1357 nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư dạ dày của curcumin và phức chất curcumin trên chuột nhắt trắng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC Y DƢỢC CẦN THƠ NGUYỄN DƢƠNG THẢO NGÂN NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH KHÁNG UNG THƢ DẠ DÀY CỦA CURCUMIN VÀ PHỨC CHẤT CURCUMIN TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ ĐẠI HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: ThS HUỲNH THỊ MỸ DUYÊN Cần Thơ – 2015 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên xin gửi lời cảm ơn cha mẹ, anh hai, gia đình ln quan tâm, động viên, khích lệ suốt trình học tập trường Em xin gửi lời cám ơn chân thành đến cô ThS Huỳnh Thị Mỹ Duyên tận tình hướng dẫn, góp ý, giúp đỡ tạo điều kiện để em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám Hiệu nhà trường quý Thầy, Cô môn, đặc biệt thầy cô, anh chị kỹ thuật viên môn Bào chế, Dược lý tận tình giảng dạy cho em kiến thức quý báu năm học qua tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin gửi lời cảm ơn đến bạn Kiều Hân, Lan Thanh nhóm làm đề tài Bào chế, bạn Kim Thu chung nhà trọ bạn lớp Dược B K36 nhiệt tình giúp đỡ động viên tơi, nguồn động lực lớn giúp tơi vượt qua khó khăn thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình nghiên cứu khác Cần Thơ, ngày 14 tháng 06 năm 2015 Sinh viên Nguyễn Dương Thảo Ngân i MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan ung thư dày 1.1.1 Các yếu tố bệnh sinh 1.1.2 Giải phẫu bệnh 1.1.3 Các giai đoạn tiến triển bệnh 1.1.4 Chẩn đoán 1.1.5 Điều trị 1.2 Curcumin phức chất curcumin 1.2.1 Tính chất lý hóa curcumin 1.2.2 Tính chất dược lý curcumin 1.2.3 Sinh khả dụng dược động học curcumin .10 1.3 Tổng quan nghiên cứu liên quan 10 1.3.1 Các nghiên cứu kháng khối u dày curcumin chuột 10 1.3.2 Các nghiên cứu kháng ung thư khác curcumin chuột .12 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu 14 2.1.1 Nguyên liệu hoá chất 14 2.1.2 Trang thiết bị 15 2.1.3 Dụng cụ 15 ii 2.2 Đối tượng nghiên cứu 15 2.2.1 Động vật thí nghiệm 15 2.2.2 Bột thuốc thử nghiệm 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Bố trí thí nghiệm .16 2.3.2 Khảo sát khối lượng chuột lô 19 2.3.3 Đánh giá hoạt tính kháng khối u mặt đại thể .19 2.3.4 Đánh giá hoạt tính kháng khối u mặt vi thể .19 2.3.5 Phân tích kết xử lý số liệu thống kê 20 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 21 3.1 Khảo sát thay đổi khối lượng chuột 21 3.2 Phân tích đại thể .23 3.3 Phân tích vi thể .29 Chƣơng BÀN LUẬN 36 4.1 Kết khảo sát khối lượng chuột lô 38 4.2 Kết phân tích đại thể 39 4.3 Kết phân tích vi thể 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT 5-FU 5-fluorouracil AOM Azoxymethane AJCC American Joint Committee of Cancer (Ủy ban Hợp Hoa Kỳ Ung thư) B(a)P