: Nguyễn Văn Anh Ngày, tháng, năm sinh: 16/08/1990 Nam/ Nữ: Nam Học hàm, học vị: Tiến Sỹ Chức danh khoa học: Chức vụ: Giảng viên Điện thoại: 0862932359 E-mail: anhnv@fst.edu.vn Đại học công nghiệp thực phẩm TP.Hồ Chí Minh Địa liên lạc quan: 140 Lê Trọng Tấn, Tây Thạnh, Tân Phú, Hồ Chí Minh Địa nhà riêng: 306 Vườn Lài, Phú Thọ Hòa, Tân Phú, Hồ Chí Minh Tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ Điện thoại: 028.38.233.363 E-mail: khoahoctre@gmail.com Website: khoahoctre.com.vn Địa chỉ: Số Phạm Ngọc Thạch, P Bến Nghé, Q.1, Tp Hồ Chí Minh Họ tên thủ trưởng tổ chức: ĐOÀN KIM THÀNH Số tài khoản: 3713.0.1083277.00000 Kho bạc: Nhà nước Quận 1, Tp Hồ Chí Minh Tên quan chủ quản đề tài: Sở khoa học cơng nghệ TP Hồ Chí Minh II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng 12 năm 2021 đến 30 tháng 11 năm 2022 - Thực tế thực hiện: từ tháng 12 năm 2021 đến 30 tháng 10 năm 2022 - Được gia hạn (nếu có): Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện: 90 tr.đ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học: 90 tr.đ + Kinh phí từ nguồn khác: tr.đ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, (Tr.đ) năm) 12/202145 6/2022 6/2022 45 11/202 Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 12/20216/2022 6/2022 11/202 Ghi (Số đề nghị toán) 45 45 c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đối với đề tài: Đơn vị tính: đồng Số TT Nội dung khoản chi Theo kế hoạch NSKH Nguồn Tổng NSKH Nguồn khác khác Trả công lao động 82,38 82,386 82,38 82,386 (khoa học, phổ 6,570 ,570 6,570 ,570 thông) Nguyên, vật liệu, 0 0 0 lượng Thiết bị, máy móc 0 0 0 Xây dựng, sửa 0 0 0 chữa nhỏ Chi khác 7,613 7,613, 7,613 7,613, ,430 430 ,430 430 Tổng cộng 90,00 90,000 90,00 90,000 0,000 ,000 0,000 ,000 - Lý thay đổi (nếu có): Tổng Thực tế đạt Các văn hành q trình thực đề tài/dự án: (Liệt kê định, văn quan quản lý từ công đoạn xét duyệt, phê duyệt kinh phí, hợp đồng, điều chỉnh (thời gian, nội dung, kinh phí thực có); văn tổ chức chủ trì nhiệm vụ (đơn, kiến nghị điều chỉnh có) Số Số, thời gian ban TT hành văn 20/2021/HĐKHCNT-VƯ, 8/12/2022 Tên văn Ghi Hợp đồng thuê khoán Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Số TT Tên tổ chức Tên tổ chức đăng ký theo tham gia thực Thuyết minh Nội dung tham gia chủ yếu Sản phẩm chủ yếu đạt Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, không 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Vũ Thị Ngọc Ánh Tên cá nhân tham gia thực Vũ Thị Ngọc Ánh Nội dung tham gia Nội dung 1, 2, 4, 6, Phan Thế Duy Phan Thế Duy Nội dung 1, 2, Nguyễn Đông Triều Nguyễn Đông Nội dung 3, Triều 4, Đinh Nguyễn Thanh Thanh Đinh Nguyễn Thanh Thanh Nội dung 2, 4, Sản phẩm chủ yếu đạt Sản phẩm nội dung 1, 2, 4, 6, Sản phẩm nội dung 1, 2, Sản phẩm nội dung 3, 4, Sản phẩm nội dung 2, 4, Ghi chú* - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đồn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Theo kế hoạch Thực tế đạt Số (Nội dung, thời gian, kinh (Nội dung, thời gian, TT phí, địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) Báo cáo kết đề tài vườn Báo cáo kết đề tài ươm đợt 1, 14/10/2022, Số vườn ươm đợt 1, 197 Tôn Thất Thuyết, 14/10/2022, Số 197 Tôn Phường 3, Quận 4, TP Hồ Thất Thuyết, Phường 3, Chí Minh Quận 4, TP Hồ Chí Minh Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục 15 thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng … năm) Theo kế Thực tế hoạch đạt 11/202111/202112/2022 12/2022 Xây dựng thuyết minh chi tiết Nội dung 2: Nghiên cứu quy 1/2022trình chiết dầu hạt chứa axit 5/2022 béo ClnA nhằm hạn chế biến đổi axit có dầu - Nội dung 2.1: Thu hái chuẩn bị hạt cho trình chiết (hạt gấc, hạt lựu) - Nội dung 2.2: Nghiên cứu quy trình chiết dầu phương pháp chiết dung mơi nhiệt độ phịng: Các yếu tố khảo sát: loại dung môi (hexan, dichlomethan; aceton); tỉ lệ dung môi; số lần chiết – hàm 1/20225/2022 Người, quan thực Nguyễn Văn Anh Vũ Thị Ngọc Ánh Nguyễn Văn Anh Vũ Thị Ngọc Ánh Đinh Nguyễn Thanh Thanh mục tiêu tổng hàm lượng lipid thu Nội nung 3: Đánh giá hiệu 1/2022quả quy trình chiết dầu 5/2022 hạt đề xuất 1/20225/2022 Phan Thế Duy Nguyễn Đông Triều 1/20225/2022 Vũ Thị Ngọc Ánh Đinh Nguyễn Thanh Thanh Nội dung 3.1: Đánh giá số dầu phân tích được: độ pH, số axit, chiết suất, số iot, số xà phịng hóa - Nội dung 3.2: Chiết dầu phương pháp chiết soxhlet, so sánh số dầu thu với phương pháp chiết nhiệt độ phòng Nội dung 4: Nghiên cứu 1/2022phương pháp tinh chế dầu 5/2022 chuẩn bị cho q trình phân tích thành phần triglixerit chứa gốc axit béo chứa nối đôi liên hợp phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo - Nội dung 4.1 Xây dựng phương pháp phát nhanh có mặt gốc axit béo liên hợp dầu hạt phương pháp phổ UV-VIS - Nội dung 4.2 Nghiên cứu phương pháp tinh dầu kỹ thuật chiết pha rắn (SPE) sử dụng pha tĩnh silicagel trước phân tích HPLC + Nghiên cứu trình hấp phụ triglixerit cột chiết pha rắn + Nghiên cứu trình rửa giải triglixerit cột chiết pha rắn + Đánh giá hiệu làm Nguyễn Đơng Triều q trình chiết pha rắn sử dụng phương pháp HPLC Nội dung 5: Xây dựng quy 6/2022trình phân tích thành phần 9/2022 triglixerit chứa gốc axit béo chứa nối đôi liên hợp phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo 6/20229/2022 Phan Thế Duy Nguyễn Thanh Thanh 6/20229/2022 Nguyễn Văn Anh Vũ Thị Ngọc Ánh Nguyễn Đông Triều 9/202210/2022 Phan Thế Duy Nguyễn Văn Anh - Nội dung 5.1 Phân tích định tính triglixerit dầu hạt sau làm - Nội dung 5.2 Phân tích định lượng triglixerit dầu hạt Nội dung 6: Nghiên cứu bước 6/20229/2022 đầu ứng dụng dầu chiết sản xuất sữa hạt chứa axit béo không no liên hợp - Nôi dung 6.1 Chiết protein từ hạt để làm chất nhũ hóa - Nơi dung 6.2 Lựa chọn điều kiện để thu hệ nhũ tương ổn định: tỉ lệ chất nhũ hóa, tỉ lệ chất béo nước, hàm lượng triglixerit chứa gốc axit liên hợp, phương pháp đồng hóa - Nội dung 6.3 Nghiên cứu bổ sung thành phần khác vào hệ nhũ tương để thu thông số cảm quan đạt tiêu chuẩn: đường, tween Báo cáo tổng kết đề tài 9/202210/2022 - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA NHIỆM VỤ Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Tên sản phẩm Số Đơn tiêu chất lượng TT vị đo chủ yếu Sữa hạt chứa axit ml béo có nối đôi liên hợp Số lượng 250 Theo kế hoạch 250 Thực tế đạt 250 - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số TT Tên sản phẩm Quy trình phân tích triglixerit chứa nối đôi liên hợp hạt phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao pha đảo Yêu cầu khoa học cần đạt Theo kế Thực tế hoạch đạt - Quy trình bao gồm bước: - Quy trình bao gồm bước: + Chiết dung môi đảm bảo không làm phân hủy axit chứa nối đôi liên hợp, hiệu suất chiết 90% + Chiết dung môi đảm bảo không làm phân hủy axit chứa nối đôi liên hợp, hiệu suất chiết 90% + Quá trình tinh triglixerit phương pháp chiết pha rắn hiệu suất thu hồi đạt hiệu suất 80%, hàm lượng triglixerit đạt 90% + Phương pháp định tính định lượng triglixerit chứa axit béo + Quá trình tinh triglixerit phương pháp chiết pha rắn hiệu suất thu hồi đạt hiệu suất 80%, hàm lượng triglixerit đạt 90% + Phương pháp định tính định lượng triglixerit chứa axit béo Ghi chứa nối đôi liên hợp sử dụng phương pháp chuẩn hóa diện tích chứa nối đơi liên hợp sử dụng phương pháp chuẩn hóa diện tích - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Yêu cầu khoa học cần đạt Tên sản phẩm Theo Thực tế kế hoạch đạt Bài báo tạp chí Đạt yêu cầu Đã đăng quốc tế phản biện Bài báo đăng tạp chí nước Đã đăng Số lượng, nơi công bố (Tạp chí, nhà xuất bản) 01, tạp chí Turkish Journal of Chemistry 02, Tạp chí khoa học, Đại học quốc gia Hà Nội (VNU Journal of Science); Tạp chí Khoa học công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP.Hồ Chí Minh - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ Số lượng Theo kế Thực tế đạt hoạch 0 0 - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Ghi (Thời gian kết thúc) 10 [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] N V Anh, V T N Anh / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol , No (20 .) 1-10 Acid Linked to Animal and Human Health, Crit Rev Food Sci Nutr., Vol 57, No 13, 2017, pp 2737-2748, https://doi.org/10.1080/10408398.2015.1060190 A A Hennessy, R P Ross, R Devery, C Stanton, The Health Promoting Properties of the Conjugated Isomers of α-linolenic Acid, Lipids, Vol 46, 2011, pp 105-119, https://doi.org/10.1007/s11745-010-3501-5 K Koba, A Akahoshi, M Yamasaki, et al., Dietary Conjugated Linolenic Acid in Relation to CLA Differently Modifies Body Fat Mass and Serum and Liver Lipid Levels in Rats, Lipids, Vol 37, 2002, pp 343-35, https://doi.org/10.1007/s11745-002-0901-7 N Shinohara, T Tsuduki, J Ito et al., Jacaric Acid, a Linolenic Acid Isomer with a Conjugated Triene System, Has a Strong Antitumor Effect in Vitro and in Vivo, J Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Molecular and Cell Biology of Lipids, Vol 1821, No 7, 2012, pp 980-988, https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2012.04.001 A A Hennessy, R P Ross, P R Fitzgerald, G F Stanton, Sources and Bioactive Properties of Conjugated Dietary Fatty Acids, Lipids, Vol 51, 2016, pp 377-339, https://doi.org/10.1007/s11745-016-4135-z G F Yuan, X E Chen, D Li, Conjugated Linolenic Acids and Their Bioactivities: A Review, Food Funct, Vol 5, 2014, pp 1360-1368, https://doi.org/10.1039/c4fo00037d A Ferlay, L Bernard, A Meynadier, M B Corinne, Production of Trans and Conjugated Fatty Acids in Dairy Ruminants and Their Putative Effects on Human Health: A Review, Biochimie, Vol 141, 2017, pp 107-120, https://doi.org/10.1016/j.biochi.2017.08.006 M J L García, R Lusardi, E Chiavaro, et al., Use of Triacylglycerol Profiles Established by High Performance Liquid Chromatography with Ultraviolet-visible Detection to Predict the Botanical Origin of Vegetable Oils, J Chromatogr A, Vol 1218, No 42, 2011, pp 7521-7527, https://doi.org/10.1016/j.chroma.2011.07.078 T J Jacks, T P Hensarling, L Y Yatsu, Cucurbit Seeds: I Characterizations and uses of Oils and Proteins, A Review, Econ Bot, Vol 26, 1972, pp 135-141, https://doi.org/10.1007/BF02860774 [11] M J Chisholm, C Y Hopkins, Conjugated [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] Fatty Acids in some Cucurbitaceae Seed Oils, Canadian Journal of Biochemistry, Vol 