BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THU HUYỀN KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN LÊN MEN NHẰM TĂNG CƯỜNG HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT CÂY BẠC HÀ Á (MENTHA ARVENSIS L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2021 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THU HUYỀN Mã sinh viên: 1601373 KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐIỀU KIỆN LÊN MEN NHẰM TĂNG CƯỜNG HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA DỊCH CHIẾT CÂY BẠC HÀ Á (MENTHA ARVENSIS L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Đỗ Ngọc Quang Nơi thực hiện: Bộ môn Vi sinh & Sinh học HÀ NỘI - 2021 LỜI CẢM ƠN Với lịng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn TS Đỗ Ngọc Quang – Bộ môn Vi sinh & Sinh học, Trường Đại học Dược Hà Nội – người thầy tận tình dìu dắt, hướng dẫn từ ngày đầu làm nghiên cứu khoa học người trực tiếp hướng dẫn, góp ý cho tơi thực khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới: - Các thầy, cô giáo chị kĩ thuật viên Bộ môn Vi sinh & Sinh học tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt thời gian thực khóa luận - Bạn Nguyễn Thị Quỳnh Như – thành viên nhóm nghiên cứu khoa học ln đồng hành, hỗ trợ động viên suốt thời gian làm nghiên cứu thực khóa luận Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ, gia đình bạn bè ủng hộ nguồn động viên tinh thần to lớn để tơi có thêm động lực vượt qua khó khăn suốt thời gian qua Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng năm 2021 Sinh viên Nguyễn Thị Thu Huyền MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Bạc hà (Mentha arvensis L.) 1.1.1 Tên khoa học phân loại khoa học 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố .2 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Các đặc tính dược lý .4 1.1.5 Công dụng bạc hà 1.2 Phương pháp lên men 1.2.1 Tổng quan phương pháp lên men .5 1.2.2 Ứng dụng phương pháp lên men việc nâng cao giá trị dược liệu 1.2.2.1 Nguyên tắc 1.2.2.2 Các phương pháp lên men thảo dược, dược liệu 1.2.2.3 Sự thay đổi thành phần hợp chất có hoạt tính số sản phẩm lên men từ dược liệu 1.2.2.4 Sự thay đổi hiệu điều trị số sản phẩm lên men từ dược liệu 10 1.2.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men thảo dược, dược liệu .11 1.2.2.6 Một số nghiên cứu lên men dịch chiết bạc hà 11 1.3 Một số phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn 12 1.3.1 Phương pháp khuếch tán đĩa thạch (Agar disk-diffusion method) .12 1.3.2 Phương pháp khuếch tán giếng thạch (Agar well diffusion method) 12 1.3.3 Phương pháp pha loãng thạch (Agar dilution method) .13 1.3.4 Phương pháp pha loãng môi trường đĩa 96 giếng (Broth microdilution method) 13 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 14 2.1.1 Nguyên vật liệu 14 2.1.2 Dụng cụ, thiết bị .14 2.2 Nội dung nghiên cứu 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 15 2.3.1 Lên men dịch chiết bạc hà điều kiện khác 15 2.3.2 Đánh giá hoạt tính kháng khuẩn phương pháp khuếch tán giếng thạch 16 2.3.3 Xử lý kết sau thực nghiệm 18 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ saccarose 19 3.2 Khảo sát ảnh hưởng hàm lượng bạc hà 25 3.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nấm men 31 3.4 Bàn luận 35 3.4.1 Về khảo sát ảnh hưởng nồng độ saccarose 35 3.4.2 Về khảo sát ảnh hưởng hàm lượng bạc hà 35 3.4.3 Về khảo sát ảnh hưởng nồng độ nấm men 36 3.4.4 Bàn luận chung 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT MIC Minimum Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế tối thiểu) LB Môi trường Luria Bertani VSV Vi sinh vật Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Sự thay đổi thành phần chất hợp chất có hoạt tính sinh học sau lên men số dược liệu Bảng 1.2 Một số sản phẩm lên men từ dược liệu tác dụng sức 10 khỏe Bảng 3.1 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch chiết bạc hà lên men với 19 nồng độ saccarose chủng nấm men khác Bảng 3.2 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch lên men thay đổi nồng độ 23 saccarose Bảng 3.3 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch chiết bạc hà lên men với 26 nồng độ bạc hà chủng nấm men khác Bảng 3.4 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch lên men thay đổi nồng độ 30 bạc hà Bảng 3.5 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch chiết bạc hà lên men với 32 nồng độ nấm men ban đầu chủng nấm men khác Bảng 3.6 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch lên men thay đổi nồng độ nấm men ban đầu Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 34 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Mentha arvensis L (Nguồn: Wikipedia) Hình 2.1 Sơ đồ tổng quát quy trình lên men từ dịch chiết bạc hà Á 16 Hình 2.2 Sơ đồ quy trình thử hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á sau 17 lên men phương pháp khuếch tán giếng thạch Hình 3.1 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á lên 20 men với nồng độ saccarose chủng nấm men khác phương pháp khuếch tán giếng thạch Hình 3.2 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn mẫu 21 bạc hà Á lên men nồng độ saccarose chủng nấm men khác Hình 3.3 Phân tích hồi quy tuyến tính kích thước vịng vơ khuẩn 22 nồng độ saccarose dịch lên men chủng nấm men khác Hình 3.4 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn mẫu 24 bạc hà Á lên men nồng độ saccarose khác Hình 3.5 Phân tích hồi quy tuyến tính kích thước vịng vơ khuẩn 25 nồng độ saccarose dùng để len men Hình 3.6 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á lên 27 men với hàm lượng bạc hà chủng nấm men khác phương pháp khuếch tán giếng thạch Hình 3.7 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vô khuẩn mẫu 28 bạc hà Á lên men nồng độ bạc hà chủng nấm men khác Hình 3.8 Phân tích hồi quy tuyến tính kích thước vịng vơ khuẩn 31 hàm lượng bạc hà dịch lên men chủng nấm men khác Hình 3.9 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn mẫu 31 bạc hà Á lên men hàm lượng bạc hà khác Hình 3.10 Phân tích hồi quy tuyến tính kích thước vịng vơ khuẩn nồng độ bạc hà dùng để len men Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 32 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Hình 3.11 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á lên 33 men với nồng độ nấm men ban đầu khác phương pháp khuếch tán giếng thạch Hình 3.12 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn 34 mẫu bạc hà Á lên men nồng độ nấm men ban đầu chủng nấm men khác Hình 3.13 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn mẫu bạc hà Á lên men nồng độ nấm men ban đầu khác Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 34 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Nhiều năm trở lại đây, việc nghiên cứu khai thác đặc tính quan trọng từ sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên thu hút nhiều mối quan tâm Các hợp chất có vai trị sinh học lồi thực vật đa dạng, nhiên hàm lượng giới hạn Điều thúc đẩy việc tìm biện pháp giúp làm giàu tăng cường tác dụng chúng Đây động thúc đẩy nghiên cứu Bạc hà Á (Mentha arvensis L.) sử dụng lâu đời gia vị, vị thuốc chữa bệnh quan trọng [4] Nhiều nghiên cứu khoa học cho thấy nhiều công dụng dược lý dịch chiết tinh dầu bạc hà [27] Với nhiều công dụng tiềm tính phổ biến chi phí phù hợp, chúng tơi định chọn bạc hà đối tượng nghiên cứu cho đề tài Lên men phương pháp bảo quản thực phẩm lâu đời nhất, không giúp kéo dài tuổi thọ mà đảm bảo tính an tồn, phương pháp làm tăng hương vị tạo đa dạng cho nguyên liệu [12] Dịch chiết nhiều loại dược liệu đường sau lên men nhờ hệ vi sinh vật qua nhiều thử nghiệm in vitro cho thấy cải thiện thành phần cơng dụng có lợi cho sức khỏe [7], [8], [16] Điều gợi ý cho sử dụng phương pháp lên men để lên men dịch chiết bạc hà với mục đích tăng cường hoạt tính dịch chiết bạc hà đánh giá đại diện qua hoạt tính kháng khuẩn Trong nghiên cứu thực môn Vi sinh & Sinh học, Đại học Dược Hà Nội, phân lập số chủng nấm men có khả lên men làm tăng hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á (Mentha arvensis L.) Để tìm hiểu khai thác tiềm hướng nghiên cứu này, thực đề tài “Khảo sát số điều kiện lên men nhằm tăng cường hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á (Mentha arvensis L.)” với mục tiêu: - Đánh giá ảnh hưởng số điều kiện lên men hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an y = 0.4332x + 1.173 R² = 0.372 0 HÀM LƯỢNG BẠC HÀ Hình 3.10 Phân tích hồi quy tuyến tính kích thước vịng vơ khuẩn nồng độ bạc hà dùng để len men 3.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ nấm men Tương tự với hai thực nghiệm trên, chúng tơi tiến hành lên men theo quy trình mô tả phần 2.3 Phương pháp nghiên cứu với nồng độ nấm men ban đầu khảo sát 5%, 10%, 20%, 25% Kết thử hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà lên men với điều kiện thay đổi lượng nấm men sử dụng trình bày bảng 3.5 hình 3.11 Bảng 3.5 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch chiết bạc hà Á lên men với nồng độ nấm men ban đầu chủng nấm men khác Kích thước vịng vơ khuẩn (mm) Thí nghiệm N5% N10% N20% N25% 4 5 5 5 5 HC5 TX2 31 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 2 7,5 3,5 - 4 - 4,5 4,5 3,5 3 - 1 5,5 5 4,5 5,5 5 5 5,5 - 6,5 5,5 7,5 - - TX5 VC3 Chú thích: HC5, TX2, TX5, VC3: chủng nấm men HC5, TX2, TX5, VC3 N5%, N10%, N20%, N25%: Nồng độ nấm men 5%, 10%, 20%, 25% (-): kết không rõ ràng Hình 3.11 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà Á lên men với nồng độ nấm men ban đầu khác phương pháp khuếch tán giếng thạch Chú thích: HC5, TX2, TX5, VC3 N5%, N10%, N20%, N25%: Nồng độ nấm men 5%, 10%, 20%, 25% 32 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phân tích ANOVA cho thấy khơng có khác biệt mang ý nghĩa thống kê (p = 0,214 > 0,05) mẫu lên men chủng nấm men khác có nồng độ nấm men ban đầu khác (hình 3.12) Hình 3.12 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn mẫu bạc hà Á lên men nồng độ nấm men ban đầu chủng nấm men khác Tương tự phần trước, gộp kết khảo sát để đánh giá ảnh hưởng chung nồng độ nấm men ban đầu hoạt tính kháng khuẩn (bảng 3.6) Tuy nhiên phân tích ANOVA, chúng tơi khơng thấy khác biệt có ý nghĩa thống kê (p = 0,2567 > 0,05) kích thước vịng vơ khuẩn mẫu lên men với nồng độ nấm men ban đầu khác (hình 3.13) Như vậy, nghiên cứu này, thay đổi nồng độ nấm men từ 5% đến 25% không làm thay đổi kích thước vịng vơ khuẩn dịch lên men 33 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Bảng 3.6 Kích thước vịng vơ khuẩn dịch lên men thay đổi nồng độ nấm men ban đầu Kích thước vịng vơ khuẩn (mm) Thí nghiệm N5% N10% N20% N25% 4 5 5 5 5 2 5 7,5 3,5 4 4 4,5 4,5 3,5 3 5 10 5,5 11 4,5 5,5 5,5 7,5 12 5 5,5 13 6,5 14 Chú thích: N5%, N10%, N20%, N25%: Nồng độ nấm men 5%, 10%, 20%, 25% Hình 3.13 Kết phân tích ANOVA kích thước vịng vơ khuẩn mẫu bạc hà Á lên men nồng độ nấm men ban đầu khác 34 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.4 Bàn luận 3.4.1 Về khảo sát ảnh hưởng nồng độ saccarose Để tồn phát triển, nấm men cần cung cấp nguồn carbon, nitơ, khoáng chất, vitamin, yếu tố phát triển… Nguồn carbon lượng quan trọng carbohydrate, mà chủ yếu loại đường Hơn nữa, số nấm men sử dụng nguồn đường cho trình lên men [22] Nhận thấy tầm quan trọng yếu tố đường trình trao đổi chất lên men nấm men, định khảo sát yếu tố để xem xét ảnh hưởng đến q trình lên men dịch chiết bạc hà Dựa vào kết thực nghiệm trên, chúng tơi thấy nồng độ saccarose có ảnh hưởng đến hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà lên men Hoạt tính kháng khuẩn có xu hướng tăng theo nồng độ đường mức độ nhạy cảm loại nấm men với thay đổi nồng độ saccarose khác Tuy nhiên trình lên men có tham gia nhiều yếu tố, nên thay đổi nồng độ đường giải thích hồn tồn thay đổi hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết bạc hà lên men 3.4.2 Về khảo sát ảnh hưởng hàm lượng bạc hà Năm 1998, C J Greenwalt cộng tiến hành nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết Camellia sinensis L lên men với lượng dược liệu khô sử dụng khác Kết thực nghiệm S aureus cho thấy dịch chiết nồng độ dược liệu khác có ảnh hưởng khác đến VSV, nhiên xu hướng ảnh hưởng khơng có tuyến tính [9] Áp dụng vào thực nghiệm chúng tơi thử dịch chiết Mentha arvensis L cho thấy thay đổi hàm lượng bạc hà mức độ nhạy cảm S aureus có khác ảnh hưởng hoạt tính kháng khuẩn dịch chiết lên men có xu hướng tăng theo lượng bạc hà Tuy nhiên, phân tích hồi quy tuyến tính chúng tơi cho giá trị R2 = 0,37 Cũng tương đồng với kết C J Greenwalt cộng sự, điều gợi ý nồng độ dược liệu lên men hoạt tính kháng S aureus có mối tương quan phi tuyến tính, cần có kết hợp yếu tố khác 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.4.3 Về khảo sát ảnh hưởng nồng độ nấm men Khi lượng nấm men tăng lên, trình lên men diễn nhanh hơn, giới hạn chất dinh dưỡng nồng độ chất có hoạt tính dịch chiết nên q trình lên men nhanh chóng đạt pha cân hoạt tính kháng khuẩn chưa đạt đến mức tạo khác biệt Điều gợi ý việc thay đổi lượng nấm men giúp đẩy nhanh tốc độ trình lên men khơng tạo nên thay đổi hoạt tính dịch bạc hà lên men 3.4.4 Bàn luận chung Các thí nghiệm chúng tơi thực lặp lại nhiều lần Tuy nhiên trình thực nghiệm phát sinh số tượng nhiễm nấm hay dịch bị loang mặt đĩa làm kết rõ ràng Kết thí nghiệm khơng thể đưa vào phân tích có thêm sai số Điều khiến cho số liệu số nhóm mẫu thiếu đồng nhất, phương sai lớn, có nguy gây ảnh hưởng đến phân tích ANOVA Để kiểm chứng lại kết phân tích trên, chúng tơi tiến hành phân tích khác biệt nhóm mẫu theo kiểm định Kruskal-Wallis (kết kiểm định xem Phụ lục) Theo đó, kiểm định Kruskal-Wallis cho kết gần tương đồng với kiểm định ANOVA từ góp phần khẳng định độ tin cậy phân tích kết thực nghiệm Trong thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng chung nồng độ saccarose lên kích thước vịng vơ khuẩn (bảng 3.2, hình 3.4), kiểm định ANOVA cho kết khác biệt có ý nghĩa kiểm định Kruskal-Wallis không cho thấy khác biệt Sự không tương đồng cho thấy cần phải tăng cỡ mẫu thí nghiệm để đưa kết tin cậy Trong nghiên cứu này, số liệu thực nghiệm chưa đủ để đưa kết luận có ý nghĩa thống kê khác biệt lên men dịch chiết bạc hà chủng nấm men HC5, TX2, TX5, VC3 Do giới hạn thời gian thực nghiệm, khảo sát nhiều điều kiện khác lên hoạt tính kháng khuẩn dịch lên men Vì vậy, phân tích tương quan dừng lại xây dựng đường hồi quy tuyến tính Các giá trị R2 thu đa số thấp 0,5 Điều cho thấy có ảnh hưởng phi tuyến tính nhiều yếu tố lên hoạt tính kháng khuẩn dịch lên men dược liệu Ở mức độ tại, chưa 36 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an thể xây dựng mơ hình để xác định tham số tối ưu để lên men dịch chiết bạc hà Mặc dù vậy, phương trình tuyến tính mà chúng tơi xây dựng có giá trị việc dự báo hiệu yếu tố lên kết trình lên men bạc hà KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Qua nghiên cứu này, đã: - Khảo sát ảnh hưởng điều kiện nồng độ saccarose, hàm lượng dược liệu, nồng độ nấm men đến hoạt tính kháng Staphylococcus aureus dịch chiết bạc hà lên men chủng nấm men HC5, TX2, TX5, VC3 phân lập từ nghiên cứu trước - Xác định hoạt tính kháng Staphylococcus aureus dịch chiết bạc hà lên men chịu ảnh hưởng nhiều nồng độ bạc hà, sau đến nồng độ saccarose, ảnh hưởng nồng độ nấm men ban đầu - Tiến hành phân tích thống kê xây dựng mơ hình tuyến tính ảnh hưởng điều kiện lên men đường kính vịng vơ khuẩn dịch chiết bạc hà lên men Đề xuất - Tiếp tục khảo sát điều kiện khác ảnh hưởng đến hoạt tính kháng khuẩn dịch bạc hà lên men - Có thể kết hợp khảo sát đồng thời nhiều điều kiện để thấy mức độ ảnh hưởng đến hoạt tính dịch chiết sau lên men Từ tìm điều kiện lên men tối ưu để nâng cao hoạt tính dịch chiết bạc hà 37 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Lê Đình Bích, Trần Văn Ơn (2007), Thực vật học, NXB Y học, Hà Nội, pp 224- 320 Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học, Hà Nội, pp 595-596 Tiếng Anh Aeschbach R., Löliger J., et al (1994), "Antioxidant actions of thymol, carvacrol, 6-gingerol, zingerone and hydroxytyrosol", Food and Chemical Toxicology, 32(1), pp 31-36 Akram M., Uzair M., et al (2011), "Mentha arvensis Linn.: A review article ", Journal of Medicinal Plants Research, 5(18), pp 4499-4503 Balouiri Mounyr, Sadiki Moulay, et al (2016), "Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review", Journal of Pharmaceutical Analysis, 6(2), pp 71-79 Battikh Houda, Bakhrouf Amina, et al (2012), "Antimicrobial effect of Kombucha analogues", LWT - Food Science and Technology, 47, pp 71–77 Chakravorty Somnath, Bhattacharya Semantee, et al (2016), "Kombucha tea fermentation: Microbial and biochemical dynamics", International journal of food microbiology, 220, pp 63-72 Dufresne C., Farnworth E (2000), "Tea, Kombucha, and health: a review", Food Research International, 33(6), pp 409-421 Greenwalt C J., Ledford R A., et al (1998), "Determination and Characterization of the Antimicrobial Activity of the Fermented TeaKombucha", LWT - Food Science and Technology, 31(3), pp 291-296 10 Heatley N G (1944), "A method for the assay of penicillin", Biochemical Journal, 38(1), pp 61-65 11 Heiniö Raija-Liisa, Katina Kati, et al (2003), "Relationship between sensory perception and flavour-active volatile compounds of germinated, sourdough fermented and native rye following the extrusion process", LWT - Food Science and Technology, 36(5), pp 533-545 12 Hocking M.B, Fermentation Processes, in Modern Chemical Technology and Emission Control 1985, Springer: Berlin, Heidelberg pp 338-377 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 13 Hussain Ahtesham, Bose Shambhunath, et al (2015), "Fermentation, a feasible strategy for enhancing bioactivity of herbal medicines", Food Research International, pp 81 14 Katina K., Laitila A., et al (2007), "Bran fermentation as a means to enhance technological properties and bioactivity of rye", Food Microbiology, 24(2), pp 175186 15 Korkina Ludmila G., Afanas'Ev Igor B (1996), "Antioxidant and Chelating Properties of Flavonoids", Advances in Pharmacology, Sies Helmut, Academic Press, 38, pp 151-163 16 Kumar Vikas, Joshi Vinod (2016), "Kombucha: Technology, Microbiology, Production, Composition and Therapeutic Value", International Journal of Food and Fermentation Technology, 6, pp 13-24 17 Kumbalwar Megha M., Ingle A., et al (2014), "Antimicrobial Activity of Mentha Arvensis L (Pudina) Against on Gram Negative Bacteria", Indian journal of applied research, 4, pp 488-489 18 Lee Hyun-Sun, Kim Mi-Ryung, et al (2012), "Fermenting red ginseng enhances its safety and efficacy as a novel skin care anti-aging ingredient: in vitro and animal study", Journal of medicinal food, 15(11), pp 1015-1023 19 Luqman Suaib, Rizvi Syed Ibrahim, et al (2014), "Efficacy of Herbal Drugs in Human Diseases and Disorders", Evidence-based complementary and alternative medicine : eCAM, 2014, pp 273-676 20 Maicas Sergi (2020), "The Role of Yeasts in Fermentation Processes", Microorganisms, 8(8), pp 1142 21 Malik Farnaz, Hussain Shahzad, et al (2003), "Phyto-chemical analysis, antiallergic and anti-inflammatory activity of Mentha arvensis in animals", African journal of pharmacy and pharmacology, ISSN 1996-0816 © 2012 Academic Journals 22 Péter Gábor, Rosa Carlos (2006), Biodiversity and Ecophysiology of Yeasts The Yeast Handbook, Springer, Berlin, Heidelberg 23 Rahman Mahbuba (2013), "Medical Applications of Fermentation Technology", Advanced Materials Research, 810, pp 127-157 24 Reiss Jürgen (1994), "Influence of different sugars on the metabolism of the tea fungus", Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und -Forschung, 198(3), pp 258261 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 25 Shimoi K., Masuda S., et al (1994), "Radioprotective effect of antioxidative flavonoids in gamma-ray irradiated mice", Carcinogenesis, 15(11), pp 2669-2672 26 Sugandhi B Rachel Madhuri, Bai G Meera (2021), "Antimicrobial Activity of Mentha arvensis L (Lamiaceae)", Journal of Advanced Laboratory Research in Biology, 2(1), pp 8-11 27 Thawkar Baban, Jawarkar Amol, et al (2016), "Phytochemical and pharmacological review of Mentha arvensis", 10, pp 71-76 28 Velićanski Aleksandra, Dd Cvetković, et al (2013), "Characteristics of kombucha fermentation on medicinal herbs from Lamiaceae family", Romanian Biotechnological Letters, 18, pp 8034-8042 29 Vidhya N., Devaraj S N (1999), "Antioxidant effect of eugenol in rat intestine", Indian journal of experimental biology, 37(12), pp 1192-1195 30 Villarreal-Soto Silvia Alejandra, Beaufort Sandra, et al (2018), "Understanding Kombucha Tea Fermentation: A Review", Journal of Food Science, 83(3), pp 580588 31 Wu T., Wang N., et al (2013), "Advances in the study on microbial fermentation and transformation of traditional Chinese medicine", African Journal of Microbiology Research, 7, pp 1644-1650 32 Wu Tianxiang, Wang Na, et al (2013), "Advances in the study on microbial fermentation and transformation of traditional Chinese medicine", African Journal of Microbiology Research, 7(17), pp 1644-1650 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC Phụ lục Kết thực nghiệm sơ thay đổi nồng độ saccarose (mm) HC5 TX2 TX5 VC3 TN S20% S10% S5% S2,5% S20% S10% S5% S2,5% S20% S10% S5% S2,5% S20% S10% S5% S2,5% 7 9,5 10,5 7 7 10.5 - 12.5 11 10 10 11 10,5 7 - 11 7 7 9 - 11,5 10 10 11 10 7 - - - 10 11 11,5 11,5 10,5 11 - 10 10 7 7 7 7 16 - 10 11 15 11 - - 7 7 17 - 10 11 16 - 11 10 17 14 - - 7 7 17 10 11,5 11 - 9.5 10 19 13 - - Chú thích: TN: thí nghiệm HC5, TX2, TX5, VC3: chủng nấm men HC5, TX2, TX5, VC3 S20%, S10%, S5%, S2,5%: Nồng độ saccarose 20%, 10%, 5%, 2,5% (-): kết không rõ ràng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục Kết thực nghiệm sơ thay đổi hàm lượng bạc hà (mm) HC5 TN TX2 TX5 VC3 BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH BH 8% 4% 2% 1% 8% 4% 2% 1% 8% 4% 2% 1% 8% 4% 2% 1% 12,5 7 7 7 10 11,5 10,5 13 12 11,5 12 7 7 7 10,5 11 - - 12,5 11 12 7 7 7 11,5 11 9,5 12 11,5 11 11,5 12 10,5 12 8,5 7 - - 7 7 7 7 9,5 9,5 7 9,5 - - 7 7 13 9,5 12 11,5 - 7 13 11,5 10 7 7 Chú thích: TN: thí nghiệm HC5, TX2, TX5, VC3: chủng nấm men HC5, TX2, TX5, VC3 BH8%, BH4%, BH2%, BH1%: Hàm lượng bạc hà 8%, 4%, 2%, 1% (-): kết không rõ ràng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục Kết thực nghiệm sơ thay đổi nồng độ nấm men (mm) HC5 TX2 TX5 VC3 TN N5% N10% N20% N25% N5% N10% N20% N25% N5% N10% N20% N25% N5% N10% N20% N25% 11 11 12 12 9 11 10 12 11,5 - 11 12,5 12 12 10 11 12 12 12 14,5 10,5 - 13 11,5 12 11 11,5 12,5 12 12 12 12 12 12 11 11 11 - 10 10 10,5 11 12 12 12.5 14 7 7 7 7 7 7 - 13,5 12,5 14,5 7 7 7 7 7 7 - 13 10 - Chú thích: TN: thí nghiệm HC5, TX2, TX5, VC3: chủng nấm men HC5, TX2, TX5, VC3 N5%, N10%, N20%, N25%: Nồng độ nấm men 5%, 10%, 20%, 25% (-): kết không rõ ràng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục Kết kiểm định Kruskal-Wallis Kiểm định Kruskal-Wallis thay đổi nồng độ saccarose 1.1 Kiểm định Kruskal-Wallis kích thước vịng vơ khuẩn mẫu bạc hà Á lên men nồng độ saccarose chủng nấm men khác 1.2 Kiểm định Kruskal-Wallis kích thước vịng vơ khuẩn mẫu bạc hà Á lên men nồng độ saccarose khác Kiểm định Kruskal-Wallis thay đổi hàm lượng bạc hà 2.1 Kiểm định Kruskal-Wallis kích thước vịng vô khuẩn mẫu bạc hà Á lên men hàm lượng bạc hà chủng nấm men khác 2.2 Kiểm định Kruskal-Wallis kích thước vịng vơ khuẩn mẫu bạc hà Á lên men hàm lượng bạc hà khác Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn