Nghiên cứu nhân giống tỏi một nhánh (allium sativum l ) bằng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật

TRƢỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC o0o KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG TỎI MỘT NHÁNH (Allium sativum l.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 7420201 Giáo viên hướng dẫn Sinh viên thực Mã sinh viên Lớp Khóa : Ths Nguyễn Thị Thơ KS Vũ Thị Phan : Phạm Thị Anh : 1453071818 : K59B- CNSH : 2014 - 2018 Hà Nội, 2018 LỜI CẢM ƠN Để nâng cao kỹ thuật sinh viên ngành Cơng Nghệ sinh học Lâm Nghiệp nói riêng sinh viên đại học Lâm Nghiệp nói chung, đƣợc đồng ý lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp giáo viên hƣớng dẫn em xin tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu nhân giống Tỏi nhánh (Allium sativum L.) kỹ thuật ni cấy mơ tế bào thực vật” Có đƣợc kết trƣớc hết em xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới cô giáo Th.S Nguyễn Thị Thơ KS Vũ Thị Phan tận tâm hƣớng dẫn, bảo truyền đạt kiến thức cho em suốt q trình nghiên cứu để em hoàn thành đƣợc đề tài Em xin cảm ơn ban lãnh đạo Viện CNSH Lâm Nghiệp Bộ môn Tài nguyên thực vật rừng Bên cạnh em xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình thầy, giáo tồn cán viên chức Bộ môn Tài Nguyên thực vật rừng tạo điều kiện, giúp đỡ đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho em để trình nghiên cứu đƣợc thuận lợi Với kết khả quan em xin tiếp tục đƣợc nghiên cứu tiếp để đề tài đạt đƣợc kết tốt Với tinh thần cố gắng, chăm nhƣ ham học hỏi nhiên với kinh nghiệm hạn chế nên q trình nghiên cứu khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận đƣợc lời nhận xét, đóng góp ý kiến thầy, giáo để đề tài nghiên cứu em đƣợc hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 14 tháng 05năm 2018 Sinh viên thực Phạm Thị Anh i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1 Giới thiệu Tỏi 1.1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái Tỏi nhánh 1.1.2 Giá trị 1.1.3.Tình trạng phân bố khai thác 1.2 Nghiên cứu ni cấy in vitro lồi họ hành 1.3 Nghiên cứu nuôi cấy in vitro Tỏi 1.3.1 Trong nƣớc 1.3.2.Trên giới PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Mục tiêu: 10 2.1.1 Mục tiêu chung 10 2.1.2 Mục tiêu cụ thể 10 2.2 Nội dung: 10 2.2.1 Nghiên cứu kỹ thuật tạo mẫu in vitro 10 2.2.2 Nghiên cứu kỹ thuật cảm ứng tạo mô sẹo 10 2.2.3 Nghiên cứu kỹ thuật hình thành phôi soma từ mô sẹo 10 2.2.4 Nghiên cứu kỹ thuật tái sinh chồi 10 2.2.6 Nghiên cứu kỹ thuật tạo in vitro hoàn chỉnh 11 2.3 Vật liệu nghiên cứu, địa điểm điều kiện bố trí thí nghiệm 11 2.3.1 Vật liệu nghiên cứu: 11 2.3.2 Địa điểm điều kiện bố trí thí nghiệm: 11 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu: 11 2.4.1 Phƣơng pháp tạo mẫu Tỏi nhánh 11 ii 2.4.2 Phƣơng pháp nghiên cứu tạo mô sẹo Tỏi nhánh 12 2.4.3 Phƣơng pháp hình thành phôi soma từ mô sẹo 12 2.4.5 Nhân nhanh chồi 14 2.4.6 Ra rễ tạo hoàn chỉnh 15 2.4.7 Phƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 15 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 3.1 Kết tạo mẫu 18 3.2 Kết tạo mô sẹo Tỏi nhánh 20 3.3 Nghiên cứu khả hình thành phơi soma từ mơ sẹo 23 3.4 Nghiên cứu khả tái sinh chồi 25 3.4.1.Tái sinh chồi từ phôi soma 25 3.4.2 Kết nghiên cứu kỹ thuật tái sinh chồi Tỏi trực tiếp từ lát cắt mỏng 28 3.5 Kết nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi Tỏi 31 3.6 Kết nghiên cứu kỹ thuật tạo Tỏi hoàn chỉnh 34 KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 38 Kết luận 38 Tồn 38 Kiến nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BAP 6-Benzylaminopurine Ki kinetin NAA Naphthalene Acetic Acid 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid TDZ Thidiazuron CT Công thức Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn iv C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần dinh dƣỡng có 100g Tỏi tƣơi Bảng 2.1: Bố thí nghiệm thu thập số liệu khả tạo mẫu Tỏi nhánh 12 Bảng 2.2: Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng tới khả tạo mô sẹo Tỏi nhánh 12 Bảng 2.3: Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hịa sinh trƣởng tới khả hình thành phôi soma từ mô sẹo 13 Bảng 2.4: Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng tới khả tái sinh chồi từ phôi soma 13 Bảng 2.5: Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng tới khả tái sinh chồi Tỏi trực tiếp từ lát cắt mỏng 14 Bảng 2.6: Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng tới khả nhân nhanh chồi Tỏi 15 Bảng 2.7: Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng tới khả tạo hoàn chỉnh 15 Bảng 3.1: Khả tạo mẫu nảy mầm Tỏi nhánh 18 Bảng 3.2 Khả cảm ứng tạo mô sẹo lát cắt mỏng 21 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả hình thành phôi soma từ mô sẹo 24 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả tái sinh chồi từ phôi soma 26 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả tái sinh chồi trực tiếp từ lát cắt mỏng 28 Bảng 3.6: Ảnh hƣởng chất ĐHST tới khả nhân nhanh chồi Tỏi 32 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ chồi Tỏi 35 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn v C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1: Tỷ lệ mẫu tỷ lệ mẫu nảy mầm mẫu Tỏi công thức khử trùng khác 18 Hình 3.2: Mẫu Tỏi đƣợc khử trùng công thức CT1 sau ngày ni cấy 20 Hình 3.3: Hình ảnh mơ sẹo nuôi cấy môi trƣờng TD1, TD2, TD3 VÀ TD4 sau tháng theo dõi 23 Hình 3.4: Hình ảnh phơi soma thu đƣợc q trình hình thành sau tuần nuôi cấy môi trƣờng: zxA: Trên B2; B: Trên B3; C: T3; D: B4 25 Hình 3.5: Chồi Tỏi tái sinh từ phôi soma môi trƣờng: 27 Hình 3.6: Ảnh hƣởng chất ĐHST lên khả tái sinh chồi trực tiếp từ lát cắt mỏng 28 Hình 3.7: Chồi Tỏi tái sinh trực tiếp từ lát cắt củ mơi trƣờng: 30 Hình 3.8: Tỷ lệ tạo đa chồi công thức thí nghiệm 32 Hình 3.9: Chồi Tỏi đƣợc nhân nhanh môi trƣờng: 34 Hình 3.10: Tỷ lệ rễ cơng thức thí nghiệm khác 35 Hình 3.11: Cây hồn chỉnh mơi trƣờng: 37 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn vi C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an ĐẶT VẤN ĐỀ Cây nhánh (tỏi cô đơn) có tên khoa học Allium sativum L thuộc họ hành tỏi Alliaceae, thuốc rau gia vị quan trọng (Nguyễn Thanh Phƣơng cs, 2012) Những năm trƣớc công nguyên Tỏi đƣợc trồng vùng nhiệt đới Trung Á, sau đƣợc trồng rộng rãi Hy Lạp, Ai Cập La Mã Hiện Tỏi đƣợc trồng phổ biến nhiều nƣớc giới đặc biệt Việt Nam, số vùng trồng Tỏi tiếng nhƣ: thành nhiều vùng chuyên canh có tiếng nhƣ Tiên Sơn (Bắc Ninh), Mê Linh (Vĩnh Phúc), Hà Nội, Hƣng Yên, Hải Phòng, Quảng Ngãi, Phú Yên, Khánh Hòa, Ninh Thuận Đà Lạt (Tạ Thu Cúc cs, 2000) Các nhà khoa học nƣớc nghiên cứu đƣa nhiều công dụng Tỏi nhánhđối với sức khỏe ngƣời: làm gia vị, làm tỏi đen chữa đƣợc nhiều bệnh khác Trong Tỏi nhánh chứa 0,1-0,36% hợp chất dầu dễ bay quy định cho tính chất dƣợc lí Tỏi Tỏi có chứa 33 hợp chất sulfur, 17 amino acid, đƣờng, arginine chất khoáng chất nhƣ selenium enzymes nhƣ allinase, peroxidases, myrosinase, …Trong có hoạt chất allicin, liallyl sulfide ajoene Allicin hoạt chất mạnh quan trọng tỏi có tác dụng điều trị nhiều loại bênh: ung thƣ, chống oxi hóa, chống nhiễm trùng, giảm mỡ máu, trị thƣơng hàn,…(Trịnh Văn Hải, 2013) Theo tổ chức Y tế giới WHO, tỏi rƣợu Tỏi nhánh chữa đƣợc nhóm bệnh bao gồm thấp khớp (sƣng khớp, mỏi xƣơng cốt ); tim mạch (hở van tim, huyết áp cao, thấp); phế quản tiêu hóa (loét dày, viêm tá tràng, …) (Trần Bích Ngọc, 2015) Tỏi Lý Sơn có mùi vị đặc trƣng thơm ngon so với Tỏi vùng khác Tuy nhiên việc trồng tỏi theo phƣơng pháp truyền thống vùng đảo Lý Sơn lại gặp vơ vàn khó khăn: giống, chi phí sản xuất điều kiện khí hậu khắc nghiệt suất thu đƣợc không cao, đặc biệt Tỏi nhánh (chỉ thu đƣợc vài ký/xào) Việc nhân giống Tỏi nhánh chủ yếu hạt nên suất tỏi vụ sau thƣờng không ổn định Đây khó khăn lớn việc Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an nhân giống loại tỏi quý Do giá trị Tỏi nhánh vùng đảo Lý Sơn cao sản lƣợng khan Kỹ thuật nuôi cấy mô-tế bào đời đáp ứng đƣợc hầu hết nhƣng thiếu xót phƣơng pháp truyền thống: Tạo lƣợng lớn khỏe mạnh, đồng đều, bệnh không phụ thuộc vào thời tiết Cho đến nay, Việt Nam có số cơng trình nghiên cứu in vitro Tỏi: Trịnh Văn Hải (2013), Nguyễn Thanh Phƣơng, Nguyễn Thị Lý Anh (2012),…Từ sở mạnh dạn tiến hành chuyên đề nghiên cứu thử nghiệm nhân giống vơ tính Tỏi nhánhvới tên: “Nghiên cứu nhân giống Tỏi nhánh (Allium sativum L.) kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật” Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1 Giới thiệu Tỏi 1.1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái Tỏi nhánh Tỏi nhánh thuộc họ hành tỏi, tên khoa học Alium sativum (L) Tỏi nhánh thuộc thân cỏ, mọc hàng năm, dẹp dày Củ tỏi nằm phía dƣới mặt đất, củ tỏi có tép Tỏi có màu trắng, hình bầu dục, kích thƣớc nhỏ đầu ngón tay út, tỏi có đầu nhọn dẹp dài khoảng cm rộng cm, có lớp vỏ ngồi với nhiều lớp vỏ.Tỏi nhánh chứa nhiều tinh dầu nên ăn vào, không gây mùi hôi nhƣ loại tỏi thông thƣờng khác mà có vị cay thơm đặc biệt Thân: Thân thật chồi mọc (tép tỏi), thân khí sinh có hình trụ trịn vƣơn cao, mang phát hoa Thân thật phía dƣới mang nhiều rễ phụ, bẹ chồi (tép tỏi) hình thành thân giả, phần bẹ chồi bó thành khối tạo nên củ (giả) Củ tỏi có tép đƣợc bao bọc nhiều lớp vỏ Lá: Phần dƣới bẹ ôm sát chồi bên (tép tỏi) Phần phiến bên cứng, thẳng, dài 15-50cm, rộng 1-2,5cm có rãnh khía, mép ráp Hoa: Tỏi có hoa mọc thành cụm đầu trục hình trụ từ thân củ kéo dài Cuống hoa mọc trực tiếp từ củ tỏi Hoa tỏi rộng hình lán, cụm hoa tán giả hình cầu, màu trắng, đỏ xanh nhạt Hoa xếp thành tán thân cán hoa dài 55cm hay Bao hoa màu trắng hay hồng bao mo dễ rụng tận thành mũi nhọn dài Hoa lƣỡng tính, thụ phấn nhờ côn trùng Rễ: Rễ Tỏi thuộc loại rễ chùm, phát triển kém, tập trung chủ yếu lớp đất mặt, chịu hạn Rễ Tỏi có nhiều sợi dài, phân nhánh yếu, đƣợc bao phủ hệ thống nhiều lông hút Tỏi chịu lạnh tốt, sinh trƣởng phát triển nhiệt độ18 - 20°C, cịn để tạo củ cần từ 20 - 22°C Tỏi ƣa ánh sáng dài ngày, có đủ nắng 12 giờ/ngày củ nhanh Tỏi loại ƣa nƣớc nhƣng mức độ vừa phải Nếu thiếu nƣớc đanh lại, củ nhỏ Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 2: Kiểm tra tỷ lệ mẫu Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Mausach * ct 270 100.0% 0.0% Total N Percent 100.0 270 % MAUSACH * CT Crosstabulation CT Total CT1 CT2 CT3 Count 2 Maunhie % within m 3.3% 2.2% 2.2% 2.6% CT Mausach Count 87 88 88 263 Mausach % within 96.7% 97.8% 97.8% 97.4% CT Count 90 90 90 270 Total % within 100.0% 100.% 100.0% 100.0% CT Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 864 868 Pearson Chi-Square 293a Likelihood Ratio 282 Linear-by-Linear 219 640 Association N of Valid Cases 270 a cells (50.0%) have expected count less than The minimum expected count is 2.33 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 3: Tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Mautaomoseo * ct 360 100.0% 0.0% Total N Percent 100.0 360 % MAUTAOMOSEO * CT Crosstabulation CT Total TD1 TD2 TD3 TD4 Count 43 29 38 47 157 00 % within 47.8% 32.2% 42.2% 52.2% 43.6% CT Mautaomose o Count 47 61 52 43 203 Taomose % within o 52.2% 67.8% 57.8% 47.8% 56.4% CT Count 90 90 90 90 360 Total % within 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% CT Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 043 041 Pearson Chi-Square 8.167a Likelihood Ratio 8.279 Linear-by-Linear 993 319 Association N of Valid Cases 360 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 39.25 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Mauhinhthanhphois oma * ct 720 100.0% Total N Percent 0.0% 720 100.0% Phụ lục 4: tỷ lệ mẫu tạo phôi soma Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Mauhinhthanhphois oma * ct 720 100.0% Total N Percent 0.0% 720 100.0% MAUHINHTHANHPHOISOMA * CT Crosstabulation CT Count Maukhonghi nhthanhphoi % within soma Mauhinhtha CT nhphoisoma Count Mauhinhthan % hphoisoma within CT T2 T3 T4 B1 B2 B3 B4 12 10 20 26 15 12 19 120 13.3 11.1 22.2 28.9 16.7 6.7 13.3 21.1 16.7 % % % % % % % % % 78 80 70 64 75 84 78 71 600 86.7 88.9 77.8 71.1 83.3 93.3 86.7 78.9 83.3 % % % % % % % % % Count 90 Total Total T1 90 90 90 90 90 90 90 720 % 100 100.0 100.0 100 100 100 100 100.0 100.0 within 0% % % 0% 0% 0% 0% % % CT Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 002 002 Pearson Chi-Square 22.880a Likelihood Ratio 23.136 Linear-by-Linear 017 896 Association N of Valid Cases 720 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 15.00 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 5: Tỷ lệ mẫu tái sinh chồi từ phôi soma Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Somautaochoi * ct Somautaochoi Total 720 100.0% 0.0% Total N Percent 720 SOMAUTAOCHOI * CT Crosstabulation CT T1 T2 T3 T4 B1 Count 21 25 28 35 20 % 00 23.3 27.8 31 38.9 22.2 within % % 1% % % CT Count 69 65 62 55 70 % Taochoi 76.7 72.2 68 61.1 77.8 within % % 9% % % CT Count 90 90 90 90 90 % 100 100 100 100 100 within 0% 0% 0% 0% 0% CT Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 004 003 Pearson Chi-Square 20.751a Likelihood Ratio 21.554 Linear-by-Linear 005 942 Association N of Valid Cases 720 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 24.50 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn 100.0% Total B2 B3 B4 12 23 32 196 13.3 25.6 35.6 % % % 27.2 % 78 58 524 86.7 74.4 64.4 % % % 72.8 % 90 67 90 90 720 100 100 100 100.0 0% 0% 0% % C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 6: Số lƣợng chồi tb/phôi soma Descriptives Sochoitb N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Minimu Maximu Interval for Mean m m Lower Upper Bound Bound 5.3596 6.1071 5.56 5.83 5.0347 6.5653 5.47 6.08 T1 T2 5.7333 5.8000 15044 30806 08686 17786 T3 5.7000 15133 08737 5.3241 6.0759 5.58 5.87 T4 5.5233 41016 23681 4.5044 6.5422 5.06 5.84 B1 5.3733 48645 28085 4.1649 6.5817 4.91 5.88 B2 5.8800 14422 08327 5.5217 6.2383 5.76 6.04 B3 5.6400 08718 05033 5.4234 5.8566 5.58 5.74 B4 5.6167 15275 08819 5.2372 5.9961 5.45 5.75 24 5.6583 27413 05596 5.5426 5.7741 4.91 6.08 Total Test of Homogeneity of Variances Sochoitb Levene df1 df2 Sig Statistic 1.978 16 122 ANOVA Sochoitb Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 534 076 1.194 16 075 1.728 23 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn F 1.023 Sig .453 C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 7: Tỷ lệ mẫu tái sinh chồi trực tiếp Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Mautaisinh * ct 540 100.0% 0.0% Total N Percent 540 100.0% MAUTAISINH * CT Crosstabulation CT S1 S2 S3 S4 Count 63 55 47 33 Maukhongtai % within 20.5 17.9 15.3 10.7 sinh mautaisinh % % % % Mautaisinh Count 27 35 43 57 Mautaisinh % within 11.6 15.1 18.5 24.6 mautaisinh % % % % Count 90 90 90 90 Total % within 16.7 16.7 16.7 16.7 mautaisinh % % % % Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 000 000 Pearson Chi-Square 24.908a Likelihood Ratio 25.023 Linear-by-Linear 2.328 127 Association N of Valid Cases 540 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 38.67 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Total S5 58 18.8 % 32 13.8 % 90 16.7 % S6 52 308 16.9 100.0 % % 38 232 16.4 100.0 % % 90 540 16.7 100.0 % % C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ biểu 8: Số chồi tb/mẫu tái sinh trực tiếp Descriptives SOCHOITB N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Minim Maxim Interval for Mean um um Lower Upper Bound Bound 1.5353 2.0247 1.70 1.89 S1 1.7800 09849 05686 S2 1.7600 13892 08021 1.4149 2.1051 1.60 1.85 S3 1.7933 05132 02963 1.6659 1.9208 1.75 1.85 S4 1.8733 03055 01764 1.7974 1.9492 1.84 1.90 S5 1.7300 09644 05568 1.4904 1.9696 1.62 1.80 S6 Tota l 1.7400 10536 06083 1.4783 2.0017 1.64 1.85 18 1.7794 09270 02185 1.7333 1.8255 1.60 1.90 Test of Homogeneity of Variances SOCHOITB Levene df1 df2 Sig Statistic 1.843 12 179 ANOVA SOCHOITB Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 040 008 106 12 009 146 17 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn F 910 Sig .506 C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ biểu 9: tỷ lệ mẫu tạo đa chồi Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Mautaodachoi * ct 360 100.0% 0.0% Total N Percent 100.0 360 % MAUTAODACHOI * ct Crosstabulation ct Total NN1 NN2 NN3 NN4 Count 20 25 33 44 122 maukhongtaodac % within hoi 22.2% 27.8% 36.7% 48.9% 33.9% ct Mautaodachoi Count 70 65 57 46 238 Mautaodachoi % within 77.8% 72.2% 63.3% 51.1% 66.1% ct Count 90 90 90 90 360 Total % within 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% 100.0% ct Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 001 001 Pearson Chi-Square 16.316a Likelihood Ratio 16.304 Linear-by-Linear 15.826 000 Association N of Valid Cases 360 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 30.50 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Biểu 10: Số chồi tb/mẫu nhân nhanh Descriptives SOCHOITB N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Minimum Maximum Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 2.1347 2.7453 2.35 2.58 2.1200 2.6466 2.27 2.48 NN1 NN2 2.4400 2.3833 12288 07095 10599 06119 NN3 2.3567 05774 03333 2.2132 2.5001 2.29 2.39 NN4 2.3200 09849 05686 2.0753 2.5647 2.21 2.40 Total 12 2.3750 09615 02776 2.3139 2.4361 2.21 2.58 Test of Homogeneity of Variances SOCHOITB Levene df1 df2 Sig Statistic 733 561 ANOVA SOCHOITB Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 023 008 079 010 102 11 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn F 778 Sig .539 C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 11: tỷ lệ mẫu rễ Case Processing Summary Cases Valid Missing N Percent N Percent Maurare * ct 360 100.0% 0.0% Total N Percent 100.0 360 % MAURARE * CT Crosstabulation CT DC R1 R2 Count 0 23 Khongrare % within 0.0% 0.0% 25.6% CT Maurare Count 90 90 67 Rare % within 100.0% 100.0% 74.4% CT Count 90 90 90 Total % within 100.0% 100.0% 100.0% CT Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) 000 Pearson Chi-Square 79.840a 100.19 Likelihood Ratio 000 Linear-by-Linear 71.624 000 Association N of Valid Cases 360 a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 15.00 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn Total R3 37 60 41.1% 16.7% 53 300 58.9% 83.3% 90 360 100.0% 100.0% C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 12: Số lƣợng rễ Descriptives SORETB N Mean DC R1 R2 R3 Total 6.2100 05568 4.2767 17474 3.1233 12014 3.0367 15044 4.1617 1.34162 3 3 12 Std Deviatio n Std Error 95% Confidence Minimum Maximum Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 6.0717 6.3483 6.16 6.27 3.8426 4.7107 4.13 4.47 2.8249 3.4218 3.00 3.24 2.6629 3.4104 2.88 3.18 3.3092 5.0141 2.88 6.27 03215 10088 06936 08686 38729 Test of Homogeneity of Variances SORETB Levene df1 df2 Sig Statistic 1.014 436 ANOVA SORETB Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 19.658 6.553 141 018 19.799 11 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn F 370.73 Sig .000 C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an SORETB CT N Subset for alpha = 0.05 R3 3.0367 3.1233 Tukey R2 a B R1 4.2767 DC 6.2100 R3 3.0367 R2 3.1233 Duncan R1 4.2767 a DC 6.2100 Sig .448 1.000 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Phụ lục 12: Kích thƣớc rễ Descriptives CHIEUDAITB N Mean Std Deviation Std Error 95% Confidence Minimum Maximum Interval for Mean Lower Upper Bound Bound 2.2416 2.3450 2.27 2.31 DC 2.2933 02082 01202 R1 1.2533 08145 04702 1.0510 1.4557 1.16 1.31 R2 8767 07506 04333 6902 1.0631 79 92 R3 7133 04933 02848 5908 8359 68 77 12 1.2842 64414 18595 8749 1.6934 68 2.31 Total Test of Homogeneity of Variances CHIEUDAITB Levene df1 df2 Sig Statistic 3.015 094 ANOVA CHIEUDAITB Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 4.534 1.511 030 004 4.564 11 Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn F 399.456 Sig .000 C.vT.Bg.Jy.Lj.Tai lieu Luan vT.Bg.Jy.Lj van Luan an.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an.Tai lieu Luan van Luan an Do an Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhd.vT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.LjvT.Bg.Jy.Lj.dtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn.Stt.010.Mssv.BKD002ac.email.ninhddtt@edu.gmail.com.vn.bkc19134.hmu.edu.vn