Nghiên cứu tác dụng hướng androgen của viên nang ks trên mô hình chuột nhắt trắng suy sinh dục bằng natri valproate

N BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐƠ NGUYỄN DUY BÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HƯỚNG ANDROGEN CỦA VIÊN NANG KS TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT NHẮT TRẮNG SUY SINH DỤC BẰNG NATRI VALPROATE LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CẦN THƠ, 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐƠ NGUYỄN DUY BÌNH NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HƯỚNG ANDROGEN CỦA VIÊN NANG KS TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT NHẮT TRẮNG SUY SINH DỤC BẰNG NATRI VALPROATE LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Chuyên ngành: Dược lý-dược lâm sàng Mã số: 8720205 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS TRẦN THỊ THANH LOAN CẦN THƠ, 2021 CHẤP THUẬN HỘI ĐỒNG Luận văn này, với đề tựa “Nghiên cứu tác dụng hướng androgen viên nang KS mơ hình chuột nhắt trắng suy sinh dục natri valproate”, học viên Nguyễn Duy Bình thực theo hướng dẫn TS Trần Thị Thanh Loan Luận văn báo cáo với Hội đồng chấm luận văn thông qua ngày Ủy viên Ủy viên – Thư ký Phản biện Phản biện Chủ tịch Hội đồng i LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn chân thành sâu sắc, em xin gửi lời cảm ơn đến cô TS Trần Thị Thanh Loan Cô giao đề tài cho em tận tình hướng dẫn, bảo, truyền đạt tri thức cho em suốt q trình hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Dược trường Đại học Tây Đô truyền dạy em kiến thức quý báu giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Bộ môn Mô phôi – Giải Phẫu Bệnh - Đại học Y dược TP.HCM tận tình hướng dẫn tạo điều kiện sở vật chất để em thực nghiên cứu Xin gửi lời cám ơn đến ThS BS Nguyễn Lê Việt Hùng, em Võ Bạch Ngọc giúp đỡ, cổ vũ ủng hộ suốt trình làm việc Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình ln chăm sóc con, lo lắng, ủng hộ tất việc Sự bình n gia đình nơi tiếp cho sức mạnh sau khó khăn gặp phải Cảm ơn lắng nghe chia sẻ gia đình để dũng cảm bước quãng đường dài phía trước Một lần xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày tháng năm 2021 Nguyễn Duy Bình ii TÓM TẮT Mở đầu: Suy sinh dục nam bệnh lý thiếu hụt testosteron giảm số lượng tinh trùng nam giới liên quan tới quan sinh dục nam-tinh hoàn Từ tuổi 40 trở đi, thể nhanh lão hóa, chức hoạt động quan sinh dục Tình trạng gây vấn đề nang giải như: xuất tinh sớm, chất lượng số lượng tinh trùng giảm, sinh lực yếu, suy nhược, đau lưng, mỏi gối, … Chế phẩm viên nang Kim Sư (Dâm dương hoắc, Cửu thái tử, Đinh lăng, Bạch quả) sử dụng để khắc phục tình trạng chữa triệu chứng Mục tiêu: Khảo sát tác dụng hướng androgen viên nang Kim Sư mơ hình chuột nhắt trắng bị suy sinh dục Natri alproate Đối tượng-Phương pháp: Viên nang Kim Sư gồm Dâm dương hoắc (50%), Cửu thái tử (20%), Đinh lăng (20%), Bạch (10%) Nghiên cứu thực nghiệm mơ hình chuột nhắt đực chủng Swiss albino bị gây suy sinh dục Natri Valproate điều trị viên nang Kim Sư 35 ngày Sau đó, tiến hành đánh giá tác dụng viên nang Kim Sư thay đổi nồng độ testosterone chất lượng tinh trùng, đánh giá tính tồn vẹn ADN tinh trùng mơ học tinh hồn Kết quả: Sau 35 ngày điều trị, hai lô điều trị Kim Sư tăng so với lô gây suy sinh dục, có ý nghĩa thống kê; đó, lơ uống KS viên/kg cho tác dụng tốt hẳn Các số chất lượng tinh trùng hai lô điều trị KS tăng có ý nghĩa thống kê ADN tinh trùng bị phân mảnh xuất lơ bệnh lý, khơng có lơ điều trị Kết mơ học tinh hồn ghi nhận phục hồi so vơi lô gây suy sinh dục Kết luận:Viên nang Kim Sư có tác dụng hướng androgen, điều trị suy sinh dục Natri Valproate; có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ ADN tinh trùng chuột; phục hồi hình thái mơ học tinh hồn chuột bị suy sinh dục Từ khóa: Viên nang Kim Sư, testosteron, androgen, tinh trùng, mơ học tinh hồn, natri valproate iii ABSTRACT STUDY ON ANDROGENNIC EFFECT OF CAPSULE “KS” (Herba epimedii, Allium tuberosum, Polyscias fruticosa and Ginkgo biloba) ON MOUSE HYPOGONADISM MODEL INDUCED BY VALPROATE SODIUM” Background: Male hypogonadism is a pathology of testosteron deficiency or decreased sperm count in men involving the male-testicular sex organs From the age of 40 onwards, the body age rapidly, the functioning of the genital organs also deteriorates This condition causes problems such as: premature ejaculation, reduced sperm quality and quantity, weak energy, weakness, back pain, knee fatigue, KS capsules (Herba epimedii, Allium tuberosum, Polyscias fruticosa and Ginko biloba) have been used to remedy the condition and cure the above symptoms Objective: To investigate the androgen-oriented effects of KS capsules on white mice model with hypogonadism by Sodium Valproate Methods: KS capsules include Herba epimedii (50%), Allium tuberosum (20%), Polyscias fruticosa (20%), Ginko biloba (10%) Experimental study on male mouse model of Swiss albino strain caused hypogonadism by sodium Valproate and treated with KS capsules for 35 days The effects of KS capsules on the alteration of testosterone concentration and sperm quality were then evaluated, and sperm ADN integrity and testicular tissue were assessed Results: After 35 days of treatment, both groups treated with antibiotics increased compared to the group causing hypogonadism, with statistical significance; in which, the group taking KS capsule/kg gives a much better effect The sperm quality indexes of the two groups treated with KS increased and were statistically significant Fragmented sperm ADN appeared in the pathological group, not in the treatment groups Testicular histology results also recorded the recovery compared with the lot that caused hypogonadism iv Conclusion: KS capsules with androgen-oriented effects, treatment of hypogonadism caused by Sodium Valproate; Has anti-oxidant effect, protects mouse sperm ADN; restores testicular morphology of mice with hypogonadism Keywords: KS capsules, testosteron, androgens, sperm, testicular histology, sodium valproate v LỜI CAM KẾT Tơi xin cam kết luận văn hồn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa công bố cơng trình khoa học khác Cần Thơ, ngày tháng Nguyễn Duy Bình năm 2021 vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii ABSTRACT iii LỜI CAM KẾT v MỤC LỤC vi DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH ẢNH x DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT xii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 SƠ LƯỢC VỀ CƠ QUAN SINH DỤC NAM 1.1.1 Cấu tạo chức tinh hoàn 1.1.2 Cấu tạo ống sinh tinh 1.1.3 Quá trình sinh tinh 1.1.4 Hình thái tinh trùng 1.1.5 Nhiễm sắc thể tinh trùng 1.2 KHÁI QUÁT VỀ HORMONE SINH DỤC NAM 11 1.2.1 Sinh tổng hợp chuyển hóa hormone sinh dục nam 11 1.2.2 Cơ chế hoạt động testosteron quan đích 12 1.2.3 Chức testosteron nam giới 13 1.2.4 Hệ trục hạ đồi –tuyến n điều hịa hoạt động tinh hồn 13 1.3 SUY SINH DỤC Ở NAM GIỚI 14 1.3.1 Định nghĩa 14 1.3.2 Cơ chế bệnh sinh 15 1.3.3 Nguyên nhân 15 1.3.4 Triệu chứng 18 1.3.5 Điều trị 19 1.4 CÁC MƠ HÌNH SUY SINH DỤC Ở ĐỘNG VẬT THÍ NGHIỆM 22 1.4.1 Giải phẫu cắt bỏ tinh hoàn 22 vii 1.4.2 Stress nhiệt 22 1.4.3 Đột biến gen 23 1.4.4 Hóa dược 23 1.4.5 Tia phóng xạ 23 1.5 SƠ LƯỢC VỀ VIÊN NANG KS 24 1.5.1 Dâm dương hoắc [3], [4], [15] 24 1.5.2 Cửu thái tử (Hẹ) [4] 25 1.5.3 Đinh lăng [3], [4], [15] 26 1.5.4 Bạch quả[4], [15] 26 1.6 CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU 27 1.6.1 Trên giới 27 1.6.2 Trong nước 28 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 VẬT LIỆU 30 2.1.1 Động vật thí nghiệm 30 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 30 2.1.3 Thiết bị 30 2.1.4 Dụng cụ 31 2.1.5 Hóa chất 31 2.2 THIẾT KẾ THÍ NGHIỆM 32 2.3 PHƯƠNG PHÁP 33 2.3.1 Đánh giá thể trọng chuột 33 2.3.2 Đánh giá trọng lượng tinh hoàn, túi tinh-tuyến tiền liệt nâng hậu môn 33 2.3.3 Đánh giá chất lượng tinh trùng 33 2.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU 39 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 40 3.1 TÁC DỤNG BẢO VỆ CỦA VIÊN NANG KS LÊN MƠ HÌNH CHUỘT ĐỰC SUY SINH DỤC BẰNG NATRI VALPROATE 40 3.1.1 Khảo sát thể trọng chuột 40 61 hình thái ống sinh tinh tương đồng với ống sinh tinh lô uống nước Kết ghi nhận nghiên cứu tác giả Trần Thị Thanh Loan cộng tác dụng hướng androgen viên nang Kim Sư mơ hình chuột nhắt trắng suy sinh dục Natri Valproate (2019) [13] Điều cho thấy, tác dụng hướng androgen viên nang Kim Sư phục hồi cấu trúc mơ học tinh hồn Nồng độ testosteron huyết giúp kích thích tăng sinh tế bào Sertoli tế bào Leydig tinh hồn, thúc đẩy q trình phân chia tế bào mầm, sản xuất biệt hóa tinh trùng bên ống sinh tinh Tác dụng chống oxy hóa viên nang Kim Sư tác dụng bổ trợ, giúp giảm tác động môi trường bên ống sinh tinh lên tinh trùng tế bào mầm, giúp cho số lượng tinh trùng tạo nhiều đạt chất lượng tốt 4.3 ĐIỂM MỚI ĐỀ TÀI Khảo sát tác dụng hướng androgen viên nang Kim Sư trước dừng lại đánh giá tinh dịch đồ, nồng độ hormon testosteron huyết mơ học tinh hồn Nghiên cứu chúng tơi tiến thêm bước đánh giá tác dụng viên nang Kim Sư mức độ phân tử Hướng dựa sở việc đánh giá tính tồn vẹn ADN mơ hình chuột gây suy sinh dục Natri Valproate tác giả Khan S cộng [47] Kết nghiên cứu cho thấy, viên nang Kim Sư không gây tác động lên ADN tinh trùng mà giúp chống oxy hóa, bảo vệ ADN tinh trùng nhân tế bào mầm sinh dục, giúp cải thiện chất lượng tinh trùng Đánh giá ADN tinh trùng phương pháp nhuộm huỳnh quang AO điểm sáng nghiên cứu Phương pháp giúp phân biệt cách rõ ràng tinh trùng bị phân mảnh ADN tinh trùng bình thường thơng qua màu sắc huỳnh quang Theo đó, tinh trùng bắt màu xanh tinh trùng bình thường, tinh trùng bắt màu vàng, cam đỏ, tinh trùng phân mảnh ADN nhân theo mức độ tăng dần từ vàng đến đỏ Phương pháp dễ thực tốn phí phương pháp đánh giá ADN khác SCSA, TUN L, cho kết giống với phương pháp [58] 62 4.4 HẠN CHẾ ĐỀ TÀI Quá trình thực đề tài bị giới hạn mặt thời gian số lượng đánh giá lại lớn nên số lần thực thí nghiệm bị hạn chế Chính thế, kết nghiên cứu chưa đủ để đạt ý nghĩa thống kê mong đợi Ngồi ra, tình hình dịch bệnh COVID 19 xảy qua trình thực thí nghiệm, gây cản trở việc nuôi chuột, di chuyển nên số lượng chuột nuôi bị giới hạn con/lô, số lần thực thí nghiệm bị giới hạn Nghiên cứu nhận thấy tác dụng viên nang Kim Sư việc bảo vệ tinh trùng khỏi gốc oxy hóa tự chưa sâu vào đánh giá chức chống oxy hóa thuốc Thời gian thực thí nghiệm 35 ngày, có ghi nhận rõ rệt tác dụng viên nang Kim Sư lên phục hồi testosteron, trình sinh tinh chất lượng tinh trùng chưa đánh giá khả điều trị hoàn toàn suy sinh dục nam viên nang Kim Sư 63 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết thu qua trình thực nghiệm, đề tài rút kết luận sau: Tác dụng viên nang Kim Sư thay đổi nồng dộ testosteron huyết tinh dịch đồ mơ hình chuột thực nghiệm Viên nang Kim Sư liều KS viên/kg liều viên/kg có tác dụng làm tăng nồng độ testosterone huyết thanh, có ý nghĩa thống kê so với lơ bệnh lý Liều KS viên/kg làm tăng nồng độ testosterone lên 0,0897±0,0074 ng/ml; liều KS viên/kg làm tăng nồng độ testosterone lên 0,066±0,0093 ng/ml Sau 35 ngày thí nghiệm, thể trọng chuột, trọng lượng tinh hoàn quan sinh dục phụ lô điều trị Kim Sư tăng so với lô gây suy sinh dục Các kết liều KS viên/kg có ý nghĩa thống kê so với lơ gây suy sinh dục Cụ thể, liều KS viên/kg làm tăng thể trọng chuột lên 41,78±3,43 g, tăng trọng lượng tinh hoàn lên 0,2145±0,044 g, tăng trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt lên đến 0,1973±0,0427 g, tăng trọng lượng nâng hậu môn đến 0,0998±0,0095 g Liều KS viên/kg có làm tăng thể trọng chuột so với lô bệnh lý, đạt ,35±2,45 g, ý nghĩa thống kê so với lơ bệnh lý Trọng lượng quan sinh dục phụ lô điều trị KS viên/kg tăng có ý nghĩa thống kê so với lô gây suy sinh dục Natri Valproate Trong đó, trọng lượng tinh hồn lô đạt 0,2216±0,0349 g, trọng lượng túi tinh – tuyến tiền liệt tăng lên 0,1774±0,0361 g, trọng lượng nâng hậu môn tăng đến 0,0997±0,0127 g Viên nang Kim Sư liều viên/kg liều viên/kg làm tăng chất lượng tinh trùng, có ý nghĩa thống kê so với lô bệnh lý Cụ thể, viên nang KS liều viên/kg làm tăng mật độ tinh trùng lên 32,77±3,43 triệu con/ml, tăng tỷ lệ tinh trùng sống lên 6,97%, tăng tỷ lệ tinh trùng di động lên 12,56 %, giảm tỷ lệ tinh trùng dị tật hình thái xuống cịn 21, 64% Liều KS viên/kg có kết mật độ tinh trùng cao hẳn lô uống KS viên/kg, tăng đến 38,14 ± 3,39 triệu 64 con/ml, tăng tỷ lệ tinh trùng sống lên đến 4,54%, tăng tỷ lệ tinh trùng di động lên 9,79 % giảm tỷ lệ dị dạng tinh trùng cịn 19,07% Tác dụng lên tính tồn vẹn ADN tinh trùng viên nang Kim Sư: Chuột điều trị Kim Sư không gây ảnh hưởng lên ADN tinh trùng mà cịn giúp tăng hình thành tinh trùng bình thường, có ADN ngun vẹn giống với lô chứng uống nước cất Cụ thể, lô uống KS viên/kg lô uống KS viên/kg cho kết tinh trùng bắt màu xanh, giống với lô chứng Trong đó, lơ mơ hình bệnh lý cho kết tinh trùng bắt màu chủ yếu vàng cam, dấu hiệu phân mảnh ADN tinh trùng Hình ảnh mơ học sau dùng viên nang Kim Sư 35 ngày: Chuột điều trị suy sinh dục viên nang KS liều viên/kg có hình thái mơ học tinh hồn giống với lơ chứng uống nước cất: tăng số lượng lớp tế bào dòng tinh lên đến mức bình thường, – lớp; tăng số lượng tế bào Sertoli tế bào Leydig; tinh trùng hình dấu phẩy, xuất nhiều lịng ống sinh tinh; nhiên, mơ kẽ có vùng đặc vùng thưa liều uống KS viên/kg, hình thái mơ học tinh hồn ghi nhận giống với lơ chứng, nhiên, có xuất thể vùi tinh trùng dạng tròn lòng ống sinh tinh; số ống sinh tinh r ng, khơng có tinh trùng 5.2 KIẾN NGHỊ Nghiên cứu cần nhiều thời gian để đánh giá toàn diện ảnh hưởng viên nang KS mơ hình chuột gây suy sinh dục Natri Valproate 500 mg/kg khả điều trị hoàn toàn suy sinh dục nam giới viên nang KS Thí nghiệm có số lượng chuột ít, số lần thực lại thí nghiệm nên xảy sai số kết thu Vì thế, thí nghiệm cần lặp lại nhiều lần để tăng lượng mẫu thí nghiệm tăng ý nghĩa thống kê nghiên cứu thí nghiệm Nghiên cứu khảo sát tác dụng viên nang Kim Sư mơ hình động vật lớn mơ hình chuột rat Vì thể chuột rat to khoảng gấp sáu lần chuột nhắt, quan sinh dục phụ thứ cấp to hơn, từ đó, dễ dàng khảo sát đánh giá kết mô học so với chuột nhắt 65 Đề tài cần thực phân tích đánh giá tác dụng thành phần hóa học viên nang Kim Sư đo độ peroxy hóa lipid (MDA) Vì theo nghiên cứu này, viên nang Kim Sư có tác dụng chống oxy hóa, bảo vệ tinh trùng khỏi ROS ống sinh tinh Tuy nhiên, thành phần viên nang Kim Sư có tác dụng tác dụng nghiên cứu chưa làm rõ 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ môn Sinh lý học, Đại học Y Dược Tp HCM (2012), Sinh lý học tập 1, Nhà xuất Y học Tp.HCM Bộ môn Sinh lý học, Đại học Y Hà Nội (2012), Sinh lý học tập 2, Nhà xuất Y học Bộ Y tế (2017), Dược Điển Việt Nam 5, Nhà xuất Y học, Đ Tất Lợi (2004), "Những thuốc vị thuốc Việt Nam", NXB Y học Mai Phương Thanh (2019), "Nghiên cứu độc tính tác dụng điều trị suy giảm sinh dục đực viên hoàn cứng TD0014 thực nghiệm", Luận văn Tiến sĩ, Trường Đại học Y Hà Nội Nguyễn Lê Việt Hùng, Trần Thị Thanh Loan, Nguyễn Thị Thanh Tiền, Đ Thị Hồng Linh, Nguyễn Lê Ngọc Khanh, Nguyễn Thị Minh Mẫn, Dương Thị Phương Thùy, Huỳnh Lê Trường, Lý Chung Huy, Đào uang Oánh, Nguyễn Phương Dung (201 ), "Đánh giá độc tính bán trường diễn khảo sát tác dụng hướng androgen viên nang KS (dâm dương hoắc, cửu thái tử, đinh lăng bạch quả) kết hợp Testocaps chuột nhắt trắng", Y học TP.Hồ Chí Minh, 22(5), pp.88 - 96 Nguyễn Lê Việt Hùng, Trần Thị Thanh Loan (2019) "Taọ mơ hình gây suy sinh dục chuột nhắt trắng đực chủng Swiss albino tia phóng xạ gamma Co60", Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, 23(5), pp 293-302 Nguyễn Phương Dung, Nguyễn Thái Dương (2015) "Đánh giá ảnh hưởng cao chiết tả quy ẩm thay đổi testosteron chuột nhắt trắng" Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, 19(5): p.67-72 Phạm Đình Lựu (200 ), "Sinh lý học Y khoa (tập 2)", Nhà xuất Y học,pp 134-144 10 Trần Công Toại (201 ), "Mô học", NXB Đại học uốc gia TP.Hồ Chí Minh, pp.159-169 11 Trần Mỹ Tiên, Nguyễn Thị Thu Hương (2014), "Khảo sát độc tính, tác dụng kiểu nội tiết tố sinh dục nam tác dụng tăng lực viên Kim Sư (Chế 67 phẩm phối hợp Dâm dương hoắc, Cửu thái tử, Đinh lăng, Bạch quả) thực nghiệm", Y học TP Hồ Chí Minh, (1), pp.114 - 122 12 Trần Thị Thanh Loan, Nguyễn Lê Việt Hùng, Bùi Thị Thanh Tâm, Nguyễn Phương Dung (201 ), "Đánh giá ảnh hưởng chức suy giảm sinh dục thuốc Natri Valproate mơ hình chuột đực Swiss albino", Y học TP.Hồ Chí Minh 23(2), pp.86 – 91 13 Trần Thị Thanh Loan, Nguyễn Lê Việt Hùng, Ngô uốc Đạt, Nguyễn Phương Dung (2019), "Tác dụng hướng androgen viên nang KS mơ hình chuột nhắt trắng suy sinh dục Natri Valproate ", Y học TP.Hồ Chí Minh 23(5), pp.284 - 292 14 Trần Văn Ngọc, Nguyễn Thị Lệ (201 ), Sinh lý học Y khoa, Nhà xuất Y học, Đại học Y dược TP.HCM, tr 409-420 15 Viện dược liệu (2006), "Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam", NXB Khoa học Kỹ thuật TÀI LIỆU TIẾNG ANH 16 Afsan M, Ahmed AHH, Khaleque MA, Nessa J (2011) Testicular Recovery Effects of Folinic Acid on Cyclophosphamide Induced Damage in Rat J Shaheed Suhrawardy Med Coll, 3(2), 31-34 17 Aladamat N, Tadi P (2020) Histology, Leydig Cells StatPearls [Internet].https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK556007/ 18 Alvarez I I (2001), "Rapid papanicolaou staning method for cervicovaginal specimiens ", United States Patent 19 Antoniou-Tsigkos A., Zapanti E., Ghizzoni L., et al (2019) Adrenal Androgen Feingold KR, Anawalt B, Boyce A, et al., South Dartmouth (MA): MDText.com, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK278929/ 20 Anthony LM , L Carlos Junqueira (2009), "Junqueira’s Basic Histologytext and atlas", McGraw-Hill Medical, ISBN: 978-0-07-178033, 3th, pp.947986 21 Bairy L., Paul V., et al (2010), "Reproductive toxicity of sodium valproate in male rats", Indian Journal of Pharmacology 42(2), pp.90 – 94 68 22 (Basaria S (2014),( “Male hypogonadism”, The Lancet, 383(9924), pp.1250-1263 23 Besong EB, Ateufack G, Babiaka SB, Kamanyi A (2018) Leaf-Methanolic Extract of Pseudopanax arboreus (Araliaceae) (L F Phillipson) Reverses Amitriptyline-Induced Sexual Dysfunction in Male Rats Biochemistry Research International, (2018), p 14 24 Bhattacharya I., Sen Sharma S., Majumdar S.S (2019) Pubertal orchestration of hormones and testis in primates Mol Reprod Dev; 86: 1505– 1530 25 Bruce A , Alexander J , et al (2002), "Molecular Biology of the Cell", Garland Science, ISBN: 0-8153-4072-9, 4th 26 Campbell N.A., Reece J.B., et al (2008), Pearson Benjamin Cumming, Hoa Kì, (8), 997-1020 27 Cooke H., Saunders P (2002), Human genetics and disease: Mouse models of male infertility Nature Reviews Genetics 3: p 790-801 28 Correia S., Cardoso H., Cavaco J., Socorro S (2015) Oestrogens as apoptosis regulators in mammalian testis: Angels or devils? Expert Reviews in Molecular Medicine, 17, E2 doi:10.1017/erm.2014.25 29 Chihara M., Nakamura T (2014), The Onset of Heat-Induced Testicular Calcification in Mice: Involvement of the Telomeric Locus on Chromosome The American Journal of Pathology 184(9): p 2480-2492 30 Decaroli M C., Rochira V (2017), "Aging of sex hormones in males", Virulence, 8(5), pp.545 - 570 31 Despopoulos A., Silbernagl S (2003), "Color alat of physiology", Thieme, 6th, 270-273 32 Ebling FJ, Brooks AN, Cronin AS, et al (2000) Estrogenic Induction of Spermatogenesis in the Hypogonadal Mouse Endocrinology, 141(8), 28612869 33 Fraietta R., Zylberstejn D S ( 2013 ), "Hypogonadotropic Hypogonadism Revisited", Clinics 68(1), pp.81 - 88 69 34 Gao W, Bohl CE, Dalton JT (2005) Chemistry and structural biology of androgen receptor Chem Rev,105(9):3352-3370 35 Gurung P., Yetiskul E., Jialal I (2020).Physiology, Male Reproductive System StatPearls [Internet] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK538429/ 36 Hackney, A.C., Hypogonadism in Exercising Males: Dysfunction or Adaptive-Regulatory Adjustment? Frontiers in Endocrinology, 2020 11: p 11 37 Hamada AJ, Esteves SC, Agarwal A A comprehensive review of genetics and genetic testing in azoospermia Clinics 2013;68(S1):39-60 38 Hardelin J.P., Dode' C (2009 ), "Kallmann syndrome", European Journal of Human Genetics 17,pp.139 – 146 39 Harikrishnan R, Abhilash PA, Syam Das S, et al (2013) Protective effect of ascorbic acid against ethanol-induced reproductive toxicity in male guinea pigs British Journal of Nutrition, 110(4), 689-698 40 Hikim A.P.S, Swerdloff R.S.(1999), Hormonal and genetic control of germ cell apoptosis in the testis, Rev Reprod,4(1):38-47 41 Jamsai D, O'Bryan MK (2011) Mouse models in male fertility research Asian J Androl, 13(1), 139-151 42 Kaminetsky J., Hemani M L (2009), "Clomiphene citrate and enclomiphene for the treatment of hypogonadal androgen deficiency", Drug Evaluation 18(12), pp.1947 - 1955 43 Kazi M., Geraci S A (2007), "Considerations for the diagnosis and treatment of testosterone deficiency in elderly men", The American Journal of Medicine 120(10), pp.835 - 840 44 Kim S Y (2015 ), "Diagnosis and Treatment of Hypopituitarism", Endocrinology and Metabolism 30(4), pp.443 – 455 45 Kim S.J., Kim M R., et al (2013), "Preliminary report on the safety of a new herbal Formula and its effect on sperm quality", World Journal Mens Health, 31(3), pp.254 – 261 70 46 Kumar P, Kumar N, Thakur DS, Patidar A (2010) Male hypogonadism: Symptoms and treatment J Adv Pharm Technol Res;1(3):297-301 doi:10.4103/0110-5558.72420 47 Khan S., Ahmad T., et al (2011), Investigation on sodium valproate induced germ cell damage, oxidative stress and genotoxicity in male Swiss mice, Reproductive Toxicology (32), 385-394 48 Los E, Ford GA (2020) Klinefelter Syndrome Treasure Island (FL) https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK482314/ 49 Lunenfeld B., Mskhalaya G., et al (2015), "Recommendations on the diagnosis, treatment and monitoring of hypogonadism in men", The Aging Male 18(1), pp.5 -15 50 Malviya N, Jain S, Gupta VB, Vyas S (2013) Management of drug induced sexual dysfunction in male rats by ethyl acetate fraction of onion Acta Pol Pharm, 70(2), 317-322 51 Manjeet K.G.S., Jyoti C and Serena D.S.(2011), Sperm Chromatin Protamination: An Endocrine Perspective, Protein & Peptide Letters, 18, 786801 52 Marques P, Skorupskaite K, George JT, et al (2018) Physiology of GNRH and Gonadotropin Secretion Endotext [Internet] South Dartmouth (MA): MDText.com, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK279070/ 53 Mascarenhas M.N., Flaxman S.R., Boerma T., Vanderpoel S., & Stevens A (2012), “National, regional, and global trends in infertility prevalence since 1990: a systematic analysis of 277 health surveys”, PLoS Med, 9(12), pp.1-12, e1001356 54 Muchow M., Maincent P (2011), "Production and characterization of testosterone undecanoate-loaded NLC for oral bioavailability enhancement", Drug Development and Industrial Pharmacy, 37(1 ), pp.8 – 14 55 Mulligan T., Frick M.F., Zuraw Q.C., Stemhagen A & McWhirter C (2006), “Prevalence of hypogonadism in males aged at least 45 years: The HIM study”, Int J Clin Pract 60, pp.762–769 71 56 Neto F.T.L, Bach P V., et al (2016), "Spermatogenesis in Humans and Its affecting factors", Seminars in Cell & Developmental Biology, 59, pp.10 - 26 57 Nishimura T, Sakai M, Yonezawa H (2000) Effects of valproic acid on fertility and reproductive organs in male rats The Journal of Toxicological Sciences, 25(2), 85-93 58 Niyazi K (2018), Sperm DNA and detection of DNA fragmentations in sperm, Turk J Urol., 44(1): 1–5 59 O'Donnell L, Stanton P, de Kretser DM (2017) Endocrinology of the Male Reproductive System and Spermatogenesis Endotext [Internet] 60 Ourique G.M., Saccol E M H., et al (2016), "Protective effect of vitamin E on sperm motility and oxidative stress in valproic acid treated rats", Food and Chemical Toxicology, 95(1), pp.159 – 167 61 Perticarari S., Ricci G., Boscolo R., Santis M.D., Pagnini G., Martinelli M., Presani G (2008), Fas receptor is not present on ejaculated human sperm, Human Reproduction, 23(6), 1271–1279 62 Pinsky MR, Hellstrom WJ (2010) Hypogonadism, ADAM, and hormone replacement Ther Adv Urol 2(3):99-104 doi:10.1177/1756287210369805 63 Salonia A, Rastrelli G, Hackett G, et al Paediatric and adult-onset male hypogonadism Nat Rev Dis Primers 2019;5(1):38 64 Sharma R.D., Said T., Agarwall A (2004), Sperm DNA damage and its clinical relrvance in assessing reproductive outcome, Asian Journal of Andrology, 6: 139-148 65 Sharpe RM (2010) Environmental/lifestyle effects on spermatogenesis Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci;365(1546):1697-1712 doi:10.1098/rstb.2009.0206 66 Soliman GA, Abla Abd, el-Meguid (1999), “ ffects of antiepileptic drugs carbamazepine and sodium valproate on fertility of male rats”, Dtsch Tierarztl Wochenschr, 106, 110-113 67 Surampudi P., Swerdloff R S (2014), "An update on male hypogonadism therapy", Expert Opin Pharmacother, 15(9), pp.1247 – 1264 72 68 Tsametis C P., Isidori A M (2018), "Testosterone replacement therapy: For whom, when and how?", Male reproductive endocrinology, 86(1), pp.69 – 78 69 Virant-Klun I, Tomazevic T, Meden-Vrtovec H (2002) Sperm singlestranded DNA, detected by acridine orange staining, reduces fertilization and quality of ICSI-derived embryos J Assist Reprod Genet.19(7):319-328 70 Vodo S, Bechi N, Petroni A, Muscoli C, Aloisi AM (2013) Testosteroneinduced effects on lipids and inflammation Mediators Inflamm;2013:183041 71 Yeh S, Tsai MY, Xu Q, et al (2002) Generation and characterization of androgen receptor knockout (ARKO) mice: An in vivo model for the study of androgen functions in selective tissues Proc Natl Acad Sci U S A, 99(21), 13498–13503 72 Zanchi M.M., Manfredini V, et al (2015) Green tea infusion improves cyclophosphamide-induced damage on male mice reproductive system Toxicology Reports, 2, 252-260 xii PHỤ LỤC Phụ lục 1: Thể trọng chuột ngày 1, ngày 21, ngày 35 Lô 1: Nước cất (g) Ngày Ngày 21 Ngày 35 30,9 45,7 47,8 29,7 43,4 43,5 30,2 43,9 46 29,7 43,5 42 30,8 46,2 50,1 31 46,7 50,8 Lô 3: Natri Valproate + Testocaps 2mg/kg (g) Ngày Ngày 21 Ngày 35 31,3 41,4 43,7 29,3 39,2 38,6 30,5 40,2 41,8 29,5 42,3 38 29,1 37,5 42,5 30,4 38,1 41 Lô 5: Natri Valproate + KS viên/kg (g) Ngày Ngày 21 Ngày 35 30,6 39,7 36 29,3 36,7 42,4 32,1 36 39,5 28,7 37,4 38,5 29,4 36,6 37,9 30,6 34,4 35,8 Lô 2: Natri Valproate (g) Ngày Ngày 21 Ngày 35 31,2 37,5 32,8 30,8 36,7 35,1 29,8 33,8 37,9 30 32,5 33,4 29 31,9 36,2 31,8 32,6 34,2 Lô 4: Natri Valproate + KS viên/kg (g) Ngày Ngày 21 Ngày 35 29,5 38,4 45,1 30,6 41,5 44,1 31 43,1 36,8 29,2 42,3 44,5 29,6 40 41,6 39,2 39,3 38,6 Phụ lục 2: Trọng lượng tinh hoàn, túi tinh – tuyến tiền liệt (TT – TTL), nâng hậu môn (CNHM) Lô 1: Nước cất (g) Tinh hoàn TT – TTL CNHM 0,2242 0,2397 0,1658 0,2437 0,2301 0,1147 0,2541 0,3388 0,1308 0,2073 0,2520 0,1613 0,2563 0,3292 0,1253 0,2122 0,2657 0,1384 Lơ 2: Natri Valproate (g) Tinh hồn TT – TTL CNHM 0,0864 0,1179 0,0539 0,0927 0,0878 0,0507 0,0947 0,0956 0,0748 0,1388 0,1318 0,0648 0,1053 0,1022 0,0756 0,1038 0,0890 0,0664 xiii Lô 3: Natri Valproate + Testocaps 2mg/kg (g) Tinh hoàn TT – TTL CNHM 0,2319 0,1535 0,1122 0,2628 0,1931 0,1028 0,3210 0,2019 0,0802 0,1595 0,1795 0,0748 0,1679 0,1469 0,1330 0,2506 0,2166 0,1242 Lô 5: Natri Valproate + KS viên/kg (g) Tinh hoàn TT – TTL CNHM 0,2694 0,1679 0,0933 0,2107 0,2451 0,0897 0,2012 0,1636 0,1077 0,2017 0,1571 0,0968 0,1852 0,1435 0,0893 0,2611 0,1873 0,1216 Lô 4: Natri Valproate + KS viên/kg (g) Tinh hoàn TT – TTL CNHM 0,2565 0,2239 0,1034 0,2104 0,1734 0,1061 0,1745 0,1510 0,0986 0,1569 0,2362 0,1127 0,2723 0,2453 0,0905 0,2166 0,1538 0,0877 Phụ lục 3: Chất lượng tinh trùng Mật độ tinh trùng Lô 1: Nước cất (triệu con/ml) Lô 2: Natri Valproate (triệu con/ml) 46,30 48,00 51,25 44,35 48,50 48,05 27,35 27,85 29,38 18,95 19,38 17,93 Lô 3: Natri Valproate + Testocaps 2mg/kg (triệu con/ml) 23,68 33,23 24,58 25,88 28,73 24,78 Lô 4: Natri Valproate + KS viên/kg (triệu con/ml) 39,18 30,38 34,18 31,13 30,70 31,05 Lô 5: Natri Valproate + KS viên/kg (triệu con/ml) 40,00 35,73 43,03 35,33 34,63 40,15 Tỷ lệ tinh trùng sống – chết: Lô 1: Nước cất (%) Sống 94,79 57,43 90,95 64,15 88,00 100,00 Chết 5,21 42,57 9,05 35,85 12,00 0,00 Lô 3: Lô 4: Lô 5: Lô 2: Natri Valproate Natri Valproate Natri Valproate Natri Valproate + Testocaps + KS viên/kg + KS viên/kg (%) 2mg/kg (%) (%) (%) Sống Chết Sống Chết Sống Chết Sống Chết 72,60 27,40 86,24 13,76 91,79 8,21 100,00 0,00 41,73 58,27 96,38 3,62 98,73 1,27 98,69 1,31 71,93 28,07 98,54 1,46 95,21 4,79 99,69 0,31 89,13 10,87 92,14 7,86 97,67 2,33 98,90 1,10 68,97 31,03 54,97 45,03 53,57 46,43 78,95 21,05 81,48 18,52 47,77 52,23 84,85 15,15 31,02 68,98 xiv Tỷ lệ tinh trùng di động Lô 1: Nước cất (%) DĐ KDĐ 16,99 83,01 15,37 84,63 9,61 90,39 12,03 87,97 8,53 91,47 9,80 90,20 Chú th ch: Lô 3: Lô 4: Lô 5: Lô 2: Natri Valproate Natri Valproate Natri Valproate Natri Valproate + Testocaps + KS viên/kg + KS viên/kg (%) 2mg/kg (%) (%) (%) DĐ KDĐ DĐ KDĐ DĐ KDĐ DĐ KDĐ 0,77 99,23 9,36 90,64 7,92 92,08 3,48 96,52 7,24 92,76 6,71 93,29 14,48 85,52 13,32 86,68 5,47 94,53 10,31 89,69 15,41 84,59 8,30 91,70 6,39 93,61 19,74 80,26 11,42 88,58 8,87 91,13 0,39 99,61 8,60 91,40 14,22 85,78 14,75 85,25 7,56 92,44 10,45 89,55 11,41 88,59 15,22 84,78 DĐ: Di động; KDĐ: Không di động Tỷ lệ tinh trùng dị dạng Lô 1: Nước cất (%) DD BT 14,86 85,14 15,68 84,32 16,90 83,10 17,74 82,26 12,54 87,46 19,35 80,65 Chú thích: Lô 3: Lô 4: Lô 5: Lô 2: Natri Valproate Natri Valproate Natri Valproate Natri Valproate + Testocaps + KS viên/kg + KS viên/kg (%) 2mg/kg (%) (%) (%) DD BT DD BT DD BT DD BT 30,12 69,88 14,85 85,15 32,05 67,95 22,39 77,61 41,19 58,81 30,77 69,23 15,03 84,97 20,99 79,01 41,79 58,21 21,66 78,34 21,85 78,15 18,02 81,98 43,67 56,33 21,77 78,23 20,74 79,26 9,91 90,09 32,51 67,49 23,77 76,23 22,41 77,59 21,85 78,15 41,61 58,39 25,09 74,91 21,12 78,88 24,22 75,78 DD: Dị dạng; BT: Bình thường Phụ lục 4: Hàm lượng testosterone tồn phần huyết Lô 1: Nước cất Lô 2: Natri Valproate 0,2336 0,0458 0,2568 0,0515 0,3869 0,0495 0,2956 0,0315 0,2659 0,0395 0,2458 0,0375 Lô 4: Natri Valproate + KS viên/kg 0,0982 0,0799 0,0825 0,0893 0,0966 0,0920 Lô 3: Natri Valproate + Testocaps 2mg/kg 0,1149 0,0923 0,0982 0,1201 0,1156 0,1192 Lô 5: Natri Valproate + KS viên/kg 0,0621 0,0655 0,0754 0,0804 0,0557 0,0619