Khảo sát hàm lượng oxalat trong một số loại rau xanh

TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT HÀM LƢỢNG OXALAT TRONG MỘT SỐ LOẠI RAU XANH Giáo viên hướng dẫn: TS Nguyễn Hoa Du Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Hồng Dung Lớp: 47K - Công nghệ thực phẩm VINH - 12/2010 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đồ án tốt nghiệp này, em nhận giúp đỡ nhiệt tình, động viên khích lệ thầy giáo bạn bè Với lòng biết ơn sâu sắc em xin chân thành cảm ơn Thầy giáo, Tiến sĩ Nguyễn Hoa Du giao đề tài, động viên hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ em q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Nhân dịp này, em xin chân thành cảm ơn thầy giáo khoa Hóa, phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm Định An Tồn Thực Phẩm Mơi Trường - Trường Đại học Vinh giúp đỡ, động viên em q trình làm thí nghiệm viết đồ án Em xin trân trọng cảm ơn Mặc dù, thân có nhiều có cố gắng chắn đồ án khơng tránh khỏi sai sót Kính mong thầy cô giáo bạn bè dẫn Vinh, tháng 12 năm 2010 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hồng Dung MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Lý chọn đề tài Mục đích yêu cầu nghiên cứu 3 Thời gian nghiên cứu địa điểm nghiên cứu Đối tượng, vật liệu nội dung nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan loại thực phẩm có chứa oxalate 1.2 Các loại rau có chứa oxalat 1.2.1 Rau muống 1.2.1.1 Tên khoa học 1.2.1.2 Đặc tính thực vật 1.2.1.3 Miêu tả 1.2.1.4 Phân loại 1.2.1.5 Thành phần dinh dưỡng hóa học 1.2.1.6 Dược tính Rau muống 1.2.1.7 Ẩm thực chế biến 1.2.2 Rau dền 10 1.2.2.1 Đặc tính sinh học 12 1.2.2.2 Phân loại 12 1.2.2.3 Thành phần dinh dưỡng 12 1.2.2.4 Sử dụng 13 1.2.3 Rau bina 15 1.2.3.1 Đặc tính thực vật 16 1.2.3.2 Thành phần dinh dưỡng 16 1.2.3.3 Vài điều cần lưu ý nấu Bina 18 1.2.3.4 Công dụng y học Bina 18 1.3 Axit oxalic muối oxalate: 18 1.3.1 Axit oxalic 18 1.3.1.1 Điều chế axit oxalic 19 1.3.1.2 Phản ứng hoá học 19 1.3.1.3 Tồn tự nhiên 20 1.3.1.4 An toàn 21 1.3.1.5 Sử dụng axit oxalic 21 1.3.2 Oxalat 21 1.3.2.1 Hiệu ứng sinh lý 22 1.3.2.2 Natri oxalate 22 1.3.2.3 Canxi oxalate 23 1.4 Hàm lượng oxalate thực phẩm 24 1.4.1 Chất phản dinh dưỡng 24 1.4.2 Hàm lượng oxalate thực phẩm 25 1.4.2.1 Tinh thể Canxi Oxalat 26 1.4.2.2 Sinh tổng hợp axit oxalic thực vật 27 1.4.2.3 Sự tham gia oxalat trao đổi chất động vật 30 1.4.2.4 Sự tham gia oxalat trao đổi chất thực vật 31 1.4.2.5 Sự tham gia oxalat trao đổi chất nấm 32 1.4.2.6 Sự phân bố oxalate loài thực vật 32 1.4.2.7 Hàm lượng oxalate cám 34 1.4.2.8 Tác dụng độc axit oxalic oxalate 35 1.4.2.9 Oxalat ảnh hưởng đến khả dinh dưỡng khoáng chất 36 1.4.2.10 Oxalat ảnh hưởng đến trình chế biến 38 1.5 Sỏi thận 42 1.5.1 Cấu tạo sỏi thận 42 1.5.2 Sự hình thành sỏi 42 1.5.2.1 Nguyên nhân yếu tố nguy gây bệnh 42 1.5.2.2 Những yếu tố hóa học 43 1.5.2.3 Những yếu tố bệnh lý khác 43 1.6 Các phương pháp phân tích oxalate 44 1.6.1 Xác định hàm lượng oxalat rau xanh phương pháp sắc kí lỏng cao áp (HPLC) [9,15] 45 1.6.1.1 Nguyên tắc phương pháp 45 1.6.1.2 Chuẩn bị mẫu 45 1.6.1.3 Chiết oxalat hòa tan tổng số 45 1.6.1.4 Phân tích mẫu 45 1.6.2 Phương pháp sắc ký ion (Ion Chromatographic) 45 CHƢƠNG II: THỰC NGHIỆM 47 2.1 Xác định hàm lượng Oxalat rau muống, rau dền xanh, rau dền đỏ phương pháp chuẩn độ KMnO4 47 2.1.1 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 47 2.1.1.1 Hóa chất 47 2.1.1.2 Dụng cụ thiết bị 47 2.1.1.3 Phương pháp pha chế dung dịch 48 2.1.2 Đặc điểm chung phương pháp chuẩn độ pemanganat 50 2.1.2.1 Đặc điểm chung phương pháp 50 2.1.2.2 Xác định axit oxalic pemanganat 51 2.1.2.3 Nguyên tắc phương pháp 51 2.1.2.4 Điều kiện tối ưu để xác định axit oxalic 52 2.1.3 Kỹ thuật thực nghiệm 52 2.1.3.1 Tiến hành xác định độ chuẩn dung dịch KMnO4 52 2.1.3.2 Quy trình chuẩn bị mẫu phân tích mẫu 53 2.1.3.3 Phương pháp xử lý kết 54 2.1.3.4 Kết phân tích 55 2.1.4 Xác định hàm lượng chất khô thực vật 65 2.1.4.1 Nguyên lý 65 2.1.4.2 Dụng cụ 65 2.1.4.3 Thủ tục tiến hành 65 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 2.1.4.4 Tính kết 65 2.1.4.5 Kết phân tích 66 2.2 Xác định hàm lượng oxalat rau muống phương pháp sắc ký ion 66 2.2.1 Hoá chất dụng cụ 66 2.2.1.1 Hóa chất 66 2.2.1.2 Dụng cụ thiết bị máy móc 67 2.2.2 Lựa chọn chế độ đo 67 2.2.3 Quy trình tiến hành 67 2.2.4 Tiến hành phân tích 68 2.2.4.1 Xây dựng đường chuẩn 68 2.2.4.2 Kết phân tích mẫu 72 2.3 Nhận xét chung 74 CHƢƠNG III: KẾT LUẬN 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 76 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Lý chọn đề tài Rau xanh thực phẩm thiếu bữa ăn hàng ngày người, rau cung cấp nhiều loại vitamin bổ sung số nguyên tố khoáng chất cần thiết cho thể Từ xa xưa có câu “Cơm khơng rau đau khơng thuốc” ngày mơ hình “Cơm - rau - cá” vào nề nếp, truyền thống văn hóa gia đình người Việt Nam Các loại rau ngồi chất dinh dưỡng đem lại cho người vị thuốc hay chữa nhiều bệnh mà biết đến Rau dền đỏ tốt cho mắt có nhiều vitamin A Y học cổ truyền phương đơng cịn sử dụng rau dền để làm thuốc có tác dụng nhiệt, lợi tiểu, sát trùng, trị độc… Dền cơm dùng thuốc chữa táo bón, nhức đầu chóng mặt Dền gai vị thuốc chữa trị rết cắn, ong đốt, mụn nhọt, lị… Ở Mexico, dền hạt trị bệnh nhuận tràng sử dụng chất kết dính cơng nghiệp dược Rau muống ngồi việc dùng làm thực phẩm, cịn xem vị thuốc nhiều quốc gia vùng Đông Nam Á Ấn Độ Tại Trung Hoa, rau muống xem khí êm, vị tính mát giải chất độc ngộ độc thuốc ngộ độc thức ăn Rau có tác dụng nhuận trường Tại Indonesia, rau muống vị thuốc an thần, trị ngủ, nhức đầu Loại rau muống tím dùng để trị tiểu đường Tại Kampuchia, rau muống dùng trị nóng sốt gây mê sảng, đọt non trị nấm lác Tại Ấn Độ, dùng làm thuốc sổ, giải độc… Tuy nhiên, số loại rau có hàm lượng oxalate cao Đây chất phản dinh dưỡng, ngăn cản hấp thu khống chất thể, làm tác dụng dinh dưỡng chất khoáng Nếu dùng nhiều thường xuyên loại thực phẩm giàu oxalate có nguy mắc bệnh sỏi thận, gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe Một thực tế đáng buồn ngày nhiều người mắc bệnh sỏi thận, sỏi tiết niệu, sỏi bàng quang… Căn bệnh có liên quan đến hàm lượng oxalate có rau Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an xanh ta ăn vào Sỏi thận hình thành lắng đọng chất thận Khi chất thải nước tiểu khơng hịa tan hồn tồn dẫn đến hình thành tinh thể Người dân sử dụng loại thực phẩm mà nguồn gốc gây độc nguy hiểm Hiện bệnh sỏi thận bệnh phổ biến, gây nhiều