Nghien cuu ky thuat nhan nhanh giong chuoi vn1 99707

1 Phần Mở đầu 1.1 Đặt vấn đề Là nớc có nông nghiệp lâu đời với 80% dân số làm nông nghiệp, từ lâu Việt Nam đà trọng phát triển toàn diện toàn ngành nghề thuộc lĩnh vực Trong đó, trồng công nghiệp đợc coi hớng phát triển có nhiều tiềm vừa mang lại việc làm cho nhiều ngời lao độngvừa cho hiệu kinh tế cao đồng thời góp phần bảo vệ môi trờng xanh ®Đp HiƯn nay, níc ta ®· trång rÊt nhiỊu lo¹i công nghiệp mang lại nhiều lợi ích cao nh: chuối, chè, cà phê, bông, đay Tuy nhiên, chuối đợc cho loại có tiềm lớn lợi ích mà mang lại cho ngêi: chuèi lµ thùc phÈm quan träng giµu tinh bét, nguồn nguyên liệu rẻ cung cấp cho ngời thực phẩm ăn hàng ngày, thực phẩm đóng gói, bánh kẹo, hơng liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm [25] Nhng đặc biệt phải kể đến khả bảo vệ sức khoẻ ngời nh vị thc q cđa qu¶ chi Trong qu¶ chi cã chứa nhiều sắt nªn cã thể kÝch thÝch việc sản xuất c¸c hemoglobin m¸u do nã giúp ích nhiu cho nhng ngi thiu máu Không vËy, chuối cã chứa nhiều kali, Ýt natri v× đ©y thực phẩm hồ n hảo gióp đ¸nh bại chứng huyết ¸p nguy t qu Trong chui có nhiu vitamin, C, B gióp cho hệ thần kinh b×nh tĩnh t tt, có tác dụng tích cực thị lực Các vitamin B6 có chui giúp iu chnh nng ng máu, ci thin tâm trng người tốt hơn, ngoà i chuối cßn gióp chị em phụ nữ m đẹp…Trong chi giµu tiỊn vitamin ATrong chi giµu tiỊn vitamin A carotenoid thức ăn bổ dỡng cho ngời thiếu hụt vitamin [25] Chuối ăn thực phẩm chủ yếu nớc phát triĨn ë vïng nhiƯt ®íi ë nước ta nay, chuối trồng phổ biến c¸c vïng sinh th¸i từ Bắc o Nam, từ hải đảo tới c¸c vïng ven biển, c¸c vïng trung du miền nói Diện tÝch trồng chuối kh«ng ngừng tăng nhanh, năm 1976 diện tÝch chuối nước 32.000 Đến năm năm 2005 đà lên đến 103.400 chiếm 13,4% tổng số ăn nớc, đạt sản lợng 354.300 Chui ti th trng Vit Nam gn ây c tiêu th nhiu cã nhiều khả để ph¸t triển chưa thể phc v cho vic sn xut qui mô công nghiệp xuất h×nh thức chưa đẹp, chất lượng chưa cao trồng nhỏ lẻ khã thu hoạch tập trung quả…Trong chi giµu tiỊn vitamin A[3],[5],[14],[21] Giống chuối tiªu vừa VN1- 064 Phó Thọ (VN1- 064) Trung tâm Nghiên cu v phát trin rau qu - Vin KHKT nông lâm nghip núi phÝa Bắc tạo đ· c«ng nhận giống Quốc gia cho c¸c tỉnh phÝa Bắc, theo định số 1147 QĐ/BNN - KHCN, ngà y 19 tháng nm 2006 ca B Nông nghip v Phát trin nông thôn [5] Ging chui n y cã nhiều ưu điểm như: cã độ đồng cao, đẹp, cã từ 9-12 nải/buồng với khối lượng trung b×nh 25 kg/buồng cã khoảng 145 - 164 Tỷ lệ thịt 70 % Quả lóc xanh m u m sáng bóng, lúc chín v ng ti v không b rng áp ứng nhu cầu người tiªu dïng cã thể xuất thị trường giới Nhưng, đa số c¸c giống chuối đ· trồng khác, giống chuối tam bội , nguyên liệu sử dụng để nh©n giống th©n hà nh chồi bên nên hệ số nhân giống thấp không đủ đáp ứng nhu cầu giống ngời sản xuất [20] Hơn nhân giống theo phơng thức cũ (trồng con) làm lây lan mét sè bƯnh dÞch nh tun trïng, virus bƯnh hÐo Fusarium, Moko, bƯnh rơt nân chi (BBTV), qua đất, rễ, thân, giống bị nhiễm bệnh sang khác [21] Phng pháp nhân ging in vitro gièng chuèi nµy cã nhiều ưu điểm so với nh©n giống truyền thống như: hệ số nh©n giống cao, tạo đợc s lng ging ln thi gian ngn, ng u v kích thc, giống tạo s¹ch bƯnh t, khoảng thời gian thu hoạch ngắn Cây chuối nuôi cấy mô có nhiều u điểm chuối thờng song đợc nuôi điều kiện tối u dinh dỡng, nhiệt độ, ánh sáng nên mang trồng đất canh tác có thĨ bÞ chÕt cha thÝch nghi kÞp thêi víi điều kiện tự nhiên Do đó, đà tạo giống có kích thớc số lợng đủ lớn phòng thí nghiệm, cần thiết phải có giai đoạn vờn ơm giúp làm quen với môi trờng trớc trồng đất canh tác.Vì lí ó tin h nh nghiên cu t i: "Nghiên cứu kỹ thut nhân nhanh ging chuối VN1- 064 bng phơng pháp nuôi cấy mô tế bo v kỹ thuật chăm sóc cono vo v kỹ thuật chăm sóc kỹ thuật chăm sóc ngoo v kỹ thuật chăm sóc coni vờn ơm" 1.2 Mục đích nghiên cứu Nghiên cøu kü thuËt nh©n nhanh gièng chuèi VN1 - 064 phơng pháp nuôi cấy mô tế bào kỹ thuật chăm vờn ơm 1.3 Yêu cầu nghiên cứu Nâng cao hệ số nhân tỷ lệ rễ chồi chuối Tăng tỷ lệ sống, rút ngắn giai đoạn vờn ơm cho chuối nuôi cấy mô 1.4 ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.4.1 ý nghĩa khoa học Đề tài áp dụng công nghệ sinh học nói chung nuối cấy mô tế bào thực vật nói riêng để nhân nhanh giống trồng ph ơng pháp nuôi cấy mô, tế bào Thực đề tài giúp có điều kiện áp dụng kiến thức lý thuyết đà học vào thực tiễn hoàn thiện đợc kỹ thực hành phòng thí nghiệm Đề tài sở cho nghiên cứu chuối sau này, tài liệu tham khảo cho trờng, khoa sinh viên ngành công nghệ sinh học nhữmg khoá sau 1.4.2 ý nghĩa thực tiễn Kết đề tài góp phần bổ sung qui trình kỹ thuật nhân nhanh giống chuối nhằm: Tạo đợc số lợng lớn giống có khả sinh trởng cao, đồng đều, bệnh thời gian ngắn mà giữ nguyên đợc tính trạng mẹ, phục vụ trồng diện tích rộng cách nhanh chóng Chi phí tạo giống thấp khả vận chuyển dễ dàng nên tốn (cây giống đợc đặt èng nghiƯm nªn diƯn tÝch chøa rÊt Ýt, vËn chun đợc nhiều giống lúc), diện tích kho chứa giống phòng thí nghiệm cần nhân giống đồng theo phơng pháp nhân giống truyền thống Chất lợng, màu sắc suất chuối nuôi cấy mô vợt trội so với chuối thờng từ tăng đợc giá trị chuối đồng thời làm tăng đợc thu nhập cho ngời dân diện tích canh tác Giảm đợc chi phí phòng trừ sâu bệnh hại, góp phần làm giảm thiểu ô nhiễm môi trờng Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Cơ sở khoa học nhân giống phơng pháp nuôi cấy mô 2.1.1 Tính too v kỹ thuật chăm sóc conn tế bo v kỹ thuật chăm sóc cono thực vật * Tính toàn (Totipotence) Năm 1902 lần nhà thực vật học ngời Đức Haberlandt đà đa quan niệm: Mỗi tế bào (đà biệt hoá) lấy từ thể thực vật có khả tiềm tàng để phát triển thành thể hoàn chỉnh Theo quan niệm sinh học đại "tất tế bào thể gene y hệt nhau, tất tế bào thể có tiềm tổng hợp kiểu protein - enzyme giống hệt tế bào đợc nuôi môi trờng thích hợp phát triển thành nguyên vẹn đặc trng cho loài cụ thể hoa, kết trái bình thờng Khả tế bào đợc gọi tính toàn tế bào thực vật" [6] Tính toàn tế bào sở lý luận nuôi cấy mô tế bào Cho đến nay, ngời đà hoàn toàn chứng minh đợc khả tái sinh thể thực vật hoàn chỉnh từ tế bào riêng rẽ [16] 2.1.2 Sự phân hoá vo v kỹ thuật chăm sóc phản phân hoá tế bo v kỹ thuật chăm sóc cono thực vật Sự phân hoá l trình chuyển hoá tế b o phôi sinh th nh mô chuyên hoá đảm nhận chức chuyên biệt Tuy nhiên tế b o chuyên hoá không hoàn toàn khả phân hoá mà gặp điều kiện thuận lợi, trờng hợp cần thiết, tế bào lại quay trở dạng tế bào phôi sinh có khả phân chia tế bào Đó gọi trình phản phân hoá [16] Về chất phân hoá phản phân hoá trình hoạt hoá, ức chế gene.Tại thời điểm trình phát triển thể, có số gene đợc hoạt hoá tính trạng Còn số gene khác lại bị đình hoạt động Điều xảy theo chơng trình đà đợc mà hoá cấu trúc phân tử DNA tế bào khiến trình sinh trởng phát triển thể thực vật đợc hài hoà [16] Sơ đồ phân hoá phản phân hoá tế bào thực vật: Phân hoá Tế bào phôi sinh Tế bào dÃn Tế bào chuyên hoá Phản phân hoá Quá trình phát sinh hình thái nuôi cấy mô, tế bào thực vật thực chất kết trình phân hoá phản phân hoá Kỹ thuật nuôi cấy mô, tế bào thực vật thực xét đến kỹ thuật điều khiển phát sinh hình thái tế bào thực vật cách có định hớng dựa vào phân hoá phản phân hoá tế bào sở tính toàn tế bào thực vật [7] 2.2 Khái nim nuôi cy mô, nhân ging in vitro thực vật ý tëng vỊ nu«i cÊy m« tÕ bào thực vật đợc đề xuất từ năm 1838 -1839 bëi Schleiden vµ Schwann Häc thuyÕt tÕ bµo Nhng mÃi đến năm 1902 Haberlandt đề xuất tạo đợc phôi nhân tạo từ tế bào dinh dỡng giả thuyết tính toàn tế bào, sau nghiên cứu lĩnh vực thực đợc ý [12] Đầu tiên phải kể đến kết nghiên cứu White P.R (1934), ông nuôi cấy đợc dòng rễ cà chua sinh trởng mạnh liên tục Sau đó, năm 1939, Gautherets đà thành công nuôi cáy mô tợng tầng môi trờng Knop có bổ sung glucose cysteinhypochloride Tiếp theo, vào năm 1956, Miler Skoog đà tạo chồi thành công từ mô thuốc nuôi cấy [16] Đến năm 1960, Morel Martin đà thành công việc tạo dahlia (cây thợc dợc) virus cách nuôi cấy đỉnh sinh trởng [12] Cho tới ngày nuôi cấy mô thực vật đà đợc ứng dụng rộng rÃi chọn tạo giống trồng thu đợc nhiều thành tựu rực rỡ Khái niệm nuôi cấy mô nhân giống in vitro thực vật hiểu nh sau: Nuôi cấy mô - tế bào thực vật phơng pháp sử dụng điều kiện nhân tạo để trì sống tế bào èng nghiƯm Nh©n gièng in vitro hay vi nh©n gièng thực vật kỹ thuật nuôi cấy mô để nhân giống htực vật, bắt đầu nhiều phận khác cđa thùc vËt víi kÝch thíc nhá Nh©n gièng in vitro bao gồm kỹ thuật sau: Nuôi cấy đỉnh sinh trởng, nuôi cấy mô quan (trừ mô đà hoá gỗ), nuôi cấy mô sẹo, nuôi cấy phôi, nuôi cấy bao quanh phấn hạt phấn, nuôi cấy tế bào đơn tế bào trần [16] Nuôi cấy đỉnh sinh trởng nuôi cấy in vitro mà phận đem nuôi cấy đỉnh sinh trởng có chứa từ đến vài non Đỉnh sinh trởng phận có đờng kính khoảng 0.1mm, dài từ 0.25 - 0.30 mm nằm chồi thân cành [12] 2.3 Tình hình nghiªn cøu ngồi n ngồ ngồi ni níc 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới Limmasets Cornuet (1949) đà phát nhiễn bệnh virus, virus phân bố không đồng thờng không thấy chúng đỉnh sinh trởng Phát sở để Morel Martin (1954) chứng minh giả thuyết cách tạo đợc bện virus từ giống khoai tây qua nuôi cấy đỉnh sinh trởng Năm 1963, Morel áp dụng thành công kỹ thuật nhân nhanh loài địa lan Cymbidium thông qua protocom Sau đó, việc phát cytokinin môi trờng nuôi cấy mô cải tiến (Murashige v Skoog, 1962) đà tạo bớc ngoặt lớn để nuôi cấy đỉnh sinh trởng nhân giống thơng mại thực vật Ngày nay, kỹ thuật với số cải tiến đà trở thành phơng pháp loại trừ bệnh virus đợc sử dụng rộng rÃi toàn giới với nhiều loài trồng khác Cây chuối trồng nhiƯt ®íi quan trräng nhÊt thÕ giíi Chi (Musa spp.), đợc trồng năm lục địa khoảng 120 quốc gia Hiện nay, giới ớc tính có khoảng 97.500.000 đợc sản xuất năm bao gồm 10.000.000 (Kalloo, năm 2002; Singh, 2002) ViƯc s¶n xt trồng chuối gặp nhiều khó khăn lây lan cđa rÊt nhiỊu lo¹i bƯnh nh nÊm, vi khn tuyến trùng gây hại (Dale & Harding, 1998) [17] Nuôi cấy đỉnh sinh trởng chuối đà góp phần làm giảm lây lan dịch bệnh qua giống nhân giống theo phơng thức truyền thống (trồng con) Tại Đài Loan, dịch bệnh hÐo Panama, Fasarium chđng lan trun qua rƠ vµ đất đà đợc loại bỏ nuôi cấy xuất giống chuối Cavendish Tại ấn Độ Trung Quốc, việc trồng chuối nuôi cấy mô thực vật đà mang lại hiệu lớn việc kiểm soát dịch virus chuối (BBTV) Nuôi cấy mô chuối qui mô công nghiệp nớc phát triển đợc ngời dân trồng rộng rÃi phổ biến [18] Trên giới đà có nhiều nghiên cứu nuôi mô chuối mang lại thành công việc trao đổi nguồn gen trung tâm nghiên cứu chuối đợc dễ dàng, đồng thời hạn chế đợc dịch bệnh làm tăng suất, giảm chi phí vận chuyển giá thành tạo giống Có nhiều môi trờng dinh dỡng, môi trờng tạo chồi, rễ đợc tìm phù chợp cho giống chuối khác Nhng môi trờng đợc sử dụng cho tất giống chuối môi trêng Murashige & Skoog Trong bé su tËp nguån gen giống chuối quốc tế INIBAP (International Network for the Improvement of Banana and Plantain), Transit Centre ë K.U.Leuven, đà có 1000 đỉnh chồi giống chuối đợc lu giữ ống nghiệm đây, môi trờng đợc nhà nghiên cứu sử dụng để tạo chồi nhân nhanh môi trờng MS, có bổ sung 30 g/l sucrose, 2.25 mg/l BA (6-benzyladenine) vµ 0.175 mg/l IAA (indole-3-acetic acid), đà tạo đợc - chồi - tuần nuôi cấy Môi trờng rễ môi trờng nhng hàm lợng BA giảm xuống 0.225 mg/l BA Nhiệt độ tăng trởng tối u đợc tìm thấy cho chuối cấy mô 28 C CC chu kỳ chiếu sáng từ 12 - 16 h ngày [23] Trong nghiên cứu Masoud Sheidai cộng biến đổi di truyền chuối Cavandish Dwarf nuôi cấy mô trồng, đà tìm môi trờng u việt để nhan nhanh giống chuối môi trờng MS bổ sung 30 g/l sucrose, N-phenyl-N-1, 2, - thiadiazol 5-YL Ure (0,5 mg/l) acid Indoleacetic (2 mg/l) cho hƯ sè nh©n 25 cây/5 mẫu 120 ngày [20] Đài Loan - Trung Quốc, S.W Lee (2003), đà thành công vi nhân giống chuối Cavendish phơng pháp nuôi cấy mô, môi trờng đợc sử dụng để nhân nhanh chồi MS bổ sung thiamine HC1 0,4 mg/l, myoinositol L -tyrosine 100 mg/l, đờng 30 g/l, agar g/l, chÊt kÝch thÝch sinh trëng bao gåm BA mg/l, IAA 1,6 mg/L adenine sulfate 80 mg/l, pH 5.8, ®Ĩ ë nhiƯt ®é 26 - 280C với chu kỳ chiếu sáng 12 h/ngày/đêm Sau - tuần từ 15 - 25 chồi đợc tạo từ mẫu cấy Nghiên cứu cho thÊy cã thĨ c¶i thiƯn chiỊu cao cđa chåi chuối nuôi cấy cách điều chỉnh nồng độ chÊt kÝch thÝch sinh trëng mg/l BA vµ 1,6 mg/l IAA môi trờng MS lần cấy chuyển, làm giảm tỷ lệ chồi thấp cm Giá thể thích hợp cho phát triển hai tháng vờn ơm phân hữu (phân bò) : mùn ca (1:2.5) [24] Khi nghiên cứu môi trờng nhân nhanh chồi, Aish Muhammad cộng (2004) ®· cho thÊy m«i trêng MS cã bỉ sung mg/l BAP thích hợp cho chuối (Musa spp.) Cv Basrai, trung bình tạo đợc 124 sau lần nuôi cấy [19] Said M Khalil A.A.M Elbanna (2003) đà nghiên cứu đề tài mang tính mẻ hiệu cao tạo phôi soma phục tráng giống thông qua nuôi cấy mô dạng treo dung dịch lỏng giống chuối Dwarf Brazil (nhóm AAB Musa spp.) Trong nghiên cứu này, phôi soma lấy từ nụ hoa đực cha trởng thành đợc nuôi môi trờng lỏng dạng treo m«i trêng MS bỉ sung mg/l biotin, 100 mg/l malt, 100 mg/l glutamine, 4mg/l 2,4 - dichlorophenoxyacetic acid, mg/l axit indole-3-acetic (IAA), mg/l α-naphthaleneacetic acid, 30g/l sucrose v 2,6 g/l Phytagel, pH 5,8 Đà có khoảng 900 - 1050 (90%) phôi soma nảy mầm phát triển thành [22] V M Kulkarni T R Ganapathi, làm giảm phát triển hai gièng chuèi Rajeli Rasthal, nh»m b¶o tån nguån gene hai giống chuối thông qua nuôi cấy dạng treo tế bào dung dịch chứa môi trờng dinh dỡng nhiệt độ thấp mà giữ đợc khả tái sinh phôi soma [26] Những nghiên cứu chuối nuôi cấy mô ngày nhiều phong phú cách thức tiến hành Nhng điểm chung tất nghiên cứu nhằm tìm môi trờng dinh dỡng phù hợp để nhân nhanh giống, tăng suất, giảm chi phí khâu sản xuất 2.3.2 Tình hình nghiên cứu nớc Việt nam, nghiên cứu chuối nuôi cấy mô đà đợc sóm Nhng thời gian đầu chuối nuôi cấy mô cha mang lại giá trị kinh tế cao nh mong đợi Giai đoạn 1986 1995, Thái Nguyên giống chuối tiêu lùn nhân giống phơng pháp nuôi cấy mô đà đợc trồng thử nhng hiệu kinh tế mang lại thấp, sau 15 tháng đợc thu hoạch, suất chất lợng không chuối tiêu đợc trồng nhân giống theo phơng pháp thông thờng [4] Hiện nghiên cứu chuối nuôi cấy mô nớc ta đà có nhiều thành công mang lại lợi ích kinh tế cao cho ngời dân Trong nhiều năm qua đà có nhiều đề tài cấp sở, cấp nhà nớc dành cho cá nhân, viện nghiên cứu, tiến hành nghiên cứu nhân nhanh chuối nuôi cấy mô chuối phòng thí nghiệm biện pháp kỹ thuật thích hợp để thâm canh giống chuối dợc tạo Qui trình nhân giống chuối phơng pháp nhìn chung gồm giai đoạn: chọn vật liệu khởi đầu để tạo chồi, nhân nhanh, rễ, vờn ơm trồng thực nghiệm Viện Nghiên cứu ăn Miền Nam tạo chuối giống phơng pháp nuôi cấy mô, đà mang lại hiệu sản xuất cao cho ngời nông dân Nguồn giống tạo theo mong muốn, u tú di truyền hoàn toàn bệnh Cây tạo có tỷ lệ sống cao, đồng sinh trởng Cây chuối đợc tạo nhờ kỹ thuật có khả tăng suất lên 20%/ha/năm so với chuối trồng phơng pháp thông thờng u ®iĨm lín nhÊt lµ chi hoa cïng thêi ®iĨm, buồng chuối đồng dạng, đều, thu hoạch đồng loạt, dễ vận chuyển nên có thu nhập cao [1] Dựa kỹ thuật nuôi cấy đỉnh sinh trởng Đài Loan, công ty PAN VIET đà hợp tác với Phòng Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Sinh học Nhiệt đới, sản xuất triệu chuối giống Cavendish năm, từ năm 1991 -1998, Thủ Đức, TP Hồ Chí Minh [11] Những nghiên cứu chuối nuôi cấy mô phong phú giống chuối khác thích hợp với môi trờng nuôi cấy khác tùy theo giai đoạn sinh trởng mà lại cần có môi trờng phù hợp riêng Năm 2009, Vũ Ngọc Phợng cs đà nhân thành công giống chuối Cavendish SP qui mô công nghiệp môi trờng nuôi cấy MS có bổ sung BA 5mg/l, L-tyrosine 100 mg/l, IAA 0,5 mg/l, adenine sulfate 100 mg/L, thiamin HCL 10mg/l, m-inositol 100mg/l, níc dõa 20%, pH 5.8, đờng 30g/l, agar 8g/l Trong điều kiện ánh sáng ®Ìn hnh quang, cêng ®é chiÕu s¸ng 2000lux, chu kú chiếu sáng h/ngày, nhiệt độ 28 C 0C Đà tạo chuối nuôi cấy mô hoàn chỉnh có chiều cao trung bình - 5cm, trọng lợng tơi trung bình 1g, đờng kính thân mm dài từ 4,5 - 6cm, có từ - lá, có - rễ, dài rễ từ - 7cm Giá thể thích hợp cho giống chuối bột mùn dừa [11] Năm 2009, Nguyễn Trọng Lực đà nghiên cứu xây dựng qui trình nhân giống chuối mốc (Musa spp) phơng pháp nuôi cấy mô, đà tạo chåi tõ mét ®Ønh sinh trëng nhê kü thuËt chẻ thân chồi thành Trong nghiên cứu tìm giá thể thích hợp cho chuối trấu Đặc biệt nghiên cứu khác, môi trờng rễ Nguyễn Trọng Lực môi trờng MS không sử dụng chất kích thích rễ nên giảm đợc giá thành sản xuất [8] 2.4 Một số điều kiện nuôi cấy mô, tế bào thực vật 2.4.1 Điều kiện vô trùng Môi trờng nuôi cấy mô thực vật chứa đầy đủ chất dinh dỡng nên thích hợp cho vi sinh vật phát triển Do tốc độ phân bào cđa vi sinh vËt lín h¬n rÊt nhiỊu so víi tế bào thực vật Nếu môi trờng nuôi cấy bị nhiễm vài bào tử nấm vài vi khuẩn sau vài ngày tới tuần bề mặt môi trờng nuôi cấy bị bao phủ vi sinh vật Mô cấy tiếp tục phát triển dinh dỡng bị gây hại vi sinh vật Do đó, nuôi cấy mô thực vật đòi hỏi phải vô trùng nghiêm ngặt Tuỳ theo loại mẫu dụng cụ thí nghiêm sử dụng mà chọn phơng pháp hoá chất khử trùng thích hợp cách sử dụng xà phòng, nớc máy, nớc cất vô trùng, cồn 70%, javen, HgCl2, HCl, Các hoá chất sử dụng để khử trùng mẫu phải đảm bảo đợc hai yêu cầu sau: có khả diệt nấm khuẩn tốt có mức độ độc hại thấp mẫu thực vật [7] 2.4.2 Môi trờng nuôi cấy Môi trờng nuôi cấy điều kiện cần phải có để mô thực vật sống sinh trởng, môi trờng thay đổi tuỳ theo loài thực vật, loại tế bào, mô, quan, mục đích nuôi cấy nh: trì trạng thái mô sẹo, tạo chồi, tạo rễ, tái sinh thành hoàn chỉnh,