45, No 7, 1967, pp 1081-1086, https://doi.org/10.1139/o67-125 B Matthaus, K Vosmann, L Q Pham, K Aitzetmüll, FA and Tocopherol Composition of Vietnamese Oilseeds, Journal of the American Oil Chemists’ Society, Vol 80, No 10, 2003, pp 1013-1020, https://doi.org/10.1007/s11746-003-0813-y V I Deineka, V M Staroverov, G M Fofanov, et al., An Increment Approach to the HPLC Analysis of Triglycerides, Pharmaceutical Chemistry Journal, Vol 36, 2002, pp 392-395, https://doi.org/10.1023/A:1021004516406 A V Nguyen, V I Deineka, L A Deineka, Spectrophotometric Determination of Oils with Radicals of Conjugated Octadecatrienoic Acids, J Appl, Spectrosc., 85, 2018, 483-487, https://doi.org/10.1007/s10812-018-0676-7 A V Nguyen, V I Deineka, L A Deineka, A T N Vu, Comparison of Separation of Seed Oil Triglycerides Containing Isomeric Conjugated Octadecatrienoic Acid Moieties by Reversed-phase HPLC, Separations, Vol 4, 2017, pp 37, https://doi.org/10.3390/separations4040037 N K Freeman, Applications of Infrared Absorption Spectroscopy in the Analysis of Lipids, J Am Oil Chem Soc, Vol 45, 1968, pp 798-809, https://doi.org/10.1007/BF02631958 V I Deineka, A V Nguyen, L A Deineka, Model of a Reversed Phase Grafted on Silica Gel Russ J Phys Chem., Vol 93, 2019, pp 2490-2493 https://doi.org/10.1134/S0036024419120057 Y G Joh, S L Kim, W W Christie, The Structure of the Triacylglycerols, Containing Punicic Acid, in the Seed Oil of Trichosanthes kirilowii, J Am Oil Chem Soc., Vol 72, 1995, pp 1037-1042, https://doi.org/10.1007/BF02660718 N V Anh, V T N Anh / VNU Journal of Science: Natural Sciences and Technology, Vol , No (20 .) 1-10 11 NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHUẨN BỊ MẪU DẦU HẠT CHỨA ACID BÉO CĨ NỐI ĐƠI LIÊN HỢP TRONG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HPLC Vũ Thị Ngọc Ánh1, Phan Thế Duy2, Ngô Thị Tú Trinh3, Nguyễn Văn Anh2,* Trung tâm nhiệt đới Việt Nga - Chi nhánh phía Nam Đại học cơng nghiệp Thực phẩm TP Hồ Chí Minh Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ * Ngày nhận bài: Email: anhnv@hufi.edu.vn ; Ngày chấp nhận đăng: TĨM TẮT Acid béo chứa nối đơi liên hợp chứng minh có nhiều hoạt tính sinh học quý khả chống ung thư, giảm béo phì, tiểu đường tăng cường hệ miễn dịch Tuy nhiên nhóm hợp chất nhạy cảm với yếu tố bên (nhiệt độ, ánh sáng), dễ bị phân hủy trình tách, chiết xử lý mẫu phân tích Trong nghiên cứu này, quy trình chuẩn bị mẫu nhanh, hiệu phục vụ cho q trình phân tích thành phần triacylglycerol chứa acid béo có nối đơi liên hợp có dầu hạt nghiên cứu nhằm hạn chế biến đổi, phân hủy nhóm hợp chất Quy trình chuẩn bị mẫu đề xuất gồm giai đoạn: xác định nhanh có mặt acid béo có nơi đơi liên hợp có dầu hạt; chiết dầu hạt phương pháp chiết dung môi nhiệt độ thường; làm dầu thu phương pháp chiết pha rắn sử dụng silicagel làm pha tĩnh Kết rằng, đặc trưng phổ hấp thụ phân tử dầu hạt n-hexanee vùng bước sóng 220-400nm sử dụng để phát nhanh có mặt gốc acid béo có nối đơi liên hợp dầu Dầu hạt chiết phương pháp chiết dung môi nhiệt độ thường với dung mơi có độ phân cực khác nhau: n-hexanee; dichloromethane; acetone; so sánh với phương pháp chiết Soxhlet truyền thống Phương pháp chiết pha rắn sử dụng silicagel làm pha tĩnh sử dụng để tinh chế dầu hạt trước tiến hành phân tích phương pháp HPLC Hoạt tính xúc tác silicagel với chất hấp phụ pha tĩnh cột chiết pha rắn kiểm sốt thảo luận Từ khóa: Chuẩn bị mẫu, chiết pha rắn, dầu hạt, triacylglycerol, acid béo chứa nối đôi liên hợp MỞ ĐẦU Acid béo không bão hòa đa (Polyunsaturated Fatty Acid) (PUFA) hợp chất tiềm cho công nghiệp dược phẩm chúng acid thiết yếu, tốt cho sức khỏe, thể người khơng có khả tự tổng hợp Đặc biệt acid béo chứa nối đôi liên hợp (Conjugated Fatty acid (CFA)) chứng minh có nhiều hoạt tính sinh học quý: khả chống ung thư, béo phì, tiểu đường tăng cường hệ miễn dịch [1-4] Chính vậy, dầu hạt chứa acid béo gốc acid béo không no với nối đôi liên hợp nguồn nguyên liệu quan trọng công nghiệp dược phẩm Tuy nhiên, CFA triacylglycerol (TG) chứa gốc CFA dễ bị biến đổi nhiệt, dễ bị phân hủy trình tách, chiết xử lý mẫu phân tích [5] Do đó, phân tích hợp chất trình xử lý chuyển hóa mẫu cần nghiên cứu cẩn thận để tránh bị phân hủy, từ dẫn đến kết phân tích xác Phân tích trực tiếp thành phần triacylglycerol dầu thực vật có vai trị quan trọng đánh giá chất lượng dầu hạt phương pháp sở hữu nhiều ưu điểm như: cung cấp thông tin thành phần acid béo dầu, tránh biến đổi số PUFAs (đặc biệt acid béo có nối đơi liên hợp) không cần thiết phải xử lý mẫu để chuyển hóa TGs thành methyl ester acid béo (q trình thường địi hỏi tác nhân mạnh, dễ gây biến đổi thành phần acid béo thành phần triacylglycerol) [6] Ngồi ra, phân tích phần triacylglycerol cung cấp thông tin tổ hợp gốc acid béo mạch glixerol, đặc trưng quan trọng sử dụng phân tích tính thật giả mẫu chất béo [7,8] Phương pháp HPLC chứng minh phù hợp để phân tích thành phần triacylglycerol dầu thực vật [9,10] Để tiến hành phân tích thành phần triacylglycerol có dầu thực vật, cơng đoạn chuẩn bị mẫu thường tiến hành qua giai đoạn Đầu tiên mẫu tiến hành chiết phần chất béo hạt phương pháp chiết khác Các phương pháp thường sử dụng để chiết thành phần triacylglycerol từ hạt ép dầu từ hạt (thường tiến hành với loại hạt có hàm lượng dầu cao) [11]; chiết dung môi nhiệt độ cao sử dụng chiết shoxlet [12] Ngoài ra, số trường hợp đặc biệt phương pháp ép lạnh chiết siêu tới hạn sử dụng dung môi CO2 áp dụng thành công [13] Trong trình chiết dầu từ hạt phương pháp ép chiết dung môi thường thu hỗn hợp chất phức tạp Trong có hợp chất làm bẩn thành phần dầu, gây cản trở q trình phân tích thành phần dầu Chính để thu dầu tinh khiết cần phải tiến hành làm dầu phương pháp khác Kĩ thuật chiết pha rắn phương pháp nhanh đơn giản để chuẩn bị mẫu cho q trình phân tích phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao [14] Tuy nhiên, nghiên cứu đề cập đến trình chiết pha rắn áp dụng cho việc tách lipid mơ tả cách sơ sài khó lặp lại thành công tác giả không đưa thông tin tối thiểu, bao gồm việc chọn cột chiết pha rắn, điều kiện pha, thể tích lượng mẫu đưa vào, dung mơi rửa giải thích hợp Sử dụng silicagel với vai trị pha tĩnh chiết pha rắn để làm mẫu dầu đề cập đến nghiên cứu trước [15] Nếu sử dụng pha rắn silicagel triacylglycerol chứa ba nhóm ester tách khỏi hợp chất phân cực di- monoacylglycerol, acid tự phospholipid [16] Tuy nhiên theo nghiên cứu khảo sát chúng tôi, số hợp chất không no với nối đôi liên hợp (như carotenoid) sử dụng silicagel làm pha tĩnh chúng bị phân hủy nhanh Vì sử dụng silicagel với vai trò chất hấp phụ cần phải kiểm sốt hoạt tính chúng với chất mà hấp phụ Mục đích báo nghiên cứu để đưa quy trình chuẩn bị mẫu nhanh, hiệu phục vụ cho trình phân tích thành phần triacylglycerol có dầu hạt, hạn chế biến đổi phân hủy acid béo có nối đơi liên hợp Quả gấc (Momordica cochinchinensis (Lour.) Spreng) loại thực phẩm dùng nhiều ăn truyền thống Việt Nam số nước khu vực Đông Nam Á Nhiều nghiên cứu rằng, hàm lượng β-carotenoid cơm gấc cao (gấp 70 lần cà chua) [17], phần cơm gấc sử dụng trực tiếp cho thực phẩm dạng dầu cơm gấc Ở nước ta, hạt gấc chưa sử dụng coi phụ phẩm nông nghiệp, y học cổ truyền hạt gấc sử dụng nguyên liệu số thuốc Trong nghiên cứu này, dầu hạt gấc chọn làm đối tượng nghiên cứu nghiên cứu gần dầu hạt gấc không chứa acid béo với nối đôi liên hợp [17] cơng bố trước cho thấy dầu hạt mướp đắng (một loài chi momordica với gấc) chứa hàm lượng lớn α-eleostearic acid [18] Vì vậy, báo chúng tơi tập trung đến việc chuẩn bị mẫu trước phân tích triacylglycerol phương pháp HPLC: chiết làm dầu để hạn chế biến đổi chất phân tích q trình nghiên cứu HĨA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ THỰC NGHIỆM 2.1 Hóa chất thiết bị Hạt gấc (momordica cochinchinesis) thu hái địa phân tỉnh bến tre vào năm 2021 n-hexanee, dichloromethane, (tinh khiết hóa học), Isopropanol, acetonitrile (Sigma- Mĩ), hóa chất cịn lại sử dụng thuộc loại tinh khiết hóa học Cột chiết pha rắn DIAPAK C (BioChemMac CT, Moscow), nhồi silicagel (0,52g silicagel/cột) Silicagel thương mại KCМG: dạng hạt với khoang rỗng nhỏ, silicagel КСКG: dạng hạt với khoang rỗng lớn (tinh khiết hóa học) Hệ thống sắc kí điều chế Shimadzu LC20, cột điều chế 250×10 mm, SUPELCOSILTMLC-18, đầu dị điot quang Hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Agilent 1200 Infinity với đầu dò PDA, kết nối với khối phổ, cột tách 250×4 mm, Kromasil 100-5C18 Máy đo quang phổ UV-VIS, Shimadzu UV 2401 2.1.2 Thực nghiệm Hạt gấc thu gom sấy khô nhiệt độ 40oC tủ sấy, sau bóc bỏ vỏ cứng bên ngoài, phần nhân bên nghiền nhỏ rây (sử dụng rây sàng đường kính 0.5mm) Bột nhân hạt gấc trộn sử dụng cho trình chiết Để tránh phân hủy hợp chất liên hợp bền, dầu hạt gấc chiết n-hexane cối sứ nhiệt độ phịng nghiền hạt gấc với dung mơi Sau lọc bỏ cặn đuổi hết dung mơi máy chưng cất chân không thu dầu dạng thô Quá trình chiết pha rắn sử dụng với cột chiết pha rắn DIAPAK C (BioChemMac CT, Moscow) Trước q trình chiết, hoạt hóa cột mL n-hexane, sau dẫn 20 mL dung dịch dầu (hịa tan n-hexane) nồng độ 10 mg/mL qua cột chiết pha rắn theo lượng thể tích mL Xác định hàm lượng dầu hấp phụ cột chiết pha rắn theo lượng thể tích phương pháp quang phổ UV bước sóng 270nm Tổng khối lượng dầu hấp phụ cột tính tổng khối lượng dầu hấp phụ theo lượng thể tích chảy qua xác định lại phương pháp cân khối lượng để đối chiếu Rửa giải dầu dung môi dichloromethane theo phần thể tích mL Dầu thu làm bay dung môi sử dụng máy cất quay chân không giữ lạnh đến đem phân tích Để đánh giá q trình lưu giữ dầu trạng thái bị hấp phụ silicagel, từ dầu sau làm tiến hành tách riêng thành phần di-α-eleostearat-stearat (αE2S) hệ thống sắc kí điều chế Shimadzu LC20 sử dụng pha động 50% isopropanol 50% acetonitrile với đầu dò diode quang bước sóng 270 nm Từ thành phần thu chuẩn bị dung dịch α-E2S n-hexane (3mg/mL) Lấy 1mL dung dịch chuẩn bị cho vào chai đựng mẫu vials thêm vào 0.2 g pha rắn (silicagel) với ba nhãn hiệu khác (silicagel KCМG: dạng hạt với khoang rỗng nhỏ, silicagel КСКG: dạng hạt với khoang rỗng lớn, silicagel cột chiết pha rắn DIAPAK C), đậy nắp, giữ nhiệt độ phòng để tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng Sau khoảng thời gian nghiên cứu, gạn bỏ phần dung môi khỏi pha tĩnh, giải hấp acetone, sau loại bỏ acetone hòa tan mẫu pha động để tiến hành chạy sắc kí HPLC Xác định thành phần triacylglycerol dầu hạt gấc phương pháp sắc kí hiệu cao pha đảo (RP-HPLC) sử dụng dầu hạt mướp đắng làm dầu chuẩn Mẫu phân tích hệ thống HPLC Agilent 1200 Infinity với đầu dò PDA đầu dị khối phổ, cột tách 250×4.0 mm, Kromasil 100-5C18, dung môi 40% isopropanol 60% acetonitrile, nhiệt độ cột 30oC, thể tích tiêm mẫu 20μl, nồng độ dầu 1mg/mL, bước sóng 270 nm Đầu dị khối phổ chạy điều kiện hỗn hợp: ion hóa hóa học áp suất khí ion hóa điều kiện phun mù electron với chế độ làm việc chuẩn điện 150V, tín hiệu đo với ion dương Tất phép chạy mẫu HPLC sử dụng chế độ đẳng dịng Sắc kí đồ ghi, lưu trữ tính tốn sử dụng phần mềm ChemStation Quy trình chuẩn bị mẫu cho q trình phân tích dầu hạt chứa acid béo có nối đơi liên hợp phương pháp HPLC đề xuất gồm giai đoạn - Giai đoạn 1: Xác định nhanh có mặt acid béo có nối đơi liên hợp có dầu hạt - Giai đoạn 2: Chiết dầu hạt phương pháp chiết dung môi nhiệt độ thường - Giai đoạn 3: Làm dầu thu phương pháp chiết pha rắn sử dụng silicagel làm pha tĩnh, có ý đến hoạt tính xúc tác silicagel lên chất phân tích Quy trình tổng qt thể hình Hạt (2g) Chiết với 20mL n-hexane Dịch chiết nhexane Có mặt CFA Lặp lại trình chiết lần Tổng Dịch chiết dầu Qt phổ UV (220nm-400nm) Khơng có mặt CFA Bỏ Cơ quay chân không Dầu hạt thô Xác định hàm lượng lipid tổng Chiết pha rắn Dầu Phân tích thành phần TG HPLC Hình Quy trình chuẩn bị mẫu cho q trình phân tích dầu hạt chứa acid béo có nối đơi liên hợp phương pháp HPLC Triacylglycerol kí hiệu hóa hệ thống chữ đại diện cho gốc acid béo (khơng có khác vị trí gốc phân tử) Kí hiệu αE βE biểu thị cho gốc С18:39Z11E13E ((9Z,11E,13E)-octadeca-9,11,13-trienoic) С18:39Е11E13E ((9E,11E,13E)-octadeca9,11,13-trienoic), tương tự: L-linoneic (С18:29Z12Z), О – oleic (С18:29Z), P – pamitinoic (С16:0) и Sstearic (С18:0) Ví dụ cơng thức αE2S kí hiệu triacylglycerol chứa gốc α-eleostearic gốc stearic KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Xác định nhanh có mặt acid béo có nơi đơi liên hợp có dầu hạt Một điểm khác đặc biệt hợp chất chứa nối đôi liên hợp so với hợp chất không no thông thường nằm cấu trúc phổ dao động electron chúng [19], với vùng hấp thụ tương ứng bước chuyển electron từ trạng thái dao động electron trạng thái theo “ hướng dọc” (tức trễ thay đổi cấu hình hạt nhân thay đổi trạng thái electron) bước chuyển lúc lên nhiều trạng thái dao động khác trạng thái kích thích electron (hình 2) Hình Sơ đồ bước chuyển lượng dao động electron (A) phổ hấp thụ phân tử hợp chất chứa ba nối đôi liên hợp (B) Kết rằng, phổ hấp thụ electron gốc chứa nối đôi liên hợp hấp thụ mạnh vùng 240-290 nm với số lượng đỉnh hấp thụ phụ thuộc vào số lượng nối đơi liên hợp hệ cấu hình cis-trans nối đôi C=C hệ liên hợp Từ nghiên cứu trước [9, 10] rằng, tất loại dầu có acid octadecatrienoic liên hợp có phổ dao động điện tử với ba đỉnh phổ rõ ràng Bước sóng cực đại đỉnh phổ phụ thuộc vào loại cấu hình cis-trans liên kết C=C hệ liên hợp thay đổi không nhiều dung mơi khác Sự thay cấu hình trans- hệ liên hợp cấu hình cis gây dịch chuyển đỏ (bathochromic) phổ hấp thụ phân tử [9] Ngồi ra, có phụ thuộc gần bước sóng cực đại hấp thụ chiều dài chuỗi liên hợp Sự liên hợp gây thay đổi sắc độ dải hấp thụ, tỷ lệ với số liên kết đôi hệ thống liên hợp nhóm mang màu phân tử Trong nghiên cứu này, phổ hấp thụ triacylglycerol chứa gốc axit béo có nối đơi liên hợp với độ dài mạch liên hợp khác đo dung môi pha động (isopropanol: acetonitrile; 30:70 v/v) Phổ hấp thụ phân tử 9-hydroxy-10E,12E-octadecadienoic acid (a), 9E,11E,13E-octadecatrienoic acid (b) acid 9E,11E,13E,15E-octadecatetraennoic acid (c) trình bày hình Giữa bình phương bước sóng cực đại hấp thụ số liên kết đôi hệ thống liên hợp cho cấu hình tương tự liên kết C = C có phụ thuộc [20]: λмах2 = А + В × n với n số liên kết đơi liên hợp nhóm mang màu phân tử A, B hệ số phương trình hồi quy Hình Phổ hấp thụ phân tử gốc acid béo chứa nôi đôi liên hợp (a) gốc acid chứa nối đôi C=C liên hợp (gốc ; (b) gốc acid chứa nối đôi C=C liên hợp; (c) gốc acid chứa nối đôi C=C liên hợp Chính vậy, đặc điểm đặc trưng phổ hấp thụ phân tử sử dụng để xác định nhanh chóng có mặt gốc chứa nối đôi C=C liên hợp dầu hạt Để phục vụ cho mục đích này, khoảng g nhân hạt nghiền nhỏ khuấy trộn với n-hexane vịng phút, sau dịch chiết lọc qua giấy lọc tiến hành đo phổ UV khoảng bước sóng từ 220 nm400nm để phát có mặt acid béo chứa nối đôi liên hợp dầu hạt Khi xuất vùng phổ hấp thụ vùng bước sóng với hình dạng phổ đặc trưng bước đầu kết luận có mặt gốc chứa acid béo có nối đơi liên hợp thành phần triacylglycerol 3.2 Chiết dầu hạt phương pháp chiết dung môi nhiệt độ thường Phương pháp chiết dung môi sử dụng rộng rãi phịng thí nghiệm để chiết chất có hoạt tính sinh học ngun liệu Trong đó, hàm lượng lipid tổng từ nguyên liệu hạt thường xác định phương pháp chiết dung môi nhiệt độ cao sử dụng chiết Soxhlet Tuy nhiên, phương pháp này, dầu hạt tiếp xúc với dung môi nhiệt độ cao, thời gian dài (8-10 giờ) nên dễ bị biến đổi, oxi hóa q trình chiết, đặc biệt với dầu có hàm lượng acid béo khơng bão hịa đa cao, chứa acid béo có nối đơi liên hợp Chính vậy, nghiên cứu tiến hành chiết dầu dung môi nhiệt độ thường, sử dụng chày cối sứ để chiết dầu hạt Nghiên cứu tiến hành với dung môi với độ phân cực tăng dần n-hexane (P=0,1), dichloromethane (P=3.1), acetone (P=5.1) (P- giá trị đánh giá độ phân cực dung môi theo Claidrom [21]) để chiết dầu từ hạt gấc Kết rằng, với thể tích dung mơi sử dụng nhau, khác tổng phần trăm chiết xảy với lần chiết Trong ba lần chiết độ phân cực dung mơi tăng lượng dầu chiết tăng theo Điều khơng có mâu thuẫn với ngun tắc chiết trình bày Trong lần khuấy trộn hạt (đã nghiền nhỏ) với dung mơi dung mơi phân cực dễ dàng thẩm thấu phá vỡ tế bào dầu (oil body) hạt Tuy nhiên sau vài lần chiết lớp vỏ tế bào dầu bị phá vỡ việc sử dụng dung mơi phân cực làm tăng hàm lượng tạp chất không cần thiết (các acid tự do, phospholipid…) Tổng thành phần (các triacylglycerol) gần chiết hồn toàn sau lần chiết (98%) Để so sánh mức độ chiết dung môi tiến hành lấy lượng hạt gấc chuẩn bị sẵn Tiến hành chiết lần dung dung môi xác định số đặc điểm dầu thu kết bảng Bảng Kết xác định số đại lượng trình chiết dầu hạt gấc Dung môi chiết n-hexane Dichloromethane acetone Hàm lượng dầu hạt (%) 42.33 42.68 42.70 Chỉ số khúc xạ dầu thu được* 1.5035 1.5041 1.5045 * Chỉ số khúc xạ đo nhệt độ t=27oC Nhận thấy dung môi cho kết xác định hàm lượng dầu nhau, số khúc xạ dầu thu khơng có khác nhiều Chứng tỏ ba dung mơi hồn tồn phù hợp với việc chiết dầu từ hạt Tuy nhiên xét phương diện thuận tiện bảo vệ mơi trường n-hexane có ưu điểm Chính chúng tơi chọn n-hexane làm dung mơi để chiết nghiên cứu sau Sau chúng tơi tiến hành khảo sát phụ thuộc thể tích dung mơi lần chiết vào mức độ chiết dầu hạt Tiến hành chiết dầu hạt gấc n-hexane với lần, thể tích dung mơi lần thêm vào 10 mL 20 mL Sau tiến hành xây dựng đồ thị phụ thuộc lượng dầu thu vào số lần chiết (hình 4A hình 4B) theo phương pháp đo quang A B Hình Hiệu chiết dầu hạt gấc dung mơi hexane; thể tích dung môi lần chiết 10 mL (A) 20mL (B) Kết thu hình 4A 4B trường hợp thể tích dung môi lần chiết 10mL (tỉ lệ khối lượng ngun liệu: dung mơi 1:5) với lần chiết lượng dầu thu khoảng 98% (tức cần dùng hết 60 mL để chiết 98% dầu có hạt gấc) Trong trường hợp chiết 20 mL (tỉ lệ khối lượng nguyên liệu: dung môi 1:10) dung môi lần chiết cần dùng lần chiết (80 mL dung môi) để đạt lượng dầu Khi tiến hành so sánh với số dầu hạt gấc thu hai phương pháp chiết nhiệt độ thường chiết Soxhlet nhiệt độ cao nhận thấy số khúc xạ, số xà phịng hóa số acid không thay đổi Trong đó, số peroxit dầu thu phương pháp chiết Soxhlet cao nhiều so với dầu thu phương pháp chiết dung môi nhiệt độ thường (cao gấp gần 10 lần) Chỉ số peroxit thay đổi bất thường chiết dầu phương pháp chiết Soxhlet oxi hóa, biến đổi acid không no liên hợp chiết dung môi nhiệt độ cao với thời gian kéo dài Chỉ số iodine nhận thấy có giảm so sánh phương pháp chiết Soxhlet nhiệt độ cao so với phương pháp lại, kết bảng Bảng 2: Thông số dầu gấc chiết phương pháp chiết Soxhlet Các số Chiết Soxhlet Chiết dung môi nhiệt độ thường Chỉ số khúc xạ (n) 1.488 1.492 Chỉ số acid (mg KOH/g chất béo) 0.733 0.533 Chỉ số peroxide (mqe/Kg) 12.5 1.2 Chỉ số iodine 175.1 179.1 Chỉ số xà phịng hóa 198.5 196.2 Hàm lượng dầu hạt 43.1±0.4* 42.3±0.5 * biểu diễn kết quả: mean±SD; n=3 Trong trường hợp chiết dầu dung môi, số peroxide dầu hạt thấp chứng tỏ điều kiện chiết phù hợp, không làm biến đổi thành phần dầu Chỉ số iodine tỉ lệ với hàm lượng acid béo khơng no có dầu hạt, với dầu hạt gấc số iodine cao, điều hoàn toàn phù hợp với kết xác định hàm lượng acid béo có dầu hạt gấc [22] Chỉ số khúc xạ dầu thu cao phù hợp với hàm lượng acid béo không no dầu hạt lớn Kết luận hoàn toàn phù hợp với kết số iodine xác định Kết hiệu suất chiết thu theo phương pháp khác khơng có ý nghĩa, phương pháp chiết dung mơi hồn tồn sử dụng để thay cho phương pháp chiết Soxhlet trường hợp dầu chứa thành phần dễ bị ảnh hưởng nhiệt độ Phổ UV-VIS dầu hạt gấc thu hai phương pháp chiết đo dung môi n-hexane để đánh giá biến đổi thành phần acid béo không no chứa nối đôi liên hợp, kết hình Hình Phổ hấp thụ phân tử UV-VIS dầu hạt gấc thu hai phương pháp nhexane Nhận thầy rằng, trường hợp chiết dầu hạt phương pháp chiết Soxhlet xuất vùng hấp thụ mạnh vùng 220-240 nm, vùng hấp thụ vùng 240-300 nm acid béo chứa nơi đơi liên hợp Điều giải thích biến đổi, oxi hóa dầu nhiệt độ cao trình chiết Soxhlet 3.3 Quá trình chiết pha rắn làm dầu hạt gấc Сhuẩn bị dung dịch dầu chưa làm n-hexane với nồng độ 10 mg/mL Sau dẫn mẫu phân tích vào cột chiết pha rắn theo phần thể tích 1mL Xác định hàm lượng dầu dung dịch sau qua cột chiết pha rắn phương pháp phổ hấp thụ điện tử vùng UV (tại cực đại hấp thụ dung môi n-hexane 270 nm) Một đường chuẩn liên hệ nồng độ dầu (mg/mL) mật độ quang A xây dựng bước sóng 270 nm để xác định nồng độ dầu gấc trình chiết pha rắn Ngồi tổng lượng dầu khơng hấp phụ cột xác định lại phương pháp khối lượng Kết thu hình Hình Quá trình hấp thu dầu cột chiết pha rắn DIAPAK C 1- Hàm lượng dầu hấp thu cột theo mL thể tích mẫu qua cột trình tăng thể tích, 2- Tổng khối lượng dầu hấp thu cột trình chiết pha rắn (mg) Từ liệu cho thấy rằng, cột chiết pha rắn hấp phụ hoàn toàn 10 mL dung dịch dầu n-hexane (nồng độ 10 mg/mL) Giới hạn hấp thu cột chiết dầu hạt gấc tính tốn 120 ±2 (P=0.95; n=3) mg/cột chiết (0.5g silicagel) Trong nghiên cứu này, để rửa giải dầu cột chiết sử dụng dung môi dichloromethane rửa giải theo phần thể tích 1mL, điều khiển trình rửa rải phương pháp phổ hấp thụ UV-VIS sắc kí lỏng hiệu cao Kết để rửa giải hoàn toàn dầu cột chiết pha rắn cần sử dụng mL dung môi Dung dịch thu sau rửa giải làm bay dung môi thu dầu suốt không chứa thành phần rắn vẩn đục dầu chưa làm Sau trình chiết pha rắn từ 122 mg dầu chưa làm thu 108 mg dầu sạch, dầu chưa làm chứa khoảng 12% hợp chất phân cực hiệu suất thu hồi sau làm khoảng 88% Ý nghĩa thực nghiệm việc làm dầu hạt gấc mẫu dầu chưa làm sau thời gian cất giữ tủ lạnh (t=10oC) thời gian vài tháng lượng triacylglycerol mẫu dầu chứa ban đầu bị phá hủy lớn (trên 50%), cịn mẫu làm khơng xảy tượng Kiểm sốt hoạt tính xúc tác pha tĩnh dùng cột chiết pha rắn Để đánh giá khả sử dụng silicagel làm pha tĩnh cột chiết pha rắn để làm dầu hạt gấc chúng tơi tiến hành đánh giá q trình chuyển hóa αE2S tiếp xúc với silicagel nhà sản xuất khác với thời gian tiếp xúc khác phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Nghiên cứu tiến hành với loại silicagel với nhãn hiệu khác Kết sau chạy sắc ký đưa hình Hình Quá trình giữ αE2S trạng thái hấp phụ silicagel 1-Dung dịch dầu gốc, sản phẩm sau giải hấp sau 48h với: 2-silicagel nhãn hiệu КСМG; 3- silicagel nhãn КСKG; 4silicagel cột chiết pha rắn DIAPAK C Theo kết hình thấy mẫu dung dịch chuẩn ban đầu tách từ dầu hạt gấc chứa triacylglycerol αE2S, với một lượng nhỏ đồng phân (sắc kí đồ 1), sau thời gian tiếp xúc thời gian 48 với silicagel nhãn hiệu KCМG (sắc kí đồ 2), KCKG (sắc kí đồ 3) silicagel chứa cột chiết pha rắn DIAPAK C (sắc kí đồ 4) phá hủy gần hồn tồn chất phân tích Sau chúng tơi nghiên cứu phụ thuộc mức độ chuyển hóa chất phân tích vào thời gian tiếp xúc chất phân tích với silicagel chứa cột chiết pha rắn để đánh giá khả sử dụng cột chiết pha rắn DIAPAK C trình làm dầu hạt gấc Chúng tơi tiến hành thí nghiệm với thời gian giữ chất phân tích silicagel khác Kết với thời gian tiếp xúc silicagel với α-E2S ngắn mức độ chuyển hóa chất phân tích nhỏ Đồng thời với thời gian tiếp xúc không dài (0.5-1.0 giờ) chất phân tích bị phân hủy khơng đáng kể (nhỏ 1%) Như sử dụng cột chiết pha rắn DIAPAK C để làm dầu chứa gốc acid với nối đôi liên hợp nhiên thời gian tiếp xúc mẫu với pha rắn phải giới hạn KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, quy trình chuẩn bị mẫu cho q trình phân tích triacylglycerol dầu hạt chứa acid béo có nối đơi liên hợp gồm ba giai đoạn nghiên cứu đề xuất Trong giai đoạn 1, có mặt acid béo có nối đơi liên hợp có dầu hạt xác định đo phổ hấp thụ phân tử dịch chiết dầu hạt n-hexane vùng bước sóng 220-400 nm Dầu hạt chứa acid béo có nối đơi liên hợp chiết dung mơi n-hexane nhiệt độ thường Để hiệu suất chiết đạt 98% cần sử dụng lần chiết (với tỉ lệ dung môi: nguyên liệu 5:1 v/w) lần chiết (với tỉ lệ dung môi:nguyên liệu 10:1 v/w) Kết chiết dầu phương pháp chiết dung môi nhiệt độ thường phương pháp chiết Soxhlet đưa hiệu suất chiết nhau, nhiên chiết nhiệt độ thường tránh trình phân hủy, oxi hóa acid béo chứa nối đôi liên hợp Dầu hạt thô làm phương pháp chiết pha rắn sử dụng silicagel làm pha tĩnh, thời gian tiếp xúc chất phân tích với pha tĩnh không dài để hạn chế khả tính xúc tác silicagel làm biến đổi chất phân tích Các triacylglycerol rửa giải khỏi chất cột chiết pha rắn dung môi diclomethane Hiệu suất thu hồi dầu sau trình làm phương pháp chiết pha rắn khoảng 88% LỜI CẢM ƠN Đề tài thực nguồn kinh phí hỗ trợ từ Chương trình Vườn ươm Sáng tạo Khoa học Công nghệ Trẻ, quản lý Trung tâm Phát triển Khoa học Công nghệ Trẻ - Thành Đồn thành phố Hồ Chí Minh Sở Khoa học Cơng nghệ thành phố Hồ Chí Minh, theo hợp đồng số “20/2021/HĐ-KHCNT-VƯ” TÀI LIỆU THAM KHẢO Holic, R.; Xu, Y.; Caldo, K.M.P et al Bioactivity and biotechnological production of punicic acid Appl Microbiol Biotechnol 102 (2018) 3537-3549 Arao, K.; Wang, Y-M.; Inoue, N.; et al Dietary effect of pomegranate seed oil rich in 9cis, 11trans, 13cis conjugated linolenic acid on lipid metabolism in obese, hyperlipidemic OLETF rats Lipids Health Dis (2004) 24 Gao-Feng Yuan, Xiao-E Chen, Duo Li, “Conjugated linolenic acids and their bioactivities: a review”, Food Funct.,5 (2014),1360-1368, Hennessy A A, Ross P R, Fitzgerald G F, Stanton C “ Sources and Bioactive Properties of Conjugated Dietary Fatty Acids”, Lipids, 51(4), 377-97, (2016) Chen J Cao Y Gao H Yang L Chen ZY Isomerization of conjugated linolenic acids during methylation Chemistry and Physics of Lipids.150(2) (2007) 136–142 Kramer JKG Fellner V Dugan MER Sauer FD Mossoba MM Yurawecz MP Evaluating acid and base catalysts in the methylation of milk and rumen fatty acids with special emphasis on conjugated dienes and total trans fatty acids Lipid 32(11) (1997)1219–1228 Indelicato S, Bongiorno D, Pitonzo R, Di Stefano V, Calabrese V, Indelicato S, Avellone G Triacylglycerols in edible oils: Determination, characterization, quantitation, chemometric approach and evaluation of adulterations J Chromatogr A 15 (2017) 1515:1-16 Lerma-García MJ, Lusardi R, Chiavaro E, Cerretani L, Bendini A, Ramis-Ramos G, Simó-Alfonso EF Use of triacylglycerol profiles established by high performance liquid chromatography with ultraviolet–visible detection to predict the botanical origin of vegetable oils Journal of Chromatography A 1218(42) (2011) 7521–7527 Nguyen AV Deineka VI, Deineka LA.Vu TNA Comparison of Separation of Seed Oil Triglycerides Containing Isomeric Conjugated Octadecatrienoic Acid Moieties by Reversed-Phase HPLC Separations 4(4) (2017) 37 10 Nguyen AV Deineka V Vu TNA Deineka LA, Doan TLP Kovalchukova O Thladiantha Seed Oils - New Source of Conjugated Fatty Acids: Characterization of Triacylglycerols and Fatty Acids Journal of Oleo Science 69(9) (2020) 993–1000 11 Siraj MS, Zakiuddin SK et al Technologies for Oil Extraction: A Review International Journal of Environment Agriculture and Biotechnology 1( 2) (2016) 106-110 12 Bhuiya MMK., Mohammad R, Masud K, Nanjappa A, Mofijur M Comparison of oil extraction between screw press and solvent (n-hexane) extraction technique from beauty leaf (Calophyllum inophyllum L.) feedstock Industrial Crops and Products 144 (2020) 112024 13 Hossein A, Jerry W King, Ali E Mohammad Y Supercritical fluid extraction of seed oils – A short review of current trends Trends in Food Science & Technology 111 (2021) 249–260 14 Żwir-Ferenc A, Biziuk M Solid Phase Extraction Technique – Trends, Opportunities and Applications Polish J Environ Stud 15 (2006) 677-690 15 Ruiz-Gutiérrez V., Pérez-Camino MC Update on solid-phase extraction for the analysis of lipid classes and related compounds Journal of Chromatography A 885 (2000) 321–341 16 Ruiz-Gutiérrez V, Pérez-Camino M.C Update on solid-phase extraction for the analysis of lipid classes and related compounds”, J Chromatogr A 885 (2000) 321–341 17 Ishida BK, Turner C, Chapman MH et al Fatty Acid and Carotenoid Composition of Gac (Momordica cochinchinensis Spreng) Fruit J Agric Food Chem 52 (2004) 274–279 18 Yoshime L.T., de Melo I.L.P., Sattler J.A.G et al Bitter gourd (Momordica charantia L.) seed oil as a naturally rich source of bioactive compounds for nutraceutical purposes Nutrire., 41 (2016) 12 19 Ruger, R., Niehaus, T., van Lenthe, E et al Vibrationally resolved UV/Vis spectroscopy with time-dependent density functional based tight binding J Chem Phys 145 (2016) 184107 20 Hammond EG Lundberg WO The Alkali Isomerization of a Methyl Docosahexaenoate and the Spectral Properties of Conjugated Fatty Acids The journal of the american oil chemists’ society 30(11) (1953) 433–438 21 Johnson A R., Vitha M F Chromatographic selectivity triangles J Chromatogr A 1218(4) (2011) 556–586 22 Nguyen A V., Deineka V I., Pham L Q., Doan P L., Deineka L A., Vu A T N., Dinh T T T Determination of triacylglycerols and fatty acid composition of momordica cochinchinensis seed oil and some other plants of this genus Chemistry of plant raw material (2019) 53-60 STUDY OF SAMPLE PREPARATION OF SEED OILS WITH CONJUGATED FATTY ACIDS FOLLOWED BY HPLC Vu Thi Ngoc Anh1, Phan The Duy2, Ngo Thi Tu Trinh3, Nguyen Van Anh2,* Southern Branch of Vietnam-Russia Tropical Center Ho Chi Minh University of Food Industry The Center for Young Science and Technology Development * Email: anhnv@hufi.edu.vn Conjugated fatty acids have been shown to possess many valuable biological activities, including anticarcinogenic, antiatherogenic, anti-inflammatory, and antidiabetic effects and immunemodulating properties However, these compounds are susceptible to external factors (temperature, light) and easily decomposed and oxidized during separation, extraction, and sample processing prior to analysis In this work, a fast and efficient sample preparation procedure for analyzing triacylglycerol compositions containing conjugated fatty acids in seed oils was studied The sample preparation procedure consists of three stages: the rapid determination of the presence of conjugated double fatty acids in seed oil using UV spectroscopy; solvent extraction of seed oil at room temperature; oil purification using solid phase extraction with silicagel as stationary phase The results showed that the molecular absorption spectra of seed oil in n-hexanee in the wavelength range of 220-400 nm could be used to quickly detect the presence of fatty acid moieties, containing conjugated double bonds in oil The seed oil was extracted at room temperature using three different solvents in polarity: n-hexane, dichloromethane, and acetone; and compared with the traditional Soxhlet extraction method The seed oil was purified by solid phase extraction using silicagel as the stationary phase The catalytic activity of silica gel with analytical compounds absorbed on the stationary phase of solid phase extraction columns was controlled and discussed Keywords: sample preparation; solid phase extraction; seed oil; triacylglycerols, conjugated fatty acid