Đánh giá khả năng định tính nhóm beta agonist trong thịt bằng kit beta agonist elisa của hãng randox (anh)

BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - - LÊ DUY TRUNG ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỊNH TÍNH NHĨM BETA-AGONIST TRONG THỊT BẰNG KIT BETAAGONIST ELISA CỦA HÃNG RANDOX (ANH) LUẬN VĂN THẠC SĨ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC HÀ NỘI, 2015 i BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM - - LÊ DUY TRUNG ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG ĐỊNH TÍNH NHĨM BETA-AGONIST TRONG THỊT BẰNG KIT BETAAGONIST ELISA CỦA HÃNG RANDOX (ANH) LUẬN VĂN THẠC SĨ CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 60420201 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐỒNG HUY GIỚI HÀ NỘI, 2015 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii LỜI CAM ĐOAN - Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ đề tài, cơng trình - Tơi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Tác giả luận văn Lê Duy Trung Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với: TS Đồng Huy Giới tận tình giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu đề tài hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô khoa Công nghệ sinh học, Bộ môn sinh học tận tình hướng dẫn đóng góp ý kiến q báu để tơi hồn thành luận văn Tơi chân thành cảm ơn lãnh đạo Trung tâm Phân tích Chứng nhận chất lượng sản phẩm nông nghiệp Hà Nội - Sở Nông nghiệp PTNT Thành phố Hà Nội cho phép triển khai tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn bạn đồng nghiệp Trung tâm gia đình động viên, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình thực đề tài Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Lê Duy Trung Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỤC LỤC MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Mục đích nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu .3 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lý thuyết chất kích thích tăng trưởng họ Beta-agonist 1.1.1 Clenbuterol 1.1.2 Salbutamol 1.2 Tình hình nghiên cứu nhóm Beta-agonist nước ngồi nước 10 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nước 11 1.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 13 1.3 Thực trạng sử dụng Beta-agonist thịt nước giới 15 1.4 Một số phương pháp sử dụng để phân tích Beta-agonist 16 1.4.1 Phương pháp ELISA 17 1.4.2 Phương pháp phân tích sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS) 20 1.5 Một số vấn đề thẩm định phương pháp phân tích sàng lọc 21 Chương NGUYÊN VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Vật liệu nghiên cứu: 23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 23 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 23 2.1.4 Hóa chất thuốc thử 23 2.1.5 Thiết bị, dụng cụ 23 2.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.3 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3.1 Xác định có mặt Salbutamol thịt lợn phương pháp ELISA 26 2.3.2 Xác định có mặt Clenbuterol thịt lợn phương pháp ELISA 26 2.3.3 Xác định phù hợp kit ELISA 27 2.3.3.1 Độ tuyến tính (Linearity) / Khoảng xác định (Working ranger) 27 2.3.3.2 Độ chọn lọc (Selecsibility) 27 2.3.3.3 Độ nhạy (Sensitivity) 28 2.3.3.4 Giới hạn phát nhỏ LOD 28 2.3.3.5 Độ thu hồi (Recovery) 29 2.3.4 Thí nghiệm đảm bảo chất lượng kết thử nghiệm kit ELISA 30 2.3.5 Khẳng định khả phát Beta-agonist Kit phương pháp định lượng LC/MS/MS 30 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Xác định phù hợp kit ELISA 33 3.1.1 Độ tuyến tính (Linearity) / Khoảng xác định (Working ranger) 33 3.1.2 Độ chọn lọc (Selecsibility) 37 3.1.4 Độ nhạy (Sensitivity); Độ thu hồi (Recovery) 42 3.2 Khẳng định lại khả phát Beta-agonist Kit ELISA phương pháp Sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS 43 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page v C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.3 Ứng dụng phù hợp phương pháp phát Beta-agonist kit ELISA mẫu thực thị trường 45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 50 DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page vi C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT - Clen: Clenbuterol - ELISA: Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay - HPLC: High-performance liquid chromatograph - LC/MS/MS: Sắc ký lỏng khối phổ - LOD: Giới hạn phát (Limit of Detection) - LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation) - NN&PTNT: Nông nghiệp Phát triển nông thôn - ppb: Phần tỷ (Parts per billion) - Sal: Salbutamol - TACN: Thức ăn chăn nuôi - TCVN: Tiêu chuẩn Việt Nam Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page vii C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Nhóm chất β2-agonist Bảng 1.2 Giới hạn cho phép Clenbuterol Salbutamol mẫu 15 Bảng 2.1 Độ thu hồi chấp nhận nồng độ khác 29 Bảng 3.1 Kết tổng hơp hệ số hồi quy tuyến tính Clenbuterol 34 Bảng 3.2 Kết tổng hơp hệ số hồi quy tuyến tính Salbutamol 36 Bảng 3.3 Kết phân tích Clenbuterol Salbutamol mẫu thịt 37 Bảng 3.4 Kết phân tích Clenbuterol mẫu trắng đánh giá LOD 39 Bảng 3.5 Kết phân tích Clenbuterol mẫu thêm chuẩn đánh giá LOD 39 Bảng 3.6 Kết phân tích Salbutamol mẫu trắng đánh giá LOD 40 Bảng 3.7 Kết phân tích Salbutamol mẫu thêm chuẩn đánh giá LOD 41 Bảng 3.8 Kết phân tích Clenbuterol Salbutamol mẫu thêm chuẩn 42 giá trị LOD Bảng 3.9 Kết phân tích mẫu mù Elisa LC/MS/MS 44 Bảng 3.10 Kết phân tích Clenbuterol mẫu nghiên cứu 45 Bảng 3.11 Kết phân tích Salbutamol mẫu nghiên cứu 47 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page viii C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 1.1 Cấu trúc hóa học nhóm chất β1-agonist Hình 1.2 Hình 1.3 Cấu trúc hóa học nhóm chất β2 -agonist có tác dụng kéo dài Cấu trúc hóa học nhóm chất β2 -agonist có tác dụng ngắn Hình 1.4 Cấu trúc hóa học nhóm chất Beta-agonist chưa phân loại Hình 1.5 Vị trí lấy mẫu nghiên cứu 25 Hình 3.1 Độ hấp thụ OD dãy chuẩn kit Clenbuterol 34 Hình 3.2 Độ hấp thụ OD dãy chuẩn kit Salbutamol 36 Hình 3.3 Biểu đồ thể tương đồng kết Clenbuterol thịt phương LC/MS/MS Biểu đồ thể tương đồng kết Salbutamol thịt phương LC/MS/MS phân tích pháp Elisa 49 phân tích pháp Elisa 48 Hình 3.2 Học viện Nơng nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page ix C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Ngày xã hội phát triển cao nhu cầu đời sống người cao hơn, chất lượng an toàn thực phẩm chiếm vị trí quan trọng Các ngành, quan quản lý Nhà nước có đề án, chương trình nhằm nâng cao chất lượng quản lý sử dụng chất kháng sinh lĩnh vực cụ thể Tuy nhiên, việc quản lý hướng dẫn sử dụng thuốc kháng sinh chưa đồng triệt để, tình trạng sử dụng chất kháng sinh tùy tiện Dẫn đến tồn dư chất kháng sinh, gây nguy hại đến sức khỏe người tiêu dùng Trong lĩnh vực dược phẩm, Beta-agonist nhóm chất sử dụng nhiều điều trị bệnh hen suyễn hay tắc nghẽn phổi mãn tính, hai chất điển hình Salbutamol Clenbuterol Nhu cầu người sử dụng ngày cao, thúc đẩy tăng trưởng tăng lượng nạc cho gia súc, gia cầm Dẫn đến việc sử dụng kích thích tố tăng trưởng, hormone tăng trọng ngày phổ biến từ nhà sản xuất thức ăn chăn nuôi đến người chăn nuôi Clenbuterol Salbutamol đưa vào thức ăn gia súc nhằm làm giảm lớp mỡ da, tăng cơ, tăng trọng gia súc, gia cầm Ở Việt Nam, loại dược liệu thuộc nhóm Beta-agonist có Clenbuterol Salbutamol xếp vào danh mục "Thuốc, hóa chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thôn" (Bộ NN PTNT, 2009) Kiểm sốt diện nhóm Beta-agonist thức ăn gia súc, gia cầm vào năm gần Nhà nước quan tâm trọng, nhiên chưa tập trung, triệt để Việc định lượng xác dư lượng Beta-agonist thức ăn chăn nuôi vấn đề cần quan tâm công tác kiểm tra chất lượng sản phẩm Đồng thời, việc xác định tồn dư Betaagonist thịt số gia súc cần thiết mặt quản lý để đánh giá tình hình mức độ sử dụng chất thức ăn chăn nuôi đưa cảnh Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an M5 0.211 83 0.884 74 M6 0.239 73 0.878 72 M7 0.266 105 0.943 93 M8 0.246 96 0.880 73 M9 0.259 85 0.917 85 M10 0.264 98 0.903 80 RmTB 87 % 79 % SD độ thu hồi 0.106 0.084 Khoảng thu hồi (Rm ± × SD) 66-108% 63-96% Từ kết thêm chuẩn Clenbuterol Salbutamol, tính độ nhạy: SeClen = SeSal = 100 × 10/10 = 100% Khoảng thu hồi thêm 0,1 ppb chuẩn Clenbuterol 66-108%, khoảng thu hồi thêm 0,3 ppb chuẩn Salbutamol 63-96% Tham chiếu AOAC [23], khoảng thu hồi chấp nhận phương pháp bán định lượng 40-120% Do giá trị độ thu hồi thêm chuẩn Clenbuterol chuẩn Salbutamol phù hợp Độ chọn lọc, độ nhạy kit để phân tích Beta-agonist thịt lớn 95% Như vậy, phương pháp phát Clenbuterol mẫu thịt có nồng độ 0,1 ppb Salbutamol mẫu thịt có nồng độ 0,3 ppb với xác suất sai số bé 5% Theo yêu cầu quy định định 657/2002/EC độ chọn lọc, độ nhạy phương pháp ≥ 90% Đối chiếu với quy định định 657/2002/EC (EC, 2002) việc chuẩn hóa phương pháp phân tích sàng lọc tồn dư thực phẩm kết hồn toàn đáp ứng yêu cầu phương pháp sàng lọc 3.2 Khẳng định lại khả phát Beta-agonist Kit ELISA phương pháp Sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS Kiểm tra hệ thống máy Trước chạy mẫu, bơm dung môi ACN để kiểm tra ổn định ô nhiễm máy Kết kiểm tra: Hệ thống máy Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 43 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Kiểm tra nhiễm bẩn sau bơm loạt mẫu Sau bơm loạt 10 mẫu, bơm 01 mẫu ACN để kiểm tra ổn định ô nhiễm máy Kết máy không bị nhiễm bẩn từ lần chạy máy trước Như chương trình lập trình chạy máy đạt yêu cầu Bố trí thí nghiệm mẫu mù, bao gồm mẫu trắng, mẫu dương tính, loại mẫu, Kiểm nghiệm viên khác chuẩn bị để để đảm bảo tính bảo mật thơng tin mẫu Tiến hành phân tích định tính ELISA, sau khẳng định lại kỹ thuật phân tích LC/MS/MS Bảng 3.9 Kết phân tích mẫu mù Elisa LC/MS/MS STT MSM Phân tích Elisa Bố Kết trí Phân tích LC/MS/MS Đánh Kết Đánh Sal Clen giá Beta-agonist giá Lần M1 - - - Đạt - Đạt M2 + + + Đạt + Đạt Lần M1 - - - Đạt - Đạt M2 + + + Đạt + Đạt Từ bảng 3.9 cho thấy: + Kết phân tích phương pháp ELISA: Mẫu trắng M1 cho kết âm tính; mẫu dương tính M2 cho kết dương tính Kết phù hợp với thí nghiệm bố trí + Kết phân tích phương pháp LC/MS/MS: Mẫu trắng M1 cho kết âm tính; mẫu dương tính M2 cho kết dương tính với nhóm Betaagonist Kết phù hợp với thí nghiệm bố trí Như với tiến hành thí nghiệm ngẫu nhiên khách quan, thơng qua kết phân tích hệ thống LC/MS/MS cho thấy kết phân tích phương pháp Elisa cho kết sàng lọc xác Tuy nhiên để khẳng định độ xác phương pháp, cần tiến hành phân tích với số lượng mẫu lớn tiếp tục kiểm chứng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ LC/MS/MS Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 44 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 3.3 Ứng dụng phù hợp phương pháp phát Beta-agonist kit ELISA mẫu thực thị trường Trên sở xác định phù hợp phương pháp phát Beta-agonist Kit ELISA mẫu thịt, tiến hành thí nghiệm nhằm khảo sát thực trạng có mặt chất tồn dư kháng sinh Clenbuterol Salbutamol thị trường cách thực phân tích mẫu chương trình nghiệp vụ năm 2015 Trung tâm phân tích Chứng nhận chất lượng sản phẩm nơng nghiệp Hà Nội Để đánh giá thực trạng tồn dư Clenbuterol Salbutamol thị trường, tiến hành lấy ngẫu nhiên 20 mẫu thịt tổng số mẫu thịt chương trình để tiến hành khảo sát (xem chi tiết Phụ lục 1) Trong 20 mẫu, lựa chọn ngẫu nhiên 01 mẫu (trong thí nghiệm chọn mẫu 04NV15-01) để thêm chuẩn Clenbuterol giá trị 0.2 ppb chuẩn Salbutamol giá trị ppb (ngưỡng tối đa cho phép Bộ NN PTNT Clenbuterol Salbutanol) Các mẫu phân tích phương pháp sàng lọc ELISA Trên sở kết kiểm nghiệm sàng lọc Elisa, tiếp tục tiến hành kiểm nghiệm định lượng Clenbuterol phương pháp LC/MS/MS Kết kiểm nghiệm phương pháp biểu diễn sau: Bảng 3.10 Kết phân tích Clenbuterol mẫu nghiên cứu Clenbuterol ELISA LC/MS/MS Xi KQ Xi KQ 04NV15-01-SPK 0.2 0.271 + 0.314 + 04NV15-01-SPK 0.2 0.256 + 0.305 + 04NV15-01 0.128 - 0.154 - 02NV15-02 0.132 - 0.162 - 04NV15-02 0.128 - 0.152 - 09NV15-01 0.134 - 0.169 - 03NV15-02 0.129 - 0.147 - 02NV15-03 0.137 - 0.165 - Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 45 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 04NV15-03 0.098 - 0.122 - 03NV15-03 0.092 - 0.130 - 08NV15-01 0.114 - 0.145 - 02NV15-04 0.123 - 0.177 - 03NV15-04 0.137 - 0.164 - 04NV15-04 0.152 - 0.171 - 09NV15-02 0.302 + 0.433 + 04NV15-05 0.127 - 0.154 - 03NV15-06 0.148 - 0.176 - 09NV15-03 0.183 - 0.185 - 02NV15-06 0.102 - 0.142 - 04NV15-06 0.156 - 0.175 - 10NV15-01 0.149 - 0.166 - 09NV15-04 0.144 - 0.165 - Hình 3.3 Biểu đồ thể tương đồng kết phân tích Clenbuterol thịt phương pháp Elisa LC/MS/MS Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 46 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Kết tổng hợp cho thấy: Tham chiếu Thông tư số 57/2012/TTBNNPTNT ngày 07 tháng 11 năm 2012, 19 mẫu tổng số 20 mẫu thịt (95%), phân tích Elisa, đạt kết Âm tính với Clenbuterol mẫu thêm chuẩn đạt kết dương tính; 01 mẫu (5%) nghi ngờ tượng Dương tính với Clenbuterol (mẫu 09NV15-02 với Xi = 0.302 ppb) Sau tiến hành phân tích mẫu phương pháp LC/MS/MS, khẳng định 19 mẫu âm tính đạt kết âm tính, 01 mẫu nghi ngờ Dương tính đạt kết dương tính với Clenbuterol Bảng 3.11 Kết phân tích Salbutamol mẫu nghiên cứu Salbutamol ELISA LC/MS/MS Xi KQ ĐG Xi KQ ĐG 04NV15-01-SPK 6.611 + Đạt 7.745 + Đạt 04NV15-01-SPK 6.494 + Đạt 7.774 + Đạt 04NV15-01 2.216 - Đạt 2.652 - Đạt 02NV15-02 2.381 - Đạt 2.635 - Đạt 04NV15-02 2.356 - Đạt 2.669 - Đạt 09NV15-01 2.407 - Đạt 2.874 - Đạt 03NV15-02 2.009 - Đạt 2.425 - Đạt 02NV15-03 3.389 - Đạt 3.554 - Đạt 04NV15-03 2.839 - Đạt 3.127 - Đạt 03NV15-03 3.433 - Đạt 3.822 - Đạt 08NV15-01 3.362 - Đạt 3.623 - Đạt 02NV15-04 3.700 - Đạt 3.889 - Đạt 03NV15-04 2.419 - Đạt 2.795 - Đạt 04NV15-04 3.263 - Đạt 3.665 - Đạt 09NV15-02 2.471 - Đạt 2.607 - Đạt 04NV15-05 3.094 - Đạt 3.413 - Đạt 03NV15-06 2.339 - Đạt 2.724 - Đạt 09NV15-03 3.381 - Đạt 3.641 - Đạt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 47 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 02NV15-06 2.866 - Đạt 3.044 - Đạt 04NV15-06 2.962 - Đạt 3.322 - Đạt 10NV15-01 4.042 - Đạt 4.320 - Đạt 09NV15-04 3.741 - Đạt 4.005 - Đạt Hình 3.4 Biểu đồ thể tương đồng kết phân tích Salbutamol thịt phương pháp Elisa LC/MS/MS Kết tổng hợp cho thấy: Thông tư số 57/2012/TT-BNNPTNT ngày 07 tháng 11 năm 2012, 20 mẫu tổng số 20 mẫu thịt (100%), thức ăn chăn nuôi, thủy sản, đồ hộp thực phẩm, phân tích Elisa, đạt kết Âm tính với Salbutamol mẫu thêm chuẩn đạt kết dương tính Sau tiến hành phân tích mẫu phương pháp LC/MS/MS, khẳng định 20 mẫu âm tính đạt kết âm tính với Salbutamol Như vậy, mẫu thịt lợn nghiên cứu, có 01 mẫu dương tính với Clenbuterol, khơng có mẫu dương tính với Salbutamol Dựa vào hai biểu đồ 3.3 3.4 cho thấy có tương đồng kết ELISA LC/MS/MS Tuy nhiên đánh giá dư lượng Salbutamol Clenbuterol có mẫu thịt Nhóm Beta-agonist cấm sử dụng chăn nuôi động vật sản xuất thực phẩm (Bộ NN PTNN, 2012) Kết nghiên cứu cho thấy lạm dụng chất cấm Beta-agonist sản xuất thịt lợn Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 48 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Các phương pháp áp dụng phân tích mẫu, định tính định lượng hợp lệ theo quy định định 657/2002/EC Văn phòng công nhận chất lượng VILAS (TCVN 17025:2007) Tuy nhiên, phương pháp phân tích sàng lọc bỏ sót tỷ lệ nhỏ mẫu thịt ô nhiễm với Betaagonist ngưỡng giới hạn chuẩn hóa nghiên cứu cao ngưỡng giới hạn protocol nhà sản xuất kit Hơn nữa, phương pháp phân tích khẳng định định lượng Beta-agonist nghiên cứu tập trung vào 02 chất nhóm salbutamol clenbuterol khơng phân tích tất chất có nhóm Beta-agonist bitolterol, carbuterol, ractopamine… Như thế, tỷ lệ mẫu phát thấy Beta-agonist mẫu thịt nghiên cứu tỷ lệ mẫu phát thấy Salbutamol Clenbuterol; tỷ lệ mẫu thịt lợn nhiễm nhiễm Beta-agonist nói chung cao Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 49 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Xác định phù hợp Kít Elisa Clenbuterol Salbutamol mẫu thịt lợn Có tương đồng kết phân tích dư lượng Salbutamol, Clenbuterol thịt lợn kit ELISA phương pháp phân tích định lượng LC/MS/MS Sử dụng Kit ELISA để định tính Clenbuterol Salbutamol với số mẫu thị trường Trong mẫu thịt lợn nghiên cứu, có 01 mẫu dương tính với Clenbuterol, khơng có mẫu dương tính với Salbutamol KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu kit Salbutamol ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay; Clenbuterol ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Assay mẫu Thức ăn gia súc, thực phẩm khác để nghiên cứu phù hợp kit cho mục đích sử dụng khác Ứng dụng phù hợp Kit Elisa Clenbuterol Salbutamol vào chương trình đề án kiểm nghiệm nhanh chợ đầu mối địa bàn Hà Nội để sàng lọc, đánh giá chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm Mở rộng, nghiên cứu phương pháp khẳng định kết sàng lọc, qua đánh giá xác phương pháp sàng lọc Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 50 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Nông nghiệp PTNT (2011), Thông tư 54/2011/TT-BNNPTNT, ngày 03 tháng năm 2011, Yêu cầu lực phòng thử nghiệm chất lượng, an tồn thực phẩm nơng lâm thủy sản muối Bộ Nông nghiệp PTNT (2009), Thông tư số 15/2009/TT-BNNPTNT ngày 17 tháng năm 2009, Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng Bộ Nông nghiệp PTNT (2012), Thông tư số 57/2012/TT-BNNPTNT ngày 07 tháng 11 năm 2012, Quy định việc kiểm tra, giám sát xử lý vi phạm chất cấm thuộc nhóm beta-agonist chăn ni Phùng Thị Lâm Dung (2013), Hướng dẫn xác nhận giá trị sử dụng phương pháp hóa học, Văn phịng công nhận chất lượng BOA - Bộ Khoa học Cơng nghệ (Vilas 684) Đồn Thị Khang, Phan Thanh Đạm, Dương Thị Thu Anh Đào Đức Hảo (2008) Ứng dụng kỹ thuật ELISA để xác định clenbuterol salbutamol thức ăn chăn ni, Tạp chí Khoa học Công nghệ Chăn nuôi số 13, tháng 8/2008 Dương Thanh Liêm, Bùi Như Phúc Dương Duy Đồng (2002) Thức ăn dinh dưỡng vật nuôi, NXB Đại học Nông Lâm, TP HCM, tr 146-179 Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng, Bộ Khoa học Công nghệ (2008), TCVN 7925-2008, Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử Trần Cao Sơn (2010), Thẩm định phương pháp phân tích Hóa học Vi sinh vật, Nhà Xuất Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, p16-59 Nguyễn Thị Thu Thủy (2007) Báo cáo hội nghị Hóa học Châu Á lần thứ 12, tháng năm 2007 Kuala Lumpur, Malaysia – International Symposium on Food Analysis, Chemistry and Technology, 12th Asian Chemical Congress, August 23-25, 2007, Kuala Lumpur, Malaysia Tạp chí Khoa học Công nghệ, năm 2008 10 Nguyễn Thị Thu Thủy (2008) Báo cáo hội nghị khối phổ 56th ASMS Conference on Mass Spectrometry and Allied Topics, Denver, Colorado, Mỹ 11 Nguyễn Thị Thu Thủy (2011), Hội Nghị Quốc Tế Analytica 2011 tổ chức Thành phố Hồ Chí Minh 12 Phan Thị Nhã Tú (2007), Điều tra tình hình tồn dư dexamethasone nhóm β– agonists gan thịt lợn phương pháp ELISA số tỉnh lân cận Tp HCM, Luận văn tốt nghiệp Kỹ sư Chăn Nuôi Thú Y Đại Học Nông Lâm Tp HCM TÀI LIỆU TIẾNG ANH 13 Ahee, P (2000) The management of hyperkalaemia in the emergency department Emergency Medicine Journal 17 (3): 188–191 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 51 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 14 Andrzej Posyniak, Jan Zmudzki and Jolanta Niedzielska (2003) Screening procedures for clenbuterol residue determination in bovine urine and liver matrices using enzyme – linked immunosorbent assay and liquid chromatography, Analytica Chimica Acta 483: 61–67 15 AOAC International (2007), How to meet ISO 17025 requirements for method verification, USA 16 Baselt, R (2008) Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man (8th ed.) Biomedical Publications, pp 33–35 17 Baselt, R (2008) Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man Biomedical Publications, Foster City, CA, pp 325–326 18 British National Formulary (57 ed.) (2008) London: BMJ Publishing Group Ltd and Royal Pharmaceutical Society Publishing ISBN 0-85369-778-7 19 Bucknall, S D., MacKenzie, A L., Sauer, M J., Everest, D J., Newman, R and Jackman, R (1993) Determination of clenbuterol in bovine liver by enzyme immunoassay, Analytica Chimica Acta, 275: 227-230 20 Carter W.J., Lynch M.E (1994) Comparison of the effects of salbutamol and clenbuterol on skeletal muscle mass and carcass composition in senescent rats Metab Clin Exp 43 (9): 1119–1125 21 Caruso, J (2005) Albuterol aids resistance exercise in reducing unloading-induced ankle extensor strength losses Journal of Applied Physiology 98 (5): 1705– 1711 22 Caruso, J.F.; Hamill, J.L.; De Garmo, N (2005) Oral albuterol dosing during the latter stages of a resistance exercise program Journal of strength and conditioning research/National Strength & Conditioning Association 19 (1): 102–107 23 Caruso, J.F.; Hamill, J.L.; Yamauchi, M; Mercado, DR; Cook, TD; Keller, CP; Montgomery, AG; Elias, J (2004) Albuterol helps resistance exercise attenuate unloading-induced knee extensor losses Aviation, space, and environmental medicine 75 (6): 505–511 24 Caruso, JF; Signorile, JF; Perry, AC; Leblanc, B; Williams, R; Clark, M; Bamman, MM (1995) The effects of albuterol and isokinetic exercise on the quadriceps muscle group Medicine and science in sports and exercise 27 (11): 1471–1476 25 Caruso, John F.; Hamill, John L.; De Garmo, Nicole (2005) Oral Albuterol Dosing During the Latter Stages of a Resistance Exercise Program The Journal of Strength and Conditioning Research 19 (1): 102 26 Collin, David T.; Hartley, David.; Jack, David.; Lunts, Lawrence H C.; Press, J C.; Ritchie, Alexander C.; Toon, Paul (1970) Saligenin analogs of sympathomimetic catechol amines Journal of Medicinal Chemistry 13 (4): 674–680 27 FARAD (2014) FDA's Prohibited Drug List, Food Animal Residue Avoidance & Depletion Program Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 52 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an 28 Guest, Katy (2007) Clenbuterol: The new weight-loss wonder drug gripping Planet Zero The Independent London 29 Guy Degand and Anne Bernes-Duyckaerts (1993) Determination of β-agonists in urine by an enzyme immunoassay based on the use of an antisalbutamol antiserum, Analytica Chimica Acta, 275: 241-247 30 Kootstra, P R., Kuijpers, C.J.P.F., Wubs, K.L, Doorn D.van, Sterk S.S., van Ginkel L.A and Stephany, R.W (2005) The analysis of β-agonists in bovine muscle using molecular imprinted polymers with ion trap LCMSs creening, Analytica Chimica Acta 529: 75–81 31 Kuiper, H A., Noordam, M.Y., Schlit, R (1998), Illegal use of β-adrenergic agonists: European community-State Institute for Quality Control of Agricultural Products, P.O Box 230, 6700 AE Wageningen, The Nethelands: 195-207 32 Lewelt, A.; Newcomb, T M.; Swoboda, K J (2011) New Therapeutic Approaches to Spinal Muscular Atrophy Current Neurology and Neuroscience Reports 12 (1): 42–53 33 Mahoney, B A.; Smith, W A.; Lo, D.; Tsoi, K.; Tonelli, M.; Clase, C (2005) Emergency interventions for hyperkalaemia In Clase, Catherine Cochrane Database of Systematic Reviews 34 MedicineNet (2015), Albuterol albuterol, Ventolin HFA, Proventil-HFA, Vospire ER, ProAir HFA 35 Rose MD, Shearer G, Farrington WH (1995) The effect of cooking on veterinary drug residues in food Ministry of Agriculture, Fisheriers and Food, 67-76 36 Schweizer, C; Saugy, M; Kamber, M (2004) Doping test reveals high concentrations of salbutamol in a Swiss track and field athlete Clin J Sport Med 14 (5): 312–315 37 Van Meerbeke, J P.; Sumner, C J (2011) Progress and promise: The current status of spinal muscular atrophy therapeutics Discovery medicine 12 (65): 291–305 38 Wang Ying (2009) 70 ill after eating tainted pig organs China Daily 39 WHO (2014) WHO Model List of EssentialMedicines World Health Organization 40 Witkamp, R F (1996) Pharmacological and toxicological properties of β-agonists In Residues of veterinary drugs and mycotoxins in animal products, Anonymous (Ed.), Wageningen Pers, Wageningen, pp 113-123 41 Xinhua (2011) China to launch one-year crackdown on contaminated pig feed" Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 53 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: Danh mục mẫu thịt lợn chương trình nghiên cứu STT Mã số mẫu Địa điểm lấy mẫu 04NV15-01 Chợ đầu mối Bắc Thăng Long - Đông Anh - Hà Nội 02NV15-02 Chợ Vân Trì - Vân Nội - Đơng Anh 04NV15-02 Chợ đầu mối Bắc Thăng Long - Đông Anh - Hà Nội 09NV15-01 Chợ đầu mối Đền Lừ - Hoàng Mai - Hà Nội 03NV15-02 Chợ Hà Đông - Quận Hà Đông - Hà Nội 02NV15-03 Chợ Vân Trì - Vân Nội - Đơng Anh 04NV15-03 Chợ đầu mối Bắc Thăng Long - Đông Anh - Hà Nội 03NV15-03 Chợ Hà Đông - Quận Hà Đông - Hà Nội 08NV15-01 Chợ đầu mối Long Biên - Quận Long Biên - Hà Nội 10 02NV15-04 Chợ Vân Trì - Vân Nội - Đơng Anh 11 03NV15-04 Chợ Hà Đông - Quận Hà Đông - Hà Nội 12 04NV15-04 Chợ đầu mối Bắc Thăng Long - Đông Anh - Hà Nội 13 09NV15-02 Chợ đầu mối Đền Lừ - Hoàng Mai - Hà Nội 14 04NV15-05 Chợ đầu mối Bắc Thăng Long - Đông Anh - Hà Nội 15 03NV15-06 Chợ Hà Đông - Quận Hà Đông - Hà Nội 16 09NV15-03 Chợ đầu mối Đền Lừ - Hoàng Mai - Hà Nội 17 02NV15-06 Chợ Vân Trì - Vân Nội - Đơng Anh 18 04NV15-06 Chợ đầu mối Bắc Thăng Long - Đông Anh - Hà Nội 19 10NV15-01 Chợ đầu mối Long Biên - Quận Long Biên - Hà Nội 20 09NV15-04 Chợ đầu mối Đền Lừ - Hoàng Mai - Hà Nội Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 54 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHỤ LỤC 2: Một số sắc ký đồ phân tích mẫu thịt hệ thống LC/MS/MS Một số sắc ký đồ phân tích Beta-agonist thịt có thêm 2ppb chuẩn Clenbuterol Salbutamol hệ thống LC/MS/MS Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 55 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Page 56 C.33.44.55.54.78.65.5.43.22.2.4 22.Tai lieu Luan 66.55.77.99 van Luan an.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.C.33.44.55.54.78.655.43.22.2.4.55.22 Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd 77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77.77.99.44.45.67.22.55.77.C.37.99.44.45.67.22.55.77t@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn