Thông tin tài liệu
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM lu HOÀNG THỊ PHƢỢNG an n va Tên đề tài: SINH TRƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY SÂM CAU (Curculigo orchioides Gaertn) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO” p ie gh tn to “NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC va an lu u nf Hệ đào tạo: Chính quy ll CNSH - CNTP z at nh Khóa học: oi Khoa: Công nghệ Sinh học m Chuyên ngành: 2011 – 2015 z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên - 2015 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM lu HOÀNG THỊ PHƢỢNG an n va Tên đề tài: SINH TRƢỞNG ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY SÂM CAU (Curculigo orchioides Gaertn) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO” p ie gh tn to “NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC an lu Hệ đào tạo: Chuyên ngành: Khoa: Khóa học: Giảng viên hƣớng dẫn: ll u nf va Chính quy Công nghệ Sinh học CNSH - CNTP 2011 – 2015 1.PGS.TS Ngơ Xn Bình Bộ Khoa học Cơng nghệ ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH - CNTP - Trƣờng ĐH Nông lâm Thái Nguyên oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Thái Nguyên - 2015 n va ac th si i LỜI CẢM ƠN Sau tháng thực tập phịng thí nghiệm ni cấy mơ Khoa Cơng nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm đến em hồn thành xong đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa thầy cô giáo môn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc thầy giáo PGS.TS Ngơ Xn Bình ThS Nguyễn Thị Tình tận tình bảo, hướng dẫn em suốt thời gian thực lu đề tài an n va Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đóng góp hướng dẫn quý Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn tới bạn bè người thân động viên, gh tn to báu Ks Lã Văn Hiền trình thực hồn thành khóa luận p ie giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em trình học tập nghiên cứu nl w Do thời gian thực đề tài có giới hạn nên đề tài tránh khỏi d oa sai sót Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy bạn an lu để đề tài em hoàn thiện va Em xin chân thành cảm ơn! u nf Thái Nguyên, ngày 03 tháng 06 năm 2015 ll Sinh viên thực oi m z at nh Hoàng Thị Phượng z m co l gm @ an Lu va n i ac th si ii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Bảng 3.1: Bảng tên hóa chất dùng thí nghiệm .22 Bảng 3.2: Bảng tên thiết bị dùng thí nghiệm 22 Bảng 4.1: Kết ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 29 Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) .31 Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi lu an Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 33 n va Bảng 4.4: Kết ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp Kinetin đến khả Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp NAA đến khả nhân gh tn to nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 35 ie nhanh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) .37 p Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ Sâm nl w cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 d oa Bảng 4.7: Kết ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ Sâm ll u nf va an lu cau (sau 30 ngày nuôi cấy) 40 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu va n ii ac th si iii DANH MỤC CÁC BẢNG BIỂU Hình 2.1 Cây Sâm cau Hình 2.2 Lá Sâm cau Hình 2.3 Hoa Sâm cau Hình 2.4 Quả hạt Sâm cau Hình 2.5: Một số hợp chất có dược liệu Sâm cau [37] Hình 4.1: Ảnh chồi Sâm cau môi trường bổ sung BA hàm lượng khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 30 lu Hình 4.2: Ảnh chồi Sâm cau mơi trường bổ sung Kinetin hàm an lượng khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 32 va n Hình 4.3: Ảnh chồi Sâm cau môi trường bổ sung BA hàm lượng to tn khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 34 p ie gh Hình 4.4: Ảnh chồi Sâm cau môi trường bổ sung BA 1,0 mg/l kết hợp Kinetin hàm lượng khác (sau 30 ngày ni cấy) 36 w Hình 4.5: Ảnh chồi Sâm cau môi trường bổ sung BA 1,0 mg/l kết hợp oa nl NAA hàm lượng khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 d Hình 4.6: Ảnh rễ Sâm cau môi trường bổ sung IBA hàm lượng lu an khác nhau(sau 30 ngày nuôi cấy) 40 u nf va Hình 4.7: Ảnh rễ Sâm cau mơi trường bổ sung NAA hàm lượng ll khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 41 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va iii ac th si iv DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT lu an B1 : Thiamin HCl B2 : Nicotinic acid B5 : Gamborg‟s B6 : Pyridocine BA : 6- Benzyladenine Cs : Cộng CT : Công thức CV : Coeficient of Variation (Hệ số biến động) n va p ie gh tn to Deoxyribonucleic Acid Đ/C : Đối chứng GA3 : Gibberellic Acid IBA : β – Indol Butyric Acid LSD : Least Singnificant Diference Test (Sai khác trung bình có ý nghĩa cơng thức nl w DNA : α -Napthalene Acetic Acid u nf Thí nghiệm ll oi m : Murashige & Skoog (1962) va : NAA : TN Kinetin an MS : lu KIN d oa mức độ tin cậy 95%) z at nh z m co l gm @ an Lu n va iv ac th si v MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 1.4.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn .3 lu an PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU n va 2.1 Giới thiệu chung Sâm cau 2.1.2 Phân loại gh tn to 2.1.1 Nguồn gốc ie 2.1.3 Đặc điểm hình thái học Sâm cau p 2.1.4 Giá trị dược liệu Sâm cau nl w 2.1.5 Phương pháp truyền thống nhân giống Sâm cau 10 d oa 2.2 Khái niệm sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 an lu 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 va 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 11 u nf 2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình ni cấy mơ tế bào 12 ll 2.3.1 Vật liệu nuôi cấy .12 m oi 2.3.2 Điều kiện nuôi cấy 12 z at nh 2.3.3 Môi trường dinh dưỡng 13 2.4 Các giai đoạn ni cấy mơ tế bào thực vật .16 z gm @ 2.5 Tình hình nghiên cứu nhân giống Sâm cau phương pháp nuôi cấy mô giới Việt Nam 17 l m co 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 17 2.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 19 an Lu va n v ac th si vi PHẦN ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Đối tượng, vật liệu phạm vi nghiên cứu 22 3.1.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 22 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 22 3.1.3 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm .22 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 23 3.2.1 Địa điểm nghiên cứu .23 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 23 3.3 Nội dung nghiên cứu 23 lu 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số Cytokinin đến khả tái an n va sinh chồi Sâm cau .23 trưởng đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 23 gh tn to 3.3.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh ie 3.3.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng số Auxin đến khả p rễ Sâm cau 23 nl w 3.4 Phương pháp nghiên cứu 24 d oa 3.4.1 Phương pháp nghiên cứu nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số an lu Cytokinin đến khả tái sinh chồi Sâm cau 24 va 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng u nf chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 25 ll 3.4.3 Phương pháp nghiên cứu nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng hàm lượng m oi Auxin đến khả rễ Sâm cau .27 z at nh 3.5 Các tiêu theo dõi đánh giá 28 PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .29 z gm @ 4.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng Cytokinin đến khả tái sinh chồi Sâm cau .29 l m co 4.1.1 Kết ảnh hưởng BA đến khả tái sinh chồi Sâm cau .29 4.1.2 Kết ảnh hưởng Kinetin đến khả tái sinh chồi Sâm cau 31 an Lu n va vi ac th si vii 4.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 33 4.2.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau .33 4.2.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 35 4.2.3 Kết ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau 37 4.3 Kết ảnh hưởng hàm loại Auxin đến khả rễ Sâm cau 39 lu 4.3.1 Kết ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả rễ Sâm cau 39 an n va 4.3.2 Kết ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả rễ Sâm cau 39 5.1 Kết luận 42 gh tn to PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 p ie 5.2 Kiến nghị 42 d oa nl w TÀI LIỆU THAM KHAO ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va vii ac th si PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Sâm cau có nhiều tên Ngải cau, Cơ nốc lan, Tiên mao, với tên khoa học Curculigo orchioides Gaertn thuộc họ thuộc họ thủy tiên (Amaryllidaceae) [17] Sâm cau loại thân thảo mọc hoang vùng núi rừng Việt Nam, Lào, Malysia, Thái Lan, Philippine, Ấn Độ, Trung Quốc [22], [30], [31] Ở Việt Nam Sâm cau phân bố rải rác tỉnh vùng núi, từ Lai Châu, Tuyên Quang, Cao Bằng đến Tây Nguyên [4] lu Theo y học cổ truyền Ấn Độ, Sâm cau có tính chất nhầy dịu, tác dụng lợi tiểu, an n va bổ kích dục, sử dụng chữa trĩ, vàng da, hen suyễn, tiêu chảy Theo y học cổ truyền điều trị suy giảm thể lực, chữa bệnh hen suyễn, còi, vàng da, tiêu chảy, đau bụng gh tn to Trung Quốc gọi tên Sâm cau với tên gọi “Xianmao” sử dụng thuốc bổ để p ie bệnh lậu, kháng viêm, chống ung thư tăng cường chức sinh lý cho nam giới [21], [22], [30], [44] nl w Như nhận thấy rằng, tác dụng S â m c a u tăng cường d oa sức khỏe tinh thần, giảm mệt mỏi, tăng sức lực độ dẻo dai, tăng cường chức an lu sinh lý nam giới, củng cố hệ thống miễn dịch,… Trên thị trường nước va cho phép bán chế phẩm có nguồn gốc Sâm cau, chẳng hạn chế phẩm u nf “KAMA SUTRA CAPSULE” hãng Alma Health Care, “STRONG-NITE ll CAPSULE” hãng Medimix, „POTENCY PLUS” “BRAINCARE” Trung m oi Quốc, “AIPANI KAMON” hãng Vaipani "SHARMIOTONE SYRUP” z at nh hãng Sharmila [22] Do giá trị dược liệu lớn Sâm cau bị khai thác tới mức cạn kiệt tự nhiên Do việc tìm kỹ thuật nhân giống cho đối tượng z gm @ tự nhiên quan trọng Theo tài liệu kỹ thuật nhân giống số loài thuốc quan trọng l m co thương mại, công bố Ấn Độ mơ tả, Sâm cau sử dụng nhân giống vơ tính phương pháp cắt mầm giâm hom Tuy nhiên, với tìm hiểu chúng tơi an Lu chưa có quy trình cơng bố quy trình nhân giống vơ tính Sâm cau va n ac th si 41 Từ bảng 4.7 cho thấy: Khi bổ sung NAA vào môi trường có ảnh hưởng đến khả rễ chồi Sâm cau Cụ thể: CT2 với NAA 0,5 mg/l số rễ tạo thành nhiều 2,23 rễ/cây, chất lượng rễ yếu, nhỏ, ngắn CT3 CT4 hàm lượng NAA 1,0 mg/l 2,0 mg/l số rễ có xu hướng giảm từ 1,97 rễ xuống 1,53 rễ; chất lượng rễ thu từ nhỏ, khỏe, ngắn sang nhỏ, yếu, ngắn CT1(Đ/C) khả hình thành rễ thấp 1,00 rễ/ cây, chất lượng rễ yếu, nhỏ, ngắn Theo nghiên cứu Thomas cs (2007) môi trường 1/2 MS bổ sung hàm lượng NAA từ 1,0 - 5,0 μmol/l hàm lượng 3,0 μmol/l cho tỷ lệ chồi rễ lu 64% với 1,8 rễ/chồi [56] Shende cs (2012) môi trường MS có bổ sung hàm an n va lượng NAA 0,25 mg/l cho tỷ lệ chồi rễ 60%, số rễ 2,00 rễ, chiều p ie gh tn to dài rễ 9,68 cm [52] b c d nl w a d oa Hình 4.7: Ảnh rễ Sâm cau mơi trƣờng bổ sung NAA an lu hàm lƣợng khác (sau 30 ngày nuôi cấy) va ngày nuôi a- NAA 0,0 mg/l số (sau rễ/cây30 1,00 rễ, rễ yếu,cấy) nhỏ, ngắn u nf b- NAA 0,5 mg/l số rễ/cây 2,23 rễ, rễ yếu, nhỏ, ngắn ll c- NAA 1,0 mg/l số rễ/ 1,97 rễ, rễ khỏe, nhỏ, ngắn m oi d- NAA 2,0 mg/l số rễ/cây 1,53 rễ, rễ yếu, nhỏ, ngắn z at nh z m co l gm @ an Lu n va 41 ac th si 42 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu đạt rút kết luận sau: - Môi trường MS bổ sung 4.0 mg/l BA thích hợp cho tái sinh chồi Sâm cau, tỷ lệ tái sinh chồi đạt 90% - Môi trường BA 1,0 mg/l + Kinetin 1,0 mg/l thích hợp cho nhân nhanh chồi Sâm cau đạt 4,63 lần, chất lượng chồi thu mập, xanh - Mơi trường MS bổ sung IBA thích hợp cho rễ: IBA 1,0 mg/l lu - Môi trường thích hợp cho nâng cao chất lượng chồi IBA 0,5 mg/l an - Để tiếp tục hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro Sâm cau chúng tơi n va 5.2 Kiến nghị + Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng khác tới khả p ie gh tn to có số kiến nghị sau: tái sinh chồi, nhân nhanh rễ Sâm cau (GA3,TDZ) nl w + Tiếp tục nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố khác (khoai tây, cà rốt, ll u nf va an lu Sâm cau d oa nước dừa…) tới trình ni cấy nhằm hồn thiện quy trình nhân giống in vitro oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va 42 ac th si TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Ngơ Xn Bình, Bùi Bảo Hồn, Nguyễn Thúy Hà (2003), Giáo trình cơng nghệ sinh học, NXB Nơng Nghiệp Hà Nội Nguyễn Tiến Bân Cs (2003), Danh lục lồi thực vật Việt Nam, NXB Nơng nghiệp, tập II, trang 1067 - 1093 Nguyễn Tiến Bân cs (2007), Sách đỏ Việt Nam, phần II - Thực vật, NXB Khoa học kỹ thuật, trang 82 - 84 lu Đỗ Huy Bích cs (2003), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, an II, NXB Khoa học kỹ thuật va n Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt Nam, II, tập 2, NXB Trẻ, trang 488 – 525 (2009): “Androgenic effect of AMA KONG” remedy on castrated mice, Journal of Medicinal Materials, vol 14(2), trang 108-114 p ie gh tn to Nguyen Thi Thu Huong, Tran My Tien, Tran Cong Luan, Nguyen Minh Duc Nguyễn Thị Thu Hương, Lương Kim Bích, Trần Mỹ Tiên, Trần Công Luận, nl w Phạm Khánh Biền (2008), Nghiên cứu tác dụng dược lý thực nghiệm chế d oa phẩm “Kỷ thược địa hoàng gia vị” theo hướng tăng cường thể trạng chức an lu gan, Tạp chí Y học TP.HCM, tập12, phụ số 4, trang 152 - 158 va Trần Thị Lệ, Trương Thị Bích Phượng, Trần Thị Triêu Hà (2008), Giáo trình u nf Cơng nghệ sinh học thực vật, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội ll Nguyễn Tập (2001), Áp dụng khung phân hạng IUCN-1994 để đánh giá m oi tình trạng bị đe doạ loài thuốc cần bảo tồn Việt Nam z at nh nay, Tạp chí Dược liệu, (2+3), trang 42 - 45 10 Nguyễn Tập (2006), Danh lục đỏ thuốc Việt Nam, Tạp chí Dược liệu,11(3), z @ trang 97 - 105 gm 11 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005), l “giáo trình cơng nghệ sinh học”, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội an Lu dụng, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội m co 12 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - nghiên cứu ứng n va 44 ac th si 13 Nguyễn Duy Thuần, Nguyễn Thị Phương Lan (2001), “Bước đầu nghiên cứu sâm cau”, Tạp chí Dược Liệu, 6(6), trang 163-166 14 Trần Mỹ Tiên, Hồ Việt Anh, Lê Minh Triết, Nguyễn Thị Thu Hương, Trần Công Luận (2008), “Ứng dụng kỹ thuật ELISA định lượng testosteron nghiên cứu tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nam gai chống (Tribulus terrestris L 15 Trần Mỹ Tiên, Nguyễn Thanh Hồng Vân, Trần Công Luận, Nguyễn Thị Thu Hương (2012), “Khảo sát tác dụng hướng sinh dục nam từ dịch chiết cồn rễ Bách bệnh (Eurycoma longifolia Jack.) chuột nhắt trắng”, Y học TP Hồ lu Chí Minh, tập 16, Phụ số 1, trang 186-191 an 16 Võ Châu Tuấn, Nguyễn Thị Út, Trần Quang Dần (2011), “Nhân giống in vitro va n sâm cau (Curculigo orchiodes Gaertn)-Một lồi thuốc q”, Tạp chí tn to Khoa hoc Công nghệ Đại học Đà Nẵng, 6(47), trang 163-169 chất kích thích sinh trưởng đến khả nhân nhanh chồi in vitro Sâm cau p ie gh 17 Nguyễn Thị Út, Nguyễn Thị Xuân Tâm, Từ Thị Tú (2010), “Ảnh hưởng (curculigo orchioides gaertn)”, Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên nl w cứu Khoa học lần thứ Đại học Đà Nẵng, trang 523 - 527 an lu Hà Nội d oa 18 Đỗ Năng Vịnh (2007), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông Nghiệp xuất Giáo Dục u nf va 19 Vũ Văn Vụ cộng (2008), Công nghệ sinh học tập CNSH tế bào, Nhà ll 20 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tân (2009), Sinh lý học thực vật, Nhà z at nh Tài liệu Tiếng Anh oi II m xuất Giáo dục 21 Agrawal VS (1997) Drugs plant of India, New Delhi: Kalyani publisher, 306 z @ 22 Ajit M (2012) A review on phytochemical and ethnopharmacological activities gm of Curculigo orchioides, Journal of Pharmaceutical Sciences, 39:(3-4):1-10 m co l 23 Anonymous (2000), In plant tissue from Research to commercialization, DBT Ministry of Sciene and Technology (Eds), India, p.33-34 an Lu n va 45 ac th si 24 Augustine AC and Souza LD(1997), “Regeneration of an anticarcinogenic herb, Curculigo orchioides (Gaertn.)”, In Vitro Cellular and Development Biology Plant 33(2), p.111-113 25 Bafna AR, Mistra SH (2006), Immunostimulatory effect of methanol extract of Curculigo orchioides on immunosuppressed mice J Enthnopharmacol, 104(12), p.1-4 26 Bandyopadhyay U, Das D, Banerjee R (1999) Reactive oxygen species: oxidative damage and pathogenesis Curr Sci., 77(5), p.658-665 27 Cao DP, Zheng YN, Qin LP, Han T, Zhang H, Rahman K, Zhang QY (2008) lu Curculigo orchioides, a traditional Chinese medicinal plant, prevents bone loss an in ovariectomized rats Maturitas, 59(4), p.373-380 va n 28 Chauhan NS, Dixit VK (2007), “Antihyperglycemic activity of the ethanolic tn to extract of Curculigo orchioides Gaertn”, Pharmacog Mag, 3(12), p.236-239 Curculigo orchioides Gaertn in male rats”, International Journal of Applied p ie gh 29 Chauhan NS, Dixit VK (2008), “Spermatogenic activity of rhizomes of Research in Natural Products, 1(2), p.26-31 nl w 30 Chauhan NS, Sharma V, Thakur M, Dixit VK (2010), “Curculigo orchioides: d oa the black gold with numerous health benefits”, Journal oF Chinese Integratve an lu Medicine, 8(7), p.613-623 va 31 Dhar ML, Dhar MN, Dhawan BN, Mehrota DN, Ray C (1968), “Screening of u nf Indian Plants for Biological activity part-I”, Indian J Expt Biol, 6, p.232-49 ll 32 Francis SV, Senapati SK and Rout GR (2007), “Rapid clonal propagation of m oi Curculigo orchioides Gaertn An endangered medicinal plant”, In Vitro z at nh Cellular and Development Biology Plant, 43(2), p.140-143 33 Garg S.N., Misawa L.N and Reddy M.N (1989), Phytochem, 28, p.1171-72 z gm p.1704-1712 @ 34 Hazarika BN (2003), Acclimatization of tissue cultured plants, Curr Sci 85, l 35 Jaiswal S, Batra A, Mehta BK (1984), “The antimicrobial efficiency of root oil J an Lu Phytopathol 109(1), p.90-93 m co against human pathogenic bacteria and phytopathogenic fungi”, n va 46 ac th si 36 Kubo M, Namba K, Nagamoto N, Nagao T, Nakanishi J, Uno H and Nishimura H (1983), Planta Med, 47, p.52-55 37 Lu HW, Zhu BH, Liang YK (2002), “Determination of curculigoside in crude medicine Curculigo orchioides by HPLC”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 27(3), p.192-4 38 Mathew JS, Savithri KE, Skaria BP and Kurien K (2004), “Quality variations in black musli (Curculigo orchioides Gaertn)”, Ancient Science of Life, 26(1), p.45-51 39 Mehta BK, and Gawarikar R (1991), Indian J Chem, 30B: 986-88 lu 40 Misra TN, Singh RS, Tripathi DN and Sharma SC (1990), Phytochem, 29: 929-31 an 41 Nagesh KS (2008), “High Frequency Multiple Shoot Induction of Curculigo va n orchioides Gaertn, “Shoot Tip V/S Rhizome Disc Taiwania”, 53(3), p.242-247 orchioides rhizome extract on pathogenic bacteria”, African Journal of Microbiology Research 3(1), p.005-009 p ie gh tn to 42 Nagesh KS and Shanthamma C (2009), “Antibacterial activity of Curculigo w 43 Nema RK, Dass SS, Mathur M and Ramawat KG (2008), “Morphactin and nl Cytokinin promotes high frequency bulbil formation from leaf explant of d oa Curculigo orchioides grown in shake flask culture”, Indian journal of an lu Biotechnology, 7, p.520-525 va 44 Nema RK, Ramawat KG (2010), “Isolation and identification of a new molecule from u nf Curculigo Orchioides (hypoxidaceae)”, J Chem Pharm Res., 2(2), p.610-617 ll 45 Pandit P, Singh A, Bafna AR, Kadam PV, Patil MJ (2008) 70(4), p.440-444 m oi 46 Purohit SD, Dave A and Gotam K (1994), “Micropropagation of safed musli Org Cult, 39, p 93-96 z at nh (Chlorophytum borivilianum), a rare Indian medicinal herb”, Plant cell tiss z @ 47 Rao PVK, Ali N and Reddy MN (1987), Indian J Pharm Sci, 40, p.104-5 gm 48 Rao KS, Mishra SH (1996), “Effect oF rhizomes of Curculigo orchioides l Gaerntn on drug induce hepatoxicity”, Indian Drugs, 33(9), p.458-461 m co 49 Shende, C.B., Undal, V.S and Chaudhari, U.S (2012), “In vitro propagation of 8(1), p.353-362 an Lu Curculago orchioides from rhizome bud”, Journal of Agricultural Technology, n va 47 ac th si 50 Singh R, Gupta AK (2008), “Antimicrobial and antitumor activity of the fractionated extracts of Kalimusli (Curculigo orchioides)” Int J Green Pharm, 2, p.34-36 51 Somashekhar & Manju Sharma (2002), Training manual on Propagation techniques of commercially important medicinal plants, Foundation for Revitalisation of Local Health Traditions, Bangalore, 118 pages 52 Soni et al (2012), “golden eye grass - a magical remedy by nature”, IJPSR, Vol 3(8), p.2407-2420 53 Thakur M, Dixit VK (2007), “Effect of some Vajikaran herbs on pendiculation lu activities and in vitro sperm count in male”, Sex Disabil, 25(4), p.203-207 an 55 Thakur M, Chauhan NS, Bhargava S, Dixit VK (2009), “A comparative study va n on aphrodisiac activity of some Ayurvedic herbs in male albino rats”, Arch to tn Sex Behav, 38(6), p.1009-1015 gh 55 The Wealth of India (1950) Raw Materials, C.S.I.R, New Delhi, Vol II , p.400 p ie 56 Thomas TD (2007), “Pretreatment in thidiazuron improves the in vitro shoot induction from leaves in Curculigo orchioides Gaertn, an endangered nl w medicinal plant”, Acta Physiologiae Plantarum, 29(5), p.455-461 d oa 57 Venukumar MR, Latha MS (2002), “Antioxidant activity of Curculigo orchioides va 17(2), p.80-87 an lu in carbon tetrachlorideinduced hepatopathy in rats”, Indian J Clin Biochem, u nf 58 Wala BB and Jasrai YT (2003), “Micropropagation of an endangered medicinal ll plant: Curculigo orchioides Gaertn”, Plant Tissue Culture 13(1), p.13-19 m oi 59 Xu JP and Dong QY (1987), Zhongcaoyao, 18, p.194-195 z at nh 60 Xu JP and Xu RS (1991), Chin Chem Lett, 2, p 227 61 Xu JP and Xu RS (1992), Phytochem, 31, p.2455-58 z m co l gm @ 62 Xu JP, Xu RS and Li XY (1992a), Phytochemistry, 3, p.1233-36 an Lu n va 48 ac th si PHỤ LỤC 1: MÔI TRƢỜNG NUÔI CẤY Table 1: Preparation of modified Murashige and Skoog‟s (MS medium) Amount to Bottle Component Stock take Solution (g/l preparation Final concentratic (mg/l) (ml) NH4NO3 I lu an II 82,5 1.650,0 20 n va 95 1.900,0 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 370,0 22,3 10 10,6 III KI 0,083 p CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 oa 0,62 ie gh tn to KNO3 nl w IV H3BO4 d an FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 ll u nf va V 37,25 100 0,5 0,5 100 2,0 2,0 100 0,1 0,1 0,5 0,5 100 z Pyridocine HCl gm @ 20.0000,0 Agar 5,6-5,8 5.000,0 m co l Sucrose an Lu pH 27,85 10 Thiamine acid Glycine 6,2 0,25 z at nh Vitamin 10 mg/100ml oi m Nicotinic acid 0,83 0,025 lu Na2MoO4.2H2O 10 n va 49 ac th si PHỤ LỤC 2: KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU Thí nghiệm 1: Kết ảnh hƣởng BA đến khả tái sinh chồi Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE PHUONG 25/ 5/** 13: PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả tái sinh chồi Sâm cau ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT$ -VARIATE TREATMENT MS - DF TLTS 943.33 RESIDUAL MS - DF 20.000 lu TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS F-RATIO F-PROB 10 FILE PHUONG 47.17 0.000 25/ 5/** 13: an PAGE n va Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả tái sinh chồi Sâm cau tn to MEANS FOR EFFECT CT$ NOS p ie gh CT$ w oa nl d TLTS 46.6667 63.3333 70.0000 86.6667 90.0000 2.58199 8.13595 u nf 10DF va 3) 5%LSD an lu SE(N= - ll m FILE PHUONG 25/ 5/** 13: oi ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE z at nh PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả tái sinh chồi Sâm cau z @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD (N= SD/MEAN | BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 16.847 4.4721 15 71.333 % | | | | | an Lu BASED ON | m co NO C OF V |CT$ l TLTS GRAND MEAN 15) DEVIATION gm VARIATE 6.3 0.0000 n va 50 ac th si Thí nghiệm 2: Kết ảnh hƣởng Kinetin đến khả tái sinh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE TLTS FILE IRRISTAT 19/ 5/** 1:55 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng kinetin đến khả tái sinh chồi Sâm cau VARIATE V003 TLTS LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO PROB ER LN ============================================================================= CT$ 343.333 10 200.000 20.0000 * RESIDUAL 1373.33 17.17 0.000 - lu * TOTAL (CORRECTED) 14 1573.33 112.381 an - va TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 19/ 5/** 1:55 n PAGE tn to Ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả tái sinh chồi Sâm cau gh MEANS FOR EFFECT CT$ p ie - CT$ nl w NOS oa d 46.6667 73.3333 63.3333 60.0000 50.0000 lu TLTS 3) 5%LSD 10DF 2.58199 u nf SE(N= va an 8.13594 ll oi m FILE IRRISTAT z at nh ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE 19/ 5/** 1:55 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng Kinetin đến khả tái sinh chồi Sâm cau z STANDARD (N= SD/MEAN | DEVIATION BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 10.601 4.4721 15 58.667 | | % | | | | 7.6 0.0002 an Lu NO C OF V |CT$ m co TLTS GRAND MEAN 15) l VARIATE gm @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - n va 51 ac th si Thí nghiệm 3: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng BA đến khả nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE PHUONG 31/ 5/** 9:32 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 4.01733 1.00433 125.54 0.000 * RESIDUAL 10 800003E-01 800003E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.09733 292667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE PHUONG 31/ 5/** 9:32 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau an n va CT$ NOS 3 3 HSN 1.03333 2.63333 2.00000 1.90000 1.66667 d oa nl w p ie gh tn to MEANS FOR EFFECT CT$ - lu u nf va an SE(N= 3) 0.516399E-01 5%LSD 10DF 0.162719 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE PHUONG 31/ 5/** 9:32 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau ll oi m z at nh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.54099 0.89443E-01 4.8 0.0000 | | | | m co l gm @ HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.8467 z VARIATE an Lu n va 52 ac th si Thí nghiệm 4: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:45 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp kinetin đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu an n va p ie gh tn to SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6.82400 1.70600 88.24 0.000 * RESIDUAL 10 193334 193334E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 7.01733 501238 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:45 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp kinetin đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau NOS 3 3 d oa CT$ nl w MEANS FOR EFFECT CT$ - u nf va an lu HSN 2.63333 3.50000 4.63333 3.47000 3.00000 ll SE(N= 3) 0.802774E-01 5%LSD 10DF 0.252957 - oi m z at nh ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:45 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau z gm @ F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.70798 0.13904 4.1 0.0000 m co | | | | an Lu HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.4533 l VARIATE n va 53 ac th si Thí nghiệm 5: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng BA kết hợp NAA đến khả nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSN FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:55 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau VARIATE V003 HSN LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5.10933 1.27733 91.24 0.000 * RESIDUAL 10 140000 140000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 5.24933 374952 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:55 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau an n va CT$ p ie gh tn to MEANS FOR EFFECT CT$ HSN 2.63333 3.00000 2.83333 2.70000 1.36667 d oa nl w NOS 3 3 va an lu SE(N= 3) 0.683130E-01 5%LSD 10DF 0.215257 - ll u nf ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:55 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng BA kết hợp NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau oi m VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.61233 0.11832 4.7 0.0000 z | | | | m co l gm @ HSN GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.5067 z at nh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - an Lu n va 54 ac th si Thí nghiệm 6: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng IBA đến khả rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:10 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau VARIATE V003 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 8.80917 2.93639 195.76 0.000 * RESIDUAL 120001 150001E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 8.92917 811742 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:10 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau an n va CT$ p ie gh tn to MEANS FOR EFFECT CT$ SRTB 1.00000 2.83333 3.26667 2.13333 oa nl w NOS 3 3 d SE(N= 3) 0.707110E-01 5%LSD 8DF 0.230581 - an lu va ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE IRRISTAT 19/ 5/** 0:10 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng IBA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau ll u nf oi m F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.90097 0.12248 5.3 0.0000 z | | | | m co l gm @ SRTB GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 2.3083 z at nh VARIATE an Lu n va 55 ac th si Thí nghiệm 7: Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng NAA đến khả rễ Sâm cau (sau 30 ngày nuôi cấy) BALANCED ANOVA FOR VARIATE SRTB FILE ABC 25/ 5/** 12:59 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau VARIATE V003 SRTB LN SOURCE OF VARIATION DF lu SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.61667 872222 116.30 0.000 * RESIDUAL 600001E-01 750001E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.67667 243333 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE ABC 25/ 5/** 12:59 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau an n va CT$ p ie gh tn to MEANS FOR EFFECT CT$ SRTB 1.00000 2.23333 1.96667 1.53333 oa nl w NOS 3 3 d SE(N= 3) 0.500000E-01 5%LSD 8DF 0.163045 - an lu va ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE ABC 25/ 5/** 12:59 PAGE Ảnh hưởng hàm lượng NAA đến khả nhân nhanh chồi Sâm cau ll u nf oi m F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.49329 0.86603E-01 5.1 0.0000 z | | | | m co l gm @ SRTB GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 1.6833 z at nh VARIATE an Lu n va 56 ac th si
Ngày đăng: 03/07/2023, 05:53
Xem thêm:
