1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

(Luận văn) nghiên cứu khả năng nhân giống cây giảo cổ lam gynostemma pentaphyllum bằng phương pháp in vitro

64 1 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - a lu n n va PHẠM THỊ HIỆNG p ie gh tn to NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY GIẢO CỔ LAM (Gynostemma pentaphyllum) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO oa nl w d KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC f an nv a lu ul oi lm Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Khóa học Giảng viên hƣớng dẫn at nh : Chính quy : Công nghệ sinh học : CNSH - CNTP : 2011 - 2015 : PGS.TS Ngơ Xn Bình ThS Nguyễn Thị Tình z z om l.c gm @ an Lu Thái Nguyên – năm 2015 n va ac th si ii LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Sinh học Cơng nghệ Thực phẩm tồn thể thầy giáo khoa tạo điều kiện tốt cho em suốt thời gian thực đề tài Qua thời gian làm việc phịng ni cấy mơ Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: ThS a lu Nguyễn Thị Tình, PGS.TS Ngơ Xn Bình tận tình bảo, hướng dẫn em n thời gian thực đề tài va n Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đóng góp hướng tn to dẫn quý báu KS Lã Văn Hiền q trình thực hồn thành p ie gh khóa luận Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lịng động oa nl w viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu d nv a lu Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để f an đề tài em hoàn thiện oi lm ul Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 at nh Sinh viên thực z z gm @ om l.c Phạm Thị Hiệng an Lu n va ac th si iii DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT a lu n n va p ie gh tn to : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine BA : 6-Benzylaminopurine Cs : Cộng CT : Công thức CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IBA : β - Indol axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine oa nl w ADN : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s d LSD a lu :  - Naphlene axetic acid f an nv NAA oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th si iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 25 Bảng 3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng môi trường MS, 1/2MS 26 Bảng 3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng kinetin đến khả cảm ứng chồi Giảo cổ lam 27 Bảng 3.4 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng kinetin tốt kết hợp với hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam 28 a lu Bảng 3.5 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng kinetin tốt kết hợp với n hàm lượng NAA đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam Error! n va Bookmark not defined tn to Bảng 3.6 Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng IBA 30 p ie gh Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Giảo cổ lam (sau 10 ngày nuôi cấy) 32 oa nl w Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng mơi trường MS, ½ MS đến khả tái sinh chồi Giảo cổ lam (sau 20 ngày nuôi cấy) 34 d nv a lu Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng kinetin đến cảm ứng chồi Giảo cổ lam (sau f an 20 ngày nuôi cấy) 35 oi lm ul Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng hàm lượng kinetin tốt kết hợp với BA để nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày nuôi cấy) 37 at nh Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng hàm lượng kinetin tốt kết hợp với z NAA để nhân nhanh chồi Giảo cổ lam (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 z Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ 41 om l.c gm @ an Lu n va ac th si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 v DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc hóa học Flavononit Saponin Hình 4.1: Chồi Giảo cổ lam tái sinh mơi trường MS ½ MS 34 Hình 4.2: Chồi Giảo cổ lam mơi trường MS có bổ sung hàm lượng Kinetin giai đoạn tái sinh 36 Hình 4.3: Chồi Giảo cổ lam mơi trường MS có bổ sung hàm lượng Kinetin BA giai đoạn nhân nhanh 38 a lu Hình 4.4: Chồi Giảo cổ lam mơi trường MS có bổ sung hàm n lượng Kinetin NAA giai đoạn nhân nhanh 40 n va Hình 4.5: Rễ Giảo cổ lam mơi trường MS có bổ sung 0,1mg/l IBA 42 p ie gh tn to d oa nl w f an nv a lu oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vi MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài .2 1.4 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU a lu 2.1 Khái quát Giảo cổ lam .3 n 2.1.1 Nguồn gốc phân bố cấy Giảo cổ lam .3 n va 2.1.2 Phân loại .3 tn to 2.1.3 Đặc điểm thực vật học Giảo cổ lam .3 p ie gh 2.1.4 Điều kiện sinh thái Giảo cổ lam .4 2.1.5 Vị trí Giảo cổ lam hệ thống thực vật học dược liệu oa nl w 2.1.6 Nghiên cứu giá trị y học Giảo cổ lam 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 d a lu 2.2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 f an nv 2.2.2 Một số chất điều hịa sinh trưởng ni cấy mô tế bào thực vật 12 oi lm ul 2.2.3 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình ni cấy mơ tế bào thực vật 13 2.3 Các phương pháp nhân giống trồng 15 at nh 2.3.1 Nhân giống hưu tính (bằng hạt) .16 2.3.2 Nhân giống vơ tính 16 z z @ 2.3.3 Nhân giống vơ tính in vitro 17 gm 2.4 Tình hình nghiên cứu Giảo cổ lam giới nước 18 om l.c 2.4.1 Tình hình nghiên cứu Giảo cổ lam giới 18 2.4.1 Tình hình nghiên cứu Giảo cổ lam nước 20 an Lu PHẦN 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 vii 3.1 Đối tượng, vật liệu phạm vi nghiên cứu 23 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu .23 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu .23 3.1.3 Hóa chất thiết bị 23 3.2 Điều kiện nuôi cấy 24 3.3 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 24 3.4 Nội dung nghiên cứu phương pháp nghiên cứu .24 3.4.1 Nội dung nghiên cứu .24 a lu 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 24 n 3.5.1 Thu thập số liệu .30 n va 3.5.2 Các tiêu theo dõi 30 tn to 3.5.3 Phương pháp xử lý số liệu 31 p ie gh PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu oa nl w nấm, vi khuẩn Giảo cổ lam .32 4.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng môi trường MS, ½ MS đến khả tái sinh d nv a lu chồi Giảo cổ lam (sau 20 ngày nuôi cấy) 33 f an 4.3 Kết ảnh hưởng hàm lượng kinetin đến cảm ứng chồi Giảo cổ lam 35 oi lm ul 4.4 Kết ảnh hưởng hàm lượng kinetin tốt kết hợp với hàm lượng BA thích hợp đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam 37 at nh 4.5 Kết ảnh hưởng hàm lượng kinetin tốt kết hợp với NAA đến khả z nhân nhanh giống Giảo cổ lam .39 z PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 gm @ 5.1 Kết luận .43 TÀI LIỆU THAM KHẢO om l.c 5.2 Kiến nghị 43 an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 viii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu trong luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố công trình nghiên cứu Các số liệu, kết nghiên cứu cơng trình nghiên cứu khác tham khảo trích dẫn tài liệu tham khảo đầy đủ a lu Thái Nguyên, ngày tháng năm 2015 n n va XÁC NHẬN CỦA GVHD NGƢỜI VIẾT CAM ĐOAN tn to Đồng ý cho bảo vệ kết p ie gh trước hội đồng khoa học! GVHD2 Sinh Viên d oa nl w GVHD1 f an nv a lu oi lm ul XÁC NHẬN CỦA GV CHẤM PHẢN BIỆN at nh Giáo viên chấm phản biện xác nhận sinh viên sửa chữa sai sót sau Hội đồng chấm yêu cầu! z z (Ký, họ tên) om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Giảo cổ lam có tên khoa học Gynostemma pentaphyllum (Thunb) thuộc họ Cucurbitaceae Còn gọi Thất diệp đởm, trà vạn, trường sinh, cỏ thần kỳ Đây dược liệu quý ghi sách cổ “Nơng tồn thư hạch chú” Từ xưa sử dụng cho vua chúa để tăng sức khỏe, kéo dài tuổi thọ làm đẹp a lu Giảo cổ lam phân bố số quốc gia Trung Quốc, Nhật Bản, n Ấn Độ, Triều Tiên, Việt Nam… Ở nước ta Giảo cổ lam phát n va tỉnh