THÔNG TIN TÀI LIỆU
Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT TRẦN THỊ THU HIỀN lu an n va p ie gh tn to PHÂN LẬP TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA CHỦNG NẤM ĐẢM THU THẬP TỪ VƢỜN QUỐC GIA BIDOUP- NÚI BÀ d oa nl w LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC oi lm ul nf va an lu z at nh z gm @ Hà Nội tháng 12 năm 2015 m co l an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Lời Cảm Ơn Trước hết, xin bày tỏ biết ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Đặng Thị Cẩm Hà tận tình bảo, quan tâm hướng dẫn dìu dắt tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, giúp tơi có thêm nhiều kiến thức kinh lu nghiệm quý báu nghiên cứu khoa học an n va Xin cám ơn Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam hỗ trợ kinh phí Bidoup- Núi Bà để tạo nguồn nguyên liệu cho phát triển chế phẩm ứng dụng gh tn to từ đề tài: “Phân lập chọn lọc vi sinh vật sinh enzyme ngoại bào vườn Quốc gia ie nơng nghiệp, lâm nghiệp” để tơi hồn thành cơng trình Tôi xin cám ơn chủ p nhiệm đề tài thành viên tham gia tạo điều kiện giúp thu thập số liệu nl w Tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS Đinh Thị Thu Hằng, Th.S Đào Thị Ngọc Ánh, d oa Th.S Nguyễn Thị Lan Anh, Th.S Phạm Quang Huy, Th.S Ngô Thị Huyền Trang, KS an lu Nguyễn Hải Vân, KS Nguyễn Đăng Thắng, KS Hoàng Thị Nhung, CN Nguyễn Văn va Huynh phịng Cơng nghệ sinh học tái tạo mơi trường, Viện Công nghệ sinh học, Viện ul nf Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện cho oi lm tơi q trình làm khóa luận tốt nghiệp Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn thầy cô viện Sinh thái Tài nguyên z at nh sinh vật, viện Cơng nghệ sinh học tận tình dạy dỗ tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học thực luận văn z gm @ Bên cạnh đó, tơi xin cảm ơn bố mẹ, chồng người thân yêu tạo điều kiện động viên giúp đỡ vật chất tinh thần để tơi hồn thành m co l khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2015 an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Trần Thị Thu Hiền Lời cam đoan Tôi xin cam đoan trực tiếp thực nghiên cứu luận văn Mọi kết thu không chép từ nghiên cứu khác Các số liệu, sơ đồ kết lu luận văn chưa cơng bố an va Mọi liệu hình ảnh, biểu đồ trích dẫn tham khảo luận văn n thu thập sử dụng từ nguồn liệu mở với đồng ý tác giả to gh tn Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm với lời cam đoan trên! p ie Tác giả d oa nl w oi lm ul nf va an lu Trần Thị Thu Hiền z at nh z m co l gm @ an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền MỤC LỤC lu LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU an va n CHƢƠNG I : TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.2 Enzyme laccase 1.2.1 Giới thiệu laccase p ie gh tn to 1.1 Đặc điểm tự nhiên Vƣờn Quốc gia Bidoup – Núi Bà 1.2.2 Cấu trúc phân tử laccase nl w 1.2.3 Cơ chế xúc tác laccase oa 1.2.4.Chất gắn kết d 1.2.5 Tính chất laccase lu oi lm ul nf va an 1.2.5.1 pH tối ưu độ bền pH 1.2.5.2 Nhiệt độ tối ưu độ bền nhiệt 1.2.5.3 Hằng số động học phản ứng laccase 1.2.5.4 Chất ức chế laccase 1.2.6 Sự phân bố laccase vi sinh vật sinh enzyme laccase 10 1.2.7 Gene mã hóa enzyme laccase 12 z at nh 1.2.8 Ứng dụng laccase 13 z 1.2.8.1 Xử lý rác thải loại màu thuốc nhuộm 13 1.2.8.2 Ứng dụng xử lý khí độc mơi trường nhiễm chuyển hóa polymer mạch dài 14 1.2.8.3 Ứng dụng công nghệ thực phẩm 15 1.2.8.4 Ứng dụng công nghệ dược phẩm công nghệ nano 15 1.2.8.5 Các ứng dụng khác laccase 16 1.2.9 Chi Polyporus đặc tính 17 m co l gm @ 1.3 Thuốc nhuộm đặc tính chúng 20 an Lu 1.3.1 Khái quát phân loại thuốc nhuộm 20 va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền 1.3.2 Khả phân hủy, loại màu thuốc nhuộm vi sinh vật sinh laccase 23 1.3.3 Ô nhiễm nước thải dệt nhuộm tác hại 26 1.3.3.1 Ô nhiễm nước thải dệt nhuộm thuốc nhuộm 26 1.3.3.2 Tác hại ô nhiễm thuốc nhuộm 26 CHƢƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 28 2.1 Vật liệu phƣơng pháp 28 2.1.1 Vật liệu 28 2.1.2 Hóa chất 28 lu 2.1.3 Thiết bị 28 an 2.1.4 Các môi trường nuôi cấy 28 va 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 29 n 2.2.1 Phân lập chủng nấm sinh enzyme ngoại bào 29 to 2.2.3 Phương pháp thu dịch laccase môi trường lên men lỏng để xác định hoạt tính 29 p ie gh tn 2.2.2 Sàng lọc chủng nấm sinh enzyme ngoại bào 29 2.2.4 Phương pháp xác định hoạt tính laccase 30 nl w 2.2.5 Phân loại chủng nấm 30 d oa 2.2.5.1 Phân loại theo phương pháp truyền thống 30 2.2.5.2 Phân loại phương pháp xác định so sánh trình tự vùng ITS 31 2.2.5.3 Phương pháp xác định trình tự vùng ITS 31 2.2.6 Nghiên cứu ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy lên khả sinh tổng hợp laccase 31 va an lu oi lm ul nf 2.2.6.1 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 32 2.2.6.2 Ảnh hưởng chất cảm ứng 32 2.2.6.3 Ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy 32 2.2.6.4 Ảnh hưởng nguồn cacbon 32 2.2.6.5 Ảnh hưởng nguồn nitơ vô 32 2.2.6.6 Ảnh hưởng nguồn nitơ hữu 32 2.2.7 Đánh giá hiệu loại màu thuốc nhuộm hoạt tính laccase thơ từ chủng nấm FBD154 33 z at nh z @ l gm CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN…………………………………………… 34 3.1 Phân lập chủng nấm sinh enzyme ngoại bào 34 3.2 Sàng lọc chủng nấm sinh enzyme ngoại bào 35 m co 3.3 Đặc điểm hình thái, phân loại định danh chủng nấm FBD154 38 an Lu 3.3.1 Đặc điểm hình thái 38 3.3.2 Phân loại chủng FBD154 39 va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền 3.3.2.1 Phân loại theo phương pháp truyền thống 39 3.3.2.2 Phân loại phương pháp xác định so sánh trình tự vùng ITS (ITS1 - 5,8 S - ITS2) 39 3.4 Chọn lọc môi trƣờng điều kiện nuôi cấy 41 3.4.1 Ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến khả sinh tổng hợp laccase chủng Polyporus sp FBD154 41 3.4.2 Ảnh hưởng pH môi trường lên khả sinh tổng hợp laccase chủng Polyporus sp FBD154 43 3.4.3 Ảnh hưởng chất cảm ứng lên khả sinh tổng hợp laccase chủng Polyporus sp FBD154 44 lu an 3.4.4 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 môi trường lên khả sinh laccase chủng Polyporus sp FBD154 46 va n 3.4.5 Ảnh hưởng nguồn cacbon lên khả sinh tổng hợp laccase chủng Polyporus sp FBD154 47 ie gh tn to 3.4.6 Ảnh hưởng nguồn nitơ lên khả sinh tổng hợp laccase chủng Polyporus sp FBD154 48 p 3.4.6.1 Ảnh hưởng nguồn nitơ vô 48 3.4.6.2 Ảnh hưởng nguồn nitơ hữu 50 3.5 Khả loại màu thuốc nhuộm enzyme thô sinh tổng hợp từ chủng nấm Polyporussp FBD154 51 oa nl w d 3.5.1 Khả loại màu nhóm anthraquinone (RBBR, NY5) laccase thô từ chủng Polyporus sp FBD154 52 lu va an 3.5.2 Khả loại màu azo (NY1, NY7) laccase thô từ chủng Polyporus sp FBD154 54 oi lm ul nf 3.5.3 Khả loại màu thương mại (CLS LF-2B) laccase thô chủng Polyporus sp FBD154 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 z at nh Kết luận 60 Kiến nghị 60 z TÀI LIỆU THAM KHẢO 62 gm @ Tiếng Việt 62 Tiếng Anh 62 l PHỤ LỤC 74 m co an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT lu an n va 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid Ace Acetosyringone bp Base pair CLS Dimaren Black CLS CGK Chất gắn kết DDT Dichloro - Trichloroethane Diphenyl DNA Deoxyribonucleic acid Đtg Đồng tác giả HCH Hexachlorocyclohexane gh tn to ABTS HBT Hydroxybenzotriazole ie Internal transcribed spacer p ITS Laccase nl Everzol Red d oa LF-2B w Lac Lignin peroxidase MnP Manganese peroxidase NY1 Acid red 299 NY5 Acid blue 281 NY7 Acid red 266 PCR Polymerase Chain Reaction RBBR Remazol brilliant blue R Si Sinapic acid Sy Syringaldehyde VIO Violuric acid VSV Vi sinh vật oi lm ul nf va an lu LiP z at nh z m co l gm @ an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số vi sinh vật có khả sinh laccase 11 Bảng 1.2 Một số loại thuốc nhuộm hoạt tính 23 Bảng 3.1 Các chủng nấm sinh enzym ngoại bào 35 Bảng 3.2 Hoạt tính laccase hình ảnh khuẩn lạc chủng nấm môi trường PDA ………………………………………………………………………………… 36 Bảng 3.3 Hiệu suất loại màu thuốc nhuộm hoạt tính laccase FBD154 có mặt chất gắn kết khác 58 lu an Bảng 3.4 So sánh hiệu suất loại màu laccase chủng nấm FBD154 so với laccase thu chủng nấm khác 59 n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh khơng gian ba chiều laccase từ M albomyces Hình 1.2 Trung tâm hoạt động laccase Hình 1.3 Cơ chế xúc tác laccase [40] Hình 3.1 Hoạt tính tự nhiên mẫu nấm từ Bidoup 34 Hình 3.2 Hoạt tính laccase chủng nấm phân lập từ Bidoup – Núi Bà 38 Hình 3.3 Hình thái khuẩn lạc chủng nấm FBD154 38 Hình 3.4 Hệ sợi nấm kính hiển vi quang học 39 lu an n va p ie gh tn to Hình 3.5 Cây phát sinh chủng lồi chủng FBD154 40 Hình 3.6 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến khả sinh laccase chủng Polyporus sp FBD154 42 Hình 3.7 Ảnh hưởng pH mơi trường lên khả sinh laccase chủng Polyporus sp.FBD154 43 Hình 3.8 Ảnh hưởng chất cảm ứng lên khả sinh laccase chủng Polyporus oa nl w sp FBD154 45 Hình 3.9 Ảnh hưởng nồng độ CuSO4 môi trường lên khả sinh laccase chủng d Polyporus sp FBD154 46 Hình 3.10 Ảnh hưởng nguồn cacbon lên khả sinh laccase chủng 47 Hình 3.11 Ảnh hưởng nguồn nitơ vô lên khả sinh laccase chủng Polyporus sp.FBD154 49 Hình 3.12 Ảnh hưởng nguồn nitơ hữu lên khả sinh laccase chủng Polyporus sp.FBD154 50 Hình 3.13 Khả loại màu thuốc nhuộm RBBR (A); NY5 (B) dịch enzyme thô chủng Polyporus sp FBD154 có khơng cómặt chất gắn kết 52 Hình 3.14 Sự thay đổi màu RBBR laccase thô từ chủng Polyporus sp.FBD154 oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ có khơng có mặt chất gắn kết 52 Hình 3.15 Sự thay đổi màu NY5 laccase thô từ chủng Polyporus sp.FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 52 Hình 3.16 Khả loại màu thuốc nhuộm NY1 (A); NY7 (B) enzyme thô chủng Polyporus sp FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 54 an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Hình 3.17 Sự thay đổi màu NY1 laccase thơ từ chủng Polyporus sp FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 54 Hình 3.18 Sự thay đổi màu NY7 laccase thô từ chủng Polyporus sp FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 54 Hình 3.19 Khả loại màu thuốc nhuộm CLS (A); LF-2B (B) dịch enzyme thơ chủng Polyporus sp FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 55 Hình 3.20 Sự thay đổi màu CLS laccase thô từ chủng Polyporus sp FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 56 lu an Hình 3.21 Sự thay đổi màu LF-2B laccase thô từ chủng Polyporus sp FBD154 có khơng có mặt chất gắn kết 56 n va p ie gh tn to d oa nl w oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu va http://www.lrc.tnu.edu.vn n Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN ac th si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền versicolor NCIM 996 by nutrient optimization using response surface methodology Appl Biochem Biotechnol 151(2-3): 371-379 Bhatnagar A., Sillanpaa M (2010) Utilization of agro-industrial and municipal waste materials as potential adsorbents for water treatment: areview.Chem Eng J157:277296 10 Bibi I and Bhatti, H.N (2012) Biodecolorization of Reactive Black by laccase mediator system.Afri Jour Biotech 11(29): 7464-7471 lu an 11 Burton S (2003) Laccases and phenol oxidases in organic synthesis Curr Org n va Chem7: 1317-1331 tn to 12 Cavallazzi JRP, Kasuya1 CM, Soares MA (2005) Screening of inducers for laccase gh production by Lentinula edodes in liquid medium Brazilian J Microb 36: 383-387 p ie 13 Chacko J T., Subramaniam K (2011)Enzymatic degradation of azo dyesa review w Int J Environ Sci 1:1250-60 synthetic oa nl 14 Charumathi D., Das N (2012)Packed bed column studies for the removal of dyes from textile wastwater using immobilised dead C d an lu TropicalisDesalination 285:22-30 nf va 15 Chang J., Kuo T., Chao Y., Ho J., Lin P (2000)Azo dye decolorization with a oi lm ul mutant Escherichia coli strain Biotechnol Lett2 (9): 807–812 16 Chen S.C, Wu P.H, Su Y.C, Wen T.N, Wei Y.S, Wang N.C, Hsu C.A, Wang A.H, z at nh Shyur L.F (2012) Biochemical characterization of a novel laccase from the basidiomycete fungus Cerrena sp WR1 Protein Eng Des Sel 25(11): 761-9 gm @ filamentous fungi.Biotech Adv 25: 558-569 Laccase production at reactor scale by z 17 Couto S.R and Herrera J.L.T (2007) l 18 Cui T (2009) Enhanced large-scale production of laccases from Coriolopsis m co polyzona forusein dye bioremediation PhD thesis.The University of Westminster 19 Cullen D (2002) Molecular genetics of lignin-degrading fungi and theirapplications an Lu in organopollutant degradation The Mycota XI Agricultural Application Springer- n va ac th 63 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Verlag Berlin Heidelberg 20 Dâssi D., Rodríguez-Couto S., Nasri M., Mechichi T (2014) Biodegradation of textile dyes by immobilized laccase from Coriolopsis gallica into Ca-alginate beads.Int Biodeterior Biodegrad90: 71-78 21 Dhakar Kusum, Jain Rahul, Tamta Sushma ,Pandey Anita (2014) Prolonged Laccase Production by a Cold and pH Tolerant Strain of Penicillium pinophilum (MCC 1049) Isolated from a Low Temperature EnvironmentEnzyme Researc 2004:6 pages lu an 22 Dhouib.A., Chakroun H., Mechichi T., Martinez M.J, Sayadi S(2010)Purification n va and characterization of a novel laccase from the ascomycete Trichoderma tn to atrovirideApplication on bioremediation of phenolic compounds.Process Biochemistry 45(4): 507-513 gh p ie 23 Eggert C., Temp U., Eriksson K.E.L(1996) The ligninolytic system of the white rot fungus Pycnoporus cinnabarinus: Purification and characterization of the laccase Appl nl w Environ Microb62: 1151-1158 d oa 24 Galai S., Limam F., Marzouki M.N (2009) A new Stenotrophomonas maltophilia va Biotechnol 416-431 an lu strain lroducing laccase use in decolorization of synthetics dyes.Appl Biochem ul nf 25 Glenn J.K., Morgan M.A., Mayfield M.B., Kuwahara M., Gold M.H (1983) An oi lm extracellular H2O2 requiring enzyme preparation involved in lignin biodegradation by the white rot basidiomycete Phanerochaete chrysosporium Biochem Biophys Res z at nh Commun114(3):1077-1083 z 26 Givaudan A., Effosse A., Faure D., Potier P., Bouillant M.L., Bally R (1993) gm @ Polyphenol oxidase in Azospirillum lipoferum isolated from rice rhizosphere: evidence l for laccase activity in nonmotile strains of Azospirillum lipoferum FEMS Microbiol m co Lett 108:205–210 27 Hadibarata T., Yusoff A.R.M., Kristanti R.A (2012) Decolorization and meabolism an Lu of Anthraquionone-type dye by laccase of white-rot fungi Polporus sp S133 Water n va ac th 64 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Air Solid Pollut233: 933-941 28 Haki G.D., Rakshit S.K (2003) Developments in industrially important thermostable enzymes: a review Bioresour Technol 89: 17-34 29 Heinfling A., Bergbauer M., Szewzyk U (1997) Biodegradation of azo and phthalocyanine dyes by Trametes versicolor and Bjerkandera adusta Appl Microbiol Biotechnol48(2): 261-266 30 Hou H., Zhou J., Wang J., Du C., Yan B (2004) Enhancement of laccase lu an production by Pleurotus ostreatus and its use for the decolorization of anthraquinone n va dye Pro Biochem39(11): 1415-1419 tn to 31 Hu D.D., Zhang R.Y., Zhang G.Q., Wang H.X., Ng T.B (2011) A laccase with gh antiproliferative activity against tumor cells from an edible mushroom, white common p ie Agrocybe cylindracea Phytomedi 18: 374-379 w 32 Husseiny Sh.M (2008) Biodegradation of the Reactive and Direct Dyes Using oa nl Egyptian Isolates.J Appl Sci Res 4(6): 599- 606 33 Jaouani A., Guillen F., Penninckx M.J., Martinez A., Martinez M.J (2005) Role of d an lu Pycnoporus coccineus laccase in the degradation of aromatic compounds in olive oil nf va mill wastewater, Enzyme Microb Technol 36:478–486 oi lm ul 34 Jegatheesan M., Eyini M (2014)Response Surface Methodology Mediated Modulation of LaccaseProduction byPolyporus arcularius Arab J Sci Eng z at nh 35 Jones C.L., Baker W.L., lonergan G.T (2001)Dimethylsulfoxide elevates extracellular laccase (phenol oxidase) activity of Pycnoporus cinnabarinus grown on a z low nutritional newspaper medium.J Chem Technol Biotechnol 76:494–500 @ gm 36 Joshi M., Bansal R., Purwar R (2004) Color removal from textile effluents.Indian l J Fiber Textile Res 29: 239-259 m co 37 Kalpana D., Velmurugan N., Shim J.H., Oh B.T., Senthil K., Lee Y.S (2012) Biodecolorization and biodegradation of reactive Levafix Blue E-RA granulate dye by an Lu the white rot fungus Irpex lacteus.J Environ Manage 111:142-149 n va ac th 65 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền 38 Kalyani D., Dhiman S.S., Kim H., et al (2012) Characterization of a novel laccase from the isolated Coltricia perennis and its application to detoxification of biomass Process Biochem 39 Kapdan I K., Kargi F (2002) Biological decolorization of textiledyestuff containing wastewater by Coriolus versicolor in a rotating biological contactor Enzyme Microb Technol30: 195-199 40 Knapp J.S., Vantoch-Wood E.J., Zhang F (2001) Use of wood – rotting fungi for lu an the decolorization of dyes and industrial effluents In: Fungi in Bioremediation G M n va Gadd(Ed.) Cambridge University Press, Cambridge 253-261 tn to 41 Knapp J.S., Newby P.S., Reece, L.P (1995) Decolorization of dyes by wood rotting gh Basidiomycete fungi.Enzyme Microbial Biotechnol 17: 664–668 p ie 42 Kiiskinen L.L., Ratto M., Kruus K (2004) Screening for novel laccase-producing w microbes J Appl Microbiol97: 640-646 oa nl 43 Kunamneni A., Plou F.J., Ballesteros A., Alcalde M (2008) Laccases and their applications: a patent review Recent Pat Biotechnol2(1): 10-24 d an lu 44 Khelifi E., Ayed L., Bouallagui H., Touhami Y., Hamdi M (2009) Effect of nf va nitrogen and carbon sources on Indigo and Congo red Decolourization by Aspergillus oi lm ul alliaceus strain 121C J Hazard Mater163: 1056-1062 45 Khlifi R., Belbahri L., Woodward S., Ellouz M., Dhouib A., Sayadi S., Mechichi z at nh T (2010) Decolourization and detoxification of textile industry wastewater by the laccase -mediator system J Hazar Mater 175: 802-808 z 46 Levin L.A., Forchiassin V.A (2003) Degradation of organic pollutants by the white @ gm rot basidiomycete Trametes trogii Int Biodet Biodeg 52: 1-5 l 47 Li Q., Ge L., Cai J., Pei J., Xie J., Zhao L (2014) Comparison of two laccases from m co Trametes versicolor for application in the decolorization of dyes J Microbiol Biotech24(4): 545-555 an Lu 48 Lorenzo M., Moldes D., Sanromán M.A (2006) Effect of heavy metals on the n va ac th 66 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền production of several laccase isoenzymes by Trametes versicolor and on their ability to decolourise dyes Chemosphere63(6):912-7 49 Machczynski M.C., Vijgenboom E., Samyn B., Canters G.W (2004) Characterization of SLAC: A small laccase from Streptomyces coelicolor with unprecedented activity Protein Sci 13(9): 2388–2397 50 Mahmoud M.G., Rifaat H.M., El Sayed, O.H., El Beih, F.M.,Selim, M.S (2013) Effect of inducers and process parameters on laccase production by locally isolated lu an marine Streptomyces lydicus from Red Sea, Egypt’’ International Journal of n va ChemTech Research 5(1): 15-23 tn to 51 Martínez S.M.S., Gutiérrez-Soto G, Garza C.F.R., Galván T.J.V., Cordero J.F.C., Luna C.E.H (2013) Purification and partial characterization of a thermostable laccase from gh p ie Pycnoporus sanguineus CS-2 with ability to oxidize high redox potential substrates and recalcitrant dyes Agricultural and Biological Sciences nl w 52 Martins M.A.M., Cardoso M.H., Queiroz M.J., Ramalho M.T., Campos A.M.O d oa (1999) Biodegradation of azo dyes by the yeast Candida zeylanoides in batch aerated an lu cultures Chemosphere 38: 2455–2460 va 53 Michniewicz A., Ullrich R., Ledakowicz S., Hofrichter M (2005) The white-rot ul nf fungus Cerrena unicolor strain 137 produces two laccase isoforms with different oi lm physico-chemical and catalytic properties Appl Microb Biotech 69(6):1-7 54 Moldes D., Fernández-Fernández M., Sanromán M.A (2012) Role of laccase and z at nh low molecular weight metabolites from Trametes versicolor in dye decolorization Sci World J 2012: pages z gm @ 55 Mohorčič M., Friedrich J., Pavko A (2004) Decoloration of the diazo dye reactive black by immobilised Bjerkandera adusta in a stirred tank bioreactor Acta Chim l m co Slov 51: 619-628 56 Niladevi K.N, Sukumaran Rajeev K., Jacob Nicemol Anisha G.S., Prema P (2009) an Lu Optimization of laccase production from a novel strainStreptomyces n va ac th 67 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền psammoticususingresponse surface methodology Microbiological Research164: 105113 57 Otterbein L, Record E, Longhi S, Asther M, Moukha S (2000)Molecular cloning of the cDNA encoding laccase from Pycnoporus cinnabarinus I-937 and expression in Pichia pastoris.Eur J Biochem 267:1619–1625 58 Palmieri G., Cennamo G., Faraco V., Amoresano A., Sannia G., Giardina P (2000) A typical laccase isoenzymes from copper supplemented Pleurotus ostreatus cultures lu an Enz Microb Technol 33: 220-230 n va 59 Parshetti G.K., Kalme S.D., Gomare S.S., Govindwar S.P (2007) Biodegradation of tn to Reactive Blue 25 by Aspergillus ochraceus NCIM–1146 Bioresour Technol 98: 3638- gh 3642 p ie 60 Patnaik P (1999) “A comprehensive guide to the properties of hazardous chemical w substances”, 2nd ed., John Wiley & Sons Publishers oa nl 61 Paweena Thongkreda, Pongtharin Lotrakul, Sehanat Prasongsuka, Tsuyoshi Imai, Hunsa Punnapayaka (2011)Oxidation of polycyclic aromatic hydrocarbons by a d an lu tropical isolate of Pycnoporus coccineus and its laccase.ScienceAsia 37: 225–233 nf va 62 Peralta-Zamora P., De Moraes S G., Esposito E., Antunes R., Reyes J., and Duran oi lm ul N (1998) Decolorization of pulp mill effluents with immobilized lignin and manganese