Xây dựng phương pháp phân tích dư lượng thuốc trừ sâu endosulfan trong rau quả

1 TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HOÁ HỌC -o0o - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DƢ LƢỢNG THUỐC TRỪ SÂU ENDOSULFAN TRONG RAU QUẢ GVHD: T.S Nguyễn Hoa Du SVTH: Lƣu Trƣờng Giang Lớp: 47K - Công nghệ thực phẩm Vinh, tháng 12/2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Lƣu Trƣờng Giang Khóa: 47 Ngành: Công nghệ thực phẩm Số hiệu sinh viên: 0652042358 Tên đề tài: XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DƢ LƢỢNG THUỐC TRỪ SÂU ENDOSULFAN TRONG RAU QUẢ Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: Họ tên cán hƣớng dẫn: T.S Nguyễn Hoa Du Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 2010 Ngày hoàn thành đồ án : Ngày tháng năm 2010 Ngày Chủ nhiệm môn (Ký, ghi rõ họ, tên) tháng năm 2010 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án tốt nghiệp ngày tháng Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) năm BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Lƣu Trƣờng Giang Khóa: 47 Cán hƣớng dẫn: T.S Nguyễn Hoa Du Cán duyệt: T.S Nguyễn Xuân Dũng Số hiệu sinh viên: 0652042358 Ngành: Công nghệ thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………… Nhận xét cán hƣớng dẫn: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2010 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Lƣu Trƣờng Giang Khóa: 47 Cán hƣớng dẫn: T.S Nguyễn Hoa Du Cán duyệt: T.S Nguyễn Xuân Dũng Số hiệu sinh viên: 0652042358 Ngành: Công nghệ thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………… Nhận xét cán duyệt: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2010 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an LỜI CẢM ƠN Xin chân thành cảm tạ T.S Nguyễn Hoa Du T.S Trần Đình Thắng giảng viên khoa Hóa học -Trƣờng Đại Học Vinh tận tình hƣớng dẫn truyền đạt kinh nghiệm quí báu để giúp em hồn thành tốt luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn quý Thầy Cô Trƣờng Đại Học Vinh năm qua truyền đạt kiến thức quí báu để em bƣớc vào đời cách tự tin để làm việc phấn đấu đƣợc tốt sau Chân thành cảm ơn cán phòng thí nghiệm Bộ Mơn Cơng Nghệ Thực Phẩm Trung tâm Kiểm định Chất lƣợng Vệ sinh An toàn Thực phẩm Môi trƣờng Trƣờng Đại Học Vinh Cảm ơn bạn sinh viên lớp 47K- Công Nghệ Thực Phẩm giúp đỡ suốt thời gian qua TP.Vinh, ngày tháng năm 2010 Sinh viên Lưu Trường Giang Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an TÓM TẮT Với mục tiêu tìm hiểu tổng quan HCBVTV sâu nghiên cứu thuốc trừ sâu endosulfan Đây hoạt chất độc hại, có khả gây ảnh hƣởng xấu đến sức khỏe ngƣời Tiến hành thí nghiệm đối tƣợng rau, củ, sản phẩm thiết yếu đời sống hàng ngày Sử dụng phƣơng pháp chiết mẫu dung môi etylacetat chúng tơi thí nghiệm đối tƣợng là: Cà chua, mƣớp đắng, rau cải, bắp cải, đậu cô ve rau ngót Sau chuẩn bị mẫu xong đem phân tích máy sắc ký GC/µECD chúng tơi thu đƣợc kết nhƣ sau: - Đã phát đƣợc nhiều loại thuốc trừ sâu gốc clo với hàm lƣợng khác - Hàm lƣợng thuốc trừ sâu endosulfan II mẫu lần lƣợt là:  Mẫu mƣớp đắng: 0,017 mg/kg  Mẫu đậu côve: 0,038 mg/kg  Mẫu dƣa chuột: 0,015 mg/kg  Mẫu cà chua: 0,023 mg/kg  Mẫu bắp cải: 0,034 mg/kg  Mẫu rau ngót: 0,023 mg/kg  Mẫu cải ngọt: 0,042 mg/kg Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỤC LỤC Trang bìa Nhiệm vụ đồ án Lời cảm ơn Tóm tắt Mục lục Danh sách hình vẽ Danh sách bảng biểu Danh sách từ viết tắt MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề 12 Mục đích đề tài 12 Nội dung khóa luận 12 Phƣơng pháp nghiên cứu 13 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU 14 1.1 Giới thiệu chung thuốc bảo vệ thực vật 14 1.1.1 Khái niệm thuốc bảo vệ thực vật 14 1.2 Phân loại thuốc bảo vệ thực vật 14 1.2.1 Phân loại theo nhóm chất hóa học 14 1.2.2 Phân loại theo nguồn gốc 15 1.2.3 Phân loại theo đƣờng xâm nhập 15 1.2.4 Phân loại theo tính độc thuốc 15 1.3 Tổng quát hoạt chất endosulfan 16 1.3.1 Khái niệm endosulfan 16 1.3.2 Các dấu mốc quan trọng lịch sử endosunfan 18 1.3.3 Cơ sở hóa học endosunfan 19 1.3.4 Các ảnh hƣởng endosulfan 19 1.3.5 Endosulfan vấn đề môi trƣờng 22 1.3.6 Tình hình gây ngộ độc endosunfan giới Việt Nam 24 1.3.7 Các triệu chứng bệnh gây endosunfan 25 1.3.8 Các phƣơng pháp đề phòng trị bệnh endosulfan gây 25 1.3.9 Một số đề xuất vấn đề phòng tránh 26 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 1.4 Kiểm soát dƣ lƣợng thuốc bảo vệ thực vật 26 1.4.1 Quy trình sản xuất rau an tồn GAP 26 1.4.2 Quản lý nhà nƣớc rau an toàn 28 1.4.3 Quản lí dịch hại tổng hợp IPM 28 1.5 Các phƣơng pháp phân tích thuốc trừ sâu 31 1.5.1 Phƣơng pháp chiết mẫu với dung môi acetonitrile 31 1.5.2 Phƣơng pháp chiết mẫu với dung môi etyl acetate 32 1.5.3 Các phƣơng pháp phân tích nhanh 34 1.6 Đối tƣợng phân tích 37 1.6.1 Dƣa chuột 38 1.6.2 Cà chua 38 1.6.3 Bắp cải(Brassica capitata) 38 1.6.4 Mƣớp đắng 39 1.6.5 Đậu côve 39 1.6.6 Rau ngót 40 CHƢƠNG : THỰC NGHIỆM 41 2.1 Cách tiến hành 41 2.1.1 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 41 2.1.2 Quy trình phân tích 41 2.2 Kết phân tích 44 2.2.1 Thời gian lƣu endosulfan II 44 2.2.2 Khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn endosulfan II 45 2.2.3 Đánh giá phƣơng pháp 46 2.2.4 Xác định hàm lƣợng endosulfan II mẫu rau thị trƣờng thành phố Vinh 47 2.2.5 Sắc đồ mẫu thực 49 CHƢƠNG : KẾT LUẬN 56 3.1 Kết luận 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH SÁCH BẢNG Bảng 1.1 Phân loại độc tính thuốc BVTV tổ chức Y tế giới tổ chức Nông Lƣơng giới… Bảng 1.2 Hợp chất endosulfan……………………………………………… Bảng 1.3 Hàm lƣợng endosulfan số sản phẩm………………… Bảng 1.4 Giới hạn cho phép endosulfan theo FAO WHO ………… 20 Bảng 2.1 Pha dãy nồng độ chuẩn làm việc………………………………… 31 Bảng 2.2 Thời gian lƣu endosulfan II…………………………………… 33 Bảng 2.3 Kết xây dựng đƣờng chuẩn endosulfan II…………………… 34 Bảng 2.4 Giá trị LOD LOQ thiết bị………………………………… 35 Bảng 2.5 Kết xác định độ lặp lại độ thu hồi (Re) phƣơng pháp… 35 Bảng 2.6 LOD LOQ phƣơng pháp xác định endosulfan II rau quả…………………………………………………………………………… 36 Bảng 2.7 Kết hàm lƣợng endosulfan II mẫu rau củ, ppm…… 37 Bảng 2.8 Giới hạn tối đa dƣ lƣợng thuốc bảo vệ thực vật thực phẩm 37 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 10 DANH SÁCH HÌNH Hình 1.1 Sơ đồ chuyển hóa endosulfan mơi trường………………… 11 Hình 1.2 Đường chuẩn endosulfan xây dựng giấy logarith…………… 25 Hình 1.3 Bộ dụng cụ thuốc thử…………………………………………… 26 Hình 1.4 Mẫu dưa chuột…………………………………………………… 27 Hình 1.5 Mẫu cà chua 27 Hình 1.6 Mẫu bắp cải 28 Hình 1.7 Mẫu mướp đắng 28 Hình 1.8 Mẫu đậu cơve 29 Hình 1.9 Mẫu rau ngót 29 Hình 2.1 Hình ảnh trình chuẩn bị mẫu 32 Hình 2.2 Sắc đồ dung dịch chuẩn endosulfan II 200ppb 33 Hình 2.3 Đường chuẩn endosulfan II 34 Hình 2.4 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu rau ngót………………… 38 Hình 2.5 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu dưa chuột……………… 39 Hình 2.6 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu mướp đắng 40 Hình 2.7 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu bắp cải………………… 41 Hình 2.8 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu đậu cơve………………… 42 Hình 2.9 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu cà chua………………… 43 Hình 2.10 Sắc đồ chạy máy GC/ECD cải ngọt……………………… 44 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 44 2.1.2.3 Chƣơng trình chạy hệ thống sắc ký * Máy sắc ký GC/ µ ECD - Cột : HP 5MS , 30m, đƣờng kính 0,25mm, lớp phim 0,25 µm - Nhiệt độ lò : 100C/phút 2800C (25 phút) 100 C - Kiểu bơm mẫu : khơng chia dịng - Thể tích tiêm mẫu : 1µl - Nhiệt độ inlet : 2800C - Nhiệt độ detertor : 3000C - Tốc độ dòng khí mang : 1ml/phút N2 2.2 Kết phân tích 2.2.1 Thời gian lƣu endosulfan II Tiến hành thí nghiệm hệ thống GC/µECD dung dịch chuẩn chứa hoạt chất endosulfan II với nồng độ 10ppb ;50ppb ;100ppb ;200ppb ;300ppb Kết đƣợc trình bày bảng sau : Bảng 2.2 Thời gian lƣu endosulfan II Chất chuẩn Endosulfan II Thời gian lƣu Độ lệch (phút) chuẩn(phút) 16,280 ± 0.002 0,0036 Độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD(%) (n=5) 0,02 Hình 2.2 Sắc đồ dung dịch chuẩn endosulfan II 200ppb Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 45 2.2.2 Khoảng tuyến tính đƣờng chuẩn endosulfan II Khoảng tuyến tính detertor đƣợc khảo sát qua dung dịch chuẩn endosulfan có nồng độ 10ppb ;50ppb ;100ppb ;200ppb ;300ppb Kết cho thấy detertor cho kết tuyến tính tốt thuốc trừ sâu endosulfan II khoảng nồng độ khảo sát từ 10-300ppb Trong khoảng này, đƣờng chuẩn xác định endosulfan II có hệ số tƣơng quan R = 0,9993 Bảng 2.3 Kết xây dựng đƣờng chuẩn endosulfan II Phƣơng trình đƣờng Đƣờng chuẩn STT chuẩn Diện tích(S) Nồng độ Hệ số µg/l Lần Lần Lần 10 2529,1 2478,6 2579,6 50 10186,2 9983,7 10388,7 100 22894,1 22837,1 22951,1 200 43807,1 43778,6 43835,6 300 65181,6 64673,2 65690 a b R2 217,25 242,78 0,9993 y = 217.25x + 242.78 R2 = 0.9993 70000 Diện tích pic 60000 50000 40000 30000 20000 10000 0 100 200 300 Nồng độ chuẩn ppb 400 Hình 2.3 Đường chuẩn endosulfan II Đƣờng chuẩn y = 217,25x + 242,78 Trong : R2 = 0,9993 y diện tích pic chuẩn nồng độ khác X nồng độ dãy dung dịch chuẩn(ppb) R hệ số hồi quy * Thiết bị cho độ lặp lại tốt (RSD tín hiệu diện tích pic xây dựng đƣờng chuẩn 0,89) Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 46 * Kết tính tốn giới hạn phát hiện(LOD) giới hạn định lƣợng(LOQ) thiết bị theo „‟quy tắc 3δ „‟ đƣợc trình bày bảng sau: Bảng 2.4 Giá trị LOD LOQ thiết bị Giá trị Endosulfan II LOD (ppb) 1,45 LOQ (ppb) 4,85 2.2.3 Đánh giá phƣơng pháp 2.2.3.1 Độ lặp lại độ thu hồi phƣơng pháp[11] Tiến hành phân tích mẫu mƣớp đắng, đậu cơve, cải theo quy trình với nồng độ thêm chuẩn endosulfan II nhƣ sau : - Mƣớp đắng nồng độ endosulfan II 0,027 ppm - Đậu côve nồng độ endosulfan II 0,048 ppm - Cải nồng độ endosulfan II 0,052 ppm Độ lặp lại phƣơng pháp đƣợc đánh giá qua độ lệch chuẩn tƣơng đối(RSD) Kết phân tích lần lặp lại độ lặp lại phƣơng pháp đƣợc trình bày bảng 2.5 Bảng 2.5 Kết xác định độ lặp lại độ thu hồi (Re) phƣơng pháp Mẫu thực Hàm lƣợng Hàm lƣợng endo xác định RSD endo thêm đƣợc, ppm (%) Re (%) chuẩn, ppm Lần Lần Lần TB n =3 Mƣớp đắng 0,027 0,024 0,026 0,026 0,025 4,89 92,6 Đậu côve 0,048 0,041 0,047 0,047 0,045 7,69 93,7 Cải 0,052 0,049 0,051 0,049 0,049 2,88 95,5 Kết cho thấy phƣơng pháp cho độ tốt với độ thu hồi đạt từ 92,6-95,5% 2.2.3.2 LOD LOQ phƣơng pháp[11] Để xác định LOD LOQ phƣơng pháp, tiến hành phân tích lần lặp lại mẫu rau đƣợc thêm chuẩn 10ppb ;50ppb ;100ppb ;200ppb ;300ppb Ở tơi tiến hành phân tích mẫu đậu côve đƣợc thêm lần lƣợt chuẩn trên.Giá trị LOD LOQ đƣợc tính theo „‟quy tắc 3δ‟‟ Kết tính tốn LOD LOQ phƣơng pháp đƣợc trình bày bảng 2.6 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 47 Bảng 2.6 LOD LOQ phƣơng pháp xác định endosulfan II rau Giá trị Dƣ lƣợng endosulfan II LOD(ppb) 1,47 LOQ(ppb) 4,9 2.2.4 Xác định hàm lƣợng endosulfan II mẫu rau thị trƣờng thành phố Vinh Quy trình phân tích đƣợc áp dụng để định tính(dựa vào thời gian lƣu) định lƣợng thuốc trừ sâu endosulfan II số mẫu rau củ thị trƣờng thành phố Vinh Kết cho thấy dƣ lƣợng thuốc trừ sâu endosulfan II mẫu Do cần làm giàu mẫu trƣớc xác định Kết thu đƣợc định lƣợng thuốc trừ sâu endosulfan II mẫu sau làm giàu lớn LOQ tƣơng ứng bảng 2.6 Hàm lƣợng thuốc trừ sâu mẫu thực C0 * Vdm C(mg/kg) = am Trong : C nồng độ thuốc trừ sâu mẫu tính theo µg/ml(mẫu nƣớc) - µg/kg(mẫu rắn dạng sệt) - Co nồng độ thuốc trừ sâu tính theo đƣờng chuẩn µg/l - Vdm thể tích định mức(ml) - am khối lƣợng mẫu phân tích(g) thể tích mẫu(ml) Kí hiệu mẫu : - Mẫu : Mƣớp đắng - Mẫu : Đậu côve - Mẫu : Dƣa chuột - Mẫu : Cà chua - Mẫu : Bắp cải - Mẫu : Rau ngót - Mẫu : Cải Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 48 Bảng 2.7 Kết hàm lƣợng endosulfan II mẫu rau củ, ppm m STT Lƣợng cân V định mức gam ml Mẫu 44,03 1,5 Mẫu 44,58 Mẫu Nồng độ S Theo đƣờng Diện tích pic chuẩn Cuối µg/l mg/kg 110678,5 508,33 0,017 1,5 245258,4 1127,81 0,038 44,48 1,5 93510,5 429,31 0,015 Mẫu 44,67 1,5 151754,5 697,41 0,023 Mẫu 44,74 1,5 220237,2 1012,63 0,034 Mẫu 44,85 1,5 150988,6 693,88 0,023 Mẫu 43,93 1,5 265936,3 1222,98 0,042 Bảng 2.8 Hàm lƣợng endosulfan cho phép thực phẩm theo Bộ Y tế[1] Code Thuốc bảo ADI (CAC) vệ thực vật (mg/kg) Thực phẩm MRL (mg/kg) Củ cải đƣờng, thịt động vật có vú, gạo, hạt cà phê, hạt cacao Hành củ, khoai lang, cà rốt, khoai tây, lúa mì 0,1 0,2 Dầu hạt bơng (thơ), đậu đỗ non, đậu ván, đậu Hà Lan non, dƣa chuột, cải hoa, súp lơ, cam ngọt, 32 Endosulfan 0,006 0,5 hạt cải dầu, bầu bí , cà chua Táo, anh đào, mận, hạt bông, cải xoan, rau diếp, đậu tƣơng, bắp cải, nho, hạt hƣớng dƣơng, linh lăng, củ cải đƣờng Rau chân vịt, cần tây, cải bắp, cà pháo Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 49 2.2.5 Sắc đồ mẫu thực Hình 2.4 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu rau ngót Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 50 Hình 2.5 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu dưa chuột Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 51 Hình 2.6 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu mướp đắng Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 52 Hình 2.7 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu bắp cải Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 53 Hình 2.8 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu đậu côve Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 54 Hình 2.9 Sắc đồ chạy máy GC/ECD mẫu cà chua Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 55 Hình 2.10 Sắc đồ chạy máy GC/ECD cải Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 56 CHƢƠNG : KẾT LUẬN 3.1 Kết luận Đã lựa chọn đƣợc quy trình phân tích thích hợp để xác định thuốc trừ sâu endosulfan II rau phƣơng pháp GC/µECD Phƣơng pháp đƣợc áp dụng để phân tích số mẫu rau thị trƣờng thành phố Vinh Kết ban đầu cho thấy : có thuốc trừ sâu endosulfan II mẫu Điều nói lên endosulfan II đƣợc sử dụng trình sản xuất rau Điều ngƣời nơng dân sử dụng loại thuốc nhập lậu bị cấm sử dụng dƣới dạng hổn hợp Tuy nhiên hàm lƣợng endosulfan II thấp so với giới hạn dƣ lƣợng tối đa(MRL) theo tiêu chuẩn Bộ Y tế Dƣ lƣợng TT Mẫu rau Mức MRL(mg/kg) endosulfan II (mg/kg) Bộ Y tế FAO/WHO Mƣớp đắng 0,017 - Đậu côve 0,038 0,5 - Bắp cải 0,034 - Cà chua 0,023 0.5 0,5 Rau ngót 0,023 - - Dƣa chuột 0,015 0,5 Cải 0,042 - - Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bộ Y tế(2008), Quy định tối đa nhiễm sinh học hóa học thực phẩm(ban hành theo Quyết định số 46/2007 QĐ-BYT ngày 19 tháng 12 năm 2007 Bộ trƣởng Bộ Y tế), Nhà xuất Hà Nội [2] Bộ Nông nghiệp & PTNT(2009),Sổ tay danh mục thuốc bảo vệ thực vật phép sử dụng rau Việt Nam NXB Nông nghiệp, Hà Nội [3] Bộ Nông nghiệp & PTNT(1999), Tiêu chuẩn ngành số 10TCN 386-99, Phương pháp lấy mẫu kiểm định chất lượng dư lượng thuốc bảo vệ thực vật(ban hành kèm theo định số 116/1999/QĐ-BNN-KHCN ngày tháng năm 1999 Bộ Nông nghiệp & PTNT) [4] Phạm Văn Biên,Bùi Cách Tuyến,Nguyễn Mạnh Chinh(2005),Cẩm nang thuốc bảo vệ thực vật.NXB Nông Nghiệp [5] Nguyen Minh Chau, Pham Ngoc Lieu, Le Thi Thu Hong, Dang Kim Son, Nguyen Van Tinh, Nguyen Man (2002), Fruits in Vietnam, Agriculture Publishing House [6] J.S Fritz (1999), Analytical Solid Phase Extraction, Wiley – VHC, New York [7] William Horwitz (2005), Official Methods of Analysis of AOAC International, 18th Edition, USA [8] Somenath Mitra (2003), Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry, John Wiley and Sons, Inc., New York [9] Dr C.Hlam(2009), Analysis of Pesticide Residues in Food, Chemist Government Laboratory,HKSAR [10].Philip L Wylie, Ph.D, Developing a Pesticide Analysis Program to Meet International Food Trade Requirements,.Agilent Technologies Wilmington, DE USA [11] J C Miller and J N Miller(1988), Statistics for Analytical Chemistry, Ellis Horwood Limited [12] Codex CAC(2003), Analysis of Pesticides: Guidelines on GoodLaboratory Practice in Residue Analysis, GL40-1993, Rev.1 – 2003 [13] EU(2007), Method Validation & Quality Control Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food & Feed, SANCO/2007/3131 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn