Thí nghiệm Hóa lý - Đại học Thủy lợi

I I THÍ NGHIỆM HĨA LÝ I I MỤC LỤC HÀ NỘI 2019 MỤC LỤC LỜI GIỚI THIỆU PHẦN I: NHIỆT ĐỘNG HÓA HỌC BÀI 1: XÁC ĐỊNH NHIỆT HOÁ HỌC 1.1 Mục đích 1.2 Lí thuyết 1.3 Hoá chất dụng cụ 1.4 Tiến hành thí nghiệm 1.4.1 TN 1: Xác định nhiệt dung riêng nhiệt lượng kế 1.4.2 TN2: Xác định nhiệt hoà tan CuSƠ4 khan CUSO4.5H2O 1.4.3 TN3: Xác định hiệu ứng nhiệt phản ứng trung hoà HC1 vàNaOH 1.5 Câu hỏi 1.5.1 Câu hỏi chuân bị trước thực hành thí nghiệm 1.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 10 1.6 Báo cáo thí nghiệm 10 1.6.1 Các kết thí nghiệm 10 1.6.2 Tính tốn số liệu phân tích kết thí nghiệm 10 BÀI 2: ÚNG DỤNG ĐỊNH LUẬT PHÂN BỐ XÁC ĐỊNH HẰNG SỐ CÂN BẰNG HOÁ HỌC 11 2.1 Mục đích 11 2.2 Lí thuyết 11 2.3 Hoá chất dụng cụ 12 2.4 Tiến hành thí nghiệm 12 2.4.1 TN1: Xác định hệ số phân bố I2 lớp CCI4 lóp H20 12 2.4.2 TN2: Xác định nồng độ chất tham gia phản ứng số cân 14 2.5 Câu hỏi 15 2.5.1 Câu hỏi chuân bị trước thực hành thí nghiệm 15 2.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 15 BÀI 3: TÍNH TAN HẠN CHẾ CỦA CHẤT LỎNG (PHENOL-NƯỚC) 17 3.1 Mục đích 17 3.2 Lí thuyết 17 3.2.1 Giản đồ độ tan hệ hai chất long hoà tan hạn chế 17 3.2.2 Phương pháp xây dựng giản đồ độ tan hai chất lỏng 18 3.3 Hoá chất dụng cụ 18 3.4 Tiến hành thí nghiệm 19 3.4.1 Đo nhiệt độ hệ phenol-nước tỉ lệ tích khác 19 3.4.2 Vẽ giản đồ tính tan hệ phenol-nước theo nhiệt độ 21 3.5 Câu hởi 21 3.5.1 Câu hỏi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 21 3.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 21 BÀI 4: CÂN BẰNG LỎNG-HƠI CỦA HỆ HAI CẤU TỬ 22 4.1 Mục đích 22 4.2 Lí thuyết 22 4.3 Hoá chất dụng cụ 25 4.4 Tiến hành thí nghiệm 25 4.4.1 Chuẩn bị dung dịch xây dựng đường chuẩn Chiết suất-Thành phần 25 4.4.2 Xác định nhiệt độ sôi thành phần pha cân 26 4.5 Câu hỏi .27 4.5.1 Câu hỏi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 27 4.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 27 BÀI 5: PHƯƠNG PHÁP NGHIỆM LẠNH 28 5.1 Mục đích 28 5.2 Lí thuyết 28 5.3 Hoá chất dụng cụ 29 5.4 Tiến hành thí nghiệm 30 5.5 Câu hởi 32 5.5.1 Câu hỏi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 32 5.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 32 PHÀN II: ĐIỆN HÓA HỌC 33 BÀI 6: ĐO ĐỘ DẦN ĐIỆN CỦA DUNG DỊCH ĐIỆN LI 33 6.1 Mục đích 33 6.2 Lý thuyết 33 6.2.1 Độ dẫn điện riêng độ dẫn điện đương lượng 33 6.2.2 Phương pháp đo độ dẫn điện 36 6.3 Hoá chất dụng cụ 38 6.4 Tiến hành thí nghiệm 39 6.4.1 Xác định số bình K 39 6.4.2 Xác định độ dẫn điện đương lượng giới hạn dung dịch HC1 39 6.4.3 Xác định số phân li axit CH3COOH 40 6.5 Câu hỏi 40 6.5.1 Câu hỏi chuân bị trước thực hành thí nghiệm 40 6.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 40 BÀI 7: SỨC ĐIỆN ĐỘNG CỦA PIN ĐIỆN HOÁ 41 7.1 Mục đích 41 7.2 Lý thuyết 41 7.2.1 Pin Ganvani 41 7.2.2 Sức điện động pin Ganvani 41 7.2.3 Phương pháp đo sức điện động pin Ganvani 43 7.3 Hoá chất dụng cụ 45 7.4 Tiến hành thí nghiệm 46 7.4.1 Đo sức điện động pin Đanien - Jacobi 46 7.4.2 Xác định điện cực đồng kẽm 47 7.5 Câu hỏi 48 7.5.1 Câu hởi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm .48 7.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 48 PHẦN III: ĐỘNG HÓA HỌC 50 BÀI 8: KHẢO SÁT ĐỘNG HỌC CỦAPHẢN ÚNG BẬC 50 8.1 Mục đích 50 8.2 Lý thuyết 50 8.3 Hoá chất dụng cụ 51 8.4 Tiến hành thí nghiệm 52 8.5 Tính tốn đánh giá kết thí nghiệm 53 8.6 Câu hỏi 54 8.6.1 Câu hỏi chuân bị trước thực hành thí nghiệm 54 8.6.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 54 BÀI 9: KHẢO SÁT ĐỘNG HỌC CỦAPHẢN ÚNG BẬC 55 9.1 Mục đích 55 9.2 Lý thuyết 55 9.3 Hoá chất dụng cụ 55 9.4 Tiến hành thí nghiệm 56 9.4.1 TN 1: Tìm số tốc độ phản ứng .56 9.4.2 TN2: Xác định lượng hoạt hóa phản ứng 57 9.5 Tính tốn đánh giá kết tiến hành thí nghiệm 58 9.6 Câu hỏi 59 9.6.1 Câu hỏi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 59 9.6.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 60 PHẢN IV: HÓA HỌC BỀ MẶT 61 BÀI 10: HẤP PHỤ 61 10.1 Mục đích 61 10.2 Lý thuyết 61 10.3 Hoá chất dụng cụ 63 10.4 Tiến hành thí nghiệm 63 10.5 Tính tốn đánh giá kết tiến hành thí nghiệm 63 10.5 Câu hỏi 64 10.5.1 Câu hởi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 64 10.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 64 PHÀN V: HÓA KEO 65 BÀI 11: ĐIỀU CHẾ KEO VÀ KEO TỤ 65 11.1 Mục đích 65 11.2 Lý thuyết 65 11.2.1 Giới thiệu hóa học chất keo phân loại hệ phân tán 65 11.2.2 Cách điều chế hệ phân tán 65 11.2.3 Cấu trúc hạt keo (mixen keo) 66 11.2.4 Đặc điểm hệ keo 67 11.3 Hoá chất dụng cụ 69 11.4 Tiến hành thí nghiệm 69 11.4.1 Chế tạo keo Fe(OH)3 phản ứng thuỷ phân 69 11.4.2 Khảo sát tính chất hệ keo 69 11.4.3 Xác định ngưỡng keo tụ sol Fe(OH)3 Na?SO4 (hoặc K2SO4) 70 11.5 Tính tốn ngưỡng keo tụ sol Fe(OH)3 71 11.6 Câu hỏi 72 11.6.1 Câu hỏi chuẩn bị trước khithực hành thínghiệm 72 11.6.2 Câu hỏi trả lời sau thực hànhthí nghiệm 72 PHẦN VI: HÓA LÝ SINH 73 BÀI 12: ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP so MÀU BRADFORD 73 12.1 Mục đích 73 12.2 Lí thuyết 73 12.3 Hoá chất dụng cụ 73 12.4 Tiến hành thí nghiệm 74 12.4.1 Xây dựng đường chuấn với dung dịch protein chuân 74 12.4.2 Xác định hàm lượng protein có mẫu cần phân tích 75 12.5 Câu hỏi 75 12.5.1 Câu hỏi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 75 12.5.2 Câu hởi trả lời sau thực hành thí nghiệm 75 BÀI 13: XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME 76 13.1 Mục đích 76 13.2 Lí thuyết 76 13.2.1 Enzyme đơn vị đo hoạt tính enzyme 76 13.2.2 Hoạt tính riêng enzyme phương pháp chung xác định hoạt tính enzyme 77 13.2.3 Enzyme amylase phương pháp xác định hoạt tính enzyme amylase 77 13.3 Hoá chất dụng cụ 77 13.4 Tiến hành thí nghiệm 78 13.4.1 Trích ly enzyme 78 13.4.2 Pha loãng enzyme 78 13.4.3 Đo mật độ quang xác định hoạt tính enzyme 79 13.5 Câu hỏi 79 13.5.1 Câu hỏi chuẩn bị trước thực hành thí nghiệm 79 13.5.2 Câu hỏi trả lời sau thực hành thí nghiệm 79 Thỉ nghiệm Hóa ỉỷ CNSH - ĐHTL 2020 LỜI GIỚI THIỆU Sách Thí nghiệm Hóa lý dùng làm tài liệu giảng dạy thức cho mơn học Thí nghiệm Hóa lý dành cho sinh viên ngành Cồng nghệ Sinh học, Trường Đại học Thủy lợi Nội dung Thí nghiệm Hóa lý minh họa lý thuyết hóa lý thơng qua thí nghiệm Ngồi mục đích củng cố kiến thức lí thuyết hóa lý, mơn học cịn nhằm mục đích hướng dẫn, rèn luyện cho sinh viên kỹ thực hành hóa lý Sách Thí nghiệm Hố lý có thời lượng 30 tiết (1 tín thực hành) gồm thực hành tham khảo từ giáo trình thực hành ngồi nước làm thực nghiệm kiếm tra cấn thận Trong q trình biên soạn Sách Thí nghiệm Hố lý, chúng tơi góp ý nhiều cán Viện Kỹ thuật Hóa học, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Khoa Hóa học,Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội cán giáo viên Bộ mơn Hóa sở, Trường Đại học Thủy lợi Chúng xin chân thành cảm ơn bảo, góp ý tận tình thầy cô bạn đồng nghiệp Tuy Sách Thí nghiệm Hố lý khơng tránh khỏi thiếu sót nội dung hình thức Vì chúng tơi mong góp ý chân thành thầy, cô giáo, bạn sinh viên để hồn thiện thêm cho Sách Thí nghiệm Hố lý thời gian tới Hà Nội, ngày 20 thảng 06 năm 2019 Bộ mơn Hóa sở _ Thí nghiệm Hóa lý CNSH - ĐHTL 2020 PHẦN I: NHIỆT ĐỘNG HĨA HỌC BÀI 1: XÁC ĐỊNH NHIỆT HỐ HỌC 1.1 Mục đích Xác định nhiệt hồ tan C11SO4 khan CUSO4.5H2O nước Xác định nhiệt phản ứng trung hồ 1.2 Lí thuyết Các q trình hố học xảy có kèm theo giải phóng hay hấp thụ nhiệt Hiệu ứng nhiệt kèm theo q trình hồ tan mol chất tan lượng dung mơi để thu dung dịch có nồng độ xác định gọi nhiệt hồ tan chất đó, xác định thực nghiệm nhiệt trình Nhiệt lượng toả phản ứng axit mạnh bazơ mạnh, nhiệt q trình hình thành nước từ mol H+ mol OH‘ nhiệt phản ứng trung hoà, nhiệt xác định thực nghiệm Nhiệt hidrat hố nhiệt lượng trình tạo thành mol muối ngậm nước từ mol muối khan lượng nước tương ứng, nhiệt không đo trực tiếp, áp dụng định luật Hess q trình hồ tan dạng khan ngậm nước đế tính Trong thí nghiệm sử dụng nhiệt lượng kế đế đo nhiệt lượng cửa q trình hồ tan, q trình trung hồ axit - bazơ Nhiệt lượng kế bình phản ứng cách nhiệt tốt có trang bị nhiệt kế đũa khuấy Phần chủ yếu nhiệt lượng kế bình nhiệt lượng kế lớp vỏ ngăn cản trao đổi nhiệt nhiệt lượng kế với mơi trường xung quanh Bình nhiệt lượng kế thường bình đậy kín nắp Nút có khoan lỗ để cắm nhiệt kế, que Thi nghiệm Hóa lý CNSII- ĐIỈTL 2020 (Ì-Thán binh nhiệt lượng kè: 2-Nhiỷt kề: 3-Que khuấy: 4-Dụng cụ cho hịa chất hịa tan: 5-Nắp bình: 6’Nước) Cơng thức tinh nhiệt áp dụng nhiệt lượng kê là: Qqxl trinh * Qhệ Trong đó: Qhệ = Chẻ ÁT AT = Turn - Tttró Với Chí nh'ệ’ dung riêng hệ nhiệt lượng kẹ (lượng nhiệt cạn thiết đế nàng nhiệt lượng kế lên I độ), Cbệ thường gụi sổ nhiệt lưựng ke 1.3 1.3.1 Hoả chất dụng cụ Hoá chất C11SO4; Cu.SO4.5H2O; KNO.; IICI; NaOH 1.3.2 1.4 Dụng cụ Càn kĩ thuật I Nhiệt lượng kc Nhiệt kc I ỏng đong lOOmL Dùa thuỷ tinh I Tiền hành thí nghiộm 1.4.1 TN1: Xác định nhiệt dung riềng cũa nhiệt lượng kế Dùng ơng dong, dong xác 200 mL nước dị vào binh nhiột lượng kè Đo vả ghi nhiệt độ ban đầu T| Cân g KNO.I cho vào nhiệt lượng kế đóng kin nhiệt lượng kế khuấy liên tục địng thời theo dơi nhiệt độ nhiệt kế Khi nhiệt độ ổn định ghi nhiệt độ T» Thõng thường với KNOj thi Tỉ < T| Muối KNOị đă biết nhiệt hoà tan AIImknoỉ) = 35.613 kJ/mol Tinh nhiệt dung riêng Chí (đe sứ dụng Chí cho thí nghiệm sau) Chí ■-Ọtu KNO.v'AT (J/độ) (J) Ọ.T KNOi = nKNOJ.AHhi KNOỊ 1.4.2 TN2: Xác dinh nhiệt hoà tan cua C11SO4 khan CuSOj.5H’O Càn 7g C11SO4 vả 8g Cu.SO4.5H2O tiến hành thi nghiệm hoả tan (giống KNO? thí nghiệm I) Ghi biển thiên nhiệt độ T| Ĩ2 hai thí nghiệm Thơng thưịng với CuS thi T» > Ti, cỏn với CuSỎ4.5H>0 thi T> < T| Tinh nhiệt lượng (Qht) cua q trình hồ tan C11SO4 khan CuSO4.5H?O theo công thức: Qh< = -Chệ.AT ỉ (J) Thi nghiệt» Hóa lý CS'S/1 - DI/TL 2020 PHÀN V: HĨA KEO BÀI 11: ĐIÈƯ CHÉ KEO VÀ KEO TỤ 11.1 Mục đích Diều chế keo Fc(OH)ỉ bàng phàn ứng thuý phân Xảc định nguờng keo tụ dung dịch keo Fc(OII)> với có mặt cùa chát điện ly 11.2 Lý thuyết 11.2.1 Giới thiệu hóa học chắt keo phân loại hệ phân tán I loã học chát keo (hay chinh xác hon hoá học hệ phân tân) nghiên cứu hệ keo (sol) bao gồm pha phân lãn dạng chia nhó thành hạt keo phân bố môi trường phân lán liên tục Các hạt keo thưởng cỏ kích thước quy ước lữ 1-100 Ịim (hay 10- - IO-’ cm) Kích thước hạt keo lớn hon kích thước phân tử (nên hệ lả dị thê), chua đù lởn đẽ có thê phát kinh hiên vi (nên hệ keo thuộc nhóm siêu vi dị the) Dựa vảo kích thước cùa phan tư pha phân tán người ta chia hệ pliân tản nhu sau: + Hộ phân tán thỏ: có kích thước hạt khống IOJ cm Hệ phân tân thỏ (như huyền phù nhũ tương) khác với hệ phân tán keo cho: pha phàn tán sa lãng hay tách lóp nhanh anh hương cùa trọng trường, khỏng lọt dược qua giấy lọc có thề quan sát kinh hiên vi (hường + Hệ phân tân trung binh: có kích thước hạt khống 10’5 đến 10 cm + I lệ phân tân cao (hệ keo): có kích thước hạt khống 10 ' den 10 ’em: + Dung dịch (côn gọi lã dung dịch thực): có kích thước hạt nhơ hon 10’ cm lả kich thước cũa phân tử hay ion Hoá học chat keo cỏn nghiên cửu câc hệ chứa hạt có kich thước lởn hon 100 Ịim (micrometre), đuợc gọi hệ phân tán vi dị thê hệ phân (án thơ Các hệ thó gọi lã huyên phù neu hạt pha răn gọi nhũ tương neu hạt pha lóng gọi lã bọt nêu hạt lã phân bỏ mỏi trưởng lóng 11.2.2 Cách điều chế hệ phán tán Có hai cách chế tạo hệ phàn tán: + Cách thứ lã chia nhó vật chất thu đuợc cãc hạt cỏ kích thước cờ hạt keo phưong pháp theo cảch gọi lã phuưng pháp phân tán.Vi dụ người ta xay lưu huỳnh phân bố vào nước, lưu huỳnh pha phân tán vã nước môi trường phân tản + Cách thú hai lả tập họp phân tứ, ngun tứ hay ion có sản mơi trưởng lại thành hạt có kích thước cữ hạt keo Các phương pháp theo cách gọi phương pháp ngưng tụ Vi dụ, sol Agl chế tạo bang cách cho AgNOi phân ứng với KI Các ion Ag I môi trường tập hựp lại thành hạt keo Agi Một diều kiện thiết yếu cho hai phương pháp lã pha phân tán phái thực tế khơng tan mõi trường phàn tủn hay nói cách khác pha phàn tán không cỏ tương 65 Thi nghiệm Hóa lý CNSH -DHTL 2020 tác với mơi trưởng Chinh the mà hệ keo chê tạo bảng hai cách gọi lã hệ keo kị lưu Ngồi cỏn có hộ keo ưa lưu điên hình dung dịch chải cao phân tư phân tứ có tương tác với mỏi trưởng vả tạo thành dung dịch thật Vi dẻ chế tạo hệ keo ưa lưu người ta chí cằn cho chắt cao phàn tứ vảo mơi trường thích họp chắt sè tự hồ lan vào mơi trường Song neu mõi trường dung mỏi đỏi với chất cao phân tứ thi người ta vân có thê chê tạo dung dịch keo cùa chất cao phân tứ phương pháp phân tán hay ngưng tụ vã thu hệ keo kị lưu 11.23 Cấu trúc hạt keo (mi xen keo) Hạt keo ché tạo mồi trưởng lịng thường có câu tạo phức lạp tuỳ thuộc vào điêu kiện chè tạo Ngây người ta quan niệm họt keo mixen keo (micelle) trung hồ điện, bao gơm nhân keo giữa, thường có câu tạo tinh thê kíp điện kép bao quanh Lớp diện kcp gơm hai bán: + Bàn gồm ion dấu điện nằm be mặt hạt keo, tạo cho hạt có điện tích nên gụi lã iọn tạo điện (quyết định thê hiệu) + Bàn ngồi gơm ion điện tích ngược dâu vừa dù đê trung hồ điện tích cùa hạt keo, ion nghịch (lớp ion bù) Các ion nghịch chiu tác dụng cùa lục hút tỉnh điện, lực háp phụ vào be mặt hụt lực khucch tán chuycn động nhiệt gây nên dược phán bò thành hai lớp o Lớp gôm sô ion nãm sát bê mặt hạt keo gọi lóp hâp phụ (lóp cổ định) o Lóp ngồi bao gồm sơ ion nghịch cỏn lại gọi lã lóp khuếch tán lớp nồng độ ion nghịch giám dần từ Khi kíp kép kẽt thúc thi nơng độ ion nghịch ó bê mật mixen keo bãng với nơng độ cãc ion nghịch ưong dung dịch Mixen keo - í (nhân kco)n.lớp hấp phụ}.lớp khuếch tán Ngirởi la thưởng biếu diễn cấu lạo hạt keo bàng sơ đồ hay bàng cóng thức keo Ví dụ hạt keo Agl hình thành phán ửng: AgNOj + KI -► Agl + KNOì, với giá thiết KI lấy dư đẽ lãm chất lãm ben hạt kéo sê cỏ sơ đồ vã còng thức chi hĩnh sau I —J nhin xK’ (n-x)K'l {mAgl lon Q.Đ.T.H KM nghựh 'laphapphy' ìrtpkhUn graoun l»ul ion Hình: Sơ đồ công thức cấu tạo cua mixen cùa sol Agl irong dung dịch KI loăng Vi dụ cấu tạo cùa hệ keo mà dược hình thành Fe(OH)j kết tủa nước từ dung dịch FeClj sau: {(mFc(0Hh].nFci-.(3n-x)CI’ỉ'".xCr 66 Thi nghiệm Hóa lý CNSII - DIITL 2020 Keo dat cỏ thè dựng tinh thê vó (lịnh hình Tướng phàn tủn cùa keo gọi rnixen keo Một mixen keo có câu tụo gơm lớp: + Nhân mixen: tập hợp phản từ vô cơ, hữu hay hữu cợ - vô cơ, cỏ cáu tạo tinh thè vơ định hình: axit mùn; hydroxit sát; nhõm; silie phân từ khoáng thử sinh Tinh chát phàn ly cùa nhân niixen u lơ t/ut (tịnh dâu dic» cùa keo + Lớp ton tựo điện thê: Trên mặt nhãn keo có lớp ion dược tạo thành phân ly cùa hay ngn góc mang diên tích khác, gọi lớp ion lụo diên thê.Dâu diện tích cùa keo dâu cua lớp ton tụo điện thê Keo silic keo hừu có lớp tạo diện thê mang dầu âm gọi keo âm: keo hydroxit Fe, Al mơi trường axit có lớp ion tạo diện thê mang dâu dương, gụi hi keo dương + Lớp ion hù: hạt keo mang diện cua lóp ion tụo điện thè sức hút tình điện mà tạo thành lớp ion trái dầu hao hên hạt keo gọi lớp ion hù Lớp lon hũ với lớp ion diện thề tạo nên lớp ton kép: Do lực hút tình diện cùa hạt keo phụ thuộc vào khoáng cách với lớp ton diện nên chúng chịu nhùng lực hút lỉnh diện khác nhau, phân thành hai lởp: (ì) Lớp ton cị định: gơm nhùng ton hù gân hạt keo hơn, chiệu lực hút tình diện mạnh, hám chật lên hạt keo hau khơng dì chun, liì) Tâng ion khuch tán: gơm ìon cách xa hạt keo lờp ion hù chịu sức hút tỉnh diện yêu nên dê di chuyên dung dịch giừa mixen keo Hình: Sơ dơ câu tạo chung cúa mixcn kco dát 11.2.4 Đặc diêm cua hộ kco Do hạt keo có kích thước nho nên chúng cỏ bề mặt riêng lớn Vi vậy, hệ keo cỏ nâng lượng bề lớn vả không bền vừng nhiệt động học Các hạt cỏ xu hướng liên kết lại với thành nhừng hạt lớn hon (lãm cho bề mặt riêng nhỏ di vả nủng lượng bề mật giâm) lắng xuống Ọuá trinh dược gọi lả keo tụ Dè giữ cho hộ keo bền vừng mức độ não đò người ta phai thêm vảo hệ chất Ồn định hệ keo (hay chắt làm bền hệ keo), ví dụ chất protit xà phòng Co chể làm bén đại da sỏ trưởng hợp hạt keo hấp phụ 67 Thi nghiệm Hóa lý CNSII- ĐIỈTL 2020 loại ion cua chát làm bên, làm tăng diện tích cua hạt kco khicn cho lực dày lĩnh diện hạt kco tàng lên, ngãn can liên kết cùa cãc hạt Tuỳ thuộc vào nông độ ion dung dịch mà lớp kép có thê dày hay móng Khi lộp kép có chiêu dày lớn thi hụt kco bên vững, lóp kép mịng hạt keo tiên sát lại gàn khoang cách mà lực hút tác dụng manh khiên cho hạt liên kct lai với thành hạt lớn-dó kco tụ Chính vi mà them chãt diện li vào hệ kco thường xáy kco tụ Sự kco tụ bắt đầu xày nồng dỏ chắt diện li tối thiêu gọi ngưỡng keo tụ dược tinh bãng sô mill mol mill đương lượng chát điện li trẽn lít dung dịch kco Nói cách khãc, ngường kco tụ Ỵ so mill dương lượng gam chãi điện ly cho vảo lít dung dịch kco có nơng độ xác định đe gây nên keo tụ có thê quan sát Sự kco tụ bơi chât diện li tuân theo quy tãc Schultze - Hardy Tác dụng keo tụ cùa chât diện li ion ngược dâu với dâu diện cùa hạt keo tác dụng đỏ tâng lèn rât nhanh theo sụ tăng hỗ trị cua ion dó + Chì có ion tích điện trái dắu với hạt keo có khà náng keo tụ + Kha nãng keo tụ cùa ion lớn (ngưỡng keo tụ nhó) nêu hóa trị cùa chúng cao; địi với ion có hóa trị thi nàng keo tụ tảng bán kính ion tảng Ví dụ: nãng keo tụ cùa Ca2" lớn cùa Na"; kha nàng keo tụ cùa Rb lởn cùa NH> lớn cùa K ; kha nâng keo tụ cùa T lớn cùa Br lớn cứa NO< lớn hon cùa cr + Những ion hữu co có nãng kco tụ mạnh nhiêu so với ion vơ có hóa tri bơi chúng phàn cực bị hãp phụ manh bê mặt hạt keo Li thuyết thục nghiệm chi ngưỡng keo tụ Y ti lệ nghịch với hố trị z luỹ thừa K v=í K lả hảng sô đặc trưng riêng cho loại keo, z lã hóa trị cùa ion gãy nên keo tụ, phương trinh có dạng tương tự với đề xuât Deriagin (Tlepximi) Sự cộ mặt cùa chất cao phân tư thích hợp ưong hệ kco kị lưu có the làm tảng độ bẽn vùng cua hệ keo Tãc dụng gọi lã tác dụng báo vệ cua chát cao phân tư dổi VỚI hệ keo kị lưu Cơ chế tãc dụng báo vệ lã chát cao phân tử hấp phụ lên bẽ mặt hạt keo, lâm thành màng bão vệ ngân cán liên kết cùa hạt cluing đến gần Như trẽn, ta đà biết hạt keo thường cỏ điện tích nhắt định, tuỳ thuộc vào bán chat ion định hiệu Do đặt hệ keo vào điện trưởng hạt kco tích điện sê di chuyên cực đỏ lã tượng điện di (phần hạt di chuyên bao gồm: nhân lớp ion quyẻt định thê hiệu lớp hẳp phụ cua ion nghịch); môi trường với phần ion nghịch lại lã lớp khuếch tán sê di chuyên cực khác, tưọng diện thâm Những hệ keo kị lưu sau che tạo thường chứa chát lần thường chắt điện li Khi nóng dộ chât điện li lớn chiểu dày lớp kcp giám làm cho dộ bên vững cùa hệ giám Muốn cho hệ keo bền vừng người ta phai loại bớt chất điện li bảng phương pháp thâm tích, nghĩa cho hệ keo vào (úi màng bán thám, chát điện li lọt qua màng dằn khoi hệ cịn hạt keo cỏ kích thước lởn nên khơng lọt qua màng giừ lại 68 Thi nghiệt» Hóa lý CS'S/1 - DI/TL 2020 Irong hộ Cũng kích thước hạt lớn mà hệ kco cịn có dặc diem khuếch tán chậm so với dung dịch thực Dê chỏ tạo nhũ tương người ta dùng phương pháp phân tán thường phái thèm chài làm bên gọi chát nhừ hố Có hai loại nhũ lương: a) Nhủ tưong loại I hay nhử tương thuận, có pha phân lãn lã chất lóng khơng phân cực, mơi trưởng phân lán lả nước b) Nhù tương loại II hay nhũ tương nghịch, có pha phân tán lã nước, mơi trường phân tán lã chát lóng khơng phàn cực (thưởng gọi dâu) Nhũ tương loại có kí hiệu D/N (dầu nước), nhù tương loại II cỏ ki hiệu lã N/D (nước dầu) Chắt nhũ hoả thưởng lã chất hoạt dộng bể mặt thi dụ kali oleat canxi oleat, nhơm stearat v.v 11.3 Hố chất dụng cụ 11.3.1 Hoá chất FcCk; Na-SOs;nước cất II 1.3.2 Dụng cụ Pipet I mL 2mL 5mL I OmL 1.1 I Ọuá bóp cao su Cốc thuỷ tinh 250mL I ồng nghiệm 24 Bể ổn nhiệt (hoặc bểp điện) I I lộp chiếu sáng Tyndall I Màng bán tham ccllophan 11.4 Tiến hãnh thí nghiệm 11.4.1 Chê tạo keo Fe(OH)> báng phàn ứng thuỹ phân Đun nóng 120 mL nước cãt đen khoang 90"C cỏc 250 mL nho vào cóc giọt cho den het 45 mL dung dịch FcClj 2% Đun them vài phút trcn bep (không đun sôi mạnh đe trành nước bị bốc hoi nhiều lảm nồng độ hệ keo thay đối), nhấc ta sol Fe(OH)j cõ mâu nâu đậm Quá trinh thúy phân FcCli dè tụo sol Fe(OH)j luân theo phán ứng: Fc(OH)m.) - 3HCl- 3H:O.|> 11.4.2 Kháo sát tính chất cua hộ keo Hệ keo quan sát bủng hộp chiều sáng Tyndall de thấy ánh sáng khuếch tán hình nón hệ keo Hãy dị dâu diện cùa hít keo Hãy thục thâm tích bâng màng bán thâm ccllophan (hoặc giày bóng kính) sau sol diêu chê dược cịn nóng (khi làm nguội phán ứng dicn theo chiêu nghịch) 69 Thi nghiệm Hóa lý CNSĨI - D/ITL 2020 Hình: Hiệu ímg Tyndall 11.4.3 Xác định ngưỡng keo tụ cùa sol Fc(OH)i bang Na>so< (hoặc K’SOi) Lay 12 ống nghiệm đánh số ống từ I đen 12 cho vào mồi mL dung dịch sol Fe(Oli)j Ĩng sơ The tích sol Fe(OH)j (mL) 10 II 12 5 5 5 5 5 5 Tử dung dịch Na?SƠ4 0.01 N pha thánh cãc dung dịch loàng dằn theo thứ tự sau cho vào 11 ống nghiệm tú la đển la theo báng sau: Ĩng sơ The tích dung dịch NaaSOi 0.0 IN ImL) Thẻ tích nước cat (mL) la 2a 3a 4a 5a 6a 7.1 8a 9a 10a la 10 11 11 10 12a Lấy mL cua mồi dung dịch ống tử * đền 11 ’ vừa pha cho vào tìmg ống nghiệm dựng sol Fe(Oll)ỉ theo thứ tự tữ I den 11 Óng thử 12 chứa sol (FcOH)ị dược thêm n»L nước cất Lắc để yên I phút Quan sát ỏng số The tích sol Fc(OH), (mL) Thê tích dung dịch NaỉSOí them 10 11 12 5 5 5 5 5 5 1 1 1 1 1 70 Thi nghiệm Hóa lý CS'S/1 - DIITL 2020 Dũng ơng thứ 12 đè so sánh mírc độ dục ông dục hon sô 12 có kco tụ vã ghi dâu (+) vào dục, ông không dục ỏng sô 12 thi ghi dâu (-), theo báng mau sau: Óng số So sánh độ đục với ống số 12 10 11 12 + + + + l.s Tinh toán ngưởng keo tụ cùa so! Fe(OH).« Ngưỡng keo tụ y dược tính theo cõng thúc: Y= v^ 1000 dó Cdi nông dộ cua chat diộn li gây keo tụ (N) dãy lã nồng dộ chât Na*so.i; Vdi thê tích dung dịch chât diện li cho vào dung dịch keo (mL); v,oilà thê tích dung dịch keo dùng đe keo tụ (mL) Giá sử bãt dâu fit ông sơ có dục có nghĩa ngưỡng keo tụ tính từ ỏng sơ ống có ti lệ pha lồng Na’SOilihO lã 8/4 dó nồng độ dung dịch Na?SƠ4 sau pha loãng dược tinh theo công thức: d' _ Cdlbd-Vdlbd _ °-01 x VdlM + VH20 8+ 6,7.10"3 (N) Tham kháo: Cách khác thí nghiệm đê tim ngường keo lạ chinh xùc Sau đà tìm đưực nịng độ hát đáu làm cho hệ keo bút đàu keo tụ Pha khoáng 70 mL thing dịch chắt điện li đõ gọi dung dịch đặc Pha tièp khoáng 70 mL dung dịch chát điện li mà có nơng độ hên tnrờc nóng độ dung dịch dâc trên, gọi dung dịch lỗng Ví dụ: thi nghiêm / óng sỏ hãt dâu dục dung dịch dặc lum tương ứng vời dung dịch ông sổ Dung dịch loiing tương ứng với dung dịch ông so Dùng dung dịch trẽn pha thành 12 dung dịch có nịng dộ khác nám khống nịng độ cùa dung dịch theo háng sau: Ong sỗ Thê tích dung dịch NaỉSOi đặc lum (mL) Thè rich dung dịch Na:so4 loãng lum Ib 2b ỉb 4b 5h 6h 7h 8b 9b lữb llb I2b ĩ 10 II n 10 71 Thí nghiệm Hóa lý CNSII- ĐIỈTL 2020 Nơng dộ dung dịch diện li san pha lỗng cách ơng lb den I2h dược xác định theo công thức: c»< = Cị.Vỵ + c2.v2 X „ (rt) viri Cl I'l nông độ so mL dung dịch có nơng độ dạc hơn: Cỉ f'_' nong dụ so inL dung dịch có nồng độ tồng hơn: Lấy I mL từ dung dịch vừa pha cho vào ong nghiệm chừa niL dung dịch sol Fe(OH)ì, giơng làm thi nghiệm trẽn (phản /1.4 ì) Quan sát ghi kèt dã tàm (ghi dâu + vào ông dục, dâu - vào ơng khơng dục) 11.6 Câu hịi 11.6.1 Câu hỏi chuẩn bị trưức thực hành thí nghiệm 11.6.2 Câu hịi trả lịi sau thực hành thí nghiệm 72 Thi nghiệm Hóa lỳ CNSH -DHTL 2020 PHÀN VI: HÓA LÝ SINH BÀI 12: ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN BÀNG PHƯƠNG PHÁP so MÀU BRADFORD 12.1 Mục đích Định lượng protein bãng phương pháp so màu Bradford 12.2 Li thuyết Phương pháp nảy dựa thay đồi bước sóng hấp thu cực dại thuốc nhuộm Coomassie Brilliant Blue tạo phức hợp với protein Trong dung dịch mang tinh axit chưa kết nối vôi protein thi thuốc nhuộm cỏ bước sõng hấp thu cực đại 465 nm; kểt họp với protein thi thuốc nhuộm hắp thu cực đại bước sóng 595 nm Độ hấp thụ bước sóng 595 nm có liên hệ cách trực tiếp tói nồng độ protein Dê xác định protein mẫu đâu liên ta xây dựng đường chuân với dung dịch protein chuân đà biết tnrớc nồng độ Dung dịch protein chuãn thưởng lã bovine scrum albumin (BSA) Sau cho dung dịch protein vào dung dịch thuốc nhuộm, màu sê xuất sau phút vả bên I giở Tien hành dung dịch bàng máy quang phơ ke la dược OD« dộ hấp thụ tỳ lộ với lượng mau Thực phép dôi chửng với nước cât (ODo) Lây giá trị OD = OD, -OD„ Lượng protein mau dung dịch dược xãc đinh băng cách chàm trcn dường chuản theo OD lây giá tri cùa diêm dó trục hồnh Đó chinh lượng protein mau dung dịch Công thức phân lữ Coomasic Brilliant Blue G-250: 123 Hoá chất dụng cụ 12.3.1 iỉoá chất Cồn 90" Dung dịch protein chuãn: cân 10 mg albumin bảng cân phân tích, pha I ml nước cat lác cho tan Giừ ở-20°C Khi dùng pha loảng 100 lẩn dung dịch cỏ nồng độ 0,1 mg/mL Dung dịch thc thư Bradford: dung dịch thuốc thư có thành phân I OOmL sau: Coomassie Brilliant Blue: 0.005g: Methanol: 4.7g; Phosphoric axil 85%: 8.5g Phàm màu Coomasie Brilliant Blue làm tan ethanol chai đựng màu tịi có nap Bõ sung phosphoric axit vá chinh tời ỈOOmL hang nước càt Lac 73 Thi nghiệm Hóa lý CNSH - D/ITL 2020 đêu giiỉ 4"C Dung dịch cần xác định hâm lượng protein (phông thi nghiệm cung cấp) 11.3.2 Dụng cụ Máy đo quang phò Ong nghiệm (14) Pipette Sink, ImL (có the thay hảng pipettcman) Đồng hồ bấm giây Giày tham Giá đế ồng nghiệm Binh tia đựng cồn 12.4 Tiến hành thi nghiệm 12.4.1 Xây dựng dường chuân vói dung dịch protein chuân Thu dịch (rich ly protein nhu (rong bãi enzyme (5 g malt trích ly bủng nước thu V 100 II1L) Pha loàng mẫu với hệ số pha loăng n lằn đê mầu phân tích (mẫu X) Lập loạt ong theo so thử tự vả I ống nghiệm chúa mau cắn phân tích X Dùng dơng hơ bâm giây, canh thời gian phút cho 5mL thuộc thư vào ong nghiệm 0, lãc đêu đê yen thời diêm I phút cho 5mL thc thứ vào ơng nghiệm I lãc đểu đê yên cử tièp tục cho den het Tinh thời gian ống 20 phút, tiến hành đo độ hạp thu cùa dung dịch ứ bước sóng 595 nm Ta cỏ giá trị OỊX., thời diêm 21 phút đo ông I (OD!), tương tự cách phút cho hèt ông Ghi lại giá trị OD Ĩng nghiệm sơ Thê lích nước cất Albumin chuân (O.lmg'mL) Thuốc tint Bradford Nong độ albumin (pg'mL) ODsnỉnm 74 X Thi nghiệt» Hóa lý CS'S/1 - DI/TL 2020 Vi dường tuycn tính nịng dộ protein (Hg'niL) với mật độ quang OD 595nm 12.4.2 Xác dịnh hãm lirọng protein có mẩu cán phân tích Dựa vảo phưong trinh đường tuyển tính giừa nồng độ protein (pg/mL) với mật độ quang OD 595 nin ta tinh hãm lượng protein p mẫu phân tích X Sau tinh tóan hãm lượng protein I g mau cân 12.5 Câu hỏi 12.5.1 Câu hói chn bị trước thực hành thí nghiêm 12.5.2 Câu hòi trà lòi sau thực hành thí nghiệm 75 Thi nghiệm Hóa lý CNSII- ĐIỈTL 2020 BÀI 13: XÁC ĐỊNH HOẠT TÍNH ENZYME 13.1 Mục đích Xác định hoạt tính enzyme 13.2.1 í thuyết 13.2.1 Enzyme đon vị đo hoạt tinh cũa enzyme Enzyme chât xúc tác sinh học có bàn chât protein có tính đặc hiệu cao Mỗi enzyme có xúc tác cho một sổ phán ứng định Hoạt động (hoạt tính) enzyme câng mạnh lượng co chãi chun hóa lượng sân phàm tạo thành trẽn đơn vị thởi gian câng lớn Vi có thè đánh giá hoạt tinh xúc tác cũa enzyme cách xác định tốc độ chun hóa chài tốc độ tích lùy sãn phàm phán ửng Vẽ nguyên tắc có thê hai nhỏm phương pháp chinh sau: - Đo lượng chât bị (hoặc lượng sán phàm tạo thành) thời gian nhât định ủng với nóng dộ enzyme xác định + Đo thời gian càn thiết đẽ thu lượng biên thiên định cua chât (hoặc san phâm tương ứng) với nông độ enzyme xác định Đè thực mục dích trên, nhiều phương pháp phân tích khác dưọc sư dụng, lã: phương pháp quang phô dộ phán cực áp suat, dộ nhớt, phương pháp sãc ký phương pháp hóa học Mục đích xác định hoạt tinh enzyme xác định số đơn vị hoạt tinh Có nhiều phương pháp đè có thê xác định đơn vị hoạt tính Đon vị hoạt tinh cua enzyme gồm cỏ: - Đơn vị hoạt tinh quòc tè (Enzyme Unit, viet tãt U): Hiệp hội Hỏa sinh Quốc tê (International Union of Biochemistry lUB) định nghĩa: Một đơn vị chuân cúa enzyme (Ị U) lượng enzyme xúc tác chuyến hóa I Ịimol chắt sau phút điêu kiện chuẩn I Ư = ịimol sán phàm = I pmol chàt/phút = 10* mol chẩưphút + Đơn vị hoạt tinh Katal: Năm 1979, Hội đồng Danh pháp cùa 1UB khuyến cảo nên Sừ dụng Katal lãm đơn vị bân đo hoạt tính enzyme Một Kalal lượng enzyme xúc tác chuyên hóa đựợc mol chãt sau I giây điêu kiện liêu chuân Đơn vị Katal khuyên cáo năm hộ đơn vi lường Ọuôc tè (SI) Katal mol chấl/giày 60 moL'phút 60-10* pmol/phút ■'6* 10’ u u - 1/60x10* Katal - 16,67 nKatal (nanokatal) + Đơn vj hoạt tinh tự dặt: dơn vị hoạt tinh dựa vào thay địi dặc tính hợp phàn ứng Vi du thay dôi dộ dục, độ nhói dơn vị thời gian Trường họp chat sán phâm hon hợp phức tạp áp dụng don vị hoạt tinh 76 Thi nghiệt» Hóa lý CS'S/1 - DI/TL 2020 13.2.2 Hoạt tinh riêng cũn enzyme phương pháp chung xác định hoạt tính enzyme Hoạt tính riêng cùa chê phàm enzyme đác trưng cho độ tinh cùa ché phâm enzyme Hoạt tính riêng biêu thị bảng sơ đơn vị enzyme.'mg protein (U/mg protein) (Kat'kg protein), hàm lượng protein xác định bơi phương pháp Lowry Bradford 13.2.3 Enzyme amylase phưong pháp xác định hoạt tính enzyme amylase Cần trách nhừng yếu tổ có the biến tính protein enzyme Các thơng sị nhiệt dộ pH nong dộ ion thành phân dung dịch đệm ánh hương lên hoạt tinh enzyme Thứ hoạt tinh enzyme phai dược tiên hành điều kiện thích hợp điêu kiện sinh lý đk tòn trữ thục phàm dk mà hoạt lực có thê đọt tỏi ưu Với enzyme cân có chât hoạt hóa chát ôn đinh phai cho chàt vào enzyme trước cho chát vào hon hợp phán ứng Nơng độ chất giới hạn thích hợp đú thừa đê hào hịa enzyme, khơng q cao để kim hăm enzyme, chất chuyên hóa 20%-30% Thời gian xác định hoạt tinh chường 5-30 phút Khi xác dinh hoạt tinh phai làm mau dôi chứng! enzyme bị bát hoạt trước tiép xúc với chát) song song với thi nghiêm Các phương pháp đo hoạt tính enzyme amylase Nguyên tảc chung dựa trẽn sở thúy phân tinh bột enzyme dd enzyme nghiên cứu (hãnh dextrin có phân tứ lượng khác Đo cưởng độ mâu lạo thành giừa tinh bột vã sân phẩm thủy phàn cũa với iod bang mảy so màu sè tinh dược hoạt tính enzyme Đơn vị amylase (theo Smith vả Roe) lã lượn enzyme cần thiết dê thùy phân hoàn toàn 10 mg tinh bột sau thời gian phán ứng 30 phút diêu kiện thi nghiệm 133 Hố chất dụng cụ 13.3.1 Hóa chất Dung dịch đệm acetate pH= 4,7 (xác dinh hoạt tính enzyme nam môc): trộn I the tich CH.COOH IN với I the tích CH.COONa IN Kicm tra pH Dung dịch đệm phosphate pl 1= 4,9 (xác định hoạt tính enzyme cũa malt): trộn 10 ml dung dịch NaJIPOj 1/15 M với 990 ml dung dịch KH2PO4 1/15 M nhận I I dung dịch đệm phosphate pH = 4,94 Kiêm tra pH Dung dịch đệm glycine-NaOH 0.1 M pH amylase kiềm) 10 (dũng de xác định hoạt tinh Dung dịch I ICI 0.1N Dung dịch iod: hỏa tan 30 mg KI mg I: với lượng nhỏ nước càt Lãc nhọ hồn họp đê hịa tan hồn tồn, sau dỏ chuyên dung dịch sang bình dinh mức 1000 mL bô sung nước cât dèn vạch mức Bào quàn dung dịch binh màu nâu dê cho tòi 77 Thi nghiệm Hóa lý CNSII- DIỈTL 2020 Dung dịch tinh bột 1%: hòa lan g tinh bột (theo chât khỏ tuyệt đôi) với 50 mL nước cát bình định mức 100 mL lăc dcu Đặt vào bèp cách thủy dang sỏi lắc liên tục cho đen tinh bột tan hồn tồn Sau làm nguội bo sung 10 mL đệm acetate pll = 4.7 (hoăc 10 mL dung dịch đệm phosphate pll = 4.9) bô sung nước cat đen vụch mức lăc Dung dịch chuân b| ngày sư dụng Dung dịch enzyme góc 13.3.2 Dụng cụ Mảy lác Máy đo quang cuvette dày em Bẻ ò nhiệt Binh định múc ỏng nghiệm Pipette 5mL, ImL Dồng hồ bấm giây Giãy thâm Giá dê nghiêm Binh tia đựng cồn 13.4 Tiến hành thí nghiệm 13.4.1 Trích ly enzyme Enzyme trích ly từ ché phâm hay tẽ bào, mơ dộng thực vật bảng dd đệm có pH thích họp như: + Trích lỵ enzyme tử vi khuắn: Cân 0,1 g chế phẩm, dùng đùa thúy tinh chà nhẹ chế phàm cốc dung lích 50mL, cho vào binh định mức loại 100 mL vả them nước càl, lọc Inch ly enzyme Bặo quán nhiệt độ 2-4°C 24 giở + Trích ly enzyme nấm mốc: Cân 5,0 g chế phàm, dùng đùa thúy tinh chã nhẹ chế phàm cốc dung tích 50mL cho vảo binh định mức loại lOOmL, thèm nước cãt, thêm dung dịch đệm acetate pll = 4,7, giữ ứ nhiệt độ 30°C I giở Lọc, rữa, trích ly lấy enzyme v= 100 IỊ1L Báo qn 2-4QC 24 giị + Trích ly enzyme từ malt: Cân 5-10 g chê phàm, xay nhõ cho vào binh dịnh mức lOOmL, them nước càt dung dịch đệm phosphasc pll = 4,9 Lọc lira, trích ly lây enzyme v= 100 mL Bào quàn 2-4°C 24 giở 13.4.2 Pha lỗng enzyme Hệ sổ pha lồng n - 50 100 200 Thi nghiệm xác dịnh hoat tính: Hóa chất A/ârr thi nghiệm Máu đơi chứng Mâu trầng Dung dịch tinh bột 1% 2mL 2mL 78 mL Thi nghiệm Hóa lỵ CNSll - DIỈTL 2020 Nước cất mL mL 2mL Dung dịch đệm mL mL I11L Dung dịch NaCI 3% 0,5 mL 0.5 ml 0,5 mL Sau ủ nhiệt độ 40 °C vòng 10 phút đê đạt điêu kiện enzyme hoạt dộng tòt Tiêp dỏ thèm vào máu thi nghiệm I mL dung dịch enzyme Tiêp tục ù cà ba mầu nhiệt độ 40 °C vòng 30 phút dê xảy phán ứng Sau dó them ticp vào môi ông I mL HCI IN Thêm mL enzyme vào mâu dôi chửng mầu trang Cuối chuyên cà mầu sang binh định mức 100 mL Thêm nước cất tới vạch định mức Thêm vào mỏi binh 0,5 mL iot 13.4.3 Đo mật độ quang xác định hoạt tính enzyme Tính mật độ quang: - ODo lả mật độ quang mẫu đói chửng - OD mật độ quang mau thí nghiệm Số mg tinh bột bi thúy phân là: s= 0Do - OD Tx2°- I loạt tính (đon vị hoạt tínlVg): Hoạt tính riêng (dơn vị hoạt tính /mg) = hoạt tính tồn phân /mg protein (Bradford) Trong đõ n hệ sỏ pha lồng: V thê tích dung dịch trích ly (ml): m khối lượng enzyme đem trích ly (g) 13.5 Câu hoi 13.5.1 Câu chn bị trước thực hành thí nghiệm 13.5.2 Câu hịi trà lịi sau thực hành thí nghiệm 79