(Luận văn) nghiên cứu khả năng sinh sản và mối tương quan với các đa hình gen thụ thể prolactin và properdine của lợn nái lai f1 (đực rừng thái lan x nái địa phương pác nặm)

0 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HÀ VĂN LƯƠNG lu an n va p ie gh tn to NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG SINH SẢN VÀ MỐI TƯƠNG QUAN VỚI CÁC ĐA HÌNH GEN THỤ THỂ PROLACTIN VÀ PROPERDINE CỦA LỢN NÁI LAI F1 (♂ RỪNG THÁI LAN X ♀ ĐỊA PHƯƠNG PÁC NẶM) w d oa nl Chuyên ngành: CHĂN NUÔI Mã số: 60 62 40 nv a lu an LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP ll fu oi m at nh z Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN VĂN PHÙNG z gm @ l.c om an Lu THÁI NGUYÊN - 2011 n va ac th si i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn chưa sử dụng để bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn cảm ơn Các thông tin, tài liệu trình bày luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 10 năm 2011 Tác giả luận văn lu an va n Hà Văn Lương p ie gh tn to d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn, q trình thực đề tài, nhận quan tâm giúp đỡ quan, cấp lãnh đạo trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Tôi xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Sau Đại học thầy, cô giáo khoa Chăn nuôi thu y, quan tâm tạo điều kiện giúp đỡ phương diện q trình thực luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy hướng dẫn: PGS.TS Trần Văn Phùng lu không quản thời gian tận tình giúp đỡ phương hướng phương pháp nghiên an cứu hoàn thiện luận văn n va Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình anh chị cán khoa p ie gh tn to Sau Đại học, cán Viện Khoa Học Sự Sống - Đại học Thái Ngun, cán phịng Cơng Nghệ gen động vật - Viện Công nghệ sinh học Việt Nam anh chị công nhân trại Chăn nuôi xã Tức Tranh - huyện Phú Lương - Thái Nguyên w tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình thực luận văn d oa nl Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn a lu Xin trân trọng cảm ơn tất giúp đỡ đó! nv an Thái Nguyên, tháng 10 năm 2011 ll fu Tác giả luận văn oi m at nh z Hà Văn Lương z gm @ l.c om an Lu n va ac th si iii MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Các ký hiệu chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii MỞ ĐẦU lu an Đặt vấn đề n va Mục tiêu đề tài p ie gh tn to Ý nghĩa đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn w Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cơ sở khoa học di truyền chăn nuôi lợn d oa nl 1.1.1 Cơ sở khoa học việc cho lai tạo lợn đực rừng lợn nái lai a lu 1.1.2 Đặc điểm sinh lý sinh dục lợn nái .5 nv 1.1.2.1 Đặc điểm sinh lý lợn nái hậu bị an fu 1.1.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến phát dục lợn ll 1.1.3 Khả sinh sản lợn nái yếu tố ảnh hưởng m oi 1.1.4 Đặc điểm khả sản xuất lợn địa phương Pác Nặm nh at 1.2 Cơ sở khoa học lý luận di truyền 11 z 1.2.1 Cấu trúc nucleic acid - DNA 11 z gm @ 1.2.2 Tổng hợp DNA in vitro 12 1.2.3 Gen quan niệm gen .13 l.c 1.2.4 Các thị di truyền 14 om 1.2.5 Một số phương pháp sử dụng nghiên cứu gen lợn ứng dụng 15 Lu an 1.2.6 Ứng dụng thị di truyền đến tính trạng số lượng lợn 17 n va ac th si iv 1.3 Cơ sở lý luận phương pháp nghiên cứu 18 1.3.1 Phương pháp tách DNA 18 1.3.2 Phương pháp nhân đoạn DNA đặc hiệu 18 1.3.2.1 Phản ứng PCR cho phép nhân đoạn DNA định trước 18 1.3.2.2 Cách tiến hành phản ứng PCR chuỗi trùng hợp 19 1.3.3 Enzym giới hạn 20 1.3.4 Phương pháp RFLP 20 1.3.5 Điện di gel agarose 21 1.4 Các gene liên quan đến tính trạng sinh sản lợn .22 lu an 1.4.1 Gen thụ thể prolactin 22 n va 1.4.2 Gen Properdine 24 p ie gh tn to 1.4.3 Các gen sinh sản khác 25 1.5 Tình hình nghiên cứu gen lợn nước .26 1.5.1 Nghiên cứu gen lợn nước 26 w 1.5.2 Nghiên cứu gen lợn Việt Nam 27 d oa nl Chương ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .31 2.