peroxidase from Phanerochaete chrysosporium Environ Technol 19(5): 521–528 z at nh 63 Piontek, K., Antorini, M., Crystal, T.C (2002) Structure of a Laccase from the fungus Trametes versicolor at 1.9 – A0 Resolution Containing a Full Complement of z Cooppers”.J Biology Chem277: 37663-37669 @ gm 64 Pilz R., Hammer E., Schauer F., Krag U (2003) Laccase-catalyzed synthesis of l coupling products of phenolic substrates in different reactors m co Biotechnol60: 708-712 Appl Microbiol 65 Pointing S.B (2001) Feasibility of bioremediation by white-rot fungi Appl an Lu Microbiol Biotechnol57: 20-33 n va ac th 68 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền 66 Pointing S.B., Pelling A.L., Smith G.J., Hyde K.D., Reddy C.A (2005) Screening of basidiomycetes and xylariaceous fungi for lignin peroxidase and laccase genespecific sequences Mycol Res 109(1): 115-124 67 Pointing S.B., Jones E.B.G., Vrijmoed L.L.P (2000) Optimization oflaccase production by Pycnoporus sanguineus in submergedliquid cultures.Mycologia 92:139– 144 68 Prolonged Laccase Production by a Cold and pH Tolerant Strain ofPenicillium lu an pinophilum(MCC 1049) Isolated from a Low Temperature Environment n va 69 Ramalho P.A., Cardoso M.H., Cavaco-Paulo A., Ramalho M.T (2004) tn to Characterization of azo reduction activity in a novel ascomycete yeast strain Appl gh Microbiol Biotechnol70: 2279–2288 p ie 70 Rani C., Jana A.K., Bansal A (2011) Studies on the biodegradation of azo dyes by w white rot fungi Daedalea flavida in the absence of external carbon source 2011 2nd oa nl International Conference on Environmental Science and Technology 6: 147-150 71 Ratanapongleka K., Phetsom J (2014) Decolorization of synthetic dyes by crude d an lu laccase from Lentinus polychrous Lev International Journal of Chemical Engineering nf va and Applications 5(1): 26-30 24(5): 219–226 oi lm ul 72 Riva S (2006) Laccase: Blue enzyms for green chemistry.Trends in Biotechnology z at nh 73 Rodriguez C S., Sanromán M., Gübitz G M (2005) Influence of redox mediators and metalions on synthetic acid dye decolourization by crude laccase from z Trametes hirsute.Chemosphere 58: 417-422 @ gm 74 Record E, Punt PJ, Chamkha M, Labat M, van den Hondel CAMJJ, Asther M l (2002) Expression of the Pycnoporus cinnabarinus laccase gene in Aspergillus niger m co and characterization of the recombinant enzyme Eur J Biochem 269:602–609 75 Reid I.D (1989) Solid state fermentation for biological delignification Enz an Lu Microb Technol 11: 786-803 n va ac th 69 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền 76 Robles A., Lucas R., Cienfueges A.D., Galvez A (2000) Phenol oxidase activity in strains of the hyphomycete Chalara paradoxa isolated from Olivemill wastewater disposal ponds Enzyme Microbial Technol 26: 484-490 77 Riva S (2006) Laccase Blue enzyms for green chemistry.Trends in Biotechnology 24(5): 219–226 78 Ruijssenaars H.J., Hartmans S (2004) A cloned Bacillus halodurans multicopper oxidase exhibiting alkaline laccase activity Appl Microbiol Biotechnol 65: 177-182 lu an 79 Ryu W (1992) Decolorization of azo dyes by Aspergillus sojae B10 J Microb n va Biotechnol 2: 215–219 Production, tn to 80 Sadhasivam S., Savitha S., Swaminathan, Feng-Huei Lin (2008) gh purification and characterization of mid-redox potential laccase from a newly isolated p ie Trichoderma harzianum WL1 Process Biochemistry 43: 736 – 742 w 81 Sathishkumar P., Murugesan K., Palvannan T (2010)Production of laccase from oa nl Pleurotus florida using agro-wastes and efficient decolorization of Reactive blue 198 Journal of Basic Microbiology 50: 360-367 d an lu 82 Saratale, G.D., Kalme, S.D., Govindwar, S.P (2006) Decolorization of textile dyes nf va by Aspergillus ochraceus (NCIM-1146) Ind J Biotechnol5(3): 407–410 oi lm ul 83 Saratale R.G., Saratale G.D., Chang J.S., Govindwar SP (2011)Bacterial decolorization and degradation of azo dyes: a review" J Taiwan Inst Chem Eng z at nh 42:138-57 84 Schneider P., Michael B.C., Kristine M., Torben, Lars K.S., Peter R.O., Kiberly z M.B., Stephen HB, Feng X(1999)Characterization of a Coprinus cinereus laccase @ gm Enzyme microbial Technol 25: 502-508 l 85 Selvam K., Shanmuga P.M (2012) Biological treatment of azo dyes and textile Lenzites eximia Int Biodet Biodeg 2(4): 1926-1935 m co industry effluent by newly isolated white rot fungi Schizophyllum commune and an Lu 86 Shiroya A.J.Recent advances of laccase enzyme in industrial biotechnology n va ac th 70 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Bhagwan Mahavir College Of Biotechnology, Surat 87 Singh H (2006) Mycoremediation-Fungal Bioremediation Wiley Interscience Hoboken 421-471 88 Soares, G.M., Amorim, M.T.P and Costa-Ferreira, M (2001) Use of laccase together with redox mediators to decolourize Remazol Brilliant Blue R J Biotech89:123-129 89 Songserm Pajareeya, Sangvanich Prakitsin Sihanonth Polkit, Karnchanatat lu an Aphichart (2012) Decolorization of textile dyes by Polyporus pseudobetulinus and n va extracellular laccase African Journal of Microbiology Research 6(4): 779-792 tn to 90 Song Z., Zhou J., Wang J., Yan B., Du C(2003) Decolorization of azo dyes by gh Rhodobacter sphaeroides Biotechnol Lett25: 1815–1818 p ie 91 Sullivan G., Henry E.D (1971)Occurrence and distribution ofphenoxazinone w pigments in the genus Pycnoporus.J Pharmaceu-tical Sci 60:1097–1098 oa nl 92 Sulistyaningdyah W.T., Ogawa J., Tanaka H., Maeda C., Shimizu S (2003) Characterization of alkaliphilic laccase activity in the culture supernatant of d nf va Lett 230: 209-214 an lu Myrothecium verrucaria 24G-4 in comparison with bilirubin oxidase FEMS Microbiol oi lm ul 93 Suzuki Takashi, Endo Kohki, Ito Masaaki, Tsujibo Hiroshi, Miyamoto Katsushiro, Jnamori Yoshihiko (2003) A Thermostable laccase from Streptomyces z at nh lavendulae REN-7: Purification, characterization, nucleotide sequence and expression Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry 67: 2167-2175 z 94 Téllez-JuradoA., Arana-Cuenca A., González Becerra A.E., G Viniegra-González @ gm G., Loera O (2006)Expression of a heterologous laccase by Aspergillus nigercultured l by solid-state and submerged fermentations” Enzyme and Microbial m co Technology38(50): 665-669 95 Uzan E., Portet B., Lubrano C., Milesi S., Favel A., Lesage-Meessen L, Lomascolo an Lu A (2011) Pycnoporus laccase-mediated bioconversion of rutin to oligomers suitable for n va ac th 71 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền biotechnology applications Appl Microbiol Biotechnol 90:97–105 96 Viswanath, B., Chandra, M.S., Kumar, K.P and Rajasekhar-Reddy, B (2008) Production and purification of laccase from Stereum ostrea and its ability to decolorize textile dyes Dyn Biochem Pro Biotech Mol Biol 2: 19-25 97 Wang H.X., Ng T.B (2004) Purification of a novel low-molecular-mass laccase with HIV-1 reverse transcriptase inhibitory activity from the mushroom Tricholoma giganteum Biochem Biophys Res Commun315(2): 450-454 lu an 98 Wang, J.W., Wu, J.H., Huang, W.Y and Tan R.X (2006) Laccase production by n va Monotospora sp., and endophytic fungus in Cynodon dactylon”, Bioresource tn to Technology 97(5): 786-789 gh 99 Wang CL , Zhao M., Lu L.,Wei XD, Li TL(2011) Characterization of spore p ie laccase from Bacillus subtilis WD23 and its use in dye decolorization.African Journal w of Biotechnology 10(11): 2186-2192 oa nl 100 Xu L., Wang H., Ng T (2012) A Laccase with HIV-1 Reverse Transcriptase Inhibitory Activity from the Broth of Mycelial Culture of the Mushroom Lentinus d an lu tigrinus J Biomed Biotech2012: 1-7 nf va 101 Xiao Y Z., Chen Q., Hang J., Shi1 Y., Wu J., Hong Y Z., Wang Y P(2004) oi lm ul Selective induction, purification and characterization of a laccase isozyme genes from Trametes sp AH28-2 and analyses of their differential expression Applied z at nh Microbiology and Biotechnology 71: 493-501 102 Yadav J.S., Tripathi J.P (1991) Optimization of cultivation and nutrition z conditions and substrate pre-treatment for solid substrate fermentations of wheat straw @ gm by Coriolus versicolor Folia Microbiologica36: 249-301 l 103 Yo Johannes C and Majcherczyk A (2000) Natural Mediators in the Oxidation of m co PolycyclicAromatic Hydrocarbons by Laccase Mediator Systems Appl Environ Microbiol 66: 524–528 an Lu 104 Yeşİlada Ö., Bİrhanli E., Ercan S., Özmen N., (2014) Reactive dye decolorization n va ac th 72 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền activity of crude laccase enzyme from repeated-batch culture of Funalia trogii Turk J Biol 38: 103-110 105 Zadrazil F., Brunnert H., (1981) Investigation of physical parameters important for the solid state fermentation of straw by white rot fungi Appl Microbiol Biotechnol 11: 183-188 106 Zeng, G.M., Yu, H.Y., Huang, H.L., Huang, D.L., Chen, Y.N, Huang, G.H and Li, G.B (2006) Laccase activities of a soil fungus Penicillium simplicissimum in lu an relation to lignin degradation.W J Microb Biotech 22(4): 317-324 n va 107 Zhang G.Q., Wang Y.F., Zhang X.Q., Ng T.B., Wang H.X (2010) Purification and tn to characterization of a novel laccase from the edible mushroom Clitocybe maxima Pro gh Biochem 45(5): 627-633 p ie 108 Zouari-Mechichi H., Mechichi T., Dhouib A., Sayadi S., Martίnez A., T., w Martίnez M J (2006) Laccase purification and characterization from Trametes trogii oa nl isolated in Tunisia decolorization of textile dyes by the purified enzyme.Enz Microb Technol 39: 141-148 d oi lm ul nf va an lu z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 73 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trƣờng nuôi cấy Thành phần môi trƣờng Khối lƣợng Thành phần môi trƣờng Khối lƣợng (g) (g) PDA PDB lu an n va Khoai tây (lấy dịch chiết) 200 Khoai tây (lấy dịch chiết) 200 Glucose 10 Glucose 10 Agar 18 H2 O 1000 ml H2 O 1000 ml pH 6,5 GYMP MEG gh tn to pH 6,5 0,5 KH2PO4 0,4 Na2HPO4 NaCl 0,2 20 MgSO4 0,2 CaCO3 0,5 Cao men Cao malt Glucose H2 O 1000 ml p ie MgSO4.7H2O K2HPO4 nf va oi lm ul NH4Cl an Cao men lu Peptone d Glucose oa nl w KH2PO4 H2 O 1000 ml z at nh Cao malt pH pH 6,5 TSH1 z Czapek @ 30 Khoai tây (lấy dịch chiết) 200 MgSO4 0,5 Glucose 10 KH2PO4 Cám NaCl Bột đậu tương m co l gm Saccharose an Lu n va ac th 74 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Thành phần môi trƣờng Khối lƣợng Thành phần môi trƣờng Khối lƣợng (g) (g) NaNO3 CuSO4 0.1 mM KCl 0,5 H2 O 1000 ml FeSO4 0,01 pH 6,5 H2 O 1000 ml pH lu Vis an Mechichi n va 10 Glucose Cao men Peptone 10 Glucose KH2PO4 H2 O 1000 ml K2HPO4 0,6 ZnSO4 0,4 FeSO4 0,001 p ie gh tn to Cao malt oa nl w pH 5,5 d MnSO4 0,0005 lu an MgSO4 0,5 nf va H2 O 1000 ml oi lm ul pH z at nh Phụ lục Thành phần chất phản ứng loại màu Đệm natri Thuốc nhuộm Chất gắn kết acetate 20 Nồng độ Thể tích Nồng Thể mM, pH (mg/L) (ml) độ tích (ml) (µM) (ml) Laccase z thơ (ml) 100 0,167 0 Khơng có chất 4,583 100 0,167 m co 0,25 4,383 100 0,167 200 an Lu 0,25 l 4,833 gm @ Đối chứng gắn kết Có chất gắn kết 0,2 n va ac th 75 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Phụ lục Tách DNA tổng số từ nấm Bước 1: Nuôi cấy thu sinh khối nấm khoảng đến ngày Bước 2: Thu sinh khối cách ly tâm 6000 vòng/phút 10 phút 4oC Bước 3: Rửa đến lần sinh khối mơi trường ni cấy, ly tâm 6000 vịng/phút 10 phút 4oC lu Bước 4: Lấy sinh khối cho vào cối sứ khử trùng nghiền an nitrogen lỏng thành bột mịn va n Bước 5: Dùng thìa xúc mẫu cho vào ống eppendorf, bổ sung to gh tn 600 μl đệm lyzozyme, lắc nhẹ p ie Bước 6: Bổ sung tiếp 65 μl lyzozyme, ủ 37oC 30-45 phút Bước 7: Cho μl protease K ủ 56oC nl w Bước 8: Bổ sung tiếp chloroform: isoamyl alcohol(tỷ lệ 24:1) với tỷ d oa lệ 1:1 thể tích, trộn sau ly tâm 12.000 vịng/phút 15 an lu phút 4oC nf va Bước 9: Thu phần dịch bên cho vào ống eppendorf đêm oi lm ul Bước 10 : Bổ sung isopropanol với tỷ lệ 1:1 thể tích, ủ 4oC qua z at nh Bước 11: Ly tâm 12000 vòng/phút 15 phút ở 4oC, thu tủa Bước 12: Hòa tan kết tủa 500 μl TE z Bước 13: Loại RNA cách thêm RNAse, ủ 37oC qua đêm @ l gm Bước 14: Bổ sung chloroform : isoamyl alcohol(tỷ lệ 24:1) với tỷ lệ m co 1:1 thể tích sau đảo nhẹ ly tâm 12000 vòng/phút, 15 phút 4oC an Lu Bước 15: Thu phần dịch phía n va ac th 76 si Luận văn Thạc sĩ Sinh học Trần Thị Thu Hiền Bước 16: Bổ sung ethanol 100% (giữ lạnh) tỷ lệ 1:1 thể tích Bước 17: Ly tâm 12000 vòng/phút 15 phút 4oC, thu kết tủa sau rửa ethanol 80% Làm khơ DNA Bước 18: Hịa 100 μl TE bảo quản 4oC Phụ lục Thành phần phản ứng lu an n va Thể tích (µl) Nồng độ cuối Đệm Taq 10X 2,5 1X dNTPs mM 2,5 0,2 mM MgSO4 20 mM 2,5 mM Mồi ITS1 10 µM 0,4 µM 0,4 µM gh tn to Thành phần p ie Mồi ITS4 10 µM w U/25 µl Taq Polymerase U/ 0,2 ddH2O 14,3 d oa nl µl DNA khn lu 25 µl va an Tổng thể tích Số chu kỳ 94˚C/5 z at nh Biến tính Nhiệt độ/thời gian oi lm Bước ul nf Phụ lục Chu trình nhiệt 94˚C/30 s Gắn mồi 54˚C/45 s Kéo dài chuỗi 72˚C /60 s Kéo dài chuỗi 72 ˚C /7 z Biến tính m co l gm @ 30 ˚C Giữ ổn định an Lu n va ac th 77 si
Ngày đăng: 21/07/2023, 09:21
Xem thêm: