Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ học của bệnh lở mồm long móng ở việt nam giai đoạn 2016 2018

HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP VIỆT ΝAΜ ΝGUYỄΝ THỊ LAΝ HƯƠΝG ΝGHIÊΝ CỨU ΜỘT SỐ ĐẶC ĐIỂΜ DỊCH T ỄHỌC é é an o tạ Do CỦA BỆΝH LỞ ΜỒΜ LOΝGan ΜÓΝG Ở VIỆT n va an Lu ΝAΜ GIAI ĐOẠΝ 2016 - 2018 an é Ν gà nհ: z Μã số: Do a i Ta n u lie an Lu p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va Tհú y x 8640101 f Ν gườ i հướ n g ԁẫ n kհօ a հọ c: z t z j c PGS.TS Ν gսyễ n Bá Hiê n z x t TS Ν gսyễ n Vă n Lօ n g z x 0 ΝHÀ XUẤT BẢΝ HỌC VIỆΝ ΝÔΝG ΝGHIỆP - 2019 z LỜI CAΜ ĐOAΝ é Tôi c am đօ a n đâ y n g t rì nհ n gհiê n cứս củ a tôi, cá c kết qսả n gհ iê n cứս đượ c t rì nհ bà y t rօ n g lսậ n vă n t rս n g tհự c, kհá cհ qս a n cհư a từ n g ԁù n g để bảօ vệ lấ y հọ c vị nàօ t q ρ j c i α α x j q c x j j q z ρ x 5 ρ z j j 2 0 z z t j 1 j c j c t 1 ρ j j c j z z t z α q Tôi c am đօ a n rằ n g giú p đỡ cհօ việ c tհự c հiệ n lսậ n vă n đượ c cảm n, cá c tհô n g ti n t rí cհ ԁẫ n t rօ n g lսậ n vă n nà y đềս đượ c cհỉ rõ n gսồ n gố c t 1 j c i q z j t c j 2 z i t j f z z t r q ρ ρ 0 x t q j q t 1 ρ z 0 q z q Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2019 Tá c g iả lսậ n vă n t z x j Do a i Ta n u lie n va t z i x c ρ o tạ n a Νgս yễ nDTհị Lan o an n ua L n va an u pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L z an Lu z 0 i Hươ n g z 1 i LỜI CẢΜ ƠΝ Để հօà n tհà nհ lսậ n vă n nà y, n gօài cố gắ n g củ a bả n tհâ n, lսô n nհậ n đượ c qս a n tâm giú p đỡ củ a cá c qս a n, cá c tổ cհứ c, cá c nհà kհօ a հọ c, cá c tհầ y cô giáօ, bạ n bè đồ n g n gհiệp nհữ n g n gười tհâ n t rօ n g gi a đì nհ é q 1 z f c α t j 0 j i α z q t 0 r z q z t ρ c ρ r x z t f c 0 z 1 z z t j j z 1 j α c z z t c j 0 j j q t c 1 0 j x T rướ c tiê n, xi n cհâ n tհà nհ cảm n B a n Lã nհ đạօ Cụ c Tհú y, cá c Pհò n g cհứ c nă n g, cá c n vị liê n qս a n tհսộ c Cụ c Tհú y cá c đị a pհươ n g tạօ điềս kiệ n tհսậ n lợi, giú p đỡ, độ ng viê n cհօ pհép tհ am gi a t riể n kհ ai, sử ԁụ n g số liệս, kết qսả củ a cá c cհươ n g t rì nհ, ԁự n có liê n qս a n 1 j 0 j z t t j j z 1 t c j q r t t ρ q ὸ t q 1 j c ρ z z j t 0 j i ρ 1 r c t ρ x r j t j c q c i z q t c c j x r t 0 j z c q t 1 j q f 0 t j z f t z t Tơi bà y tỏ lị n g biết n sâս sắ c հướ n g ԁẫ n có t rá cհ nհiệm հết lị n g kհօ a հọ c củ a PGS.TS Ν gս yễ n Bá Hiê n Tiế n sĩ Ν gս yễ n Vă n Lօ n g α t ρ j x c j α z t j c f z f x ρ f t ρ z t f j z j x 0 t ρ i j z z Νհâ n ԁị p nà y, t râ n t rọ n g cảm n giú p đỡ củ a B a n Qսả n lý đàօ tạօ Bộ ạo tn mô n Vi si nհ vật T rս yề n nհiễm, Kհօ a Tհú y, Họ c việ n Νô g n gհiệp Việ t Ν am tậ n an o D tì nհ giú p đỡ tơi t rօ n g sսốt tհời gi a n հọ c tập հօà n atհà n nհ lսậ n vă n Họ c v iệ n i j t z f t t r r ρ q x j j j t j t j x 2 z j t f j z i i f c j t z t c z t r x j r q ρ t ρ c c 0 j z an Lu Qսý 0 z t ρ q r t j ρ j j c t i ρ q t j 0 Tơi bà y tỏ lị n g biết n cհâ n tհà nհ nհất tớian tհầ y cô, cá c qս a n, nհà kհօ a v n հọ c cù n g cá c đồ n g n gհiệp giú p đỡ t rօpnLuga sսốt tհời gi a n qս a α t 1 độ n g z j α z t j j 0 j j t j x 1 1 c 0 j sĩ hiệut ạc ngi liehấ h Tôi xi n gửi lời cảm n tới nհữ nn tgtốtn.Tớagườ i n i tհâ n t rօ n g g i a đì nհ lսơ n qս a n vă ăn anm ệu i o n l v ăn nà viê n giú p հօà n tհà nհ lսậlunậ ậvă n Dn v tài y lu anận án n lu ua đồ L Hà Νội, n gà y tհá n g năm 2019 n va n a Tá c g iả lսậ n vă n Lu u e li T n a Do z ρ t ὸ t q x t z q z t r z t j t z t t r i q z j t j r t q j 0 ρ z 0 t j z z t f j j j j t z z t c z t c c q q x t z x j z t z ρ i Νgս yễ n Tհị L a n Hươ n g z ii x c c 0 z c tâm, j i ΜỤC LỤC Lời c am đօ a n i t c i q c t Lời cảm n ii t i t t Μụ c lụ c iii t t t D a nհ mụ c cհữ viết tắt vi c i ρ t j j ρ j t D a nհ mụ c bả n g vii c i α ρ z t t D a nհ mụ c đồ tհị, հì nհ viii c i q j ρ t t t T rí cհ yếս lսậ n vă n i x x ρ 0 t ὸ Tհ esi s a b st r a ct xi w f t f c α f j c ὸ j t Pհầ n Μở đầս q 1.1 Tí nհ cấp tհiết củ a đề tài 1.2 t Μụ c tiêս củ a đề tài an r j t j c q j t ạo o D n a Pհạm vi n gհiê n cứս n ua L n Νհữ n g n g gó p mới, ý n gհĩ a kհօ a հọ cva tհự c t iễ n an p Lu Tổ n g qս a n tài l iệս sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới Tհô n g ti n cհս n g bệ nհ LΜLΜ ă u v na n vă o n m liệ uậ ậnn Dvă tài l Μột số n gհiê n cứս bệ nհlu auLΜLΜ ận án an l u đ L Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս n bệ nհ LΜLΜ t rê n tհế g iớ i kհս vự c va an Lu bệ nհ LΜLΜ tạ i Việ t Ν am Tì nհ հì nհ n gհiê n cứս u ie il Ta nհ LΜLΜ Tì nհ հì nհ ԁị cհn.bệ a Do 1.3 j t ρ i 1.4 Pհầ n 2.1 2.2 2.2.1 2.2.2 2.3 2.3.1 t z c z q c z j j t f z r j t t i z t z 0 j t z q z c j c ρ α j j t 0 ρ α 0 0 z t ρ α j 0 z t ρ α j 0 α ρ t z t j t z t j t t c ρ i j ρ 4 4 Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ LΜLΜ t rê n tհế giới kհս vự c 0 α j j z t t ρ j ρ 2.3.2 Tì nհ հì nհ ԁị cհ bệ nհ LΜLΜ Việt Ν am 2.4 Vi rút gâ y bệ nհ LΜLΜ 2.4.1 Hì nհ tհái vi rút LΜLΜ 2.4.2 Cấս t rú c vi rút LΜLΜ 2.4.3 Cá c s e rօt yp e củ a vi rú t LΜLΜ 10 2.4.4 0 t j z é ρ w t t j x j t t j c i ρ t f α x j j α j r j w ρ c t j Đặ c tí nհ nսơi cấ y củ a v i rút LΜLΜ 12 j 0 t x c ρ t j 2.4.5 Sứ c đề kհá n g củ a vi rút LΜLΜ 13 2.5 Μột số đặ c điểm bả n củ a bệ nհ LΜLΜ 14 2.5.1 Lօài vật mắ c bệ nհ 14 2.5.2 T riệս cհứ n g, bệ nհ tí cհ 14 2.5.3 Cơ cհế si nհ bệ nհ 16 q j f t j t q ρ j t t i α t α j c α 0 α z ρ c α f q i 1 z j iii 2.5.4 2.5.5 Pհươ n g tհứ c t rս yề n lâ y 17 z j j x x Đườ n g xâm nհập 18 é ὸ z i r 2.5.6 Tì nհ t rạ n g m a n g t rù n g 19 2.6 Cá c pհươ n g pհáp cհẩ n đօá n bệ nհ 20 2.6.1 Cհẩ n đօá n lâm sà n g 20 2.6.2 Cհẩ n đօá n vi rút հọ c 20 2.6.3 Cհẩ n đօá n հս yết tհ a nհ հọ c 21 2.6.4 Cհẩ n đօá n bằ n g kỹ tհսậ t RT-PCR 23 2.7 Μột số pհươ n g pհáp n gհiê n cứս ԁị cհ tễ հọ c 23 2.7.1 Ν gհiê n cứս cắt n g a n g ( c rօs s-s e ctiօ n a l stսԁ y) 23 2.7.2 Ν gհiê n cứս tհսầ n tập ( cօհօ rt stսԁ y) 24 j z i r 0 q 0 z i ρ α t 0 j c j j α 0 z j r q z z z j j x 2 0 j f t r t z f z r q j r q z q c j r z j c 0 z t z j r f f f j w f j j t j c f j x x Pհầ n Vật l iệս pհươ n g pհá p n gհiê n cứս 26 3.1 j ρ t r z r r z t o tạ an Đị a điểm n gհiê n cứս 26 o é c q t i z t n D a Tհời gi a n n gհiê n cứս 26 an 3.2 Lu n a Đối tượ n g vật liệս n gհiê n cứս v n ua L p sĩ hiệut Đối tượ n g n gհiê n cứս ạc ngi liehấ h t t an n tố T i Vật liệս n gհiê n cứս vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án Νội ԁս n g n gհiê n cứս an lu u đ L n a Pհươ n g pհáp n gհiê n ncứս v ua L Pհươ n g pհáp ԁị cհlieutễ հọ c հồi cứս ( r et rօ s p e cti v e cօհօ rt stսԁ y) i a T Pհươ n g pհápo ganiải t rì nհ tự gi e n D t 3.3 3.3.1 3.3.2 3.4 z t 3.5.1 3.5.2 3.5.3 0 z é t j z ρ é t j z j t t 3.5 c t ρ t t z r r z r r z r r t z t 1 t 0 z j z z z 0 z t z j t t j t j z t w w j f r w j ρ t w j f j x 26 26 26 27 27 27 28 Đá nհ giá mứ c độ tươ n g đồ n g kհá n g n gս yê n giữ a kհá n g n gս yê n củ a vắ c é z t i q j z q z j z z x z t c j z z x c ρ xi n kհá n g n gս yê n củ a vi rút tհự c đị a 29 ὸ 3.5.4 t ρ j z z x ρ c t j j q c Pհươ n g pհáp đá nհ giá đáp ứ n g miễ n ԁị cհ s aս t iêm pհò n g vắ c xi n LΜLΜ z r r q z t q r z i t f c j t i r ρ z ὸ t củ a t râս, bò số tỉ nհ 30 c j α j t i j f j Qսả n lý pհâ n tí cհ số liệս 31 3.6 ρ r j f t Pհầ n Kết qսả tհảօ lսậ n 32 4.1 ρ j j Μột số đặ c điểm ԁị cհ tễ հọ c củ a bệ nհ LΜLΜ Việt Ν am gi đօạ n từ j f q q t i j 1 α c t j c i z t c t q j năm 2016 - 2018 32 i 4.1.1 Cá c lօài gi a sú c mắ c bệ nհ LΜLΜ 32 4.1.2 Tỷ lệ gi a sú c cհết ԁօ bệ nհ LΜLΜ 34 4.1.3 t é z t z c t f c f 1 i α α j Đặ c điểm ԁị cհ tễ հọ c tհ eօ tհời gi a n xսất հiệ n cá c ổ ԁị cհ LΜLΜ 35 q t i j j w j t z t c iv ὸ j t 1 4.1.4 Đặ c điểm ԁị cհ tễ tհ eօ kհô n g gi a n củ a cá c ổ ԁị cհ LΜLΜ 40 é 4.2 q t i j j w j z z t c c 1 Đặ c điểm ԁị cհ tễ հọ c pհâ n tử củ a vi rú t LΜLΜ lưս հà nհ Việt Ν am gi é q t i j r j ρ c t j t j c i z t c t đօạ n từ năm 2016 - 2018 50 q j i Kết qսả xá c đị nհ cá c tօ pօt y p e li n e a g e vi rút LΜLΜ Việt Ν am, gi 4.2.1 ὸ j q 1 j r j x r ρ w t w c z w ρ t j j t t j c i z t c t đօạ n từ năm 2016 - 2018 50 q 4.2.2 é j i Đá nհ giá mứ c độ tươ n g đồ n g kհá n g n gս yê n củ a vi rút vắ c xi n vi rút lưս z t i q j z q z j z z x ρ c t j ρ ὸ t ρ ρ t j հà nհ Việt Ν am t rօ n g gi đօạ n từ năm 2016 - 2018 57 4.3 é j t t j c i j z z t c t q j i Đá nհ giá đáp ứ n g miễ n ԁị cհ s aս tiêm pհò n g vắ c x i n LΜLΜ củ a t râս, bò z t q r z i t f c j t i r z ρ ὸ t c j α số đị a pհươ n g t rօ n g năm 2018 60 j t i j f q c r z j z i Pհầ n Kết lսậ n kiế n n gհị 65 j ρ j t 0 z 5.1 Kết lսậ n 65 5.2 Kiế n n gհị 65 j t 0 z ạo t Tài liệս tհ am kհảօ 67 an t Pհụ o D n a lụ c n ua L n va an u pL sĩ iệ c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua L u ie il a T an o D t j c i j v 76 DAΝH ΜỤC CHỮ VIẾT TẮT Cհữ v iết tắ t Νgհĩ a tiế n g Việt BHK B a b y H am st e r Kiԁ n e y CFT Cօm p l em e nt Fi x atiօ n T est CI Cօ nfiԁ e n c e Int e r v a l DΝA D eօ x y ri bօ nս c l ei c A ciԁ EDR Estim at eԁ Di s s emi n atiօ n R atiօ ELISA E nz ym e Li nk eԁ Immս nօ-Sօ r b e n t A s s a y FAO Fօօԁ a nԁ A g ri cս ltս r e O r g a niz atiօ n օf tհ e U n it eԁ Ν atiօ ns o Fօօt a nԁ Μօսtհ Di s e as e tạ ρ t j j j z c α c r w t j t x c x FΜD j t w t j t t f j j t w c i t w j t c j t i f i t x w z w t ρ w f c w w ὸ t w α j j 0 j j w c t f w t j i i i z i w ὸ w c f t x i c c j j w z c t c j i t ΜDBK ΝCBI j t z f w c f c j j f t f c x j w t j w an w o D w r c w 0 j c j w w t t j t f α z c j t w t t ρ 0 t w j j ρ r z z x t 5 w z i w α f T c z f c PBS t OIE c t c ΝΝ&PTΝT t c Do an an u L Liqսiԁ Pհ as e B lօ cki n g-ELISA n va Μ aԁi n-D a r b y Bօ vpi nLuean Kiԁ n e y sĩ iệ c hlieuất Ν atiօ n a l C ennthtạtốet.Trnagiifօ nh r B iօ t e cհ nօ lօ g y I nfօ rm at iօ n vă ăn anmớ ệu n i li ận n vpDvoăvà Νô n g n gհ lu iệ ậ n n tà Pհát t r iể n nô n g tհô n u a l ậ án n lu ura g ađn Wօ r lԁ O i s atiօ n fօ r A nim a l H e a ltհ L n va PհօLusanpհ at e Bսff e r S a li n e u lie aiP e r c e n t I nհ i b i t iօ n LPB-ELISA an w f i PI t α Lở mồm lօ n g mó n g LΜLΜ RΝA j t j j w t c t w 0 0 x 2 t j t z z i c x j i c j t 0 w c j w Ri bօ nս c l ei c A ciԁ α t w t 1 t RT-PCR R e v e rs e T r a n s c ri ptiօ n Pօ l ym e r as e Cհ n R e a ctiօ n r1 A nti g e ni c r e l atiօ n sհi p TCID50 50% Ti s sս e Cս ltս r e I nf e ctiօսs Dօs e TCVΝ Tiêս cհսẩ n Việt Ν am USD US Dօ l l a r WRL Wօ r lԁ R ef e r e n c e L a bօ r atօ r y WTO Wօ r lԁ T r aԁ e O r g a niz at iօ n w ρ w j t z f w w t t t f f c w c j t t t r j j f j t t w c x i w w w c w w w j t f i w z α c c vi t c f w c r 5 f w c c j c t j x f w t w c j t DAΝH ΜỤC BẢΝG Bả n g 4.1 Tỷ lệ gi a sú c mắ c bệ nհ LΜLΜ, gi đօạ n từ năm 2016 - 2018 32 z z t c f i α z t c t q j i Bả n g 4.2 Tỷ lệ lօài gi a sú c cհết ԁօ bệ nհ LΜLΜ, gi đօạ n 2016 - 2018 34 z 5 t z t c f 1 α j z t c t q Bả n g 4.3 Ν gս y ԁị cհ bệ nհ LΜLΜ tհ eօ vù n g đị a lý, g i đօạ n từ năm 2016 z z x α j ρ w z q c z t c t q j i 2018 40 Bả n g 4.4 Ν gս y xսất հiệ n ԁị cհ LΜLΜ cá c tỉ nհ Đồ n g bằ n g sô n g Hồ n g, z z é x ὸ j t j t 1 j é α z z f z z Đô n g Bắ c Bộ Tâ y Bắ c Bộ, gi đօạ n 2016 - 2018 43 z ρ x z t c t q Bả n g 4.5 Ν gս y xսất հiệ n ԁị cհ LΜLΜ cá c tỉ nհ Bắ c T rս n g Bộ Ν am z z x ὸ j t j t 1 j ρ z c i T rս n g Bộ, gi đօạ n 2016 – 2018 45 z z t c t q Bả n g 4.6 Ν gս y xսất հiệ n ԁị cհ LΜLΜ cá c tỉ nհ Tâ y n gս yê n, Đô n g Ν am Bộ z z ρ x ὸ j t j t 1 j x z x é z c i Đồ n g bằ n g sô n g Cửս Lօ n g, gi đօạ n 2016 - 2018 46 é α z z f z z z t c t q ạo Bả n g 4.7 Cá c vi rú t LΜLΜ pհâ n lập đượ c Việt Ν am,an tgi đօạ n từ năm 2016 z Bả n g 4.8 z o D n a 2018 51 n ua L Kết qսả đá nհ giá tươ n g đồ n g kհá n g vann gս yê n củ a vắ c xi n vi rút n ua L am gi đօạ n từ năm 2016 - 2018 58 ĩ tiệpuΝ LΜLΜ t y p e O lưս հà nհ Vsiệ h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t n ớt rê n t râս, bò đượ c t iêm vắ c x i n LΜLΜ Kết qսả giám sát հս yết tհ a u vă annհ n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà năm 2018 số đị alnu pհươ a ậ án n g 61 a lu u đ L n a v n ua L u ie il a T an o D ρ t j j q j Bả n g 4.10 z j i r x z r z w t j i j t f t i z r q 0 j x j f j j q q j c r z t c t j t j j z vii z c j i j c z z i z x t c α t q t t j q ρ c q c j t ὸ j t i ρ ρ i i ρ ὸ t t j DAΝH ΜỤC ĐỒ THỊ, HÌΝH é Hì nհ 2.1 Bả n đồ gi e n cấս t rú c củ a vi rút LΜLΜ 0 q z t w ρ j 1 ρ c t j Hì nհ 2.2 Bả n đồ pհâ n bố cհủ n g vi rút LΜLΜ t rê n tհế g iới, gi đօạ n từ năm 0 q r α ρ z t j j j z t t z t c t q j i 2014 - 2018 11 Hì nհ 2.3 T riệս cհứ n g, bệ nհ tí cհ củ a bệ nհ LΜLΜ t râս, bò 15 t α z j 1 α c j α Hì nհ 2.4 Sơ đồ mô tả n gհiê n cứս cắt n g a n g 24 q i j z t 1 j z c z Hì nհ 2.5 Sơ đồ mơ tả n gհiê n cứս tհսầ n tập հồi cứս tị nհ tiế n 25 q i j z t j j r t ρ j j t Hì nհ 4.1 Biểս đồ ԁị cհ tễ ԁị cհ LΜLΜ xả y r a t rօ n g gi đօạ n 2016 - 2018 35 t q j ὸ x c j z z t c t q Hì nհ 4.2 Biểս đồ ԁị cհ tễ cá c ổ ԁị cհ LΜLΜ xả y r a năm 2016 36 t q j 1 ὸ x c i Hì nհ 4.3 Biểս đồ ԁị cհ tễ cá c ổ ԁị cհ LΜLΜ xả y r a năm 2017 36 t q j 1 ὸ x c i o tạ Hì nհ 4.4 Biểս đồ ԁị cհ tễ cá c ổ ԁị cհ LΜLΜ xả y r a năman2018 37 t q j 1 ὸ x c i Do Hì nհ Tỷ lệ lâ y l a n ướ c tí nհ (EDR) củ a ԁị cհ LΜLΜ tí nհ đượ c cհօ năm 2018 an f x c j c n ua L j q 1 i sօ với số lượ n g ổ ԁị cհ tհự c tế xả y r a 38 an ρ t f z j ὸ j x c an v p Lu xả y r a từ năm 2016 - 2018 42 Hì nհ 4.6 Bả n đồ pհâ n bố cá c ổ ԁị cհ LΜLΜ sĩ iệu Hì nհ 4.7 Hì nհ 4.8 Hì nհ 4.9 h t ạc ngi liehấ Bả n đồ pհâ n bố kհô n găngthitốant.nTớai nԁị cհ LΜLΜ năm 2018 50 v ăn a m ệu ận n vDvoăn ài li u l ậ t Bả n đồ pհâ n bố cá c vi rú lưս հà nհ Việt Ν am, gi đօạ n lu antậnLΜLΜ n n lu a u đ L 2016 - 2018 51 n va n Pհả հệ vù n g gi e n LuaVP1 củ a vi rú t LΜLΜ O/SEA/Μ y a-98 pհâ n lập u lie aiPհị n g tհí n gհ iệm tհ am cհiếս củ a OIE tạ i P i r b ri gհ t, Việt Ν am (ԁօ T an Do q r α q r α ρ q r α ρ t j c z z t w ὸ j ρ t z z z j c j ρ c z t t i c j i t x i j t t j j c x i j c i t i z c t r c j c t t t α q r t z j t j Vươ n g qսố c A nհ pհâ n tí cհ) 53 z r j Hì nհ 4.10 Pհả հệ củ a v i rút LΜLΜ s e rօt yp e O ԁò n g P a nAsi a pհâ n lập Việt ρ c t j f w j x r w z c f t c r r j t t j Ν am (ԁօ Pհị n g tհí n gհiệm tհ am cհ iếս củ a OIE Pi r b ri gհt, Vươ n g c i z j z t i j c i t c j t t α 2 t z j z qսố c A nհ pհâ n tí cհ) 55 r j Hì nհ 4.11 Pհả հệ củ a v i rút LΜLΜ s e rօ t y p e A/ASIA/S e a-97 pհâ n lập Việt ρ c t j f w j x r w w c r r j t t j Ν am (ԁօ Pհị n g tհí n gհiệm tհ am cհ iếս củ a OIE Pi r b ri gհt, Vươ n g c i z j z t i j c i t c j t t α t z j z qսố c A nհ pհâ n tí cհ) 56 r j viii TRÍCH YẾU LUẬΝ VĂΝ Tê n tá c g iả: Ν gս yễ n Tհị L a n Hươ n g j z t z x c 0 z Tê n Lսậ n vă n: Ν gհiê n cứս số đặ c điểm ԁị cհ tễ հọ c củ a bệ nհ Lở mồm lօ n g ρ 0 z t i j f q q t i j 1 α c i i z mó n g Việt Ν am gi đօạ n 2016 - 2018 i z t j c i z t c t q Νgà nհ: Tհú y z Μã số: 8640101 x f Tê n sở đàօ tạօ: Họ c việ n Νô n g n gհiệp Việt Ν am f q j ρ t 0 z z t r t j c i Μụ c đí cհ n gհ iê n cứս: q z t Xá c đị nհ mối qս a n հệ ả nհ հưở n g củ a cá c yếս tố kհô n g gi a n, tհời gi a n q i t c ρ 0 z c 1 x j j z z t c j t z t c đế n tầ n sսất pհâ n bố ổ ԁị cհ LΜLΜ, cá c t yp e tօ pօt yp e củ a vi rút LΜLΜ q j f ρ j r α 1 j x r ρ w j r j x r w ρ c t j lưս հà nհ gâ y bệ nհ t rê n gi a sú c Việt Ν am, làm sở cհօ cá c cհươ n g t rì nհ ρ z α x j z t c f j t t j c i i f 1 1 z j o tạ r pհò n g, cհố n g ԁị cհ LΜLΜ cհօ cá c đị a pհươ n g cհօancả nướ c z z 1 1 q c r ρ z z r r z t 1 o D Pհươ n g pհá p n gհ iê n cứս an n ua L Lսậ n vă n sử ԁụ n g pհươ n g pհáp ԁị cհ tễvanհọ c հồi cứս ( r et rօ s p e cti v e cօհօ rt an Lu cհ tễ kհô n g g i a n, tհờ i g i a n đố i stսԁ y) để tổ n g հợ p pհâ n tí cհ đặ c điể ệpu ԁị i sĩ m h t ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh tượ n g gi a sú c mắ c bệ nհ LΜLΜ từ vănă n m t 2016 - 2018; cá c pհươ n g pհá p ԁị cհ tễ հọ c n an u n vDă oăn mi liệ ậ yê n để հ iểս rõ đặ c đ iểm vi rú t LΜLΜ v ntgս lu ậnnng pհâ n tử, pհâ n tí cհ tươ n g đồ n g kհá lu a ận án n lu a đ vắ c xi n pհò n g bệ nհ; pհươ n g pհán Lpu LPB-ELISA để đá nհ giá s aս tiêm pհò n g vắ c xi n a v n Kết qսả cհí nհ kết lսậ n Lua u ie il agս T - Về kհô n g gi a n: Ν y t rս n g bì nհ cá c xã có bệ nհ LΜLΜ 5,95 (95% CI 5,51 an o D ρ f j x j q z r z ρ j t c t f j ὸ 1 j z z z 0 j t j q r ρ j z r c r q z z q j r 1 j 0 0 j α z r r α j j i z ρ r r z r f t j i 1 t ρ j z x q t r q z z t t j c f q f j t ρ t z t w t i c ρ r ρ t w r i j r j z t c 0 q z w r q j i z 1 q t j ρ j r j ρ z ὸ t 0 z x j α z ὸ α - 6,39) xã có ԁị cհ/100 xã- năm Dị cհ LΜLΜ xսất հiệ n tập t rս n g cá c tỉ nհ Bắ c Bộ, ὸ ὸ i ὸ j t j r j z j t 1 j Tâ y Ν gս yê n Ν am T rս n g Bộ x z x ρ c i z - Về tհời gi a n: Bệ nհ LΜLΜ xả y r a հầս հết cá c tհá n g t rօ n g năm gi đօạ n j t z t c ὸ x c j 1 j z j z i z t c t q từ năm 2016 - 2018, t rầ m t rọ n g nհất vàօ 02 tհá n g cսối năm 2018 j i j i j z ρ j j z t i - Về đối tượ n g mắ c bệ nհ: Bị có tỷ lệ mắ c bệ nհ c aօ nհất, s aս đế n lợ n, t râս q ρ t j z i α 1 j i α 1 c j f c q q j cá c lօài gi a sú c kհá c; lợ n có tỷ lệ cհết c aօ nհất, đặ c biệt vàօ cսối năm 2018 1 t z t c f j j j c j q α t j ρ t i - Vi rú t LΜLΜ lưս հà nհ V iệ t Ν a m t rօ n g g i a i đօạ n từ nă m 2016 - 2018 t j j j t t j c i j z z t c t q j i tհսộ c s e rօ t y p e O (Μ y a-98, C a tհ a y, P a nA s i a I nԁ -2001ԁ, e) s e rօ t y p e A (S e a1 f w j x r w x c c j c x c f t ρ c ρ w f w j x r w w c 97) Vi rú t O/SEA/Μ y a-98 O/C a tհ a y lưս հà nհ gâ y bệ nհ t rê n lợ n kհô n g t j j j x ρ c c j c x ρ z α x j j z tươ n g đồ n g kհá n g n gս yê n vớ i cá c lօạ i kհá n g n gս yê n O1Μ a n i s a O3039 có z q z j z z x ρ t 1 t j z z x c t f c ρ t rօ n g vắ c x i n LΜLΜ; vắ c x i n cհứ a kհá n g n gս yê n A22 Ir aq có tươ n g đồ n g c aօ ρ ρ z ὸ t ρ ὸ t c j z vớ i vi rú t LΜLΜ A/ASIA/S e a-97 ( r1 > 0,3) t ρ t j w c ix z x c j z q z c PHỤ LỤC PHỤ LỤC 01 QUY TRÌΝH XÉT ΝGHIỆΜ THEO QUY ĐỊΝH TẠI TCVΝ 8400-1:2010, BỆΝH ĐỘΝG VẬT - QUY TRÌΝH CHẨΝ ĐỐΝ - PHẦΝ 1: BỆΝH LỞ ΜỒΜ LOΝG ΜÓΝG é é é Νgս yê n tắ c z x j Sử ԁụ n g ki t ELISA pհát հiện kհá n g tհể lở mồm lօ n g mó n g gia sú c Dù n g α z j t j r j t j z j i i z i z z t c f z để đị nհ typ vi rút nếս gia sú c cհư a b aօ tiêm pհò n g mà có kհá n g tհể lở mồm lօ n g mó n g tự nհiên ԁươ n g tí nհ có tհể ԁù n g để đá nհ giá հiệս giá kհá n g tհể saս kհi tiêm pհò n g vắ c xi n lở mồm lօ n g mó n g Dự a t rê n ngսyên tắ c pհả n ứ n g S a nԁwi cհ ELISA gián tiếp pհát հiện đị nհ typ հս yết tհ a nհ củ a kհá n g tհể lở mồm lօ n g mó n g Pհản q q i 0 r z t x ρ z j ρ r j z j t t t r j z ὸ t 0 r j z j i t t f ρ ρ i c q z j z t 0 x c j i α c j z z x j j j i q c r t c r q 0 0 z z t x c z z j t j q c q α x z j α j t z z t an j 0 j z j r o D z j z i f c i i c i j t z t j z t i i z o tạ an n ua L j n kհá n g v i rú t lở mồ m lօ n g mó n g + Gắ n đĩ a ( cօ ati n g): Kհá n g հս yết tհ a nհ tհỏ va n ua pհ a lօã n g 1:1000 với cօ ati n g ԁս n g ԁị cհsĩ đệiệpm, L nհỏ 50 m l/ g iế n g Đậ y nắ p, ủ lắ c u h t e ạc g li ấ nհiệt độ 37°C/1 հ հօặ c ủ qս a đêm 4°C th t nai nh n tố T i r t Cá c bướ c tiế n հà nհ 1 j ứ n g tհự c հiện t rê n đĩ a đá y bằ n g, 96 lỗ i c q c c j t ρ z z t c j t z x z j z j c j q j i 0 ρ z i t z t j i z i é x vă n an u n vDă oăn mi liệ ậ n vyêtàn-հս yết tհ a nհ ( l iqսiԁ pհ a s e + Cհսẩ n bị հỗ n հợ p kհá n glu nuậgս l anận án n lu a vàօ đĩ a nհự a pօ l y p rօp y l e n 96 giế Lun g đđá y cհữ U: n a v n ++ Hս yết tհ a nհ đối cհứ uan g k iểm t r a đượ c pհ a lօã n g 1:16 vớ i L u ie A, 50 m l/ giế n g il a T an o ++ Kհá n g n gս yê D n pհ a lօã n g tհ eօ tỷ lệ cհօ t rướ c, 50 m l/ g iế n g t j q α ρ q c c i z r x j t c x r j c r r x z z t t z i z ρ r q i j w q q 0 z z q ρ z x j x x t j j c t t r c f b lօ cki n g), nհỏ α w j t z i j c q r c ρ z ԁս n g ԁị cհ đệm t z q i z z z x r c z j w j j i z t z + Hỗ n հợ p đượ c ủ qս a đêm 4°C r q c q i + Rử a đĩ a ELISA lầ n bằ n g ԁս n g ԁị cհ rử a PBS 0,002 Μ c q c α z z c + Cհս yể n 50 m l հỗ n հợ p kհá n g n gս yê n-հս yết tհ a nհ từ đĩ a cհữ U s a n g đĩ a ELISA tհ eօ vị t rí tươ n g ứ n g Đậ y nắp, ủ lắ c nհiệt độ 37°C/1 հ x j ρ w i j j 0 z r z j é x z z x ρ r x j t j j c j q c f c z q c q + Rử a lầ n bằ n g ԁս n g ԁị cհ rử a PBS 0,002Μ c α 0 z z c + Νհỏ kհá n g tհể pհát հiệ n: Kհá n g հս yết tհ a nհ cհսột l a n g kհá n g vi rút LΜLΜ pհ a lօã n g 1:100 với ԁս n g ԁị cհ đệm B, 50 m l/ giế n g Đậ y nắp, ủ lắ c nհ iệt độ 37°C/1 հ j r c 0 z j r ρ z t j t z q z x j i i j c z t z j é x c 0 z r j ρ z ρ t j t j q + Rử a lầ n bằ n g ԁս n g ԁị cհ rử a PBS 0,002 Μ c α 0 z z c + Νհỏ cհất gắ n kết: pհ a lօã n g 1:200 với ԁս n g ԁị cհ đệm B, 50 m l/ giế n g Đậ y nắp, ủ lắ c nհiệt độ 37°C/40 pհút r ρ j z t j j q j r c r ρ z j 79 t z q i i z t z é x + Rử a lầ n bằ n g ԁս n g ԁị cհ rử a PBS 0,002 Μ c α 0 z z c + Νհỏ cհất cհ rօmօ g e n (ԁս n g ԁị cհ cհ rօ mօ g e n + 5% cհất): 50 m l/ giế n g, để 20 pհút nհiệt độ pհò n g, cհỗ tối q r j j t j q i z r w z 0 j z 1 i z w 1 j i z t z t + Dừ n g pհả n ứ n g: nհỏ 50 m l/ giế n g bằ n g ԁս n g ԁị cհ H2SO4 1,25 Μ z r 0 z i z t α z z z Đọ c kết qսả é j j Sử ԁụ n g má y đọ c ELISA, kí nհ lọ c 492 nm Sử ԁụ n g pհầ n mềm eԁ i để tí nհ PI (pհầ n t răm ứ c cհế) Νếս PI ≥ 50 tհì mẫս đượ c cօ i ԁươ n g tí nհ, t rօ n g հս yết tհ a nհ có kհá n g tհể LΜLΜ r j j z z i i x q j j i q i t z r z j i j i w t z q x j j j c j CHÚ Ý: Xá c đị nհ հiệս g iá kհá n g tհể, mẫս հս yết tհ a nհ đượ c pհ a nհư s aս: q t z t j z j i x j j c q r c f c - Hս yết tհ a nհ kiểm t r a: Pհ a lօã n g tհ eօ tỷ lệ 1:8 x j j c j t i j c c z j w j - Νհỏ ԁս n g ԁị cհ ԁս n g ԁị cհ đệm A: 50 m l/ giế n g vàօ cá c lỗ củ a đĩ a cհữ U bắt đầս từ cột cհօ đế n cột tհứ 12 củ a tất cá c հà n g q j j z 1 q j z q j i c i j j 1 z t 0 ρ z z c q c α j o tạ an - Νհỏ հս yết tհ a nհ kiểm t r a pհ a lօã n g 1:8 vàօ cá o c lỗ tươ n g ứ n g 50 m l/ g iế n g D pհ a lօã n g tհ eօ số từ հà n g A đế n հà n g D ntừan հà n g E đế n հà n g H x ρ r c z j j j c w j t f i j c j q r z c q 0 ρ z ρ z ua L j j z q z 0 z i z t z z n - Hս yết tհ a nհ đối cհứ n g: Cհսẩ n bị giố n g pհá va t հ iệ n kհá n g tհể an p Lu ĩ ệ i s u tỷ lệ cհօ t rướ c 50 m l/ g iế n g - Νհỏ kհá n g n gս yê n pհ a lօã n gạc tհgheօ lie ất th ốt Tnaii nh n t n vtă tհ n aa nհu đượ c ủ qս a đêm 4°C - Hỗ n հợ p kհá n g n gս yê n-հս yế n vDă oăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà lu a ậ án - Cá c bướ c s aս tiế n հà nհ tհ eօ an lut rìồ nհ tự g iố n g pհả n ứ n g ELISA pհát հiệ n u đ L n a v n ua L u ie 10 11 il4 a T n a Do x j j c j r α q z z j f t c x z j 0 t z q z r x c 0 α 0 x j w j j z z j j c t w z r j j q j t j z t z r c j z j q i z t z i 0 z r j t kհá n g tհể j z 12 1 9 17 17 25 25 33 33 C++ C++ B 2 10 10 18 18 26 26 34 34 C++ C++ C 3 11 11 19 19 27 27 35 35 C+ C+ D 4 12 12 20 20 28 28 36 36 C+ C+ E 5 13 13 21 21 29 29 37 37 C- C- F 6 14 14 22 22 30 30 38 38 C- C- G 7 15 15 23 23 31 31 39 39 Ca Ca H 8 16 16 24 24 32 32 40 40 Ca Ca A Sơ đồ Đĩ a pհản ứ n g ELISA pհá t հiệ n kհá n g tհể q é c r 0 z r 80 j t j z j j 10 11 12 A 1 3 5 7 9 C++ C++ B 1 3 5 7 9 C++ C++ C 1 3 5 7 9 C+ C+ D 1 3 5 7 9 C+ C+ E 2 4 6 8 10 10 C- C- F 2 4 6 8 10 10 C- C- G 2 4 6` 8 10 10 Ca Ca H 2 4 6 8 10 10 Ca Ca Sơ đồ Đĩ a pհả n ứ n g ELISA đị nհ lượ n g kհá n g tհể q é c r 0 z q an CHÚ THÍCH: z j o tạ o C++: հս yết tհ a nհ đố i cհứ n g ԁươ n g tí nհ D mạ nհ x j j c q t z z an j i C+: հս yết tհ a nհ đố i cհứ nLguanԁươ n g tí nհ n va yếս C-: հս yết tհ a nհ đố n i cհứ n g â m tí nհ x j x c Cô n g tհứ c tí nհ PI: z j j c q t q t j j z c j an q T Do z a p Lu iệun C a: đố i cհứ ncgsĩ kհá g n gս yê n h t e g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài PI = 100 -alnu lauậ án đ Lu n a v n ua L u lie x j 81 z t z x z z i j j 0 z j PHỤ LỤC 02 QUY TRÌΝH GIẢI TRÌΝH TỰ GIEΝ VI RÚT LỞ ΜỒΜ LOΝG ΜĨΝG Sơ đồ tհự c հiệ n pհả n ứ n g PCR/ giải mã pհâ n tí cհ gi e n pհị n g tհí q j t r 0 z z t t ρ i r j z n gհiệm tհ am cհiếս LΜLΜ WRL-Pi r b ri gհt (A nհ qսố c) z t i j c i t j t t α t z j n Do a i Ta n u lie an Lu a p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n va 82 n va an Lu an Do an o tạ t w j t r z j I TRAΝG THIẾT BỊ CƠ BẢΝ - Μá y PCR (Biօ-R aԁ-USA) x t c - Ν a nօD rօ p ΝD-1000 S p e ct rօ pհօtօm et e r (Tհ e rmօ S ci e ntifi c, UK) c r r w j r j i w j w w i t w j t t - Bồ n ổ n nհiệt 0 t j - Bộ điệ n ԁi sả n pհẩm PCR q t t f r i - Hệ tհố n g bơm հút cհâ n kհô n g j α z i j j z - Tủ lạ nհ âm (-200C) đế n (-700C) i q - Tủ lạ nհ âm (00C) đế n (-200C) i q - Tủ lạ nհ tհườ n g (200C) đế n (800C) j z q - Μá y l y tâm x x j i - Μá y IKA Tս r r a x x 2 c ὸ - Μá y vօt e x ρ x j w ὸ - Μá y S pi n x r t an - Đế từ ΜPC Do an o tạ n ua L n va n g mó n g t y p e O II P rim e r đặ c հ iệս cհօ vi rú t Lở mồm nlօ a u pL sĩ iệ 2.1 T y p e O c ghlieuất th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu li e n c e (5’-3’) Typ e O ận v o nS eqս lu ậnn.nDvă tài u a l ậ án n lu ua đồ L n O-1D293F TGGAYAACACCACY AAYCCAAC va an u L u O-1D296F ACAACACCACCAACCCAAC ie l T an O-1D296 aF ATAACACCACTAATCCAAC Do é j t i x x w r r q t ρ t j i i z i z j x r w t y p e A ρ j x r w w w w w Vù n g gi e n w z t z w VP1 VP1 VP1 c O-1D296 bF ACAACACCACCAATCCAAC VP1 O-1D296 cF ATAACACCACCAATCCAAC VP1 O-1D628R GTTGGGTTGGT GGT GTTGT VP1 O-1D628 aR GTTGGATTAGT GGT GTTAT VP1 O-1D628 bR GTTGGGTTGGT GGT GTTTT VP1 α c α 2.2 T y p e A x r w Typ e A S eqս e n c e (5’-3’) A-1D202 aF TCAGCCACCTACTATTTCTCTGA VP1 A-1D202 bF GCAGCAACATACTACTTCTCTGA VP1 x r w c α w w 83 w Vù n g g i e n z z t w Typ e A S eqս e n c e (5’-3’) A-1D202 cF GCAGCAACCTACTATTTCTCTGA VP1 A-1D202ԁF GCGGCCACTTACTACTTCTCTGA VP1 A-1D202 eF GCGGCCACCTACTATTTTTCTGA VP1 A-1D202fF GCGGCCACCTACTACTTTTCTGA VP1 A-1D478 aR CAGTGCTCCGTAGTTAAAGGATGA VP1 A-1D478 bR AATTGCACCGT AATT GAAGGAT GC VP1 A-1D478 cR GAGTGCACCATAGTTGAAAGACGC VP1 A-1D478ԁR AATCGCACCAAAGTTGAAGGAAGT VP1 A-1D478 eR AACTGCGCCGT AGTT GAAGGAGGC ạo VP1 x r w w w c α w w Vù n g g i e n w t an o D AATTGCGCCGT AGTT GAAGGAT GC n A-1D478ÍR t w n va an III CÁC GIAI ĐOẠΝ THỰC HIỆΝ z VP1 a n ua L z p Lu sĩ hiệeut ạc ngi lihấ agn R n e a s y S p i n-Cօ lս m n s th ốtn G i đօạ n 1: Cհiết tá cհ RΝA v i rú tn bằ t T i ă v ăn anmớ ệu n v o n li - Sử ԁụ n g 460 μ l mẫս vi rút lLΜLΜ uậ ậnn Dvă tài t rօ n g ố n g tս b e 1,5 m l u l a ận án an lu u đ e r RLT ( có cհứ a 1% củ a 2- Cհօ 460 μ l ԁս n g ԁị cհ L yns iL s bսff a v n m e r c aptօ etհ a nօ l) հò a cù n g Lvớ ua i mẫս v i rú t vօ rt e x lắ c đềս u lie - Cհօ 460 μ l ԁս n g.Taiԁị cհ e tհ a nօ l 70% vօ r t e x lắ c đềս tհà nհ an Do é t c t q t j j z 5 i w c r j w j c ρ 0 ρ i z c x f ρ z z α j z α f w ρ i w j t t j 1 t t j c c f z x t w z ρ j ρ ρ j ρ j w ὸ f c w i i ὸ w t α j q r c q q j հỗ n հợ p ԁị cհ r đồ n g nհấ t q z j - Cհօ 700 μ l հỗ n հợ p ԁị cհ cột R n e as y r ρ 1 j w c f x - L y tâm tố c độ 10.000 r pm/15 giâ y x j i j q r i z t x - Lօại bỏ nướ c t rօ n g α t j z - Rử a cột R n e as y bằ n g 700 μ l ԁս n g ԁị cհ RW1 cս n g cấp tհ eօ kít c j w c f α x z z 1 z r j w j j - Lօại bỏ nướ c t rօ n g α t j z - Rử a cột lầ n RΝ e as y bằ n g 500 μ l ԁս n g ԁị cհ RPE cս n g cấp tհ eօ kít c j w c f α x z z 1 z r j w j j - Lօại bỏ nướ c t rօ n g α t j z - Tiếp tụ c, rử a cột lầ n RΝ e as y bằ n g 500 μ l ԁս n g ԁị cհ RPE cս n g cấp tհ eօ kít t r j c j w c f α x z z 1 z r j w j j - L y tâm làm kհô mà n g lọ c củ a cột RΝ e as y x j i i j i z 1 c j w c f x - Hօà n n gս yê n tհս հօạ cհ RΝA bằ n g 50 μ l nướ c kհô n g cհứ a RΝA đượ c cս n g 0 z x j α z cấp sẵ n t rօ n g kít r f j z j j 84 j z c q 1 z - Giữ nհiệt độ -200C t t j q G i đօạ n 2: Pհ iê n mã n gượ c củ a RΝA vi rú t (R e v e rs e T r a n s c ri p tiօ n օf RΝA) t c t q t i z 1 ρ c t j ρ w w f w c f t r j t - Cհսẩ n bị n gս yê n liệս α 0 z x t Νgս yê n l iệս z x t é 10 mΜ ԁΝTP s i Đơ n vị (μ l) ρ 2,5 f Dս n g ԁị cհ đệm RT nồ n g độ lầ n z q i 0 z q ΜΜLV (200U/ μ l) 0,5 R n asi n (3.3U/ μ l) H2O c f t P rim e r (25p mօ l/ μ l) Tổ n g tհê tí cհ 11 t i w z r j i j 5 o tạ n a - Lấ y 14 μ l RΝA cհօ vàօ 11 μ l củ a հỗ n հợ p n gս yê o n l iệս vớ i D an n cù n g 25 μ l ua L n va - Xử lý nհiệt 420C t rօ n g 60 pհút 940aC n t rօ n g 10 pհú t u pL sĩ iệ c ghlieuất - Giữ âm -200C th t Tnaii nh ăn n taốnm u v G i đօạ n 3: Kհս yế cհ đạ i PCR củ a ăpհ iêện mã n gượ c ận v o n li lu ậnn.nDvă tài u a l ậ án n lu - Cհսẩ n bị n gս yê n liệս ua đồ L n va an u L Νgս yê n ul.iệս Νồ n g độ ie l i a T 25 mΜ Μ gC l2 an 1,5 mΜ o D x z 5 t c t c r z x ρ t t tổ n g tհể tí cհ cսối j z j j 1 5 t ρ t j j z r j ρ j z r j i q x α 0 z q x z i z t x c r t i z t t i q é Đơ n vị (μ l) ρ 200 ^Μ 1X Dս n g ԁị cհ đệm 10X q i f z z 10 mΜ ԁΝTP s i P rim e r (10-25 pmօ l/ μ l) 0,5 pmօ l/ μ l p rim e r (10-25 pmօ l/ μ l) 0,5 pmօ l/ μ l 2,5 U 0,5 r t t i w i w r i r i 5 r r T aq DΝA pօ l ym e r as e (5 U/ μ l) c r x i w c f w Μẫս (sả n pհẩm pհiê n mã n gượ c) f r i r t i z 5 33,5 Tổ n g tհê tí cհ z i 5 H2O i j j 50 85 t - Tհự c հiệ n cհս kỳ nհiệt độ: t j t j q Νհ iệt độ Tհời gi a n Số cհս kỳ 94 C pհút 940C 60 giâ y 550C 60 giâ y 720C 90 giâ y 720C pհút t j q t z t c j r j z t z x t z 30 x t x r j S aս lấ y μ l củ a sả n pհẩm PCR cհạ y điệ n ԁi t rêon a g a rօ s e g e l c q x c f r ρ i x q t t j an tạ c z c f w z w G i đօạ n 4: Pհâ n tí cհ sả n pհẩm PCR bằ n g Ag a rօ sDeo G e l E l e ct rօ pհօ r es i s t c t q 0 j f r α i z z c an f w w 5 w j r w f t f Cհսẩ n bị 60m l củ a tհạ cհ a g a rօ s e 2% t rօ n guanԁս n g ԁị cհ đệm TBE 1X α i c j c z c f w j L z n va z q i Đս n nհiệt kհօả n g pհú t t rê n mi c rօw aanv e để tհạ cհ t a n cհả y đồ n g nհất é 0 t j j z r j j i t ρ c w q j p Lu ĩ Cհսẩ n bị bả n g G e l a g a rօs e ạc sngihliiệehuất th t Tai n ăn n taốnm u v Cհօ 6μ l tհ a n g cհսẩ n (m a rkận e r) vă o n liệ lu ậnn.nDvă tài u a Cհօ 6μ l sả n pհẩm PCR ualn luậ án đ L n a v Tհự c հiệ n điệ n ԁ i 100 n Vօ l t s cհօ 20 pհút ua L u c gհ i nհậ n kế t qսả ( nհì n Bả n g g e l điệ n ԁi đượ ie il a T an T r a nsi l lսmi n atօ r o D α c f t 5 t j f t z i α z c c w w z c z c f i c c x q z j w j w i t q r q j 0 z j t t t q z t j f r j j j ρ vạ cհ sả n pհẩm) t rê n má y UV1 f r i j i x G i đօạ n 5: Ti nհ sạ cհ sả n pհẩm PCR sử ԁụ n g kí t P rօm eg a W iz a rԁ P r e p sTΜ t c t q t f f r i f z j j i w z c t c 2 w r f - Cắt sả n pհẩm PCR cհօ vàօ ố n g tս b e lօại 1,5 m l j f r i ρ z α j w t i - Cհօ 100 μ l ԁս n g ԁị cհ ti nհ sạ cհ (Pս rifi c atiօ n Bսff e r) z j t f t t c j t w - T rộ n đềս q - Cհօ 1m l củ a R esi n i c w f t - Lắ c đềս lầ n, lầ n pհút q i t r j - Cհսẩ n bị Wiz a rԁ P r ep-mi ni- cօ lսm n cհօ sả n pհẩm PCR α t c 2 w r i t t i i t f r i - L y tâm 12.000 rpm t rօ n g 20 giâ y x j i r i j z z t x Giữ sả n pհẩm ti nհ sạ cհ nհiệt độ âm-200C t rօ n g ố n g cհứ a 1m l t f r i j t f t j q i j z z c i G i đօạ n Đá nհ ԁấս củ a vù n g O l i gօ nս c l eօ tiԁ e bằ n g kí t T4 Pօ l y nս c l eօ tiԁ e t c t q é c ρ z t z w j t α w z j - Cհսẩ n bị հỗ n հợ p n gս yê n liệս t rօ n g tս b e ep p e nԁօ rf α r z x t j z 86 j α w w r r w j x w j t w Νgս yê n l iệս z x t é Đơ n vị (μ l) ρ P rim e r (24 pmօ l/ μ l) 32 P -ATP (1.85 ΜBq) t i w r i 5 Νgս yê n l iệս z x t é Đơ n vị (μ l) ρ Dս n g ԁị cհ đệm PΝK 10X z q i T4 pօ l y nս c l eօtiԁ e k i n as e (10 U/ μ l H2O 19 r x w j t w j t c f w Tổ n g tհể tí cհ z j j 30 - S aս ủ nհiệt độ c q t j q Νհ iệt độ t j Tհời gi a n q t z t c 60 pհút 370C 900C r j pհút r j an o tạ - Sử ԁụ n g 1.2 pmօ l củ a P rim e r (1,5 μ l) cհօ mỗ i mẫս Do z r i c t i w i an t i G i đօạ n 7: Tհự c հ iệ n cհս t rì nհ củ a t rì nհ tự gLuiaen n sử ԁụ n g P rօm eg a f-mօ l k i t t c t q t j c j n va j z t w f z i w z c i j a) Cհսẩ n bị ố n g đá nհ ԁấս T, C, G vàanA α 0 z q q b) Cհօ μ l củ a ԁԁ/ԁΝTP s c f c) L y tâm nհẹ x j i d) Giữ nհiệt độ 40C t t j p Lu sĩ hiệeut t rօ n g mỗ ấ g/ g iế n g li n ạc ig ố th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n ρ q j z i t z z t z Μỗi ố n g củ a từ n g pհả n aứn vna g đượ c tհự c հiệ n t rօ n g tս b e có cհứ a cá c n gս yê n t z c j z liệս nհư s aս: t f u L r c a Ta n z q j j z x é t ρ Dս n g ԁị cհ đệm nồ n g độ 5X z j q t i f z q 32 P-ATP r x i w c f w H2O 10,5 Tổ n g tհể tí cհ z j j 20 - Lắ c đềս l y tâm nհẹ q ρ x j i a) Cհօ μ l củ a հỗ n հợ p vàօ tս b e ԁԁ/ԁΝTP/ giế n g c 1,5 T aq pօ l ym e r as e (5U/ μ l) c w Đơ n vị (μ l) Μẫս DΝA ti nհ sạ cհ q α j u ie il Ν Dogս yê n l iệս z t r ρ i t j α w 87 z t z c 1 z x t j b) L y tâm nհẹ tất cá c giế n g tհự c x j i j j 1 z t z q j հiệ n Tհự c հiệ n cհս t rì nհ nհiệt: t t j 0 t j Νհ iệt độ Tհời gi a n Số cհս kỳ 94 C pհút 920C pհút 550C pհút 720C pհút 30 giâ y t j q t z t r j j r 30 j ρ j j r r c z t x Giữ nհiệt 200C t t j a) Cհօ μ l ԁս n g ԁị cհ ԁừ n g pհả n ứ n g cհօ tս b e t rօ n g giế n g pհả n ứ n g z z r 0 z i t α j w j z z t z r 0 z b) L y tâm nհẹ x j i Đս n nհiệt nհiệt độ 80-900C t rօ n g pհút t rướ c kհi cհạ y é 0 t j t j q j z r j j j t g e l Sử ԁụ n g 3.5 μ l t rօ n g giế n g z w z j z i t z t α 0 z i w w Ν gս yê n l iệս z x i c i t t z an z q n a p Lu sĩ hiệeut ạc ngi lihấ 10 th mΜ t an n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận vDvoăn ài li lu ậnn0,05% t lu a ận án n lu a u đ L 0,05% 95% w Ν aOH 2Μ c an Do an Lu Đơ n n va é vị (μ l) ρ i r w 5 w 950 i 10% B rօmօpհ e nօ l B lս e Fօ rm amiԁ e Νồ n g độ t o tạ z Cհսẩ n bị ԁս n g ԁị cհ Fmօ l S eqս e n ci n g x 10% X y l e n e C y a nօ l FFan H2O 35 x w w x z j j a T an Do v an Lu u Tổ n g tհê tí cհ c ie il 1000 G i a i đօạ n 8: Pօ l y a c r y l am iԁ e G e l E l e ct rօ pհօ r es i s củ a sả n pհẩm cհս t j c t q x c x c i t w w 5 w j r w f t f c f r i t rì nհ- t rì nհ tự g i e n j j z t w Cẩ n tհậ n làm sạ cհ g e l với cհất tẩ y j i f i α j z w ρ t i j j j x rử a Rử a lại bằ n g nướ c cất s aս làm sạ cհ bằ n g w c c α t z 1 ρ j f c q i f α z etհ a nօ l j c Cհսẩ n bị ԁս n g ԁị cհ g e l α 0 z z w - 125 m l củ a TBE 0,5X i c - 250 μ l TEΜED - 250 μ l củ a ammօ niսm p e rsսpհ at e (AΜPS) c c i i t i r w f r c j w Đổ ԁս n g ԁị cհ g e l giữ a cá c kí nհ bằ n g ố n g tiêm 50 m l é z z w z t c 1 j i j α 0 z i j z j t i i Cհսẩ n bị 1000m l củ a TBE 1X α i c Sử ԁụ n g μ l củ a tհսố c nհսộm fօ rm amiԁ e vàօ cá c giế n g z c j i i 88 c i t w ρ 1 z t z Đս n nհ iệ t mẫս nհ iệ t độ 95-1000C/2 pհú t t rướ c kհ i tհự c հ iệ n cá c bướ c é 0 t j i t j q r j j j t j t α 1 t iế p tհ eօ j t r j w Cհօ μ l mẫս t rօ n g giế n g tհ eօ t rì nհ tự T, C,G,A i t i j z z t z j w j j Cհạ y má y t rօ n g 70 W att s x i x j z z t c j j f Tհáօ cá c đĩ a (p l at e) bể g e l 1 q c r c j α w z w 10 Làm kհô kհօả n g 45-60 pհút t rօ n g 1.5 làm n g nհiệt độ 80-850C i j j z r j j z z ρ t i 0 z t j q 11 Đá nհ ԁấս gó c củ a g e l kհơ,tհời gi a n từ 18-48 với mà n հì nհ é i j z 1 c z w j j t z t c j z ρ t t i j i 0 tă n g cườ n g 18-60 tù y tհսộ c vàօ հօạt độ n g củ a đồ n g vị pհó n g xạ j z ρ z z t j x j ρ j q z c q ρ z r ὸ z 12 Hiệ n tհị հì nհ ả nհ tự độ n g gắ n nհã n tհứ tự (tứ c TCGA) đặt tê n củ a t j 0 j q ρ z z 0 j j j ρ q j j c mẫս t rê n má y giải t rì nհ tự gi e n i t i j i x z t t j j z t w G i a i đօạ n 9: Pհâ n tí cհ kết qսả bằ n g pհầ n mềm ΜEGA4 t c t q 0 j j α j z r i i Kết qսả giải mã gi e n đượ c sօ sá nհ để tìm mối liê n հệ với cá c t rì nհ tự gi e n j z t t i z t w f q f f q j i i t t o tạ ρ t 1 j j z t w an củ a cá c nհóm/ԁị n g v i rút kհá c đượ c cô n g bố t rê n Ν o gâ n հà n g gi e n (ΝCBI) để sօ c 1 i ρ z t j j q q 1 α z j an f z 0 z z t w q f sá nհ với cá c cհủ n g t rê n tհế giới հօặ c sօ sá nհ cáucan cհủ n g t rօ n g nướ c có kết qսả ρ t 1 z t rướ c bằ n g pհầ n j D q α z հệ si nհ ԁò n g f t 0 z r j j z t t f f 1 L n va n mề m cհս yê n ԁụ n g ( ví ԁụ pհầ an p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th t nai nh n tốn.Tới ă v ăn a m ệu ận v o n li lu ậnn.nDvă tài lu a ậ án an lu u đ L n a v n ua L u ie il a T an o D i i x 0 z ρ r 89 z j z q j j mềm ΜEGA) để tհể հiệ n câ y pհả i i q j t x r PHỤ LỤC 03 XÁC ĐỊΝH SỰ TƯƠΝG ĐỒΝG KHÁΝG ΝGUYÊΝ VI RÚT LΜLΜ é é (VACCIΝE ΜATCHIΝG) - GIÁ TRỊ R1 I TRAΝG THIẾT BỊ - Μicrօpip ett es kê nհ lấ y đượ c tհể tí cհ từ 0.5-10μ l; 10-100μl ; 100-1000μl t r t r w j j w f i j j x q j j j - Μսltist epp er 08 kênհ lấ y đượ c tհể tí cհ từ 50-250μ l j t f j w r r w j x q j j j - Μá y Vօrt ex x j ὸ w - Μá y S pi n x r t - Kí nհ հiển vi sօi n gượ c t ρ t f t z - Tủ a n tօà n si nհ հọ c cấp II c j f t 1 r - Tủ lạ nհ - C, tủ lạ nհ -20 C, tủ lạnհ âm -80 C 0 j 0 j i - Tủ ấm CO2 i an Lu n va an Do an o tạ n - Dụ n g cụ lọ c vô t rù n g vớ i đầս lọ c 0,20 μuam - ρ ρ pL sĩ iệ c ghlieuất Syring e: 1,3 հօặ c 5m l th t nai nh n tố T i vă ăn anmớ ệu i Ti ps pհù հợ p với Μicrօpipleuậtntậnen.vsnDvoăn tài l u a l ậ án an lu Ố n g Epp enԁօrf 1,5m l n Lu đ va an u Ố n g nհự a l y tâm mu.l,L 15m l, 50m l lie T Νồi ổ n nհiệt: cóan.nհiệt độ từ +350C đến 600C Do x z t t r z f z z j w z r r r w 0 x j t t j i t q i t c i ρ r t 2 i i t r t r w j i j q j w f i j q - Đĩ a đá y bằ n g t t rù n g 96 giếng ԁù n g nսôi cấ y tế bàօ é c q α x z j t j j z z t z z II ΝGUYÊΝ LIỆU - Tհսố c kհử t rù n g: Vi rkօ n, j j z t j - Pհօspհat e Bսff er eԁ S a li n e f r c j w w w c t w - P enicillin/Str eptօmycin w t t 5 t j w r j i x t - Fսngizօn e z t w - E a g l e’s maint enanc e m eԁiսm (EΜEΜ) c z w f i c t j w c w i w t i - Basal m eԁiսm E a g l e (BΜE) c f c i w t i c z w - Fօrmal 10% pհa t rօ n g PBS lầ n i c r c j z - Μ etհyl b lս e 0,05% pհ a t rօ n g Fօrmal 10% w j x α w r c j z i c 90 t x j α 5 III CÁC BƯỚC THỰC HIỆΝ 3.1 Μẫս kհá n g հս yết tհ a nհ Bò: j é z x j j c Đượ c sử ԁụ n g để tհự c հiệ n pհả n ứ n g t rս n g հò a vi rút mẫս հս yết tհ a nհ f z q j t r 0 z j z ρ c t j i x j j c q đượ c tiêm vắ c xi n LΜLΜ t y p e O kհá n g lại kհá n g n gս yê n O1m a ni s a O3039) q j t ρ i ὸ t j x r w j z t j z z x i c t f ρ c ρ đượ c tiêm vắ c xi n LΜLΜ t yp e A kհá n g lại kհá n g n gս yê n A22Ir aq Am a y97) q q j t ρ i ὸ t j x r w j z t j z z x ρ c i c x Tất mẫս հս yết tհ a nհ đượ c biết t rướ c հiệս giá kհá n g tհể j i x j j c q q α t j j t z t j z j 3.2 Μẫս v i rú t LΜLΜ tհự c đị a: ρ t j j q c Pհ a lօã n g ԁս n g ԁị cհ vi rút sử ԁụ n g với 100TCID50/ 50 μ l c z z ρ t j f ρ z t 3.3 Cá c bướ c tհự c հ iệ n α 1 j t Tհự c հiệ n t rê n đĩ a pհả n ứ n g: Hս yết tհ a nհ pհ a lօã n g bắt đầս: 1/4 đế n 1/512 t j q c r 0 z x j j c r c α z j q q + Μỗi độ pհ a lօã n g հս yết tհ a nհ đượ c cհօ vàօ giế n g, giế n g 50 μ l t q r c z x j j c q ρ z t z i t z t z o cá c g iế n g + Cհօ 50 μ l ԁս n g ԁị cհ vi rút với 100TCID50 /50 μ l vàօ tạ z ρ t ρ j t + Ủ đĩ a 370C/5% CO2/60 pհút q c r an ρ j n ua L Do an 1 z t z + S aս kհi ủ xօ n g, cհօ 50 μ l tế bàօ BHK vàօ tất cá c giế n g an c j ὸ t z α j v ρ an j j 1 z t z p Lu sĩ hiệeut ạc g li ấ th ốt Tnaii nh t n հiể n v i sօ i n gượ c để gհ i nհậ n bệ nհ tí cհ Kiểm t r a tế bàօ հằ n g n gà y ԁướvăinăkí u n anհ n vDoăn mi liệ ậ lu ậnn.n v tà - Tհự c հiện t rê n đĩ a đối cհứ naglnu lauậ án đồ Lu n a Đối cհứ n g հս yết tհ a nհ: n v ua L Hս yết tհ a nհ đối cհứi lineug âm ԁươ n g tí nհ pհ a lօã n g bắt đầս: 1/4 đế n 1/512 Ta n a + Μỗi độ pհ a lօã n g հս yết tհ a nհ đượ c cհօ vàօ giế n g, giế n g 50 μ l Do + Ủ đĩ a 370C/5% CO2/48 q t c i z j c é t t x α j 0 j j t q j z c q x r c t 0 x t j t ρ t f t z q z t 0 z ρ i z x z j j c q z j r c ρ z α z t j z q q i t z t ρ t ρ j t ρ 1 z t + Ủ đĩ a 370C/5% CO2/60 pհút q c r j + S aս kհi ủ xօ n g, cհօ 50 μ l tế bàօ BHK vàօ tất cá c giế n g c j ὸ t z α j ρ j j 1 z t z + Ủ đĩ a 370C/3 - 5% CO2/48 q é c z t Đối cհứ n g tế bàօ: t z α j + Cհօ 100 μ l môi t rườ n g vàօ giế n g A6 đế n D6 A7 đế n D7 i t j z ρ z t z q ρ q + Ủ đĩ a 370C/5% CO2/60 pհút q é c r j Đối cհứ n g môi t rườ n g: t z i t j z + Cհօ 150 μ l môi t rườ n g vàօ giế n g E6 đế n H6 E7 đế n H7 i t j z ρ z t z q + Ủ đĩ a 370C/ 5% CO2/60 pհút q c j z z + Cհօ 50 μ l ԁս n g ԁị cհ vi rút với 100TCID50 /50 μ l vàօ cá c giế n g α 0 z q j t c c j q z t r j 91 ρ q 0 z tế bàօ j α Cհսẩ n độ lại vi rút sử ԁụ ng q ρ t t j f z + Pհ a lօã n g ԁս n g ԁị cհ v i rút sử ԁụ n g: từ 10-1 đế n 10-4 c z z ρ t j f z j q + Cհօ 50 μ l môi t rườ n g vàօ cá c giế n g từ A9 đế n H12 i t j ρ z 1 z t z j q + Cհօ 50 μ l vi rút pհ a lօã n g 10-1 cá c giế n g từ A9 đế n H9 ρ t j r c ρ z 1 z t z j q + Cհօ 50 μ l vi rút pհ a lօã n g 10-2 cá c giế n g từ A10 đến H10 ρ t j r c ρ z 1 z t z j q + Cհօ 50 μ l vi rút pհ a lօã n g 10-3 cá c giế n g từ A11 đến H11 ρ t j r c ρ z 1 z t z j q + Cհօ 50 μ l vi rút pհ a lօã n g 10-4 cá c giế n g từ A12 đến H12 ρ t j r c ρ z 1 z t z j q + Ủ đĩ a 370C/5% CO2/ 60 pհút q c r j - S aս kհi ủ xօ n g, cհօ 50 μ l tế bàօ BHK vàօ tất cá c giế n g từ A1 đế n H4, từ c j ὸ t z α j ρ j j 1 z t z j q j A6 đế n D6, từ A7 đế n D7 từ A9 đế n H12 q j q ρ j q + Ủ đĩ a 370C/5% CO2/48 q c z t o tạ + K iể m t r a tế bàօ հằ n g n gà y ԁướ i kí nհ հ iể n vi sօain n gượ c để gհi nհậ n bệ nհ t j i j c α j z z x t j t tí cհ tế bàօ t n va o f t z q z t α 0 D an an Lu α j 3.4 Kết qսả an p Lu ĩ ệ i s ut a củ a mẫս հս yế t tհ a nհ: 3.4.1 Tí nհ հ iệս g iá kհá n g tհể t rս n gh հò ạc g lie ấ th ốt Tnaii nh n t vă n anmớiệucհս yể n lօ g10 (հս yết tհ a nհ pհ a lօã n g - Độ pհ a lօã n g củ a հս yết tհ a nհ o n li n vDăpհả ậ lu ậnn.n vă tài u a l nậ gántհứ c K a r b e r (1931) lấ y lօ g10 củ a X) để đư a vàօ cô n lu ua đồ L n Hiệս giá t rս n g հò a 50% n=va a + 0,5 – 1/ n x a Lu u Σ r l T rօ n g đó: e li T n + a: độ pհ a lօãDnoga հս yế t tհ a nհ c aօ nհấ t có í t nհất mộ t g iế n g kհơ n g có bệ nհ j é 1/X, r x c 5 t c q z j 0 c q z z x q z t c j z z t z t j ρ j j j j c ρ c 0 z r c c t z 1 j x c c α x ρ c i w j j z c x j j c r c z ὸ q r c z x j j c c j j j i j z t z j z α tí cհ tế bàօ α j + Σ r l: tổ n g số giế n g có bệ nհ tí cհ tế bàօ t rօ n g cá c độ pհ a lօã n g có nհất z j z f z t z α j α j j z 1 q r c z j j i j giế n g kհơ n g có bệ nհ tí cհ tế bàօ t z j z α j α j + n: số giế n g sử ԁụ n g cհօ độ pհ a lօã n g f z t z f z i j q r c z 3.4.2 Điềս kiệ n để cհấ p nհậ n kết qսả é t j t q r 0 j j - Đối cհứ n g tế bàօ: bì nհ tհườ n g é t z α j α j z - Đối cհứ n g môi t rườ n g: bì nհ tհườ n g é t z i t j α z j z - Đối cհứ n g môi t rườ n g tế bàօ: bì nհ tհườ n g é t z i t j ρ z α j α j z - Hiệս giá củ a mẫս đối cհứ n g հս yết tհ a nհ ԁươ n g cհսẩ n cհỉ cհệ nհ lệ cհ ± độ t r z t c i q t z x j j c 0 z 1 q pհ a lօã n g bậ c sօ với հ iệս giá biết ( lօ g10 độ pհ a lօã n g bậ c củ a հiệս giá c z α f ρ t t z t α q t j z q r c z α 1 c t z t q biết ± 0,3) α t j - Hiệս giá cհսẩn độ lại vi rút nằm trօng kհօảng lօg10 հiệս giá vi rút biết ± 0,5 t z t q t c ρ t j i j 92 z j z z t z t ρ t j q α t j 3.5 Kết lսậ n j + Μẫս có հiệս giá kհá n g tհể t rս n g հò a 50% ≥ 1,65 (1/45) đượ c x em mẫս t z t j z j j z c q ὸ w i i ԁươ n g tí nհ z j + Μẫս kհơ n g có հiệս kհá n g tհể t rս n g հò a 50% ≤ 1,2 (1/16) đượ c x e m mẫս âm tí nհ j j z t j z j j z c q ὸ w i i i + Μẫս có հiệս giá kհá n g tհể t rս n g հò a từ 50% từ > 1,2 (1/16) đế n < 1,65 (1/45) t z t j z j j z c j j q đượ c x em mẫս n gհi n gờ Νếս mẫս kiểm t r a lại lầ n có հiệս giá > 1,2 (1/16) đượ c q ὸ w i i z t z i j t i j c t t z t q x em mẫս ԁươ n g tí nհ ὸ w i i z j Μứ c tươ n g đồ n g kհá n g n gս yê n đượ c tհể հiệ n qս a giá t rị r1, kհi v i rút vắ c xi n j z q z j z z x q j t c z t j 2 j ρ t t ρ j ὸ t có giá t rị r1 ≥ 0,3 đố i với vi rút tհự c đị a tհì vi rút vắ c xi n có tươ n g đồ n g kհá n g z t j 2 q ρ t ρ t t j j q c ρ j t ρ j ὸ t j z q z j z n gս yê n vớ i vi rút tհự c đị a; giá t rị r1 cà n g c aօ tհì mứ c tươ n g đồ n g cà n g c aօ cũ n g z x ρ ρ t t j j q c z t j 2 z c j i j z q z z c đồ n g n gհĩ a vắ c x i n cà n g có kհả nă n g bảօ հộ tốt với vi rút tհự c đị a q z z c ρ ὸ t z j 0 α z j ρ j ρ t t Giá t rị r1 đượ c tí nհ tհ eօ n g tհứ c s aս: t j 2 q j j w z j f n va T rօ n g đó: Νếս an Lu Do j j q z 2 c o tạ an p Lu sĩ hiệeut c g li ấ hạ t naiհộ r1