Benzo (a) pyrene Cur Curcumin CYP Cyclophosphamide DMBA 7,12 dimethyl benzanthracene GST Glutathion S-transferase MNU N-metyl-N-nitroureas NF-kB Nuclear Factor-kappa B (yếu tố hoạt hoá nhân) PEG 6000 Polyethylenglycol PVP K30 Polyvinylpyrrolidon TCYTTG Tổ chức y tế giới TP Toàn phần UICC Union for International Cancer Control (Liên minh Kiểm soát Ung thư Quốc tế) UTBMT Ung thư biểu mô tuyến UTDD Ung thư dày iv DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Phân loại mô bệnh học ung thư dày Tổ chức Y tế Thế giới năm 2000 .5 Bảng 2.1 Các ngun liệu, hóa chất dung mơi sử dụng 14 Bảng 2.2 Các trang thiết bị sử dụng bào chế thử nghiệm 15 Bảng 3.1 Số chuột chết lơ q trình thí nghiệm 21 Bảng 3.2 Khối lượng chuột trung bình lô từ ngày 18 đến ngày 104 22 Bảng 3.3 Số lượng khối u kích thước khối u lô 23 Bảng 3.4 So sánh kết đại thể lô 26 Bảng 3.5 Kết phân tích vi thể đoạn dày chuột lô 29 Bảng So sánh kết vi thể lô 35 v DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Cấu trúc curcumin Hình 1.2 Quá trình hình thành di khối u tác động curcumin Hình 2.1 Sơ đồ tóm tắt quy trình thử nghiệm hoạt tính kháng ung thư dày phức chất cucumin chuột 18 Hình 3.1 Đại thể dày lô 27 Hình 3.2 Đại thể dày lô 27 Hình 3.3 Đại thể dày lơ 27 Hình 3.4 Đại thể dày lơ 28 Hình 3.5 Đại thể dày lơ 28 Hình 3.6 Đại thể dày lơ 28 Hình 3.7 Đại thể dày lô 29 Hình 3.8 Vi thể đoạn dày bình thường 32 Hình 3.9 Vi thể khối u đoạn dày chuột lô .32 Hình 3.10 Vi thể tâm vị dày chuột lô .33 Hình 3.11 Vi thể khối u đoạn dày chuột lô .33 Hình 3.12 Vi thể đoạn dày chuột lô số 5, .34 Hình 3.13 Vi thể khối u đoạn dày chuột lô .34 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư dày loại ung thư phổ biến thứ tư nguyên nhân tử vong ung thư cao thứ hai giới sau ung thư phổi Trên khắp giới với số ca mắc 989.600 738.000 người chết ước tính xảy năm 2008, chiếm 8% tổng số ca 10% tổng số trường hợp tử vong [13] Việt Nam thuộc khu vực nguy ung thư dày trung bình cao, với tỷ lệ mắc chuẩn hóa theo tuổi 21,8 nam 10,0 nữ 100.000 dân [3] Mặc dù có nhiều tiến chẩn đoán, điều trị tiên lượng ung thư dày xấu, đặc biệt ung thư dày tiến triển, với tỷ lệ sống thêm năm khoảng 28% [3] Các liệu pháp hóa trị cần thiết đa số bệnh nhân ung thư dày tiến triển, chúng cải thiện tiên lượng số bệnh nhân có chọn lọc với thời gian sống thêm tối đa khơng q 12 tháng độc tính cao hố chất tổng hợp cơng khơng đặc hiệu tế bào ung thư tế bào thường [28] Vì vậy, việc hướng tới tìm hợp chất có nguồn gốc dược liệu có hiệu điều trị đồng thời an toàn cho người sử dụng thu hút quan tâm nhiều nhà nghiên cứu Nghệ vàng (Curcumin longa L Zingiberaceae) loài dược liệu trồng sử dụng nhiều vùng nhiệt đới Nam Đông Nam Á có thành phần thân rễ curcumin - polyphenol trọng lượng phân tử thấp Nhiều nghiên cứu chứng minh curcumin có tác dụng nhiều tác dụng đáng ý hoạt tính kháng viêm, làm lành vết loét dày tá tràng, đặc biệt khả kháng ung thư ung thư dày quan tâm Bên cạnh đó, thử nghiệm lâm sàng chứng minh curcumin thật an toàn dùng với liều cao Với an toàn hiệu quả, curcumin hợp chất thiên nhiên có nhiều tiềm ứng dụng điều trị phòng ngừa bệnh [11] Cho đến nay, giới có số nghiên cứu tác dụng phòng chống ung thư dày Nghệ chuột mà thành phần có tác dụng curcumin Việt Nam chưa có nghiên cứu cụ thể Vì vậy, để góp phần nghiên cứu hiệu sử dụng curcumin phức chất curcumin có độ hồ tan cải thiện, thực đề tài “Nghiên cứu hoạt tính kháng ung thư dày curcumin phức chất curcumin chuột nhắt trắng” với mục tiêu sau: 1) Gây mơ hình ung thư dày Benzo (a) pyrene chuột nhắt trắng suy giảm miễn dịch 2) Đánh giá hoạt tính kháng ung thư dày curcumin phức chất curcumin chuột nhắt trắng qua phân tích đại thể phân tích vi thể Ý nghĩa khoa học Cung cấp thêm luận chứng khoa học tác dụng kháng ung thư dày curcumin phức chất có độ hòa tan cao curcumin Ý nghĩa thực tiễn Nghiên cứu thành công tiến hành thử tiền lâm sàng lâm sàng người tình nguyện dạng bào chế chứa curcumin phức chất curcumin Góp phần sản xuất chế phẩm có nguồn gốc từ dược liệu có hiệu điều trị cao tác dụng phụ khơng mong muốn 34 Hình 3.12 Vi thể đoạn dày chuột lơ số 5, Hình 3.13 Vi thể khối u đoạn dày chuột lô a/ Tăng sinh tế bào gai nhiều lớp b/ Viêm mạn với xuất bạch cầu đa nhân trung tính lympho c/ Tăng sinh tế bào đáy nhiều lớp 35 Bảng 3.6 So sánh kết vi thể lô Số Tăng sản con/lô Số lƣợng Tỉ lệ (%) Số lƣợng Tỉ lệ (%) 0 0 13 11 84,6 ** 13 100*** 10 10 (88,2) ### 30 (70)### 14 28,6 (66,2)## 57,1 (42,9)## 10 30 (64,5)## 40 (60)## 17 14 82,4 (2,6)** 16 94,1 (5,9)*** 10 0 (100) ### 10 (90)### Lô Viêm mạn *p < 0,05 so sánh với lô 1; **p < 0,01 so sánh với lô ***p < 0,001 so sánh với lô 1; # p < 0,05 so sánh với lô ## p < 0,01 so sánh với lô 2; ###p < 0,001 so sánh với lô Nhận xét: lô 3, 4, cho kết tỉ lệ tăng sản viêm mạn giảm có ý nghĩa sơ với lơ 36 Chƣơng BÀN LUẬN Để gây mơ hình ung thư dày chuột đề tài định lựa chọn dùng hoá chất gây ung thư Benzo (a) pyrene dòng chuột Swiss gây ức chế miễn dịch CYP B(a)P hoạt chất gây ung thư theo chế gây đột biến gen có nguồn gốc từ q trình cháy khơng hồn tồn, tìm thấy có nhiều khí thải cơng nghiệp, tơ khói thuốc lá, sử dụng phổ biến nhiều nghiên cứu gây mơ hình ung thư đoạn dày chuột để thử nghiệm tác dụng thuốc CYP chất ức chế tăng sinh tế bào, gây giảm bạch cầu, hồng cầu, tiểu cầu, lympho B, T…Khi miễn dịch suy giảm không nhận diện tiêu diệt tế bào đột biến nên dễ bị ung thư Một số nghiên cứu gây mơ hình ung thư sử dụng chuột tuyến ức dòng chuột Balb/C, số nghiên cứu khác thực chuột bình thường bị suy giảm miễn dịch, đặc biệt nghiên cứu tác dụng điều trị ung thư thuốc kích hoạt hệ thống miễn dịch Theo kết nghiên cứu gần Như Nguyện (2014), thực Bộ môn Dược lý - Khoa Dược -Trường ĐH Y Dược TP HCM, nghiên cứu xây dựng mơ hình ung thư gan chuột nhắt trắng gây suy giảm miễn dịch dòng chuột Swiss đực với liều tiêm phúc mô 100 mg/kg CYP vào ngày thứ 1, cho kết thể trạng yếu, lông xù hoạt động bình thường khơng có chết, lượng bạch cầu thấp vào ngày thứ vào ngày thứ 21 tỷ lệ phục hồi đạt khoảng 33,33% so với ban đầu Như vậy, thời khoảng gian từ ngày đến ngày 21 khoảng thời gian miễn dịch chuột thích hợp đưa liều hoá chất ung thư nên đề tài chọn ngày ngày 19 chuột uống hóa chất gây ung thư Hệ gen chuột người có tương đồng lớn, cấu trúc mô học dày chuột dày người có khác nhau, cấu tạo dày người tế bào tuyến chuột tế bào vảy nguyên nhân chủ yếu gây ung thư khởi nguồn từ đột biến viêm tạo thành tế bào bất thường không chịu kiểm sốt thể, tăng sinh vơ tổ chức, thay đổi hình dạng xâm lấn quan khác Vì vậy, đề tài 37 chọn chuột làm động vật thí nghiệm phù hợp với qui định thử lâm sàng kết lại ứng dụng làm tài liệu tham khảo có ý nghĩa cho thử nghiệm người sau Bố trí thí nghiệm chuột chia thành lô với lô sinh lý uống dầu bắp nhằm đánh giá dầu bắp có tăng nguy ung thư hay không, lô lô chứng bệnh để chứng minh tác dụng có hoạt chất dầu, lô thử bột thuốc chứa phức chất cur nguyên liệu Merck có 75mg cur I, lơ thử bột thuốc chứa phức chất cur ngun liệu tồn phần có 75mg cur I, lô thử bột thuốc chứa phức chất cur toàn phần 75mg sử dụng nhằm khảo sát xem ngồi cur I cịn có thành phần khác cur II, III… có tác dụng kháng ung thư dày, lô lô tá dược nhằm đánh giá tá dược có khả kháng ung thư hay khơng hay tác dụng sinh học hoạt chất cur, lô lô chứng dương điều trị 5-FU sử dụng lâm sàng trị ung thư dày người nhằm so sánh tác dụng thuốc thử nghiệm với 5-FU Dung môi dầu bắp sử dụng dầu bắp giúp hoà tan tăng hấp thu B(a)P ruột, dạng bào chế định hướng sau viên nén nên việc sử dụng dầu bắp khơng hịa tan thành phần tá dược thân nước có cơng thức bào chế, nhằm giữ cho bột thuốc dày Trong tiến trình thử nghiệm sau tiêm liều CYP 100 mg/kg vào ngày 1, uống liều hoá chất gây ung thư B(a)P 3mg có 10 tổng số 98 chuột chết trước ngày 19 nguyên nhân miễn dịch kết hợp với thời tiết nóng, thời gian đầu vệ sinh lồng chuột chưa kỹ nên chuột dễ mắc bệnh mà chết, ngồi cịn ghi nhận trường hợp lô chứng dương bị cắn đuôi máu nhiều dẫn đến chết Vào ngày 19 có lơ chết ngộp uống hoá chất gây ung thư liều thứ 2; vào ngày 38, 50, 64, 78, 96 có chuột chết lơ cur merck cur tồn phần 75mg ngộp uống thuốc; lô 2, 3, 5, có chuột chết vào ngày 22, 25, 30, 40, 62 không rõ nguyên nhân ghi nhận ốm chết Tất chuột chết sau ngày 19 tiến hành mổ quan sát dày khơng thấy xuất khối u Vì vậy, đề tài loại bỏ số lượng chuột chết này, không đưa vào kết nghiên cứu 38 4.1 Kết khảo sát khối lƣợng chuột lô Khối lượng chuột thời gian bắt đầu thử nghiệm khác khơng có ý nghĩa thống kê lứa chuột 5-6 tuần tuổi, giống đực Trước ngày 18 chuột lô 2, 3, 4, 5, 6, bị suy giảm miễn dịch bị uống hóa chất gây ung thư thứ nên giảm khối lượng nhiều so lơ sinh lý có chuột chết chưa tiến hành dùng thuốc ảnh hưởng đến kết thống kê đề tài bắt đầu ghi nhận thay đổi khối lượng chuột ngày 18, ngày trước cho chuột uống liều hoá chất gây ung thư thứ uống thuốc trị liệu nhằm giúp đánh giá khác lô điều trị không điều trị, lơ với lơ sinh lý xác Khối lượng chuột thay đổi theo hàng ngày khơng đáng kể nên thí nghiệm tiến hành cân ngày Kết từ đầu tiến trình cuối tiến trình có gia tăng khối lượng, lơ từ 33,7g tăng lên 39,1g tăng trưởng sinh lý bình thường chuột chế độ ăn đầy dủ giàu chất béo Ở lô bệnh cho thấy lô tăng từ 28,5g lên 36,1g; lô tăng từ 28,4g lên 36,3g; lô từ 28,6g lên 36,4g; lô từ 28,3g đến 36g; lô từ 28,5g lên 37,9g ; lô từ 28,3g lên 39g So sánh khối lượng lô ngày, vào ngày 18, 20, 22, 24, 26 khối lượng lô 2, 3, 4, 5, 6, nhỏ lơ 1có ý nghĩa thống kê ngày 18 lô 33,7g; lô 28,5g; lô 29,4g; lô 28,6g; lô 28,3g; lô 28,5g; lô 28,3g (p < 0,05) Nguyên nhân lô 2, 3, 4, 5, 6, bị suy giảm miễn dịch nên khối lượng nhỏ lơ phát triển bình thường khơng bị gây bệnh việc suy giảm miễn dịch làm chuột trở nên sức đề kháng, ăn uống kém…, lô 2, 3, 4, 5, 6, không khác (p > 0,05) bị gây suy giảm miễn dịch Nhưng kể từ ngày 36 đến ngày 104 khối lượng ngày khơng khác có ý nghĩa thống kê lơ chuột bệnh thích nghi, hệ thống miễn dịch dần hồi phục kết hợp với chế độ ăn đầy đủ, nhiều chất béo dầu bắp nên lơ chuột bệnh tăng trọng bình thường trở lại lơ sinh lý tăng trọng sinh lý bình thường Trong trường hợp chuột bệnh có xuất khối u khối u giai đoạn đầu giúp thể chuột 39 tăng cường trao đổi chất, cung cấp vật liệu cho tổng hợp tế bào nên không làm giảm khối lượng chuột Khối lượng chuột ngày lơ tăng khơng tuyến tính, lơ lơ sinh lý phát triển bình thường khối lượng ngày 18 33,7g; ngày 20 giảm 33,6g; ngày 22 tăng lên 34g đến ngày 24 lại giảm cịn 33,8g; tương tự lơ khác lô ngày 22 28,7g; ngày 24 29,4g; ngày 26 29,9g; ngày 28 giảm xuống 29,6g Nguyên nhân dao dộng sinh học chuột, thời gian cân khác ngày, chuột tăng khối lượng ngày sau so với ngày trước ngày trước cân thời điểm chuột ăn no, chưa tiểu tiện, đại tiện ngược lại Từ kết phân tích cho thấy, khối lượng chuột khơng có liên quan tới tình trạng chuột có khối u hay khơng có khối u Kết có tương đồng với nghiên cứu trước Mou-Tuan Hung cộng (1994) khối lượng chuột vào ngày cuối khơng có khác lô bệnh lô điều trị [24] 4.2 Kết phân tích đại thể Phân tích đại thể lô 2, lô uống uống B(a)P không điều trị so với lô 1, 3, 4, 5, 6, cho kết sau Số có khối u lô 11/13 chiếm tỉ lệ 84,6% với số khối u trung bình 2,45; kích thước khối u trung bình 3,99 mm3 so sánh với lơ khơng có có khối u (p < 0,001) chứng tỏ dung môi dầu bắp dùng để hòa tan B(a)P phân tán hệ tá dược không gây khối u chuột, tỉ lệ chuột mang khối u lô 82,6% với số khối u trung bình 2,21 kích thước khối u trung bình 3,61mm3 nhỏ lơ khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), lô uống thành phần chứa tá dược để tạo phức chất cur, hỗn hợp tá dược cơng thức viên nên khơng có tác dụng sinh học điều chứng minh lơ uống bột thử nghiệm có tác dụng kháng khối u hoạt chất có tác dụng So sánh tỉ lệ khối u lô 40% giảm 52,7%, với số khối u trung bình 1,25 giảm 49%, kích thước khối u trung bình 1,56mm3 giảm 60,9% so với lơ có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Ở lô tỉ lệ khối u giảm 40,9%, số khối u trung bình 40 giảm 36%; thể tích khối u trung bình giảm 55,9% khác so với lô (p < 0,05), lô tương tự lô tỉ lệ khối u giảm 40,9% số khối u trung bình giảm 42,9%, thể tích khối u giảm 55,6% khác biệt so với lô (p < 0,05) Lơ có tác dụng tốt lô chuột uống bột thuốc chứa phức chất cur liều 75mg cur I nguyên liệu merck, lô uống bột thuốc phức chất cur có 75mg cur I lượng bột thuốc nhiều cho chuột uống bị tràn mép nên đủ liều Lô cho kết kháng khối u khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) so với lô hàm lượng cur I lô nửa lơ 3, thấy ngồi cur I, thành phần khác có tác dụng So sánh lơ lơ có tỉ lệ khối u lượng cur lơ nhiều lô lượng chất mang không thay đổi nên tỉ lệ cur tạo phức không tăng lên số lượng khối u trung bình lơ nhiều lô chuột lô uống bị tràn Ở lơ hồn tồn khơng thấy xuất hiên khối u, chuột lô uống thuốc 5FU thuốc điều trị ung thư dày người Trong lô 3, 4, cho uống bột thuốc thử nghiệm lơ có tác dụng tốt nhất, so sánh với lơ lơ cho tác dụng kháng khối nhiều lơ có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) Shishu cộng (2008), tiến hành thử hoạt tính kháng khối u bột viên nén chứa phức chất cur với β-cyclodextrin liều 100mg/kg mơ hình ung thư dày liều B(a)P 3mg chuột nhắt trắng 20 tuần kết cho thấy bột viên chứa phức chất cur β-cyclodextrin tỉ lệ chuột mang khối u số khối u trung bình giảm 50% so với lô gây bệnh Nghiên cứu sử dụng liều cur 100mg/kg, tỉ lệ hoà tan phức cao phóng thích 90% sau 24h lại cho kết thấp lô sử dụng liều cur 75mg/kg nguyên nhân thời gian nghiên cứu kéo dài 20 tuần để tài tiến hành 14 tuần nên thời gian lâu tỉ lệ xuất khối u nhiều [32] Duangporn Thong Ngam cộng (2012), thử hoạt tính kháng khối u cur mơ hình ung thư dày MNU, liều cur sử dụng 200mg/kg 20 tuần tỉ lệ chuột mang khối u giảm 50% so với kết lô 52,7% 41 Nguyên nhân chuột uống cur tinh khiết tan cho tác dụng liều 200mg/kg [20] Shishu cộng (2011), tiếp tục nghiên cứu hoạt tính kháng khối u hạt chứa phức chất cur β-cyclodextrin liều thấp 75mg/kg uống ngày 18 tuần tỉ lệ chuột có khối u giảm 50% độ hoà tan cur cải thiện cao tới 98% cur phóng thích sau 24h thử nghiệm hồ tan [31] 4.3 Kết phân tích vi thể Khi tiến hành gây mơ hình ung thư dày cách cho uống liều 3mg B(a)P vào ngày 5, 19 sau gây suy giảm miễn dịch liều CYP 100mg/kg Khối u xuất đoạn dày với tỉ lệ chuột có khối u 84,6%; số khối u trung bình 2,45; kích thước trung bình 3,93mm3 Qua phân tích vi thể lô cho thấy mức độ tổn thương cao tăng sản kèm với tổn thương không u viêm mạn chưa đạt tới mức ung thư ngun nhân cường độ hố chất gây ung thư chưa đủ cao thời gian thử ngắn 104 ngày chưa đủ thời gian để khối u phát triển tới mức ung thư trình phát sinh ung thư diễn thời gian dài gồm q trình tế bào bị đột biến khơng chịu kiểm sốt thể tăng sinh vơ tổ chức, trình sinh sản diễn nhanh dẫn tới tế bào cịn non khơng đủ thực chức bình thường, khối u phát triển vơ tổ chức xâm lấm, di quan khác So sánh với số nghiên cứu trước Nghiên cứu Watteberg (1980), tiến hành gây ung thư dày loài chuột ICR liều (2 lần/ tuần, tuần) 1mg B(a)P 0,2ml dầu bắp, sau 211 ngày kể từ liều kết cho thấy 90-100% chuột có khối u với số khối u trung bình từ 4,1-5,8; kết phân tích vi phẫu 41% khối u cho kết thuộc loại ung thư [22] Nghiên cứu Kun Wu cộng (2001), tiến hành khảo sát tình trạng bị ung thư theo thời gian dòng chuột Kunming cho uống tổng liều B(a)P 8mg tuần, vào thời điểm tuần thứ 11, 16, 29 mổ chuột quan sát dày cho thấy: tuần 11 có 100% bị tăng sinh, 9,6% bị u nhú; tuần 16 có 100% bị tăng sinh, 42 100% bị u nhú, 19,6% bị ung thư; tuần 29 có 100% bị tăng sinh, 100% bị u nhú 76,8% bị ung thư [21] Nghiên cứu Shishu cộng (2011), sử dụng chuột tuyến ức để thử nghiệm với tổng liều ung thư thấp nghiên cứu trước 6mg thời gian rút ngắn 140 ngày tạo hiệu suất u 100% điều mơ hình sử dụng chuột tuyến ức nên thể chuột giảm hoàn tồn miễn dịch khơng thể chống lại tế bào bất thường Kết mức độ tổn thương chuột nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu đề tài sử dụng liều hoá chất gây ung thư 6mg thời gian ngắn, 104 ngày thử nghiệm chuột Swiss albino bị suy giảm miễn dịch khơng phải dùng chuột bị hồn tồn tuyến ức nên chuột thử nghiệm tạo lượng miễn dịch định để chống lại tế bào bất thường, chuột nghiên cứu chưa tiến triển đến giai đoạn ung thư mà giai đoạn tăng sản đoạn dày chuột Ở lơ có 84,6% chuột bị tăng sản, 100% xuất hiện tượng viêm mạn so sánh với lơ vi thể dày hồn tồn bình thường Kết cho thấy B(a)P gây biến đổi, tăng sản tế bào dày chuột So với lô lơ có tỉ lệ chuột tăng sản 82,6% viêm mạn 94,1% không khác biệt (p > 0,05), tá dược hồn tồn khơng có tác dụng ức chế tăng sinh kháng viêm Ở lô 3, 4, 5, tỉ lệ tăng sản 10%, 28,6%, 30% giảm 88,2% (p