tác hại xấu đến sức khỏe người Nghiên cứu hàm lượng oxalate rau xanh cịn người quan tâm đến Do đó, em chọn đề tài “Khảo sát hàm lượng oxalate số loại rau xanh” để làm đề tài tốt nghiệp Mục đích yêu cầu nghiên cứu - Khảo sát hàm lượng Oxalate phận rau (rau muống, rau dền xanh, rau dền đỏ) gồm có: phần ngọn, phần thân phần gốc - Khảo sát hàm lượng Oxalate q trình chế biến để từ lựa chọn phương pháp chế biến cho giảm thiểu đến mức tối đa hàm lượng oxalate có rau đảm bảo an toàn thực phẩm người tiêu dùng Thời gian nghiên cứu địa điểm nghiên cứu - Thời gian: Đề tài tiến hành từ tháng đến hết tháng 11 năm 2010 - Địa điểm nghiên cứu: Đề tài thực Trung Tâm Kiểm Định An Tồn Thực Phẩm Mơi Trường - Trường Đại Học Vinh Đối tƣợng, vật liệu nội dung nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: ba loại rau dùng phổ biến nhân dân: rau muống, rau dền xanh, rau đền đỏ thu mua chợ vùng lân cận tỉnh - Vật liệu: rau xanh số hoá chất dùng nghiên cứu Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu khả định lượng oxalate phương pháp chuẩn độ với KMnO4 phương pháp sắc ký ion (IC) - Xác định hàm lượng oxalate phần rau (phần gốc, phần thân giữa, phần ngọn) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an - Nghiên cứu khác hàm lượng oxalate trước sau nấu thực phẩm từ đưa phương pháp chế biến phù hợp an toàn cho người tiêu dùng Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Kết nghiên cứu góp phần cho cơng trình nghiên cứu sâu hợp chất oxalate rau xanh loại thực phẩm khác để từ tìm phương pháp tối ưu để giảm thiểu hàm lượng chất đến mức thấp Từ đó, góp phần làm giảm bệnh sỏi thận, sỏi bàng quang nhân dân, sản xuất nguồn thực phẩm an toàn, biết cách tự bảo vệ sức khỏe cho người thân Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan loại thực phẩm có chứa oxalate Hàng ngày sống, ăn, uống không để ý không nhận thực phẩm giàu oxalate Điều xấu thực phẩm mà ăn vào trở thành lí gây rối loạn chức thể Nếu tiêu thụ loại thực phẩm giàu oxalate gây rối loạn đường tiết niệu - bệnh thường gặp sỏi thận Chúng ta hồn tồn tránh loại thực phẩm chứa hàm lượng oxalate cao để ngăn ngừa phòng bệnh thận Oxalat tìm thấy hầu hết loại thực phẩm có hàm lượng khác Theo nhà khoa học khuyến cáo nên hạn chế ăn, uống thực phẩm chứa oxalate giới hạn từ 40 - 50 mg/ngày để đảm bảo sức khỏe phòng tránh bệnh liên quan Sau loại thực phẩm có chứa oxalate: + Đồ uống: bia, sữa sô cô la, sữa đậu nành, nước quýt, nước ép loại mọng, cocktail trái cây, nước ca cao, trà, cà phê… + Trái cây: đại hồng có chứa hàm lượng oxalate cao nhất, loại chua chanh, quýt, nho tím, dau tây, nam việt quất… + Các loại rau: loại rau có hàm lượng oxalate cao bao gồm: rau bina, rau sam, rau dền, rau muống, cần tây, cà tím, củ cải đường, hẹ, đậu bắp, rau mùi tây, chua me, bí đỏ,… + Ngũ cốc: bánh mì ngun chất, bỏng ngơ, cám lúa mì, bột yến mạch, bột bắp trắng, bánh quy, đậu tương, kiều mạch… + Các loại đậu, lạc, vừng, hạt giống: Thực phẩm đậu xanh, đậu phộng, đậu phộng rang, bơ đậu phộng, hạt mè, hạt hướng dương, hạt hạnh nhân, hạt điều… có chứa hàm lượng cao oxalate + Các loại gia vị như: Nên hạn chế sử dụng gia vị hạt tiêu đen, quế, gừng, tỏi tây… + Tinh bột: loại bánh trái cây, khoai lang có chứa oxalate 1.2 Các loại rau có chứa oxalat Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 63 700 600 500 400 300 200 100 Rau muống Rau dền đỏ Rau dền xanh Hình 2.14 So sánh hàm lượng oxalate phần mẫu rau mua chợ Bến Thủy 700 600 500 400 300 200 100 Rau muống Rau dền đỏ Rau dền xanh Hình 2.15 So sánh hàm lượng oxalate phần mẫu rau lấy Nam Đàn Nhận xét: Có khác ba loại rau rau dèn xanh có hàm lượng thấp rau muống rau dền đỏ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 64 600 500 400 300 200 100 Rau muống Rau dền đỏ Rau dền xanh Hình 2.16 So sánh hàm lượng oxalate mẫu rau chợ Bến Thủy 600 500 400 300 200 100 Rau muống Rau dền đỏ Rau dền xanh Hình 2.17 So sánh hàm lượng oxalate mẫu rau Nam Đàn Nhận xét: Trong rau dền đỏ có hàm lượng oxalate nhiều thấp rau dền xanh Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 65 2.1.4 Xác định hàm lượng chất khô thực vật [3] 2.1.4.1 Nguyên lý Hàm lượng chất khô xác định chênh lệch khối lượng mẫu thực vật tươi trước sấy sau sấy 1050C 2.1.4.2 Dụng cụ - Hộp nhôm - Tủ sấy - Cân phân tích (độ xác 0.0002g) 2.1.4.3 Thủ tục tiến hành - Mẫu thực vật sau rửa sạch, thái nhỏ, trộn để lấy mẫu (nếu có nhiều phận, theo yêu cầu nghiên cứu, cần xác định mẫu rieng rẽ hay liên hợp) - Cân xác 20-30g vào hộp nhơm biết khối lượng từ trước - Đặt mẫu với hộp nhôm vào tủ sấy Tăng dần nhiệt độ lên đến 105 0C, trì nhiệt độ từ 4-6g (đến khối lượng không đổi) - Lấy hộp nhôm cho vào bình hút ẩm, làm nguội - Cân khối lượng mẫu sau sấy 2.1.4.4 Tính kết X% = (B - C / A - C) * 100 Trong đó: X%: phần trăm khối lượng chất khơ mẫu tươi A: Khối lượng mẫu tươi khối lượng hộp nhôm (g) B: Khối lượng mẫu khối lượng hộp nhôm sau sấy (g) C: Khối lượng hộp nhơm (g) Cũng phân tích ta tính hàm lượng nước Y%= (A - B/ A - C)*100 Trong đó: Y%: Phần trăm khối lượng nước mẫu tươi A: Khối lượng hộp nhôm mẫu trước sấy (g) B: Khối lượng hộp nhôm mẫu sau sấy (g) C: Khối lượng hộp nhôm (g) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 66 2.1.4.5 Kết phân tích Bảng 2.3 Hàm lƣợng chất khơ hàm lƣợng nƣớc mẫu Mẫu rau Khối lượng mẫu hộp nhôm trước sấy (g) Khối lượng mẫu hộp nhôm sau sấy (g) Khối lượng hộp nhôm (g) % hàm lượng chất khô mẫu % hàm lượng nước mẫu Rau muống Phần gốc 70,2892 59,3642 56,8272 18,85 81,15 Phần thân 66,1246 53,7903 51,081 18,00 82,00 Phần 131,5282 118,5216 116,4597 13,62 86,32 Rau dền Phần gốc 32,7162 18,4582 14,326 22,47 77,53 Phần thân 132,7653 119,5083 115,9393 21,21 78,79 Phần 129,2098 116,1948 114,4597 13,41 88,24 2.2 Xác định hàm lƣợng oxalat rau muống phƣơng pháp sắc ký ion [6] 2.2.1 Hoá chất dụng cụ 2.2.1.1 Hóa chất - Dung dịch HCl 0,1 M - Nước cất lần - Dung dịch NaHCO3 1M - Dung dịch Na2CO3 1,5M - Dung dịch H2SO4 2,5M Các hóa chất sử dụng q trình phân tích tinh khiết phân tích, sử dụng nước cất không chứa nitrat Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 67 2.2.1.2 Dụng cụ thiết bị máy móc - Ống đong - Cốc chịu nhiệt 500ml - Máy nghiền thực phẩm - Màng lọc 0,45 µm cellulose acetate - Cân phân tích - Máy sắc ký ion: PROFESSIONAL IC 850 Hãng sản xuất: METROHM / THỤY SĨ 2.2.2 Lựa chọn chế độ đo Trước thực phép đo máy sắc ký ion PROFESSIONAL IC 850 phải lựa chọn chế độ đo: - Tên cột: METROSEP ANION DUAL (6.1006.100) - Kích thước cột: 4,6 × 7,5 mm - Cột bảo vệ: HPIC-AG4A - Cột tách: HPIC-AS4A - Thiết bị giảm xóc: AMMS - Pha động (dung mơi): hỗn hợp 1mM NaHCO3 15mM Na2CO3 - Tốc độ dịng: cm3/phút - Thể tích bơm mẫu: 20µl 2.2.3 Quy trình tiến hành Nguyên tắc xử lý mẫu: tách oxalate hịa tan khơng hịa tan rau cách ngâm dung dịch HCl 0,1M sau làm giàu sắc ký ion - Rau muống chọn to, dài khỏe tươi xanh không bị sau bệnh - Mẫu rau sau thu nhận bảo quản tủ lạnh Rau rửa nước, sau dó rửa lại nước cất Rau cắt nhỏ xay nhuyễn máy nghiền thực phẩm, trộn Giới hạn phát phương pháp LD: 8,9 ppb - Chiết axit oxalic hòa tan: Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 68 Cân 7,55g mẫu nghiền nhỏ, cho vào túi lưới nhỏ, chuyển tất vào cốc chịu nhiệt 500ml Thêm 250ml nước 800C vào cốc, sau 120 phút lấy mẫu ra, lọc bỏ bã, làm nguội dịch chiết Cân 7,68g mẫu nghiền nhỏ, cho vào túi lưới thêm 250ml nước cất đun sôi đến 800C, ngâm mẫu sau lấy mẫu ra, lọc bã, làm nguội dịch chiết - Các dịch chiết thu đem ly tâm tốc độ 3000 vòng/phút - Lấy khoảng 20ml dịch gạn sau ly tâm đem lọc qua màng lọc cellulose acetate 0,45µm - Bơm 20µl mẫu phân tích vào vào hệ thống máy sắc ký ion với cột trao đổi anion 2.2.4 Tiến hành phân tích 2.2.4.1 Xây dựng đường chuẩn - Từ dung dịch chuẩn gốc ta tiến hành pha thành dung dịch chuẩn nồng độ 1, 2, 4, 6, 10 ppm Tiến hành phân tích máy sắc kí ion(IC) dung dịch thu kết hình 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6 Các mẫu cho pic thời gian lưu tR (36,753 phút) Ngoài không quan sát thấy pic chứng tỏ mẫu chuẩn tinh khiết với pic đặc trưng tR = 36,753 phút Sử dụng phương pháp bình phương tối thiểu xây dựng quan hệ tuyến tính nồng độ axit oxalic diện tích pic (hình 2.7) Kết thu phương trính hồi quy hệ số tương quan sau: Y = 0,0601758X – 0,0142538, R2 = 99,9958% Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 69 Hình 2.18 Sắc ký đồ IC dung dịch chuẩn axit oxalic ppm Hình 2.19 Sắc ký đồ IC dung dịch chuẩn axit oxalic ppm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 70 Hình 2.20 Sắc ký đồ IC dung dịch chuẩn axit oxalic ppm Hình 2.21 Sắc ký đồ IC dung dịch chuẩn axit oxalic ppm Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 71 Hình 2.22 Sắc ký đồ IC dung dịch chuẩn axit oxalic 10 ppm Hình 2.23 Sắc ký đồ IC mẫu trắng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 72 Hình 2.24 Kết phân tích hồi quy tuyến tính phụ thuộc nồng độ axit oxalic vào diện tích pic 2.2.4.2 Kết phân tích mẫu Hình 2.8, 2.9 cho biết kết phân tích mẫu thực Trong pic thời gian lưu tR = 36,753 phút chất phân tích axit oxalic rau muống Hàm lượng axit oxalic mẫu rau muống 86,4 mg/kg (ppm) Từ kết phân tích cho ta thấy hàm lượng oxalate hịa tan rau muống với kết nghiên cứu nhà khoa học oxalate rau muống chủ yếu dạng khơng hịa tan [15] Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 73 Hình 2.25 Sắc ký đồ IC dung dịch mẫu rau muống Hình 2.26 Sắc ký đồ IC dung dịch mẫu rau muống Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 74 2.3 Nhận xét chung Sau trình thực hiện, em nhận thấy rằng: Cả hai phương pháp chuẩn độ nóng với pemanganat phương pháp sắc ký ion dùng để xác định hàm lượng oxalate rau Nhưng phương pháp sắc ký ion có ưu điểm phân tích mẫu trực tiếp nên có độ xác cao so với phương pháp chuẩn độ Vì thời gian có hạn nên em bước đầu xác định hàm lượng oxalate rau muống phương pháp sắc ký ion Để kết luận cách xác hàm lượng oxalate rau muống rau dền cần phải lấy mẫu phân tích nhiều nơi làm nhiều mẫu khác Vì cần phải nghiên cứu kỹ dùng phương pháp đại sắc ký ion Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 75 CHƢƠNG III: KẾT LUẬN Trong đồ án tốt nghiệp này, nghiên cứu cụ thể phương pháp định lượng oxalate rau muống thu kết sau: 1- Đã tổng quan số vấn đề liên quan đến: tính chất, phân bố, q trình sinh tổng hợp oxalate loài thực vật, động vật thể người độc tính người động vật ăn phải 2- Hàm lượng oxalate phân bố khơng lồi thực vật, thay đổi theo tuổi cây, theo mùa, khí hậu, loại đất trồng thời điểm thu hoạch rau 3- Phân tích hàm lượng oxalate ba loại rau: rau muống, rau dền đỏ, rau đền xanh phương pháp chuẩn độ pemanganat, thu kết sau: - Hàm lượng axit oxalic trung bình rau dền đỏ: 548,543 mg/100g - Hàm lượng axit oxalic trung bình rau dền xanh: 331,583 mg/100g - Hàm lượng axit oxalic trung bình rau muống: 520,805 mg/100g 4- Hàm lượng axit oxalic rau muống phương pháp sắc ký ion 84,48 mg/kg 5- Cùng khảo sát mẫu rau lấy hai địa điểm khác cho thấy hàm lượng oxalate giảm dần từ phần đến phần thân thấp phần gốc Phần gốc giảm dần từ rau muống đến rau dền đỏ rau dền xanh 6- So sánh hàm lượng ba phần rau dền đỏ có hàm lượng cao nhất, thấp rau dền xanh 7- Tỷ lệ oxalate hòa tan rau muống thấp 8- Hàm lượng oxalate rau muống, rau dền xanh, rau dền đỏ thu qua trình làm thực nghiệm hàm lượng oxalate qua tài liệu em nghiên cứu có khác vị trí địa lý khác nhau, thời gian thu hoạch rau khác nhau, khác giống rau phương pháp thực nghiệm khác nên kết có chênh lệnh Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Lê Ngọc Tú (chủ biên), (2006) Độc tố học an toàn thực phẩm Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật [2] Đinh Thị Thu Hương, (2005), Xác định hàm lượng canxi, magie, sắt số đối tượng thực phẩm Khóa luận tốt nghiệp đại học Trường Đại học Vinh [3] Viện Thổ nhưỡng nơng hóa, (1993), Sổ tay phân tích đất, nước, phân bón, trồng Nhà xuất nông nghiệp [4] P.P.Koroxtelev, (1974) Chuẩn bị dung dịch cho phân tích hóa học Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật [5] Trần Tứ Hiếu, (2004) Hóa học phân tích Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội [6] Yuuko Ishii, (1991) Extraction and Ion chromatographic Determination of Free and Combined Oxalic acids in Vegetables Analytical sciences Vol.7 263-266 [7] Mahmut CALISKAN, (2000) The Metabolism of Oxalic acid Turk j zool 24 103-106 [8] Vincent R Franceschi and Paul A Nakata, (2005) Calcium oxalate in plants: Formation and Function Annual Review of Plant Biology Vol 56 41-71 [9] G P Savage, L Vanhanen, S M Mason and A.B Ross, (2000) Effect of Cooking on the Soluble and Insoluble Oxalate Content of Some New Zealand Foods Journal of food composition and analysis 13 201-206 [10] S A Adeniyi, C L Orjiekwe and J E Ehiagbonare, (2009) Determination of alkaloids and oxalates in some selected food samples in Nigeria African Journal of Biotechnology, vol 110-115 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn