(Luận văn) xác định thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của lá cây vú bò (ficus hirta vahl ) phân bố tại huyện bắc sơn tỉnh lạng sơn

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TÔ THANH ĐẠM lu an XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH n va p ie gh tn to SINH HỌC CỦA LÁ CÂY VÚ BÒ (FICUS HIRTA VAHL.) PHÂN BỐ TẠI HUYỆN BẮC SƠN - TỈNH LẠNG SƠN d oa nl w va an lu ll u nf LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC oi m z at nh z m co l gm @ an Lu THÁI NGUYÊN - 2020 n va ac th si ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM TÔ THANH ĐẠM lu an n va PHÂN BỐ TẠI HUYỆN BẮC SƠN-TỈNH LẠNG SƠN p ie gh tn to XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LÁ CÂY VÚ BÒ (FICUS HIRTA VAHL.) d oa nl w Ngành: Hóa hữu Mã số: 8440114 u nf va an lu ll LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC oi m z at nh z Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Thanh Hƣơng m co l gm @ an Lu n va THÁI NGUYÊN - 2020 ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu, kết luận văn hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khoa học khác Thái Ngun, tháng năm 2020 Tác giả luận văn lu an TÔ THANH ĐẠM n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Thị Thanh Hương giao đề tài, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi để hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn thầy giáo, cán phịng thí nghiệm Khoa Hóa học trường ĐHSP Thái Ngun, Ban giám hiệu Phòng, Ban Trường Đại học Sư phạm Thái Ngun, Phịng nghiên cứu hoạt tính Sinh học - Viện Cơng nghệ Sinh học; Phịng Hóa sinh ứng dụng - Viện Hàn lâm Khoa lu học & Công nghệ Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện cho tơi suốt q an trình học tập thực đề tài va n Cuối xin chân thành cảm ơn tới lãnh đạo quan công tác; gia tn to đình; bạn bè; đồng nghiệp giúp đỡ, cổ vũ động viên, tạo điều kiện cho tơi p ie gh suốt q trình học tập thực luận văn d oa nl w Học viên va an lu ll u nf Tô Thanh Đạm oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH vii MỞ ĐẦU lu Tính cấp thiết đề tài an Mục tiêu đề tài va n Chƣơng 1: TỔNG QUAN tn to 1.1 Tổng quan chi Ficus ie gh 1.1.1 Giới thiệu chung chi Ficus (Họ Moraceae) p 1.1.2 Đặc điểm thực vật loài Ficus hirta Vahl nl w 1.1.3 Đặc điểm thực vật loài Ficus microcarpa d oa 1.1.4 Đặc điểm thực vật loài Ficus racemosa L an lu 1.1.5 Đặc điểm thực vật loài Ficus hispida L.f va 1.2 Tình hình nghiên cứu , thành phần hóa học hoạt tính sinh học 10 ll u nf 1.2.1 Các nghiên cứu quốc tế 10 oi m 1.2.2 Các nghiên cứu nước 24 z at nh 1.2.3 Hoạt tính sinh học 27 1.2.4 Thành phần hóa học lồi Ficus hirta Vahl 27 z Chƣơng 2: THỰC NGHIỆM 29 @ gm 2.1 Đối tượng nghiên cứu 29 m co l 2.2 Hóa chất, thiết bị 29 2.2.1 Hóa chất 29 an Lu 2.2.2 Thiết bị 30 n va ac th iii si 2.3 Phương pháp xử lý mẫu thực vật, chiết tách xác định cấu trúc chất phân lập 31 2.3.1 Xử lý mẫu thực vật 31 2.3.2 Chiết tách chất 31 2.3.3 Xác định cấu trúc chất 31 2.4 Phương pháp xác định hoạt tính sinh học 32 2.4.1 Phương pháp xác định hoạt tính ức chế Nitric oxide (NOs inhibition) 32 2.4.2 Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh 32 2.5 Thực nghiệm 32 lu 2.5.1 Quá trình phân lập chất từ mẫu Vú Bị (khơ) 32 an 2.5.2 Dữ kiện phổ chất phân lập 35 va n 2.5.3 Xác định khả ức chế Nitric oxide 35 tn to 2.5.4 Phương pháp xác định hoạt tính kháng vi sinh 37 ie gh 2.6 Phương pháp xử lý số liệu 38 p Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 39 nl w 3.1 Phân lập chất từ cặn chiết ethyl acetate mẫu khơ lồi F hirta Vahl 39 d oa 3.2 Xác định cấu trúc chất tách 39 an lu 3.2.1 Chất VB1: 3β-acetoxyurs-12-en-11-one 39 va 3.2.2 Chất VB2: Psoralene 47 ll u nf 3.3 Kết thử hoạt tính sinh học từ dịch chiết nước mẫu loài oi m F hirta Vahl 53 z at nh 3.3.1 Kết nghiên cứu khả ức chế Nitric Oxide (NOs Iinhibtion) từ dịch chiết nước mẫu loài F hirta Vahl 53 z 3.3.2 Kết nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh dịch chiết nước mẫu @ l gm (khơ) lồi F hirta Vahl 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 m co TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 an Lu PHỤ LỤC n va ac th iv si DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT lu an n va Chữ viết tắt C-NMR 1D-, 2D-NMR H-NMR ADH ALDH ATCC 10231 ATCC 13709 ATCC 15442 ATCC 25922 ATCC 6633 DMSO EI-, ESI-, HR-MS FBS FT-IR Hep G2 13 p ie gh tn to STT 10 11 12 13 14 15 d oa 17 KB 18 LU nl w 16 IC50 z at nh z m co l gm @ N4 SKC UV-VIS VB1 VB2 oi 23 24 25 26 27 m 22 MIC ll 20 MCF-7 21 MDA u nf va an lu 19 MBC Chữ viết đầy đủ Phổ cộng hưởng từ hạt nhân nguyên tử 13C Phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều hai chiều Phổ cộng hưởng từ hạt nhân nguyên tử 1H Alcohol dehydrogenase Acetaldehyde dehydrogenase Candida albicans: nấm men Staphylococcus aureus : cầu khu n gram ( ) Pseudomonas aeruginosa: vi khu n gram (-), Escherichia coli: vi khu n gram (-) Bacillus subtilis :là trực khu n gram ( ) Dimetylsulfoside Phổ khối Huyết phơi bị Phổ hồng ngoại Tế bào ung thư gan Nồng độ gây tác động sinh học cho 50% mẫu thử nghiệm Tế bào ung thư biểu mô Tế bào ung thư phổi Minimum bactericidal concentration - nồng độ tối thiểu diệt khu n Tế bào ung thư vú Malonyl diandehit Minimum inhibitor concentration - nồng độ tối thiểu ức chế Lactobacillus fermentum : vi khu n gram ( ) Sắc ký cột Phổ tử ngoại 3β-acetoxyurs-12-en-11-one 7H-furo[3,2-g]chromen-7-one (Psoralene) an Lu n va ac th v si DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Cấu trúc hóa học hợp chất 1-4 11 Bảng 1.2: Các hợp chất (6-11) phân lập từ số loài thuộc chi Ficus 12 Bảng 1.3: Các hợp chất (12-21) phân lập từ loài F Hirta 13 Bảng 1.4: Các hợp chất (22-25) phân lập từ loài F Indica 14 Bảng 1.5: Một số hợp chất (26-27) cumarin phân lập từ số loài thuộc chi Ficus 14 Bảng 1.6: Một số hợp chất (28-31) flavonoid phân lập từ số loài thuộc chi Ficus 15 lu an Bảng 1.7: Các hợp chất terpenoid, sterol số chất khác (32-37) 16 n va Bảng 1.8: Một số hợp chất (38-51) flavonoid phân lập từ thân số tn to loài thuộc chi Ficus 17 p ie gh Bảng 1.9: Hợp chất (52) phân lập từ nhựa loài F glabrata thuộc chi Ficus 19 nl w Bảng 1.10: Một số hợp chất (53-85) phân lập từ rễ số loài thuộc oa chi Ficus 20 d Bảng 1.11: Một số hợp chất (97-101) phân lập từ loài F hirta Vahl 28 an lu va Bảng 3.1: Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): chất VB1 42 u nf Bảng 3.2: Số liệu phổ 13C-NMR chất VB1 46 ll Bảng 3.3: Số liệu phổ 1H-NMR chất VB2 48 oi m Bảng 3.5: So sánh phổ 1H-NMR, z at nh Bảng 3.4: Số liệu phổ 13C-NMR chất VB2 50 13 C-NMR chất VB2 hợp chất z tham khảo 51 @ gm Bảng 3.6: Khả ức chế sản sinh NO mẫu nghiên cứu 54 m co l Bảng 3.7: Kết thử hoạt tính kháng sinh vật kiển định 56 an Lu n va ac th vi si DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Thân lồi Ficus hirta Vahl Hình 1.2: Lá loài Ficus hirta Vahl Hình 1.3: Quả loài Ficus hirta Vahl Hình 1.4: Hình vẽ mơ tả loài Ficus hirta Vahl Hình 1.5: Hình vẽ mơ tả lồi Ficus microcarpa Hình 1.6: Lá chín lồi Ficus microcarpa Hình 1.7: Gốc rễ loài Ficus microcarpa lu Hình 1.8: Lá lồi F racemosa L an Hình 1.9: Quả lồi F racemosa L va n Hình 1.10: Thân lồi F racemosa L tn to Hình 1.11: Hình vẽ mơ tả lồi F racemosa L ie gh Hình 1.12: Thân, lồi F hispida L.f p Hình 1.13: Hình vẽ mơ tả lồi F hispida L.f nl w Hình 2.1: Sơ đồ chiết, tách chất từ mẫu khơ lồi F hirta Vahl 34 d oa Hình 3.1: Phổ 1H-NMR chất VB1 40 an lu Hình 3.2: Phổ 1H-NMR chất VB1 41 va Hình 3.3: Phổ 1H-NMR chất VB1 41 ll u nf Hình 3.4: Phổ 13C-NMR chất VB1 43 oi m Hình 3.5: Phổ 13C-NMR chất VB1 43 z at nh Hình 3.6: Phổ HSQC chất VB1 44 Hình 3.7: Phổ HMBC chất VB1 45 z Hình 3.8: Cơng thức cấu tạo chất VB1 47 @ gm Hình 3.9: Phổ 1H-NMR chất VB2 47 m co l Hình 3.10: Phổ 1H-NMR chất VB2 48 Hình 3.11: Phổ 13C-NMR chất VB2 49 an Lu Hình 3.12: Phổ 13C-NMR chất VB2 49 n va ac th vii si Hình 3.13: Phổ HSQC chất VB2 50 Hình 3.14: Cơng thức cấu tạo chất VB2: 7H-furo[3,2-g]chromen-7-one (Psoralene) 52 Hình 3.15: Đường chu n NaNO2 54 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si Saccharomyces cerevisiae: defects in DNA repair increase gene copy number variation" Vol 21: pp 8796 doi: 10.1016/j.dnarep 2014.05.011 PMID 24969513 36.Shenoi, Shrutakirthi D.; Prabhu, Smitha; Indian Association of Dermatologists, Venereologists and Leprologists (November 2014) Photochemotherapy (PUVA) in psoriasis and vitiligo Indian Journal of Dermatology, Venereology and Leprology 80 (6): 497–504 doi:10.4103/0378-6323.144143 ISSN 0973-3922 PMID 25382505 37.Shunyo Matsunaga, Reiko Tanaka and Masao Akagi (1988) Triterpennoids lu from euphorbia maculate Phytochemistry, Vol.27, No 2, pp.535-537 an 38.Singh AB, Yadav DK, Maurya R, Srivastava AK Antihyperglycaemic va n activity of α-amyrin acetate in rats and db/db mice Nat Prod Res, 2009, gh tn to 23(9): 876-882 39.Singh D, and R.K Goel Anticonvulsant effect of Ficus religiosa: Role of ie p serotonergic pathways J Ethnopharmacol, 2009, 123: 330–4 nl w 40.Takahiro Masuda, Mitsuo Takasugit and Masaki Aneta (1998) Psoralen d oa and other linear furanocoumarins as phytoalexins in glehnia littoralis an lu Phytochemistry, Vol 47, No 1, pp 13-16 u nf va 41.Tuyen NV, Kim DSHL, Fong HS, Soejarto DD, Khanh TC, Tri MV, Xuan LT Structure elucidation of two triterpenoids from Ficus fistulosa ll oi m Phytochemistry, 1998, 50: 467-469 z at nh 42.Wu Q, Christensen LA, Legerski RJ, Vasquez KM (June 2005) "Mismatch repair participates in error-free processing of DNA interstrand crosslinks in z human cells" EMBO Rep (6): 551–7 doi:10.1038/sj.embor.7400418 @ l gm PMC 1369090 PMID 15891767 43.Yanliang Wang, Hong Liang, Qingying Zhang, Wei Cheng, Sirong Yi m co Phytochemical and chemotaxonomic study on F tsiangii Merr ex Corner an Lu Biochemical Systematics and Ecology, 2014, 57, 210e215 n va ac th 63 si 44.Yanliang Wang, Hong Liang, Qingying Zhang, Wei Cheng, Sirong Yi Phytochemical and chemotaxonomic study on F tsiangii Merr ex Corner Biochemical Systematics and Ecology, 2014, 57, 210e215 45.Yui Akihara, Emi Ohta, Tatsuo Nehira, Hisashi Omura and Shinji Ohta New prenylated ortho-dihydroxycoumarins from the fruits of Ficus nipponica Chemistry & Biodiversity, 2017, Volume 14, Issue 9, e1700196 46.Yui Akihara, Emi Ohta, Tatsuo Nehira, Hisashi Omura and Shinji Ohta New prenylated ortho-dihydroxycoumarins from the fruits of Ficus nipponica Chemistry & Biodiversity, 2017, Volume 14, Issue 9, e1700196 lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 64 si lu an n va p ie gh tn to PHỤ LỤC d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Hình 3.1: Phổ 1H-NMR chất VB1 an Lu n va ac th PL1 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL2 an Lu Hình 3.2: Phổ 1H-NMR chất VB1 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Hình 3.3: Phổ 1H-NMR chất VB1 an Lu n va ac th PL3 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Hình 3.4: Phổ 13C-NMR chất VB1 an Lu n va ac th PL4 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL5 an Lu Hình 3.5: Phổ 13C-NMR chất VB1 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL6 an Lu Hình 3.6: Phổ HSQC chất VB1 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL7 an Lu Hình 3.7: Phổ HMBC chất VB1 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Hình 3.8: Phổ 1H-NMR chất VB2 an Lu n va ac th PL8 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL9 an Lu Hình 3.9: Phổ 1H-NMR chất VB2 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL10 an Lu Hình 3.10: Phổ 13C-NMR chất VB2 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ Hình 3.11: Phổ 13C-NMR chất VB2 an Lu n va ac th PL11 si lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ n va ac th PL12 an Lu Hình 3.12: Phổ HSQC chất VB2 si