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 31 a lu 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 31 nv an 2.2.1 Thời gian nghiên cứu .31 fu ll 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 31 m oi 2.3 Nội dung nghiên cứu 31 at nh 2.4 Phương pháp nghiên cứu 31 z 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu khả sinh sản lợn nái rừng lai 31 z gm @ 2.4.2 Phương pháp nghiên cứu đa hình gen PRLR gen Properdine 33 2.4.2.1 Hóa chất thiết bị 33 l.c 2.4.2.2 Phương pháp tách chiết DNA 34 om 2.4.2.3 Phương pháp quang phổ kế để xác định hàm lượng DNA .36 Lu an 2.4.2.4 Phản ứng chuỗi trùng hợp - PCR .36 n va ac th si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 v 2.5 Phương pháp theo dõi tiêu 38 2.5.1 Phương pháp theo dõi tiêu khả sinh sản 38 2.5.2 Phương pháp theo dõi tiêu đa hình gene 40 2.6 Xử lý số liệu 41 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .43 3.1 Kết nghiên cứu khả sinh sản lợn nái lai F1 43 3.1.1 Đặc điểm sinh lý sinh dục lợn nái lai 43 3.1.2 Khả sinh sản lợn nái lai F1 .44 3.1.3 Sinh trưởng tích lũy lợn 46 lu 3.1.4 Sinh trưởng tương đối sinh trưởng tuyệt đối 47 an n va 3.1.5 Tiêu tốn thức ăn/kg lợn giống 49 p ie gh tn to 3.1.6 Chi phí thức ăn/ kg lợn giống 50 3.2 Kết phân tích đa hình gen PRLR gen Properdine .51 3.2.1 Kết tách DNA 51 w 3.2.2 Kết nhân đoạn gen PRLR Properdine 52 3.2.3 Phân tích đa hình gen PRLR enzym giới hạn Alu I 54 d oa nl 3.2.4 Phân tích đa hình gen Properdine enzyme giới hạn SmaI 58 a lu KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .63 nv Kết luận .63 an Tồn 63 fu ll Đề nghị 64 m oi TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 nh at PHỤ LỤC 71 z z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vi CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ Tên tiếng Anh Tên tiếng Việt lu an n va Base paire Cặp Bazơ DNA Deoxyribonucleic acid Axit Deoxyribonucleic dNTP Deoxynucleoside triphosphate Deoxynucleosit triphosphát EDTA Ethylene diamine tetracetic acid Axít êthylen điamin têtraceetic EtBt Ethidium bromid Ethidium brômit PRLR Prolactin receptor Thụ thể Prolactin kb Kilobase Kilơ bazơ µg Microgram Micrơ gram µl Microlitre Micrơ lít TBE Tris boric acid - EDTA Đệm TBE TE Tris - EDTA Đệm TE RNase Ribonuclease Ribơnucleaza Restriction Fragment Length Đa hình độ dài đoạn cắt Polymorphism giới hạn p ie gh tn to bp Random Amplified polymorphic Đa hình DNA khuếch đại ngẫu nhiên an DNA nv a lu RADP d oa nl w RFLP Quantitative trait loci Vị trí tính trạng số lượng PCR Polymerase chain reaction MS Microsatellite OD Optical density ll fu QTL oi m Phản ứng chuỗi Polymerase at nh DNA vệ tinh Mật độ quang học z Đa hình chiều dài đoạn DNA khuếch đại gm Polymorphism @ Amplified Fragment length z AFLP l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Vị trí cắt enzyme giới hạn ALuI SmaI 21 Bảng 1.2 Các gen khác liên quan đến tính trạng sinh sản lợn 25 Bảng 2.1 Danh mục hoá chất sử dụng phân tích gene .33 Bảng 2.2 Các trang thiết bị dụng cụ thí nghiệm 33 Bảng 2.3 Các thành phần phản ứng PCR để nhân đoạn gen 36 Bảng 2.4 Các chu trình nhiệt phản ứng PCR sử dụng cặp mồi Leptin PIT1 37 Bảng 2.5 Sản phẩm PCR gen PRLR Properdine xử lý lu enzyme giới hạn ALuI SmaI .38 an Bảng 3.1 Chỉ tiêu sinh lý sinh dục lợn nái lai F1 43 n va Bảng 3.2 Chỉ tiêu khả sinh sản lợn nái lai 45 p ie gh tn to Bảng 3.3 Khối lượng lợn qua kỳ cân 46 Bảng 3.4 Sinh trưởng tuyệt đối lợn qua kỳ cân 47 Hình 3.2 Biểu đồ sinh trưởng tuyệt đối lợn qua thời kỳ cân 48 w Bảng 3.5 Sinh trưởng tương đối lợn qua kỳ cân 49 d oa nl Bảng 3.6 Tiêu tốn thức ăn/kg lợn giống 50 Bảng 3.7 Chi phí thức ăn/ kg lợn giống 50 a lu nv Bảng 3.8 Tỉ số OD260nm/OD280nm nồng độ DNA 52 an Bảng 3.9 Tần số kiểu gen tần số alen đoạn gen PRLR .55 fu ll Bảng 3.10 Ảnh hưởng PRLR đến số lượng lợn sinh sống/lứa 57 m oi Bảng 3.11 Tỷ lệ kiểu gen tần số alen gene Properdine .59 at nh Bảng 3.12 Ảnh hưởng Properdine đến số lượng lợn sinh z sống/lứa 61 z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Đồ thị sinh trưởng tích lũy lợn theo mẹ qua thời kỳ cân .47 Hình 3.2 Biểu đồ sinh trưởng tuyệt đối lợn qua thời kỳ cân 48 Hình 3.3 Điện di sản phẩm PCR nhân lên từ cặp mồi PRLR 53 Hình 3.4 Điện di sản phẩm PCR nhân lên từ cặp mồi Properdine 53 Hình 3.5 Gen PRLR cắt enzyme giới hạn ALuI .55 Hình 3.6 Tỷ lệ kiểu gen tần số alen gen PRLR 56 Hình 3.7 Gen Properdin cắt enzyme giới hạn SmaI 58 lu an Hình 3.8 Tỷ lệ kiểu gen tần số alen gen Properdine 60 n va p ie gh tn to d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Ở Việt Nam nhiều nước giới, lợn giống vật ni lâu đời có ý nghĩa quan trọng sản xuất nông nghiệp Từ nhiều năm qua, phát triển ngành chăn ni lợn góp phần đáng kể việc nâng cao chất lượng sống, cung cấp khoảng 75% tổng lượng thịt cho xã hội Theo thông báo FAO, 55% số lượng lợn giới thuộc vùng châu Á - Thái Bình Dương, Việt Nam nước có số đầu lợn tương đối lớn Tổng lu đàn lợn Việt Nam tính đến tháng 6/2005 28 triệu [30] Theo số liệu thống an kê thời điểm 01/04/2010, nước có 27,3 triệu con, số đầu lợn nái n va 4,18 triệu con) [9] Bên cạnh việc nhập chăn nuôi giống lợn hướng nạc, p ie gh tn to lợn lai lợn nội lợn ngoại, giống lợn địa phương sử dụng phổ biến đặc biệt khu vực miền núi trung du khả thích nghi cao với điều kiện khí hậu điều kiện chăn nuôi vùng nông thôn nghèo Việt w Nam Mặc dù giống lợn nội có nhược điểm số con/lứa đẻ thấp, tăng trưởng d oa nl chậm, tỷ lệ mỡ tiêu tốn thức ăn cao, thịt mỡ thơm ngon người dân ưa chuộng a lu Lợn địa phương Pác Nặm nuôi phổ biến nông hộ theo hình nv an thức bán hoang dã quanh nhà vườn rừng, nguồn thức ăn chủ yếu ngô, sắn, cám fu ll gạo rau cỏ tự nhiên Cũng giống lợn địa phương khác, lợn địa phương m oi Pác Nặm có đặc điểm trội khả thích nghi cao, thịt thơm ngon Đặc at nh biệt nhóm lợn đen tuyền, thường coi đặc sản nuôi tự nhiên, z tồn dư thuốc tăng trọng kháng sinh bị săn mua riết dẫn đến nguy z @ tuyệt chủng cao Trong năm qua, nhà khoa học trường Đại học Nông gm Lâm Thái Ngun phối hợp với Phịng Nơng nghiệp PTNT huyện Pác Nặm l.c tiến hành chọn lọc, lai tạo giống lợn địa phương Pác Nặm với lợn rừng Thái Lan tạo om nhóm lợn lai mang đặc điểm có giá trị hai giống lợn bố mẹ Tuy an Lu nhiên, hạn chế đặt khả sinh sản hai nhóm lợn rừng lợn địa n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 59 Đoạn gen Properdine nghiên cứu có chứa điểm cắt enzyme giới hạn SmaI thể đoạn DNA sắc nét, có kích thước khác phù hợp với tính tốn lý thuyết Khi sử dụng enzyme giới hạn SmaI cắt sản phẩm PCR gen Properdine có kích thước 390bp ta thu đoạn có kích thước 237bp, 153bp ứng với alen A đoạn DNA có kích thước 390bp tương ứng với alen B Hình 3.7 thể kết sản phẩm cắt gen Properine enzyme giới hạn SmaI cho ta thấy phân tích đa hình gen Properdine đối tượng lợn nái lai F1 (đực Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm) có xuất hai kiểu gen AB (390/237/153bp) gen BB (390bp) lu Kiểu gen AB với đoạn DNA mang kích thước 390/237/153bp xuất an n va giếng 1,4 Kiểu gen BB với đoạn DNA có kích thước 390bp p ie gh tn to giếng 2,3,5,7,8,9,10 11 Từ kết điện di sản phẩm cắt gen Properdine xác định tỷ lệ kiểu gen tần số alen quần thể nghiên cứu thể bảng 3.11 d oa nl w Bảng 3.11 Tỷ lệ kiểu gen tần số alen gene Properdine Kiểu gen/ alen Tần số (%) A 13,33 B 26 86,67 0 26,7 a lu Số lượng Alen (n=30) nv an ll fu oi m at nh Kiểu di truyền AA z gm BB @ AB z (N=15) 11 73,3 l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 60 lu an va n Hình 3.8 Tỷ lệ kiểu gen tần số alen gen Properdine p ie gh tn to Các kết từ bảng 3.11 biểu đồ hình 3.8 cho ta thấy kiểu gen Properdine lợn lai F1 (đực Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm) mà chúng tơi w nghiên cứu có đa hình xuất hai dạng alen A B với tần số 13,33% A 86,67% B đồng thời xuất tổ hợp hai kiểu gen AB BB, d oa nl kiểu gen AB xuất với tần số 26,7%, Kiểu gen BB xuất với a lu tần số cao nhiều chiếm 73,3% Như thấy tỷ lệ trội nv kiểu gen BB kiểu gen AA khơng xuất an Có thể thấy alen B có tần số xuất cao hẳn alen A, Kết fu ll đồng thuận với kết phân tích Buske cs (2005) dịng lợn nái F2 thương m oi mại, alen B xuất với tần số cao 0,89% alen A xuất nh at 0,11%, đặc biệt 123 mẫu nghiên cứu có cá thể mang kiểu gen đồng hợp tử z AA xuất nhóm có số cịn sống thấp Có thể lý giải khác z gm @ biệt thí nghiệm lần kiểu gen AA khơng xuất số mẫu nghiên cứu cịn (15 mẫu) giống lợn lai F1 (đực Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm) l.c giống lợn địa phương có ưu điểm định sức sống cao, khả om thích ứng với môi trường tốt nên tỷ lệ số sống sau sinh cao an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 61 * Phân tích tương quan kiểu gen số sinh cịn sống/lứa Để so sánh giá trị trung bình từ nhóm mẫu trở lên sử dụng phương pháp so sánh ANOVA phương pháp kiểm tra thống kê thường sử dụng Phép so sánh ANOVA nhân tố áp dụng để phân tích khác biệt số sinh sống trung bình kiểu gen AA, AB BB Kết trình bày bảng 3.12 Bảng 3.12 Ảnh hưởng Properdine đến số lượng lợn sinh cịn sống/lứa lu an Kiểu Giá trị trung bình lợn Số lượng gen sinh sống nái AA - - AB 5,33 BB 6,43 11 35 Số lứa đẻ n va p ie gh tn to w d oa nl Qua nghiên cứu thấy kiểu gen AA xuất nhóm có số sống sau 24 thấp nhất, cá thể mang kiểu gen AA thường a lu nv chết sau sinh có sức sống Kiểu gen AB có số cịn sống trung an bình 5,33 kiểu gen BB có số sinh số sinh sống cao fu ll 6,43 Kết thu nghiên cứu tương đồng với kết Buske cs m oi (2005) [33] phân tích gen Properdine lợn nái thương mại, đó, số sinh at nh số sống/lứa kiểu gen AA thấp cá thể mang kiểu gen z BB có số sinh số sinh cịn sống/lứa cao z Vì kiểu gen AA không xuất quần thể nghiên cứu, đồng thời độ lệch @ gm chuẩn nhóm có sai khác rõ rệt thể qua xuất kiểu gen AB BB 35 lứa đẻ cá thể quần thể nghiên cứu, l.c an Lu nái địa phương Pác Nặm) có ý nghĩa thống kê om khác số sinh cịn sống trung bình lợn lai (đực Thái Lan x n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 62 Sau kiểm tra khác biệt tính trạng kiểu hình nhóm mang alen A nhóm khơng mang alen A chúng tơi khẳng định Properdine ứng cử gen liên quan đến tính trạng số sinh cịn sống/lứa đẻ, tính trạng số lượng đa gen (polygenic) Xác định gen có ảnh hưởng đến tính trạng số lượng có ý nghĩa di truyền chọn giống động vật Trong nghiên cứu xác nhận tính chất đa hình đoạn gen PRLR Properdine lợn lai F1 (đực Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm) mối tương quan có ý nghĩa thống kê kiểu gen PRLR Properdine với tính trạng số sinh sống lợn lai F1 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 63 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu trên, sơ rút số kết luận sau: Lợn nái lai F1(đực rừng Thái Lan x địa phương Pác Nặm) có thời gian động dục trở lại sau cai sữa thời gian động dục dài so với lợn nái địa phương Pác Nặm Các tiêu đánh giá sức sản xuất lợn nái lai F1 thấp so với lợn địa phương phối giống với đực rừng Thái Lan Lợn nái F1 có số lu đẻ/lứa (6,25 6,33), tỷ lệ nuôi sống đến cai sữa sản lượng sữa an n va thấp (90,90 93,75%; 17,0 17,76 kg), khối lượng lợn sơ sinh p ie gh tn to cai sữa thấp (0,58 0,68; 5,80 6,33 kg/con) theo thứ tự tương ứng loại lợn nái Tiêu tốn chi phí thức ăn/kg lợn lúc 56 ngày tuổi lợn lai F2 (Đực w rừng Thái Lan x nái F1) cao (Đối với thức ăn tinh 7,37 kg thức ăn d oa nl 76.615 đ, tương ứng cao 2,64% 7,33% so với lợn lai F1 (Đực rừng Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm) a lu Lợn nái rừng lai F1 mang gene PRLR dạng đồng hợp tử BB 100% gene nv an Properdine hai dạng AB BB tương ứng tỷ lệ 26,7% 73,3% Tần số ll fu alen A B tương ứng 13,33 86,67 m oi Lợn nái lai F1 mang gen PRLR dạng đồng hợp tử BB có số đẻ at nh sống sau 24 giờ/lứa 6,2 z Lợn nái lai F1 mang gene Properdine dạng AB có số đẻ cịn sống z Tồn gm @ sau 24 giờ/lứa 5,33 con; dạng BB 6,43 l.c Do thời gian nghiên cứu có hạn, số lượng đàn lợn nái lai theo dõi chưa nhiều, om số liệu lặp lại cịn nên kết nghiên cứu chưa phản ánh toàn diện ảnh hưởng an Lu kiểu gen đến tiêu sinh sản đàn lợn nái rừng lai F1 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 64 Đề nghị - Tiếp tục nghiên cứu đánh giá tính đa hình hai gen PRLR Properdine đối tượng lợn nái rừng lai với số lượng cá thể nhiều kiểm tra tính đa hình tiêu khác - Xây dựng chương trình chọn lọc dựa thị phân tử để chọn tạo dịng lợn rừng lai có khả sinh sản cao - Cần nghiên cứu, áp dụng nhiều biện pháp nhằm nâng cao khả sản xuất lợn nái lai F1 (đực rừng Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm) phòng tránh bệnh thường gặp đàn nái đàn lợn theo mẹ Từ nâng cao lu an hiệu kinh tế, xây dựng mơ hình trang trại hợp lý đáp ứng nhu cầu thị n va trường, giúp người dân phát triển kinh tế p ie gh tn to d oa nl w nv a lu an ll fu oi m at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Atlas giống vật nuôi Việt Nam (2004), Nxb Nông Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Vân Anh (2005), Luận văn thạc sỹ sinh học Đa hình di truyền gen hormone sinh trưởng, Myogenin mối tương quan với khả tăng trọ.ng lợn Móng Cái Ngơ Xn Bình (2004), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Lê Đình Cường, Lương Tất Nhợ, Đỗ Trung Dũng, Nguyễn Mạnh Thành CTV lu (2004), “Một số đặc điểm giống lợn Mường Khương”, Hội nghị bảo an tồn quỹ gen vật nuôi 1990 - 2004:238 - 248 n va Lê Đình Cường, Mai Thi Hoa va Giang Văn Sơn (2008), “Nghiên cứu chọn p ie gh tn to lọc nâng cao suất sinh sản cho thịt giống lợn Mường Khương” Tạp chí Khoa học kỹ thuật Viện Chăn ni Nguyễn Văn Cường (2006), Phân tích biến thể AND số gen có ý w nghĩa kinh tế giống lợn nội Việt Nam, Báo cáo tổng kết đề tài theo d oa nl nghị định thư Việt Nam - Đức Nguyễn Văn Cường, Nguyễn Thị Diệu Thuý, Nguyễn Thu Thuý, Nguyễn Kim Độ a lu nv (2005), Phân tích biến thể DNA số gen có ý nghĩa kinh tế an giống lợn nội Việt Nam, Báo cáo khoa học fu Nguyễn Văn Cường, Nguyễn Thị Diệu Thuý, Nguyễn Thu Thuý, Đậu Hùng Anh, ll m oi Nguyễn Kim Độ (2003), Nghiên cứu đa hình gen số giống lợn Việt Nam nh Hội nghị khoa học lần thứ hai, nghiên cứu sinh học, nông nghiệp, y at z học, vấn đề nghiên cứu khoa học sống, Huế z Phạm Văn Duy, Nguyễn Thanh Sơn (2010), Tình hình chăn ni tiêu thụ @ gm lợn thịt, lợn giống tháng đầu năm 2010 số biện pháp đẩy mạng tiêu thụ, l.c tái đàn sau dịch tai xanh, http://www.cucchannuoi.gov.vn, ngày 28/5/2010 om 10 Hồ Huỳnh Thuỳ Dương (1997), Sinh học phân tử, Nxb Giáo dục, Hà Nội an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 66 11 Nguyễn Văn Đức, Tạ Thị Bích Duyên, Giang Hồng Tuyến, Nguyễn Văn Hà, Lê Viết Ly (1999), Kết chọn lọc dịng lợn Móng Cái tăng trọng, tiêu tốn thức ăn tỷ lệ nạc, Tóm tắt báo cáo khoa học năm 1999, Viện Chăn nuôi, tr 3-5 12 Nguyễn Văn Đức (2002), Phương pháp kiểm tra thống kê sinh học, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội 13 Văn Lệ Hằng (1998), Nghiên cứu số đặc điểm di truyền tiêu sinh lý, sinh hoá có liên quan đến khả nang kháng bệnh lợn nội (Móng Cái) lợn ngoại (Yorkshire Landrace) ni Việt Nam, Luận án Tiến sỹ khoa học lu an Nông nghiệp, Đại học Nông Nghiệp Hà Nội n va 14 Nguyễn Văn Hậu, Phạm Doãn Lân, Nhữ Văn Thụ Lê Thị Thuý (2000), p ie gh tn to Phân tích trình tự nucleotit gen hormon sinh trưởng số giống lợn nội Việt Nam, Tóm tắt báo cáo Khoa học năm 1999, Hội nghị Khoa học Viện Chăn nuôi, 13-14/7/2000, tr 156-157 w 15 Phan Xuân Hảo, Ngọc Văn Thanh (2010), "Đăc điểm ngoại hình tính sản d oa nl xuất lợn Bản ni Điện Biên", Tạp chí Khoa học Phát triển, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, (2), Nxb Nông Nghiêp, Hà Nội, tr 239 - 246 a lu nv 16 Đào Việt Hùng (2011), Khóa luận tốt nghiệp, Nghiên cứu khả sinh an sản lợn nái lai (Đực rừng Thái lan x nái địa phương Pác Nặm), Khóa fu ll luận tốt nghiệp, trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên, tr.28-39 m oi 17 Trương Lăng (1999), Ni lợn gia đình, Nxb Thanh Hoá nh 18 Lê Huy Liễu, Trần Huê Viên, Dương Mạnh Hùng (2004), Tài liệu giảng dạy at z giống vật nuôi, Đại học Nông lâm Thái Nguyên, tr 58 - 62 z Hà Nội gm @ 19 Lê Đình Lương (2001), Nguyên lý kỹ thuật di truyền, Nxb Khoa học kỹ thuật l.c 20 Lê Viết Ly (1994), "Bảo tồn nguồn gen vật nuôi Việt Nam - Một nhiệm vụ cấp om bách gìn giữ mơi trường sống”, Kêt qủa nghiên cứu bảo tồn nguồn gen vật Lu an nuôi Việt Nam, tập 1: Phần gia súc, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 67 21 Nguyễn Văn Nơi (2010), Nghiên cứu đa hình số gen quy định sinh trưởng khả sản xuất thịt lợn lai (Đực rừng Thái Lan x nái địa phương Pác Nặm), Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp, Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên, tr 4-8 22 Trần Văn Phùng (2006), Kỹ thuật chăn nuôi lợn nái sinh sản, tài liệu giảng dạy, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên 23 Trần Văn Phùng, Đỗ Khiêm Tuấn, Bùi Văn Quang (2008), Báo cáo kết dự án “Xây dưng mô hình chăn ni lợn địa phương Pác Nặm theo hình thức bán hoang dã”, Sở khoa học công nghệ Bắc Kạn lu 24 Trần Văn Phùng, Từ Quang Hiển, Trần Thanh Vân, Hà Thị Hảo (2004), Giáo an trình chăn nuôi lợn, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 13 n va 25 Phạm Thanh Phương (2006), Đa hình di truyền gen thụ thể Prolactin (PRLR) p ie gh tn to giống lợn Móng Cái, Luận văn thạc sỹ sinh học, Đại học Sư phạm, Hà Nội 26 Võ Văn Sự (2009), Tổng quan chăn nuôi lợn rừng Việt Nam từ 2005 - 2009, Hội thảo chăn nuôi lợn rừng phía Bắc ngày 20/11/2009, Viện Chăn Ni w 27 Hồng Tồn Thắng Cao Văn (2006), Giáo trình sinh lý học vật nuôi, d oa nl Nxb Nông nghiệp, tr 23 - 72 28 Nguyễn Văn Thiện, Đinh Hồng Luận (1999), Một số đặc điểm di truyền nv a lu suất hai giống lợn nội Ỉ Móng Cái, Tóm tắt báo cáo khoa học, an Viện Chăn Nuôi, tr 34-37 ll fu 29 Nguyễn Thiện, Nguyễn Khánh Quắc, Nguyễn Duy Hoan (2002), Giáo trình oi m Phương pháp nghiên cứu chăn nuôi, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội nh 30 Nguyễn Thiện, Trần Đình Miên, Võ Trọng Hốt (2005), Con lợn Việt Nam at (các giống lợn nội Việt Nam), Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 231 - 271 z 31 Nhữ Văn Thụ (2004), Các phương pháp sinh học phân tử sử dụng đánh z nuôi 1990 - 2004 Viện chăn nuôi: tr 279 - 285 gm @ giá mối quan hệ di truyền giống vật nuôi, Hội nghị Bảo tồn quỹ gen vật l.c 32 Nguyễn Thị Diệu Thuý, Nguyễn Thu Thuý, Nguyễn Văn Cường (2004), “Đa om hình di truyền gen Hormone sinh trưởng giống lợn nội Móng Cái”, Tạp chí an Lu cơng nghệ sinh học (1) n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 68 33 Nguyễn Thị Diệu Thúy, Trần Quỳnh Anh (2009), Phân tích gen Properdine liên quan với tính trạng sinh sản lợn Móng Cái, Hội nghị cơng nghệ sinh học toàn quốc 2009, tr 401 34 Nguyễn Thu Thuý (2005), Đa hình gen Heart fatty - acid bibinndinprotein gen Ryanodine receptor - số giống lợn Việt Nam, Luận văn thạc sỹ sinh học, Trường Đại Học Sư Phạm, Hà Nội 35 Phạm Thu Thuỷ, Lê Thị Thuý, Cao Xuân Hiếu, Nguyễn Đăng Tôn, Lê Thị Thu Hiền, Nguyễn Đăng Vang, Nông Văn Hải (2003), Phân tích trình tự đoạn gen PIT-1 giống lợn Landrace, Ba Xun, Mỹ Văn, Tạp chí Cơng lu an nghệ sinh học 1(3) n va 36 Nguyễn Ngọc Tuân, Trần Thị Dân, Lê Thanh Hiền, Ngô Tiến Dũng Châu p ie gh tn to Thanh Trúc (2001), Tần số gen Halothane ảnh hưởng gen lên sưc tăng trưởng, phẩm chất quay thị khả sinh sản lợn trại TPHCM, Tóm tắt báo cáo khoa học, Hội nghị Sinh học phân tử Hoá w sinh, 25 - 29/6/2001, TP.HCM d oa nl 37 Đỗ Kim Tuyên-Cục chăn Nuôi (2006), Một số đặc điểm lợn rừng Thái Lan nhập Việt Nam, http//www.vcn.vnn.vn, ngày 27/12/2006 nv a lu 38 Võ Thị Tuyết, Trịnh Công Thành Nguyễn Tiến Thành (2001), Ứng dụng kỹ an thuật PCR để phát gen prolactin giống lợn khu vực thành phố ll fu HCM, tạo tiền đề cho việc tạo dịng lợn nái cao sản, Tóm tắt báo cáo khoa oi m học Hội nghị Sinh học phân tử Hoá sinh, 25-29/6/2001, TP HCM nh 39 Nguyễn Đăng Vang, 2002 Thành phần giá trị dinh dưỡng thức ăn gia súc, at gia cầm Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội z z 40 Vương Ngọc Văn (2009), Nghiên cứu khả sinh sản lợn nái địa @ gm phương Pác Nặm nuôi Thái Nguyên cho phối giống với lợn đực rừng Thái Lan, Khóa luận tooats nghiệp, Trường Đại học Nơng lâm Thái Nguyên l.c om 41 Phùng Thị Vân, Trần Thanh Thúy, Nguyễn Đăng Thanh, Lê Đình Cương, Lu Nguyễn Văn Lục, Nguyễn Vương Quốc (2007), Đánh giá thực trạng ứng an dụng số giải pháp kỹ thuật tổng hợp vào xây dựng mơ hình chăn ni lợn n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 69 nái giống địa phương Sơn La, Thông báo kỹ thuật khoa học Chăn nuôi , Viện Chăn nuôi 42 Trần Huê Viên (2001), Giáo trình Di truyền vật ni, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội TIẾNG ANH 43 Cassady, J.P., Johnson, R.K., Pomp, D., Rohrer, G.A., Van Vileck, L.D., Spiegel, E.K., and Gilson K.M (2001) Indentification of quantitative trait loci affecting reproduction in pog J Anim.Sci 79(3): 623-33 44 Casas- Carillo E, Prill - Adam, A, Price S.G, Glutter A.C, Kirkpatrick B.W., lu (1997) Relationship of growth hormone and Insullin-like growth an 45 Drogenmuller C, Hamann H, distl O (2001) Candidate gene markerfor litter n va size in different German pig lines J.Anim Sci 79: 2565-2570 p ie gh tn to 46 Isler B.J, Neal K.M, Moeller S.J, Davis M.E, and Meeker D.L Examination of the Relationship Between the Estrogen Receotor Gene and Reproduictive traits in Swine w 47 Li N, Zhao Y.F and Wu C.X (1998) Candidate gene approach for d oa nl identification of genetic loci controlling litter size in swine Proc 6th World a lu Congress Quantitative Genetics of Livestock 26:183-186 nv 48 Li et al (2001) DNA marker for pig litter size United States Patent, an fu September 18, 2001 ll 49 Marek Kmiec, Akadiusz Terman (2006) Associations between the prolactin m oi receptor gene polymorphism and reproductive traits of boars J Appl Genet nh at 47 (2), 2006, phương pháp 139 - 141 z 50 Pope W.F (1994) Embryonic mortality in swine In: M.T.Zavy and R D z @ Boca Raton, FL gm Geisert (ed) Embryonic mortality in Domestic species Pp 53-77 CRC Press, l.c an Lu Breed Genet 112: 341-348 om 51 Rothschild M.F, Liu H.C, Tuggle C.K, Yu T.P, and Wang L (1995) J Anim n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 70 52 Rothschild M.F, Jacopson C, vaske D.A, Tuggle C.K, Sholt T (1996) The estrogen receptor locus is associated with a major gene influencing litel side in pigs Prroc Nalt Acad.Sci USA 93: 201-205 53 Rothschild M.F, Messer l.A, day A, Wahs R, Sjort T, Southwood O and Plastow G (2000) Investigation of the retinol binding protein (RBP4) gene as a candidate gene for litter size in the pig Mammalian Genome 11: 75-77 54 Short T.H, Rothschild M.F, Southwood O.I, Mclaren D.G, De Vries A, van der Steen H, Eckardt G.R, Tuggle C.K, Helm J, Vaske D.A, Mileham A.J, and Plastow G.S (1977) Effect of the Estrogen Receptor Locus on Reproduction lu and Production Traits in Four Commercial Pig lines J Anim Sci 1997.75: an n va 3138-3142 p ie gh tn to 55 Terman A (2005) Effect of the polymorphism of prolactin receptor (PRLR) and leptin (LEF) genes on little size in Polish pigs J Anim Breed genet 2005 Dec; 122(6): 400-4 Department of Genetics and Animal Breeding, w Agricultural University of Szczecin, Szczecin, Poland 56 van Rens BT, Evans GJ, van der Lende T (2003) Components of littler size in d oa nl girls with different prolactin receptor genotypes Theriogenology 59(3-4): a lu 915-26 Yi Chuan Xue Bao 2003 Dec;30(12):1090-6 nv 57 Vincent A.L, Short T.H, Eckardt G.R, Rothschild M.F, Tuggle C.K (1998) an The prolactin gene receptor is associated with increased little size in pig fu ll Proceeding of the 6th World congress on the quantitative Genetics of Livestock oi nh K, murani E, Ponsuksili S, Yerle m, Schellander K (2002) at 58 Winimers m 27: 15-18 z Detection of quantitative trait loci for carcass in the pig by using AFLP z gm @ Institute of Animal Breeding Science, University of Bonn, Germany 59 Xu N.Y, Zhang S.Q, Peng S.H (2003) Investigation on the distribution and l.c their effects on reproduction traits of three major genes in Jinhua Pigs Yi om Chuan Xue Bao 2003 Dec; 30(12): 1090-6 an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 71 PHỤ LỤC Phụ lục Trình tự đoạn gen PRLR Properdine (Genbank-U96306) Trình tự đoạn gen PRLR ORIGIN agcaggagaa cggcgaccgg ccggagaagg ctggcgcccc lu tgaaaccagc aaggaatacg an 61 cccaggtgtc ccgggtgatg gataaccaca tcctggtgtt va n agtgcaggat ccgcgagctc p ie gh tn to 121 gaaacgtggc tccgtttgaa gaaccaacca aggagacccc gccatcccgg ccgcagaatc 181 cagctgcgaa agacctggcc agcttcacca cggccccggg w ccactgcaga cacccgctgg 241 gtgggctgga ttacctcgat cccgcaggct ttatgcactc d oa nl ctttcagtga gagcttggtt a lu 301 catgggatga tgggttacaa ggtggggttt ttttcaggtc nv gcactacgtg aaatgcactc an 361 taccagagaa agctcgaaaa tggggttaga atgacactac fu ll ccagactcac agttcactcc m 421 tcttcatgct ccattttcaa ccacttgcc oi at nh z z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 72 Gen Properdine ORIGIN cggggatcct gagggaccca gtgacaggtc cctgagaccg ggaggggtac cccaaaggca 61 gcccttcccg gttggtgact tctacatgtt ccccgccccc aaagcaatcc gctgccccag 121 accgcacgac ttcgagaatg gggagtattg gccccgggcg ccctactaca acttaagtga 181 cgagatctcc ttccactgct atgacggtta cactctccgg ggctctgcca atcgcacctg lu 241 ccaagtgact ggtcggtggg atgggcaaac ggccatctgc gatgatggag gtgagaagca an n va 301 ttgcctcctc ccacgatagt accctctccc tggccgcccc tcagcccgag gaactggcag p ie gh tn to 361 cgtacgacgt atgtctgccc tcgcccttcc ggcctcaggc tttggcctca tctccatgtc 421 tcatgcttct gcagcggggt actgcccgaa cccaggcatc cccattggca cgaggaaggt w 481 gggcacccag taccgccttg aagacagtgt cacctactac tgcacgcgag ggctcaccct d oa nl 541 acgtggctcc cagcggcgaa cgtgccagga aggtggctct tggagtggaa cagagccttc nv a lu 601 ctgccaaggt gaccctcgat tggtaccctc aagtcagatc ctgctctccc atcttcacat an 661 ccccacacca ggcaccgcct tccccctgcc gcaacccagc gccttcccta cttctgaacc fu ll 721 tccctgtcag accttgctcg cttctgagcc cttctcaccc ttgaaaccca ccgtcccctc oi m at nh 781 tctctggtca ctctgtcctt gaccctccca gacatttgac ctgctttctg acccctccca z 841 agactccttt atgtacgaca cccctgcaga ggtggccgag gctttcctgt cttccctgac z gm @ l.c om an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99