Nghiên cứu độc tính và tác dụng chống viêm gan, xơ gan của quả dứa dại (pandanus odoratissimus l f) trên thực nghiệm

BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ TRƯỜNGĐẠIHỌCYHÀNỘI HỒNGTHÁIHOACƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ TÁCDỤNG CHỐNG VIÊM GAN, XƠ GANCỦAQUẢDỨADẠI (Pandanus odoratissimusL.f.)TRÊNTHỰ CNGHIỆM LUẬNÁNTIẾNSĨYHỌC HÀNỘI-2021 BỘGIÁODỤCVÀĐÀOTẠO BỘYTẾ TRƯỜNGĐẠIHỌCYHÀNỘI HỒNGTHÁIHOACƯƠNG NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH VÀ TÁCDỤNG CHỐNG VIÊM GAN, XƠ GANCỦAQUẢDỨADẠI (Pandanus odoratissimusL.f.)TRÊNTHỰ CNGHIỆM Chuyên ngành : Dược lý độc chấtMãsố:62720120 LUẬNÁNTIẾNSĨYHỌC Ngườihướngdẫnkhoahọc:1.PGS.TSVũ ThịNgọcThanh 2.PGS.TSNguyễnDuyThuần HÀNỘI-2021 LỜICẢMƠN Trong trình học tập nghiên cứu hồn thành luận án này, ngồi sựnỗlực phấnđấucủabảnthân,tơiđãnhậnđượcrấtnhiềusựgiúpđỡtậntìnhcủacác thầy,các côvà cácbạnđồngnghiệp Tôi xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban giám hiệu, phịng Đào tạo sauđạihọcTrườngĐạihọcYHàNội.Đảngủy,BangiámhiệuTrườngĐạihọcY Dược TháiNgunđãtạođiềukiệnchotơiđượcthamgiahọctậpnghiêncứu trongsuốtthờigianqua Xin trân trọng cảm ơn Thầy Cô giáo, anh chị em kỹ thuật viênBộ môn Dược lý Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi trongqtrìnhhọctập vàthực hiệnluận ánnày Xin trân trọng cảm ơn PGS TS Nguyễn Trọng Thông, PGS TS NguyễnTrần Thị Giáng Hương, PGS TS Phạm Thị Vân Anh tận tình hướng dẫn vàchỉbảochotơitrongsuốt q trìnhhọc tậptại Bộmơn Đặcb i ệ t t ô i x i n d n h s ự b i ế t n s â u s ắ c t i P G S T S V ũ T h ị N g ọ c ThanhvàPGSTSNguyễnDuyThuần,haiThầyCơhướngdẫnđãtậntìnhchỉbảotrongsuốtqtrìnhhọctậpvànghiêncứugiúptơi hồnthànhđượcluậnán Cuối tơi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới gia đình,bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ, động viên vật chất tinh thần trongsuốt q trìnhhọc tậpvà nghiêncứu HồngTháiHoaCương LỜICAMĐOAN Tơi làHồngThái HoaCương, nghiên cứu sinhkhóa32TrườngĐại họcYHà Nội,chuyênngànhDượclývàđộc chất xin camđoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫncủaPGS.TS Vũ ThịNgọc Thanhvà PGS.TSNguyễn DuyThuần Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác đãđượccôngbốtạiViệtNam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác,trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơinghiên cứu Tơixinhồntồnchịutráchnhiệmtrướcphápluậtvềnhữngcamkếtnày HàNội,ngày 25 tháng4năm2021 Ngườiviếtcamđoan HoàngTháiHoaCương MỤCLỤC LỜICẢMƠN i LỜICAM ĐOAN .ii DANHMỤCBẢNG vi DANHMỤCHÌNH ix DANHMỤCCÁCCHỮVIẾTTẮT xiii ĐẶTVẤNĐỀ CHƯƠNG1:TỔNGQUANTÀILIỆU .3 1.1 Bệnhlýviêmgan,xơgan 1.1.1 Kháiniệm .3 1.1.2 Nguyênnhân 1.1.3 Cơchếbệnhsinh 1.1.4 Chẩnđoán viêmganmạn,xơgan .10 1.1.5 Điều trịviêmganmạn,xơgan 15 1.2 Mơhìnhnghiêncứuthuốccótácdụngchống viêmgancấp,xơgantrênthựcnghiệm 20 1.2.1 Mơhìnhnghiên cứuthuốccótácdụng chốngviêmgancấp 20 1.2.2 Mơhìnhnghiên cứuthuốccótácdụng chốngxơgan 26 1.3 Mộtsốcâythuốcvàbàithuốcyhọccổtruyềnđãđượcnghiêncứuđểđiềutrịvi êmgan 28 1.4 Tổng quanvề câyDứadại 30 1.4.1 Phânloạithựcvậtvàphân bốcủacâyDứadại .30 1.4.2 Thànhphầnhóa họccủaDứadại 31 1.4.3 Côngdụngc ủ a Dứadạ i 32 1.4.4 Mộtsốbài thuốccóDứadại .33 1.4.5 Nghiêncứu tác dụngsinh học .34 CHƯƠNG2Đ Ố I TƯỢNGVÀPHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU 38 2.1 Nguyênliệunghiêncứu .38 2.2 Thuốc,hóachất,máyvàthiếtbịphục vụnghiêncứu 39 2.2.1 Thuốcvàhóachấtphụcvụnghiêncứu .39 2.2.2 Máyvàthiếtbịphụcvụnghiêncứu 40 2.3 Độngvậtthựcnghiệm 41 2.4 Phương phápnghiêncứu 41 2.4.1 Nghiêncứuđộctính 42 2.4.2 Nghiêncứutácdụngchốngviêmgan,xơgancủaquảDứadại .43 2.4.3 Nghiên cứu mộtsố tácdụng dượclýliênquan đến tácd ụ n g c h ố n g v i ê m gan,xơgan 46 2.5 Xửlýsố liệu 52 CHƯƠNG3:KẾTQUẢNGHIÊNCỨU 53 3.1 Nghiêncứuđộctínhcấpvàđộctínhbántrườngdiễn .53 3.1.1 Độc tínhcấp 53 3.1.2 ĐộctínhbántrườngdiễncủaPĐEchiếtxuấttừquảDứadại 53 3.2 Đánhgiá tác dụngc h ố n g v i ê m g a n , x g a n c ủ a C T P v P Đ E c h i ế t x u ấ t t quảDứadại 69 3.2.1 TácdụngchốngviêmgancấptrênmơhìnhgâyviêmganbằngPARliềucao 69 3.2.2 Tác dụngchốngxơgancủaCTPvàPĐE 81 3.3 Kếtquảmộtsốtácdụngdượclýliênquanđếntácdụngchốngviêmgan,xơgancủaquả Dứadại 91 3.3.1 Kết quảnghiêncứutácdụnglợimậtcủaquảDứadại 91 3.3.2 Đánhgiát c dụngchốngviêmcấpcủaCTPvàPĐE 93 3.3.3 TácdụngchốngviêmmạncủaCTPvàPĐEtrênmơhìnhgâyuhạtthựcnghiệ mbằngamiant 96 3.3.4 Tácdụngchố ngoxyhóainvitrocủaCTPvàPĐEchiếtxuấttừquảDứadại 97 CHƯƠNG4:BÀNLUẬN .99 4.1 ĐộctínhcủaCTP vàPĐEchiếtxuấttừquảDứadại 100 4.1.1 Độc tínhcấp CTPvàPĐE 100 4.1.2 ĐộctínhbántrườngdiễncủaPĐE 102 4.2 TácdụngchốngviêmgancấpcủaCTPvàPĐEchiếtxuấttừquảDứadại .111 4.2.1 Bàn luậnvềmơ hìnhnghiêncứu 111 4.2.2 Tác dụngbảovệgan .114 4.2.3 Tác dụnglàmtăngphụchồitổnthương gan 116 4.3 TácdụngchốngxơgantrênmơhìnhgâyxơganbằngCCl4 118 4.3.1 Bàn luậnvềmơ hìnhnghiêncứu 118 4.32.TácdụngchốngxơgantrênmơhìnhgâyxơganbằngCCl4củaCTPvàPĐE119 4.4 Mộtsốtácdụngdượclýliênquanđếntácdụngchốngviêmgan,xơhóagancủaquảDứa dại .125 4.4.1 TácdụnglợimậtcủaCTPvàPĐE 125 4.4.2 Tácdụngchống viêmcấpcủaCTP vàPĐE .129 4.4.3 Tácdụngchống viêmmạncủaCTP vàPĐE 133 4.4.4 Tác dụngchống oxyhóainvitro 135 KẾTLUẬN 141 KIẾNNGHỊ 143 TÀILIỆUTHAMKHẢO 144 DANHMỤCCÁCCƠNGTRÌNHKHOAHỌCĐÃĐƯỢCCƠNGBỐCĨ LIÊNQUANĐẾNLUẬNÁN .162 PHỤLỤC .163 DANHMỤCBẢNG Bảng 1.1.HệthốngđiểmcủaKnodell-Ishak trongviêmganmạn .11 Bảng 1.2.Phânđộviêmgan theo HAI 12 Bảng1.3.PhânloạixơgantheoChild-Pugh .15 Bảng1 C c c h ấ t đ ộ c v i g a n đ ợ c d ù n g đ ể g â y t ổ n t h n g g a n t h ự c nghiệmởchuộtcốngtrắng 22 Bảng3.1.ẢnhhưởngcủaPĐEđến thểtrọng chuột 54 Bảng3.2.ẢnhhưởngcủaPĐEđến sốlượng hồngcầu trongmáu chuột 55 Bảng3.3.ẢnhhưởngcủaPĐEđếnhàmlượnghuyếtsắctốtrongmáuchuột .56 Bảng3.4.ẢnhhưởngcủaPĐEđ ế n t h ể t í c h t r u n g b ì n h h n g c ầ u t r o n g máuchuột 56 Bảng3.5.ẢnhhưởngcủaPĐEđến số lượngbạch cầutrong máu chuột 57 Bảng3.6.ẢnhhưởngcủaPĐEđếncôngthứcbạchcầutrongmáuchuột 58 Bảng3.7.ẢnhhưởngcủaPĐEđếnsố lượng tiểucầutrongmáuchuột 59 Bảng3.8.ẢnhhưởngcủaPĐEđếnhoạtđộAST(GOT)trongmáuchuột 60 Bảng3.9.ẢnhhưởngcủaPĐEđến hoạt độALT(GPT)trong máu chuột 60 Bảng3.10.ẢnhhưởngcủaPĐE đếnn n g đ ộ b i l i r u b i n t o n p h ầ n t r o n g máuchuột 61 Bảng3.12.Ảnhhưởng củaPĐEđếnnồngđộcholesteroltrongmáu chuột 62 Bảng3.13.Ảnhhưởng củaPĐEđếnnồngđộcreatinin máuchuột .63 Bảng3.14.Hình tháivithểganchuột sau8tuần uốngmẫu thử 64 Bảng3.15.Hình thái vithểthậnchuộtsau8 tuần uốngmẫu thử 66 Bảng3.16.Hìnhthái vithểganchuột sau 2tuần ngừnguống mẫuthử 67 Bảng3.17.Hìnhthái vithểthậnchuộtsau2tuần ngừnguống mẫu thử .68 Bảng 3.18: Ảnh hưởng CTP PĐE lên hoạt độ AST, ALT huyếtthanh chuộtbịgâyđộcbằngPAR 69 Bảng3.19:ẢnhhưởngcủaCTPvà PĐE lênhìnhảnhmơbệnhhọccủaganchuột bị gâyđộcbằng PAR 70 Bảng3 : Ả n h hư ởngc ủ a C T P vàP ĐE lênhoạt độ A ST vàAL Tt r ong hu yết thanhchuộtsaugâyđộc bằngPAR 2ngày 74 Bảng3.21:ẢnhhưởngcủaCTPvà PĐE lênhìnhảnhmơbệnhhọc củaganchuột saugâyđộc bằngPAR2ngày 75 Bảng3 2 : Ả n h hư ởngc ủ a C T P vàP ĐE lênhoạt độ A ST vàAL Tt r ong hu yết thanhchuộtsaugâyđộc bằngPAR 4ngày 78 Bảng3.23:ẢnhhưởngcủaCTPvà PĐE lênhìnhảnhmơbệnhhọc củaganchuột saugâyđộc bằngPAR4ngày 79 Bảng 3.24 Ảnh hưởng CTP PĐE đến trọng lượng tương đối ganchuột trênmơhìnhgâyxơganthựcnghiệmbằngCCl4 81 Bảng3.25.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐEđếnhoạtđộALTtrongmáuchuộttrên mơhìnhgâyxơganthực nghiệmbằng CCl4 .82 Bảng3.26.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐEđếnhoạtđộASTtrongmáuchuộttrên mơhìnhgâyxơganthực nghiệmbằng CCl4 .83 Bảng3.27.Ảnh hưởngcủaCTP vàPĐE đếnnồng độalbumin trongmáuchuột trênmơhìnhgâyxơganthựcnghiệmbằngCCl4 83 Bảng3.28.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐEđếnnồngđộcholesteroltồnphầntrongmáu chuộttrênmơhìnhgâyxơganthựcnghiệmbằngCCl4.84 Bảng3 Ảnhh n g củaC T P v P Đ E đ ế n n n g đ ộ b i l i r u b i n t o n phầntrongmáuchu ộttrênmơhìnhg â y xơgant h ự c n g h i ệ m bằngCCl .85 Bảng3.30.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐEđếnsốlượngbạchcầutrongmáuchuột trênmơhìnhgâyxơgan thựcnghiệmbằng CCl4 .85 Bảng 3.31 Ảnh hưởng CTP PĐE đến số lượng hồng cầu hàm lượnghuyết sắc tố máu chuộttrên mơ hình gây xơ gan thực nghiệmbằngCCl4 86 Bảng3.32.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐEđ ế n h m l ợ n g h y d r o x y p r o l i n (Hyp)trongganchuộttrênmơhìnhgâ y xơg a n t h ự c n g h i ệ m bằngCCl4 87 Bảng3.33.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐEđếnlượngcollagentypeIVtronggan chuộttrênmơ hìnhgâyxơgan thựcnghiệmbằng CCl4 .87 Bảng 3.34: Ảnh hưởng CTP PĐE đến mơ bệnh học gan chuột mơhìnhgâyxơganthựcnghiệmbằngCCl4 .88 Bảng3.35.Ảnh hưởngcủa CTP PĐE đếntrọng lượng dịch mậttrongtúimậtcủachuột sau gâyđộc2 ngày 91 Bảng3.36 Ảnh hưởngcủa CTP vàPĐEđếntrọnglượng dịchmậttrongtúimậtcủachuột sau gâyđộc4 ngày 92 Bảng3.37.Độtăngthểtích chân chuộtsau khigâyviêm 93 Bảng 3.38.Mứcđộứcchếphảnứngphù CTPvàPĐEDứa dại .94 Bảng3.39.ẢnhhưởngcủaCTPvàPĐElênthểtíchdịchrỉviêm,sốlượngbạch cầu vàhàmlượngprotein trongdịchrỉviêm 95 Bảng3.40.Trọng lượngtrungbìnhuhạtthựcnghiệm 96 Bảng 3.41.Khảnăngdọngốctựdo DPPHcủaCTPvàPĐE 97 Bảng3.42.Kếtquảdọngốctựdo anion superoxidcủacủaCTPvàPĐE 97