trung du miền núi phía Bắc Lào Cai, Cao Bằng, Bắc Kạn,…và tn to số địa phương khác (Phạm Hoàng Hộ, 1999) [14] p ie gh Theo nghiên cứu GS.TS Phạm Thanh Kỳ cho thấy Giảo cổ lam chứa 100 loại Saponin có nhiều cấu trúc giống Saponin oa nl w nhân sâm tam thất Ngồi Giảo cổ lam cịn chứa Flavonoid Đây chất có khả chống lão hóa mạnh, tăng cường sức khỏe, giúp ổn định d nv a lu huyết áp, làm tan huyết khối, ngăn ngừa xơ vữa mạch, phòng chống tai f an biến tim, mạch, não, chống lão hóa, ngăn ngừa stress, ngừa ung thư não, tử oi lm ul cung, da, … (Bô ̣ Y Tế, 2009) [6] Với tác dụng nên có sản phẩm thuốc, trà at nh thực phẩm chức sử dụng Giảo cổ lam làm nguyên liệu, nguồn z Giảo cổ lam tự nhiên bị khai thác mức bị tuyệt z chủng Theo sách đỏ Việt Nam Giảo cổ lam xếp thang bậc phân @ gm hạng IUCN 1994 sách đỏ VN: EN A1a,c,d (Bộ mơn Thực vật, 2004) [5] om l.c Vì việc nghiên cứu nhân giống Giảo cổ lam phục vụ cho công tác sản xuất cần thiết Việc nhân giống Giảo cổ lam tiến an Lu hành thông qua đoạn thân hay hạt Tuy nhiên để tạo lượng giống lớn, n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 đồng bệnh thời gian ngắn để phục vụ cho sản xuất bảo tồn ni cấy mơ tế bào phương pháp tối ưu Xuất phát từ tình hình thực tiễn đó, tơi thực đề tài: “Nghiên cứu khả nhân giống Giảo cổ lam (gynostemma pentaphyllum phương pháp in vitro’’ 1.2 Mục đích nghiên cứu - Tìm quy trình nhân nhanh giống Giảo cổ lam phương pháp in vitro 1.3 Yêu cầu đề tài Xác định số yếu tố ảnh hưởng đến khả tái sinh: a lu - Xác định ảnh hưởng thời gian khử trùng dung dịch HgCl2 0,1% đến n khả tạo vật liệu nấm, vi khuẩn Giảo cổ lam va n - Xác định ảnh hưởng hàm lượng môi trường MS đến khả tái sinh tn to chồi Giảo cổ lam p ie gh - Xác định ảnh hưởng hàm lượng số chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam cổ lam d oa nl w - Xác định ảnh hưởng hàm lượng auxin đến khả rễ Giảo nv a lu 1.4 Ý nghĩa đề tài f an - Ý nghĩa khoa học nghiên cứu khoa học oi lm ul + Giúp sinh viên củng cố hệ thống lại kiến thức học at nh + Biết phương pháp nghiên cứu vấn đề khoa học, xử lý, phân tích z số liệu, biết cách trình bày báo khoa học z @ - Ý nghĩa thực tiễn om l.c nghiên cứu gm Xác định yếu tố ảnh hưởng đến nuối cấy, làm tiền đề cho an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 42 Tuy kết nghiên cứu đạt có khác biệt so với nghiên cứu trước đây, khẳng định giảo cổ lam có khả rễ q trình ni cấy in vitro để phục vụ cho nhân giống loài Như với số rễ/cây tốt đạt 4,16 rễ môi trường MS có bổ sung IBA 0,1mg/l nghiên cứu lựa chọn cho nghiên cứu rễ a lu n b c n va a p ie gh tn to oa nl w e d d a lu Hình 4.5: Rễ Giảo cổ lam mơi trƣờng MS có bổ sung 0,1mg/l IBA nv a, Đối chứng rễ nhỏ, ngắn b, IBA 0,1mg/l rễ khỏe, dài c, IBA 0,2mg/l rễ khỏe, dài d, f an IBA 0,3mg/l rễ khỏe, dài e, IBA 0,4mg/l rễ nhỏ, ngắn oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 43 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Sau nghiên cứu thời gian khử trùng, khả tái sinh, nhân nhanh Giảo cổ lam mơi trường MS, ½MS chất kích thích BA, Kinetin, NAA, IBA đưa kết luận sau: - Khử trùng Giảo cổ lam HgCl2 0,1% phút cho kết cao với tỷ lệ mẫu cịn sống 86,67% - Mơi trường thích hợp cho tái sinh chồi Giảo cổ lam: MS + Inositol a lu 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l, pH: 5,6-5,8, tỷ lệ mẫu tái sinh đạt 86,67% n n va - Mơi trường thích hợp cho cảm ứng chồi Giảo cổ lam: MS + đường 30g/l + tn to agar 5g/l bổ sung Kinetin với hàm lượng 0,5 mg/l, pH: 5,6-5,8, với tỷ lệ mẫu bật chồi đạt 100% p ie gh - Môi trường nhân nhanh: + Môi trường MS + Inositol 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l bổ oa nl w sung Kinetin với hàm lượng 0,5mg/l kết hợp với BA hàm lượng 0,5mg/l, pH: 5,6-5,8 cho hệ số nhân chồi đạt 4,36 lần với chất lượng chồi nhỏ, xanh d a lu + Môi trường MS + Inositol 100mg/l + đường 30g/l + agar 5g/l + nv Kinetin 0,5 mg/l kết hợp với NAA hàm lượng 0,2mg/l, pH: 5,6-5,8 cho hệ số f an nhân chồi cao 3,33 lần, chất lượng chồi nhỏ, xanh ul oi lm - Môi trường rễ: MS + đường 30g/l + agar 5g/l bổ sung IBA với hàm lượng 0,1 mg/l, pH: 5,6-5,8 khả rễ tốt với số rễ/cây z 5.2 Kiến nghị at nh 4,16 rễ z gm trùng đến hiệu tạo vật liệu @ - Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng khác chất khử om l.c - Nghiên cứu ảnh hưởng số chất hữu (khoai tây, cà dốt, nước dừa) đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thị Th Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Hà Thanh Bình, Nguyễn Tất Cảnh, Phùng Đăng Chinh, Nguyễn Ích Tân (2002), Trồng trọt đại cương, NXB Nông Nghiệp Bộ Khoa Học Công Nghệ (2007), Sách đỏ Việt Nam (phần thực vật), Nxb Khoa học tự nhiên & công nghệ, Hà Nội a lu Bộ môn Dược liệu, Trường Đại học Dược hà Nội (1998), Bài giảng Dược n liệu tập I, 126 – 143, 259 – 289 n va Bộ môn Thực vật (2004), Thực vật Dược phân loại thực vật, Trường tn to Đại học Dược Hà Nội p ie gh Bô ̣ Y Tế , Hội nghị tổng kết 20 năm bảo tồn gen dược liệu Tam Đảo, Bộ Y tế 06/5/2009 oa nl w Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, tập 2, 308, 309 Võ Văn Chi (2003), Từ điển thuốc Việt Nam, tập 2, 1322, 1323 d nv a lu Lê Văn Cường (1998), Góp phần nghiên cứu Gynostemma f an pentaphyllum (Thunb) Makinio Cucurbitaceae,Khóa luận tốt nghiệp oi lm ul Dược sĩ Đại học – trường Đại học Dược Hà Nội 10 Nguyễn Tiến Dẫn (1999), Ngiên cứu thành phần hóa học tác dụng at nh sinh học Thất diệp đởm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược z học – Trường Đại học Dược hà Nội z 11 Trịnh Đình Đạt (2009), Cơng nghệ sinh học (công nghệ di truyền), tập 4, gm @ Nxb giáo dục om l.c 12 Dược điển Việt Nam IV, 2009 xuất lần thứ tư Phụ lục 5.4 Hà Nội an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 13 Nguyễn Thị Thanh Duyên (2000), Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng Thất diệp đởm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Dược học - Trường Đại học Dược Hà Nội 14 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, NXB Trẻ, I, 563, 567 15 Nguyễn Thị Hòa, Nguyễn Bá Hoạt (2001), Cơng trình NCKH 1987 2000 Viện dược liệu, NXBKH & KT 16 Phạm Thanh Hương (2003), Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Giảo cổ lam Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ a lu Đại học - Trường Đại học Dược Hà Nội n 17 Phạm Thanh Kỳ chủ biên (2006), Thực tập dược liệu hóa học, trung tâm va n thông tin thư viện trường Đại học Dược Hà Nội in tn to 18 Phạm Thanh Kỳ, Phan Thị Phi Phi, Phan Thị Thu Anh (2007), Nghiên p ie gh cứu tác dụng tăng đáp ứng miễn dịch dược liêu Giảo cổ lam (cây Gynostemma pentaphyllum (Thunb) Makinio,Tạp chí thơng tin Y oa nl w Dược số 24 19 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB y học d nv a lu 20 Ngô Quốc Luật, Vũ Thị Tuyết Mai, Nguyễn Thị Bình (2010), Biện pháp f an nhân giống vơ tính chất lượng hạt giống dền tng Tạp chí oi lm ul dược liệu, tập 15, số 1/2010, trang 21 Đặng Ngọc Phúc, Nguyễn Thanh Tùng, Dương Thị Thùy Châu, Trương at nh Thị Bích Phượng (2011), “Nhân giống in vitro Sa Nhân tím z (Amomum longiligulare T.L.Wu)”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, z @ 9(4A), 689-698 gm 22 Vũ Quang Sáng, Nguyễn Thị Nhẫn, Mai Thị Tân, Nguyễn Thị Kim om l.c Thanh (2007), Giáo trình sinh lý thực vật ứng dụng, NXBNN, Hà Nội 23 Phạm Anh Thắng (2001), Một số biện pháp chống thối mầm giống xuyên an Lu khung bảo quản thời vụ thích hợp để sản xuất dược liệu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Tam Đảo, Cơng trình NCKH 1987 – 2000, Viện Dược liệu, NXB KH&KT 24 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 25 Trần Đức Thiện, La Quang Độ Trần Quốc Hưng (2010), “Nghiên cứu đặc điểm sinh thái học số loài Giảo cổ lam (Gynostemma spp) vườn quốc gia Ba Bể, Bắc Kạn”, Tạp chí Nơng nghiệp Phái triển nơng thơn(Hà Nội), tháng 11/2010, trang 52 a lu 26 Hồng Ngọc Thuận (2000), Nhân giống vơ tính ăn (chiết, ghép, n giâm cành, tách chồi nuôi cấy in vitro, Nxb Nông nghiệp, Huế n va 27 Viện Dược Liệu (1993) Tài nguyên thuốc NXB Khoa Học kỹ thuật tn to Hà Nội p ie gh 28 Viện Dược Liệu (1996), Cây thuốc Việt Nam NXB Khoa Học kỹ thuật Hà Nội oa nl w 29 Viện Dược Liệu (1998), Điều tra đánh giá dược liệu số vùng trọng điểm tỉnh Lào Cai (Tài liệu nội bộ) d nv a lu 30 Viện Dược liệu (2010), Phương pháp nghiên cứu thuốc từ thảo dược f an NXB khoa học kỹ thuật hà Nội vật, Nxb Giáo dục at nh Tài liệu tiếng anh oi lm ul 31 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực z 32 Akihisa, Toshihiro, Tamura (1990), “4α- methyl sterol isolated from z Gynostemma pentaphyllum”, phytocchemistry, 29 (5), 1647 - 1651 @ gm 33 Anchalee Jala and Wassamon Patchpoonporn, (2012) “Effect of BA om l.c NAA and 2,4D on Micropropagation of Tiaogulan (Gynostemma pentaphy llum Makino), International Transaction Journal of an Lu Engineering, Management n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 34 Ankang Pharmaceutical Intitution of Beijing Medcal University Promotional meterial, 1999 35 Arichi S, Takemoto T & Uchida Y (1986) Prevention of glucocorticoid side effects by saponin of Gynostemma pentaphyllum, Paten - Japan Kokai Tokyo Koho - 60 105 625 36 Carlson R.F (1964), Dwarf fruit trees, Mich Arg Ext Serv.Bull, pp 432 37 Chen J.C et al (2000), “Therapeutic effect Gypenoside on chronic liver injury and fibrosis by CCl4 in rats”.Am J Chin Med, 28 (2), 175 - 185 a lu 38 Cui J., Eneroth., Bruhl J.G (1999), Gynostemma pentaphyllum : n “indentification of major sapogenins and differentation from Panax va n species”, Eur J Pharm Sci, (3), 187 - 191 tn to 39 Murashige T and Skoog F (1962), “ A revised medium for rapid growth p ie gh and bio-assays with tobacco tissue cultures”, Physiol Plant, 15(3), p 473-497 oa nl w 40 Vander Zaag D.E Plantes de pomme de terre Sources d’approvisionnement et traitement Brochure de vulgaristion VIVAA d nv a lu 41 Zhang ZH, et al.Propagation of Gynostemma pentaphyllum by tissue f an culture China J Chinese Materia Medica (1989) 14(6) oi lm ul at nh z z om l.c gm @ an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Một số hình ảnh q trình thí nghiệm a lu Đối tượng Vật liệu n n va p ie gh tn to d oa nl w Tái sinh môi trường MS a lu Tái sinh môi trường Kinetin (sau 20 ngày nuôi cấy) f an nv (sau 20 ngày nuôi cấy) oi lm ul at nh z z om l.c gm @ Nhân nhanh (sau 30 ngày) Ra rễ (sau 30 ngày) an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Phụ lục 2: Kết xử lý số liệu Bảng 4.1: Kết ảnh hƣởng thời gian khử trùng HgCl2 0,1 % đến khả tạo vật liệu vô trùng BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMN FILE HGCL 23/ 5/** 9:23 PAGE anh huong cua thoi gian khu trung HgCl2 den kha nang tao vat lieu sach VARIATE V003 TLMN LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN a lu n n va p ie gh tn to ========================================================================= ==== CT$ 20457.8 6819.25 921.08 0.000 * RESIDUAL 59.2286 7.40358 -* TOTAL (CORRECTED) 11 20517.0 1865.18 oa nl w BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMKN FILE HGCL 23/ 5/** 9:23 PAGE anh huong cua thoi gian khu trung HgCl2 den d kha nang tao vat lieu sach a lu VARIATE V004 TLMKN nv SOURCE OF VARIATION ER DF f an LN PROB MEAN SQUARES SQUARES F RATIO oi lm ul SUMS OF LN at nh ========================================================================= CT$ 13067.9 4355.96 ****** 0.000 * RESIDUAL 29.6581 3.70726 -* TOTAL (CORRECTED) 11 13097.5 1190.68 z z om l.c gm @ BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLMC FILE HGCL 23/ 5/** 9:23 PAGE an Lu anh huong cua thoi gian khu trung HgCl2 den kha nang tao vat lieu sach n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 VARIATE V005 TLMC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ======================================================================== CT$ 11984.4 3994.80 539.57 0.000 * RESIDUAL 59.2294 7.40367 -* TOTAL (CORRECTED) 11 12043.6 1094.87 a lu n TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE HGCL 23/ 5/** 9:23 PAGE va anh huong cua thoi gian khu trung HgCl2 den n kha nang tao vat lieu sach tn to p ie gh MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS 3 3 oa nl w TLMN 100.000 6.67000 71.1100 4.44667 TLMKN 0.000000 86.6700 20.0000 17.7767 TLMC 0.000000 6.67000 8.89000 77.7767 d SE(N= 3) 1.57094 1.11164 1.57095 5%LSD 8DF 5.12268 3.62496 5.12271 nv a lu f an ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE HGCL 23/ 5/** 9:23 PAGE ul oi lm anh huong cua thoi gian khu trung HgCl2 den kha nang tao vat lieu sach nh at F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 43.188 2.7210 6.0 0.0000 34.506 1.9254 6.2 0.0000 33.089 2.7210 11.7 0.0000 z | | | | om l.c gm @ TLMN TLMKN TLMC GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 45.557 12 31.112 12 23.334 z VARIATE an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Bảng 4.2: Kết ảnh hƣởng môi trƣờng MS, 1/2MS đến khả tái sinh Giảo cổ lam BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE TAI SINH 23/ 5/** 9:34 PAGE anh huong cua moi truong MS, 1/2 MS den kha nang tai sinh VARIATE V003 TLTS LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN a lu n n va p ie gh tn to ========================================================================= CT$ 416.667 416.667 25.00 0.009 * RESIDUAL 66.6667 16.6667 -* TOTAL (CORRECTED) 483.333 96.6667 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TAI SINH 23/ 5/** 9:34 PAGE anh huong cua moi truong MS, 1/2 MS den kha oa nl w nang tai sinh d MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS TLTS 86.6667 70.0000 f an nv a lu oi lm ul SE(N= 3) 2.35702 5%LSD 4DF 9.23903 nh ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TAI SINH 23/ 5/** 9:34 PAGE at z anh huong cua moi truong MS, 1/2 MS den kha z nang tai sinh @ STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.8319 4.0825 5.2 0.0088 om l.c TLTS GRAND MEAN (N= 6) NO OBS 78.333 VARIATE gm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - | | | | an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Bảng 4.3: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng Kinetin đến khả cảm ứng chồi Giảo cổ lam BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLBC FILE KINETIN 22/ 5/** 15:40 PAGE anh huong cua nong kinetin den kha nang tai sinh VARIATE V003 TLBC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN a lu n n va tn to ========================================================================= CT$ 893.333 223.333 11.17 0.001 * RESIDUAL 10 200.000 20.0000 -* TOTAL (CORRECTED) 14 1093.33 78.0952 p ie gh TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KINETIN 22/ 5/** 15:40 PAGE anh huong cua nong kinetin den kha nang tai oa nl w sinh d MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS TLBC 76.6667 83.3333 3 86.6667 100.000 90.0000 f an nv a lu ul oi lm SE(N= 3) 2.58199 5%LSD 10DF 8.13594 nh at ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KINETIN 22/ 5/** 15:40 PAGE z z anh huong cua nong kinetin den kha nang tai gm @ sinh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 8.8372 4.4721 5.1 0.0012 om l.c an Lu TLBC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 87.333 VARIATE | | | | n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Bảng 4.4: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng Kinetin tốt kết hợp với hàm lƣợng BA thích hợp đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE KI+BA 22/ 5/** 17:18 PAGE anh huong cua nong kinetin tot nhat ket hop voi nong BA thich hop den kha VARIATE V003 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO a lu n n va SQUARES SQUARES LN ======================================================================== CT$ 21.2133 5.30333 284.11 0.000 * RESIDUAL 10 186668 186668E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 14 21.4000 1.52857 tn to p ie gh TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KI+BA 22/ 5/** 17:18 PAGE anh huong cua nong kinetin tot nhat ket hop voi nong BA thich hop den kha d oa nl w MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS HSNC 1.06667 2.20000 3 2.93333 4.36667 3.93333 f an nv a lu oi lm ul SE(N= 3) 0.788813E-01 5%LSD 10DF 0.248558 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KI+BA 22/ 5/** 17:18 PAGE nh at z anh huong cua nong kinetin tot nhat ket hop voi nong BA thich hop den kha z @ STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.2364 0.13663 4.7 0.0000 om l.c | | | | an Lu HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.9000 VARIATE gm F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Bảng 4.5: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng Kinetin tốt kết hợp với hàm lƣợng NAA thích hợp đến khả nhân nhanh chồi Giảo cổ lam BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE KI+NAA 22/ 5/** 17: PAGE anh huong cua nong kinetin tot nhat ket hop voi nong NAA thich hop den kh VARIATE V003 HSNC LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO a lu n n va tn to SQUARES SQUARES LN ======================================================================== CT$ 9.41067 2.35267 271.46 0.000 * RESIDUAL 10 866664E-01 866664E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 14 9.49733 678381 p ie gh TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE KI+NAA 22/ 5/** 17: PAGE oa nl w anh huong cua nong kinetin tot nhat ket hop voi nong NAA thich hop den kh d MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS HSNC 1.06667 1.86667 3 2.26667 3.33333 2.90000 f an nv a lu oi lm ul SE(N= 3) 0.537483E-01 5%LSD 10DF 0.169363 nh at ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE KI+NAA 22/ 5/** 17: PAGE z z STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.82364 0.93095E-01 4.1 0.0000 | | | | an Lu HSNC GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.2867 om l.c VARIATE gm @ anh huong cua nong kinetin tot nhat ket hop voi nong NAA thich hop den kh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 Bảng 4.6: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng IBA đến khả rêc Giảo cổ lam BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE RA RE 22/ 5/** 17:37 PAGE anh huong cua nong IBA den kha nang re VARIATE V003 SRTB LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN a lu n n va p ie gh tn to ========================================================================= CT$ 18.1293 4.53233 283.27 0.000 * RESIDUAL 10 160003 160003E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 14 18.2893 1.30638 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RA RE 22/ 5/** 17:37 PAGE anh huong cua nong IBA den kha nang re d oa nl w MEANS FOR EFFECT CT$ -CT$ NOS SRTB 1.10000 4.16667 3 3.86667 3.70000 3.13333 nv a lu f an SE(N= 3) 0.730304E-01 5%LSD 10DF 0.230121 - oi lm ul ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RA RE 22/ 5/** 17:37 PAGE nh at anh huong cua nong IBA den kha nang re z z F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1430 0.12649 4.0 0.0000 om l.c gm SRTB GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.1933 @ VARIATE | | | | an Lu n va ac th 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99 si 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.2237.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.66 37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.99

Ngày đăng: 25/09/2023, 18:59

Xem thêm:

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN