Nghiên cứu xây dựng phương pháp chuẩn phân tích hoocmon clenbuterol trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký khối phổ gc ms

Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ЬỘ ເÔПǤ TҺƢƠПǤ ѴIỆП ເÔПǤ ПǤҺIỆΡ TҺỰເ ΡҺẨM ––––––––––––––––––––––––––––––– ЬÁ0 ເÁ0 TỔПǤ K̟ẾT ĐỀ TÀI Г-D ເẤΡ ЬỘ Têп đề ƚài: “ПǤҺIÊП ເỨU ХÂƔ DỰПǤ ΡҺƢƠПǤ ΡҺÁΡ ເҺUẨП ΡҺÂП TίເҺ Һ00ເM0П ເLEПЬUTEГ0L TГ0ПǤ n yê n yê u ng L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu TҺỰເ ΡҺẨM ЬẰПǤ z p i ΡҺƢƠПǤ ΡҺÁΡ oc iệ h 3d gh c t 12 ốt n họ n t i vă n n vă ăn đ ậ Lu uận n v L uậ L SẮເ K̟Ý K̟ҺỐI ΡҺỔ (Ǥເ/MS” ເҺủ пҺiệm Đề ƚài: ΡҺẠM ѴĂП TҺÀПҺ 7313 23/4/2009 i, 12-2008 Đề tài nghiên cứu khoa häc cÊp Bé – 2008 ΡҺÇп I: Tỉпǥ quaп 1.1 sở lý đ ài : Đ ài iệ e0 ợ đồ iê ứu k0a ọ i ô ệ số 89.08.D/Đ-K ký 28 01 ăm 2008 iữa ộ ô Tơ iệ ô пǥҺiƯρ ƚҺὺເ ρҺÈm.(ΡҺơ lơເ k̟ὶm ƚҺe0) 1.2 TÝпҺ ເÊρ ƚҺiÕƚ mụ iêu iê ứu đ ài.leue0l uộ óm - a0is, ó ô ứ óa ọ 1218l220 đợ sử dụ ộ Ãi mộ ấ ă ọ, ó đợ ổ su à0 ứ L L u Lu un n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc ip th ỏi n gu yờ n ă ă uôi (TĂ) lợ, à, ò ằm kí í si ở, ă ỷ lệ ạ, ằm iảm i í ứ ă Tu iê, lợ leue0l d ậ uôi ó độ ấu đế sứ k0ẻ ời : làm ối l0ạ ị im, u ờn uế á âu âu ơ, ắ ế quả, ù , liệ ơ, ă uy g i n ă uôi, Mỹ ấm ăm 1991 cz ip ỏă 1988 đà ấm đa leue0l ѵµ0doƚҺøເ h th g c 12 ốt n họ n i t vă n n vă ăn đ ậ Lu uận n v L uậ L ë ѴiÖƚ am, ăm 2002 e0 quế đị số 54/QĐ- ộ ộ & TT ký 20/06/2002 đà ấm sả uấ, ậ kẩu, lu ô sử dụ leue0l sả uấ ki d0a ứ ă ă uôi Mặ dù ậ, iệ sử dụ leue0l ộ à0 ứ ă ă uôi a ải đà ế d0 ữ mối lợi dụ leua0l đem lại ữ kế iê ứu iệ K0a ọ Kỹ uậ ô iệ mi am ấ, 83 mẫu ứ ă ỗ ợ đậm đặ 12 ô ó mẫu dơ í ( iém 10,8%) Kế a ê 80 mẫu ị ó 05 mẫu dơ í ( ເҺiÕm 6,25%) K̟Õƚ qu¶ ເđa ເҺi ເơເ TҺό ɣ ố M ấ, 334 mẫu kả пǥҺi ເã ƚåп d− ເleпьuƚeг0l ເa0 ƚҺ× ເã 52 mÉu dơ í (iếm 15.57%) ầ đâ ấ, uối ăm 2006, đầu ăm 2007 ụ ă uôi đà ù i Së ПП-ΡTПП ເđa 64 ƚØпҺ, ƚҺµпҺ ρҺè ƚỉ ເҺøເ lÊɣ mẫu TĂ ại đại Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 lý, a ại ă uôi sở sả uấ TĂ đ kim a; đà ậ kế 114 mẫu â í ó 19 mẫu dơ í ( iếm 6,4%) õ à, kim s0á àm lợ leue0l ứ ă ă uôi ẩm iệ ải làm uê ằm ó ầ iải quế ầu ấ iế à ội ô kim s0á SAT ẩm , ôi iế đ ài : iê ứu â d uẩ â í 0m0 leue0l ẩm ằ sắ ký kí kối ổ (/MS) Mụ iêu đ ài : â d qui ì uẩ đ â í leue0l mẫu ẩm ó độ í a0 ằ sắ ký kí kối ổ (/MS) 1.3 Đối ợ, ạm i ội du iê ứu L L u Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu yê n Tõ đặ í mụ đí sử dụ leue0l, dễ dà ậ ấ sả ẩm ẩm ó kả ă ứa duyờnlợ leue0l kô à0 g z p i n ị Tu iê uồ u ạ0 d ká ị ia s sả ẩm ỏ oc hi thƚõ d g c l−ỵпǥ ເҺÊƚ 12 t n ọ n tố i h vă n đạ vă ăn ă ă uôi, ì ậ kim s0á ậ ố đ độ ại lại uấ ừLunứ n v Lu un L ò ừa ủi ấ ầ iế ì lý d0 đó, ôi iế â d qui ì â í leue0l ằ sắ ký kí kối ổ đối ợ ứ ă ă uôi ị độ ậ ữ ội du í đ ài iê ứu a0 ồm : a iê ເứu lựa ເҺọп điều k̟iệп ƚ¸ເҺ, làm sa͎ເҺ ѵà làm ǥiàu mẫu ເleпьuƚeг0l ƚ¸ເҺ ເҺiếƚ ƚừ mẫu b Х¸ເ địпҺ iu k â í leue0l ê má /MS c iệu suấ u ồi mẫu, kả ă iệ d du đà â d kả0 sá m s mu s m m ká ê a i; s0 sá kế kim a i mộ số ò í iệm ká Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 1.4 Tổ qua ì ì iê ứu 0ài 1.4.1 iê ứu ứ dụ sắ ký kí kối ổ (/MS) S kế ợ iữa sắ ký kối ổ (/MS) ạ0 ê mộ â í đặ iệ ó iệu lĩ 0á â í iế ị ó kả ă ổ su ỗ ợ au ì â í (: á, MS: iệ), ì ậ đợ sử dụ ấ ữu iệu ì kả0 sá, đị lợ ấ [13] kỹ uậ ê é ối i au ó đị lợ ấ ó độ 10-8 am 0ặ ỏ ữa, đâ độ ấ kó iệ â í ô ụ 0ài a, i s kế ối à, ữ mẫu kô ời ia ả0 ó đợ â í mộ yờ n ờn gu uy ỗ ợ ứ đó, ó uậ lợi, đặ iệ iệ â í ເ¸ເ ng z L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n c ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L iế kiệm ká iu ời ia iệm ì â lậ mẫu e0 uê ắ điu ế ki đa à0 kối ổ d0 ậ iảm ẹ ầu kỹ uậ đối i kỹ uậ iê Sơ đồ ệ sắ ký kí kối ổ ó mô ả óm ắ sau: ả, iế ị sắ ký sử dụ ộ ồi 0ặ ộ ma0 ó é ối iế ị kối ổ l0ại ội ụ ùm ia 0ặ ké [2], [17] ó iu iải kỹ uậ ká au đ iệ iệ é ối ệ Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ố i iế ị iệ đại a 0à ộ dò kí 0á a (kí ma ѵµ mÉu) ƚõ ເéƚ n yê n yê gu u ng L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ồi 0ặ ộ ma0 đợ u ẳ à0 ộ ậ iế kí ma u ia, sau đợ đa iế à0 uồ i0 0á mẫu Tiế ị iế k̟ҺÝ maпǥ ƚгuпǥ ǥiaп ເã ƚҺό ເã пҺ÷пǥ ເÊu ƚгόເ ká au, ki làm iệ ải uâ e0 mộ uê lý u kuế qua ệ ố lỗ ố 0ặ kế mộ iế ị kuế â Sắ ký đồ đợ i lại í iệu dò i0 ổ ộ ữ sắ đồ u đợ í iệu dò i0 0á dee0 i0 0á ọ lửa ói u au Sắ ký kối ổ đà đợ sử dụ ộ Ãi, đặ iệ ó ó i iệ ấu ỗ ợ ứ iu ải iế qua ọ đà đợ dụ, đặ iệ â í ợ ấ si 0á 0ài a ì хư lý gu n sè liƯu k̟Һi ǥҺÐρ пèi i má í kiế ì â í ê iả é u đợ ữ kế đá i ậ n yờ đặ iệ, ó độ a0 T0 ổ kối đợ sử dụ mộ deƚeເƚ0г gu L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp i n o i thá ƚг−êпǥ Һỵρ à, iế ị iá ị số kối ká au dò i0 3d ngh c t h n i t đá ứ đợ ậ ợ in vlạin di mộ sắ đồ (â mả kối) n v u L uđị Quá ì é đợ ả mẫu ເã пåпǥ ®é гÊƚ пҺá (ƚίi 10L uận 10 L ) uê ắ 0ạ độ dee0 kối ổ, ki mộ ấ kí a ạm i mộ dò ele0 ì â ấ ó ị a mộ 0ặ ele0 đ i0 dơ ma điệ í 0ặ 2; ó ì a ạm làm â ấ iế ậ êm ele0 đ i0 âm, ọi i0 0á â Ki a ạm mạ ì â ò ó ị a iu ầ ká au ma điệ í dơ a âm S 0à 0à ụ uộ à0 ă lợ a ạm, dẫ đế á â ká au i0 đợ đ0 kối lợ sau i ê sắ ổ đồ kỹ uậ â í kối ổ ải uâ ủ ồm: Đề tài nghiên cứu khoa häc cÊp Bé – 2008 Һ0¸ k̟ҺÝ ເҺÊƚ mÉu: mẫu đợ dẫ à0 ì ứa, suấ ó iảm i 10-6 mm, sau dò kí đợ dẫ à0 uồ i0 0á đ sả a i0, lợ mẫu ó i ậ đợ ấ ỏ 10-13 /iâ I0 0á mẫu, ó sử dụ á: - I0 0á ia a ầ ma ă lợ (ele0, 00, â) - I0 0á điệ mạ - I0 0á s ò điệ - I0 0á s ò ®iƯп - I0п Һ0¸ пҺê sὺ ®èƚ пãпǥ (пǥп пҺiƯƚ Laze) - I0 0á i0 (i0 0á Һäເ) Tгªп ƚҺὺເ ƚÕ ҺiƯп пaɣ, пǥ−êi ƚa sư dơпǥ i0 0á qua s a ạm ele0 yờ n n a ạm ele0 udò kí ®−ỵເ dÉп ®i qua méƚ gu g z p in L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n c ỏ dò ele0 ẳ ó i ó,23u ă lợ dò ele0 ghi uộ th n c t ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L l a ỏ mà i0 đợ sả a iu a í (ì u ă lợ k0ả 70e) Tá i0 e0 kối lợ, uê ắ iệ da ê s ká au kối lợ i0 s ká au điệ í T iê ời a ă ố độ i0, qua mộ điệ mạ, ậ ố i0 đợ í e0 ô ứ : = 2eU m T0 : Đề tài nghiên cứu khoa häc cÊp Bé – 2008 - e : §iƯп ƚÝເҺ i0 - U : Tế ă ố - m : Kối lợ - : ậ ố Tố độ má â í đạ 100km/s Sau ki ă ố, i0 đợ a qua mộ ờ, đờ a ị lệ ká au d0 dụ i kí lệ đợ ƚÝпҺ ƚҺe0 ເ«пǥ ƚҺøເ: m 2U Г2 = - х -e Һ2 n yê yê n Tг0пǥ ®ã: gu u ng L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz p i o iệ há - Г : Ь¸п k̟ÝпҺ lƯເҺ 3d ngh c t t họ - m: K̟Һèi l−ỵпǥ i0п n vănăn tố đại ậ v ăn Lu uận n v - e: §iƯп ƚÝເҺ i0п L uậ L - Һ: ເ−êпǥ ®é ƚõ ƚг−êпǥ Méƚ −u ®iόm ເđa sὺ k̟Õƚ Һỵρ /MS ó đợ dụ mộ ữu iệu iệ iê ứu â í ấ đồ ị ữ u đim mà kỹ uậ â í /MS à đợ ứ dụ ộ г·i, ເã ƚҺό k̟ό гa méƚ sè øпǥ dơпǥ ρҺ©п í sau: - â í ợ ấ ứa óm sufua: dụ iệ kim s0á ô iễm môi đặ iệ ô iễm ẩ dầu i ô iễm uồ u ấ ứ ă 0 ời i ợ ấ ứa sufua ó 0i đ0 đá iá s ô iễm ồi T0 iê ứu ời a ậ ấ 317 - aale iá ị m/z 170 37 - az0i0e iá ị m/z 176, alkl e0i0e 1010S m/z Đề tài nghiên cứu khoa häc cÊp Bé – 2008 162 ѵµ alk̟ɣl пaρҺƚaleп ເ12Һ12 m/z 160 Пǥ−êi ƚa ເὸпǥ ρҺ¸ƚ ҺiƯп гa đồ â alkl ez0i0e - â í ợ ấ ữu ó ầm: ấ iu iệm đẫ đợ iế đ â í lợ ế ợ ấ ữu ại Kả ă ứ dụ sắ ký kí - kối ổ đối i iệ đị í đị lợ ợ ấ ữu độ ại mẫu ải si 0ạ, ải ô iệ à iu Tu iê iệ â í ợ ấ ữu ứa đối kó kă ởi a đổi ấ a độ ấ ỏ ì lý d0 đầu iê ời a ải sử dụ kối ổ ký đ ắ ỏ ấu ử, sau sắ ký kối ổ đồ kế ợ i i0 mả đợ iệ ê ເ¸ເ ρiເ, ເïпǥ sè liƯu ƚҺêi ǥiaп l−u ເđa ເéƚ đ đị ầ độ L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu yờ n - â í ấu 0ll0ua: â í aale l0ua ằ ờn sắ ký kí kối ổ, ời a sửguydụ s0 sá z p in c ệ hi th ®é ρiເ 23 ng c t ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L u L (iesi mai me0d) T0 à, đồ â iê ầ ứa uê l0 0ặ 0m â ó đợ đị đ kẳ đị s ó mặ ợ ấ 0ll0ua - â í i0sami: i0sami mộ ữ ấ â u , s ại ó môi ấ u im ®èi ѵίi ®êi sèпǥ ເ0п пǥ−êi Møເ ®é ®éເ Һ¹i i0sami ấ a0, ì ậ ó u đợ sὺ ເҺό ý ເđa гÊƚ пҺiὸu пҺµ k̟Һ0a Һäເ ເã sử dụ iu đ đị i0sami , L Tu iê đối i ấ ì /MS ẫ kô iếu ì sử dụ /MS a ó đị đợ ấu 0á ầ - i0s0, đâ u đim l Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 - 0ài iê ứu, ứ dụ ê, iệ a /MS ò đợ sử dụ ấ iu â í d lợ ấ ả0 ệ ậ, ấ kí í, 0á ấ độ dễ a , iệ iế ậ i kỹ uậ â í mi, đặ iệ kỹ uậ sắ ký ká ổ iế k0ả ữ ăm 90, đâ ời k mộ số ò í iệm đại ọ, iệ iê ứu đợ a ị ệ ố sắ ký iệ đại i sắ ký kí kối ổ (/MS) u a iu ắ đầu ó iê ứu ứ dụ đại ọ Đại ọ K0a ọ T iê i iê ứu: â í ợ ấ ữu dễ a ằ sắ ký kí kối ổ, dù kỹ uậ lấ mẫu a ơi; iê ứu đị As kí ải má iấ Ãi ằ, iả ạm ù iệ ộ s; n yê yê n “ПǥҺiªп ເøu gu u ng ƚг0пǥ ƚҺὺເ ρҺÈm L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz p ỏi đị l0amei0l si ọ ằ sắ ký ghi mẫu th t n ọc h k̟ҺÝ – k̟Һèi ρҺỉ”, ເđa ávniả ô Sáu u iê a ó ô ố i tố Ѵὸ n đạ n ເøu vă ănøпǥ dôпǥ /MS đ đị leue0l à0 пǥҺiªп Lu ận v Lu uận L 1.4.2 ПǥҺiªп ເøu đị leue0l leue0l, 4-ami0 ala- e-ulami0mel 3,5 dil00ezl al00l, mộ ea- a0is ó ô ứ óa ọ 1218l220; â lợ 277,18 : 52,00%, Һ: 6,54%, ເl: 25,58%, П: 10,11%, 0: 5,77% 0Һ ເl Һ2П H N ເl ë ѴiÖƚ Пam, ҺiÖп пaɣ á đị leue0l ủ ếu da à0 Eliza, độ i ậ a a0 ê kế 10 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ửa iải ( 6ml ỗ ợ Me0: 40 ( 95:5 /)) Tu à0 ố uỷ ƚiпҺ 10 ml ເҺuɣόп ƚ¹0 dÉп хuÊƚ TMS - T¹0 dẫ uấ leue0l - TMS Dị ửa iải ổi kô ằ kí iơ 500 Đ uội, ổ su 50 l ỗ ợ MSTFA:TMS (99:1 /) n yờ n yờ u ng gu Lắ ằ má 0e 10 iâ L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L Ǥi÷ 600ເ/ 30 Đ uội, ổ su 450 l T0lue u à0 lọ uỷ i 1,5 ml ơm à0 /MS - ế độ ạ: ã ộ D- 5MS (AileTM Te0l0ies .Ld), I.D 0,25 30m ã iệ độ uồ ơm 2600 ã Kiu ơm : kô ia dò 40 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ã Kí maпǥ Һelium (99,999%) n yê n yê gu u ng L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 41 §Ị tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ã Tố độ dò 1,2 ml/ ã T í mẫu m ã iệ độ uồ ắ i0 : 2300 ã iệ độ iefae : 2800 ã ế độ : Full sa/SIM ( m/z 50-500) ã Tời ia ắ i du môi: 4, ã ì iệ độ ộ: 1000/1,5 ă100/ > 2800 ă 50/ - >3000 2.3.7 ứ dụ qui ì ®∙ х©ɣ dὺпǥ ®ό k̟iόm ƚгa méƚ sè mÉu ƚҺὺເ ƚÕ L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu yờ n Sau ki â d đợ qui ì â í leue0l, ôi ờn s mộ số mẫu ị ị dụ đ kim a mộ số mẫu ứ ă ia uy g cz p ỏi n ƚг−êпǥ hi th g c 12 ốt n họ n i t vă n n vă ăn đ ậ Lu uận n v L uậ L Kế u đợ ả di ả 10 Kế kim a mẫu ế STT Kế (/) Tê mẫu Mẫu ị lợ M1 Mẫu ị lợ M2 Mẫu ị lợ M3 Mẫu ị lợ M4 Mẫu ị lợ M5 K K 0,45 1,07 K̟ΡҺ 10 11 12 13 MÉu ƚҺËп lỵп M6 MÊu ƚҺËп lỵп M7 MÉu ƚҺËп lỵп M8 MÉu ƚҺËп lỵп M9 MÉu ƚҺËп lỵп M10 MÉu ǥaп lỵп M11 MÉu ǥaп lỵп M12 MÉu ǥaп lỵп M13 K̟ΡҺ K̟ΡҺ 0,20 K̟ΡҺ K̟ΡҺ 0,19 K̟ΡҺ K 42 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ – 2008 MÉu ǥaп lỵп M14 K̟ΡҺ 15 16 17 MÉu ǥaп lỵп M15 MÉu mὶ lỵп M16 MÉu mὶ lỵп M17 K̟ΡҺ 0,14 0,17 18 19 MÉu mὶ lỵп M18 MÉu mὶ lỵп M19 K̟ΡҺ K̟ΡҺ 20 MÉu mὶ lỵп M20 K̟ΡҺ 21 22 23 MÉu ПLT¡ ǥia sόເ ПLTA1 MÉu ПLT¡ ǥia sόເ ПLTA2 MÉu ПLT¡ ǥia sόເ ПLTA3 K̟ΡҺ 1,34 K̟ΡҺ 24 25 26 27 28 29 30 MÉu ПLT¡ ǥia sόເ ПLTA4 MÉu ПLT¡ ǥia sόເ LTA5 Mẫu ứ ă ia s TA1 Mẫu ứ ă ia s TA2 Mẫu ứ ă ia s TA3 ờn uy g cz p ỏi n Mẫu ứ ă ia sόເ TA4 ghi th c 12 t n n t i h Mẫu ứ ă ia s vă ănTA5 đ K̟ΡҺ K̟ΡҺ 0,10 0,51 K̟ΡҺ K̟ΡҺ K̟ΡҺ L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu yê n 14 ận v ăn Lu uận n v L u L 2.3.8 S0 sá kế â í i mộ số ò í iệm ká Đ s0 sá kế â í ại ò í iệm, ôi sử dụ mẫu ứ ă ia s d0 ká ửi đế, mẫu đợ a ầ sau ki đà đồ ấ; mộ ầ â í ại ò í iệm, ầ ò lại đem ửi ại ò í iệm ò â í ứ ă ă uôi iệ ă uôi ộ ô iệ i ô ô ò í iệm Tu âm Dị ụ â í í iệm (ASE) ại Tà ố í Mi ò í iệm sử dụ á: ại iệ ă uôi kim a ELIZA; ại ASE sử dụ sắ ký kí kối ổ (/MS) ôi â d Kế ấ ả sau: 43 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ả 11 S0 sá kế â í Kế mẫu â í () Tê ò STT iệm TA2 M1(AA) M2 (AЬ) ρҺ¸ρ ƚҺư ПAເEFA 0,51 K̟ΡҺ K̟ΡҺ Ǥເ/MS ASE K̟ΡҺ K̟ΡҺ Ǥເ/MS D−¬пǥ í Âm í Âm í ELIZA iệ ă uôi TA2; M1(AA); M2(A): ký iệu mẫu â í AEFA: Tu âm â í iám đị ẩm Q. iệ T ASE: Tu âm Dị ụ â í í пǥҺiÖm- TΡ Һå ເҺÝ MiпҺ Aьuпdaпເe TIເ: TAເП(161108).D 48000 46000 n yê yê n 44000 u ng gu 42000 cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 18.08 L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n 40000 38000 36000 34000 32000 14.27 30000 28000 26000 24000 22000 19.03 20000 18000 16000 14000 12000 16.18 10000 17.54 14.40 8000 10.31 6000 8.95 4000 8.03 6.6 34 9 2000 7.29 11 88 07 13.94 15.96 14.00 16.00 17.41 17.81 19.34 8.00 10.00 12.00 18.00 20.00 22.00 Time > Aьuпdaпເe I0п 86.00 (85.70 ƚ0 86.70): TAເП(161108).D 13.94 600 500 400 300 200 100 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 Time > Aьuпdaпເe I0п 293.00 (292.70 ƚ0 293.70): TAເП(161108).D 7000 6000 5000 4000 3000 2000 1000 6.00 19.03 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 Time > ì3 Sắ ký đồ mẫu TĂ iễm leue0l 44 20.00 22.00 Đề tài nghiên cøu khoa häc cÊp Bé – 2008 ПҺËп хÐƚ: Ѵίi mÉu ǥưi ®i k̟iόm ƚгa, Һai mÉu M1 m· 0á AA, M2 mà 0á A ả a ò í iệm đu kô iệ ó leue0l Mẫu TA2 ò í iệm ứ ă ă uôi kim a ằ ELIZA iệ dơ í ù ợ i kim a ại ò í iệm ó kế 0,51 / ầ III: Kế luậ, kiế ị Đ ài đà 0à ội du iê ứu đà ký kế ợ đồ iê ứu k0a ọ i ô ệ số 89.08.D/Đ- K ồm: L L u Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu yê n §· â d đợ qui ì á, làm sạ làm ǥiµu ເleпьuƚeг0l ƚõ ên mÉu uy g cz iệp ỏi n Đà đị đợ điu kiệ ghù th ợ đ đị leue0l ê má c 12 ốt n họ t i s¾ເ k̟ý k̟ҺÝ kối ổvn(/MS) a0 ồm ộ á, ế độ iệ n n vă ăn đ ậ n u v L uơ uồ ơm mẫu, ì iệ ộ á, ố độ dò L un L kí ma Đà đị đợ iệu suấ u ồi mẫu ổ đị k0ả qui đị é 80 đế 120%, ii iệ (L0D) ằ 1/ml ii đị (L0Q= L0D) Đà â d đợ qui ì uẩ đ â í leue0l ; dụ qui ì đ kả0 sá mộ số mẫu ị, ứ ă ia s ê địa à ội ; đà iế s0 sá kế kim a i mộ số ò í iệm ká ại ội Tà ố í Mi Kiế ị Đ ị ê duệ a à Tiêu uẩ sở đ dụ 45 Đề tài nghiên cøu khoa häc cÊp Bé – 2008 Tµi liƯu ƚҺam kả0 Đỗ Qua u(2000), Sắ ký kí lý uế à ội 2000 õ ô Sáu, iê ứu đị l0aei0l mẫu si ọ ằ sắ ký- kối ổ, ội 2003 Aпdeгs Ьl0mǥгeп, ເҺгisƚiпe Ьeгǥǥгeп, Aппa Һ0lmьeгǥ, Fгedгik̟ Laгss0п, Ьг0гje Selleгǥгeп, K̟ees Eпsiпǥ Eхƚгaເƚi0п 0f ເleпьuƚeг0l fг0m ເalf uгiпe usiпǥ a m0leເulaгlɣ imρгiпƚed ρ0lɣmeг f0ll0wed ьɣ quaпƚiƚaƚi0п ьɣ ҺiǥҺ – ρeгf0гmaпເe liquid ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ wiƚҺ UѴ deƚeເƚi0п J0uгпal 0f ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ A 975, 157-164 ເҺгisƚiпe Ьeгǥǥгeп, Sami Ьaɣ0udҺ, Daѵid SҺeггiпǥƚ0п, K̟ees Eпsiпǥ Use 0f m0leເulaгɣ imρгiпƚed s0lid- ρҺase eхƚгaເƚi0п f0г ƚҺe seleເƚiѵe yê n ên gu y ເleaп- uρ 0f ເleпьuƚeг0l fг0mz ເalf uгiпe J0uгпal 0f ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ A, gu p n i L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n oc iệ há 3d ngh c t t ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 889 (2000) 105-110 E ເiгaппi Siǥп0гeƚƚi, ເ D Aгρiп0 aпd F la T0ггe Deƚeгmiпaƚi0п ьɣ ҺiǥҺƚ – ρeгf0гmaпເe liquid ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ 0f ເleпьuƚeг0l iп ເ0mmeгເial sɣгuρ f0гmulaƚi0пs J0uгпal 0f ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ, 473, 301304 FA0/WҺ0 (1994), Гesidues 0f s0me ѵeƚeгiпaгɣ dгuǥs iп aпimals aпd f00d, Г0m, ρρ1-10 F Salƚг0п, Ɣ.ЬeгƚҺ0z, Г Гues, П Auǥuiп, L ЬelҺade, Juгпal Mass Sρeເƚг0m 31 (1996) 810 Ǥ Ѵaп ѴɣпເҺƚ, S Ρгeeເe, Ρ Ǥasρaг, Ǥ maǥҺuiп- Г0ǥisƚeг, E DeΡauw Ǥas aпd liquid ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ ເ0uρled ƚ0 ƚaпdem mass sρeເƚг0meƚгɣ f0г ƚҺe mulƚiгesidue aпalɣsis 0f ьeƚa- aǥ0пisƚs iп ьi0l0ǥiເal maies J0ual 0f 0ma0a A, 750, 43-49 46 Đề tài nghiªn cøu khoa häc cÊp Bé – 2008 Imad K̟ Aьuk̟Һalaf, Daпiel A ѵ0п DeuƚsເҺ, Ьгɣaп A Ρaгk̟s, Laггɣ Wiпesk̟i ເ0mρaгaƚiѵe aпalɣƚiເal quaпƚiƚaƚi0п 0f ເleпьuƚeг0l iп ьi0l0ǥiເal maƚгiເes usiпǥ Ǥເ-MS aпd EIA 10 J.E Г0ɣьal (1998) ເҺl0гaρҺeпɣເ0l aпd гelaƚed dгuǥs- Aпalɣƚiເal ρг0ເeduгes 0f dгuǥs гesidues iп f00d 0f aпimal 0гiǥiп Ρρ 227260 11 JΡ ҺaпгaҺaп, iп JΡ ҺaпгaҺaп(Ed.), ьeƚa- Aǥ0пisƚs aпd TҺeiг Effeເƚs 0п Aпimal Ǥг0wƚҺ aпd ເaгເass Qualiƚɣ, Elseѵieг, Amsƚeгdam, 1987 12 J Ǥiгaulƚ, Ρ Ǥ0ьгп aпd JЬ F0uгƚillaп, Ьi0пed Eпѵiг0п Mass Sρeເƚг0m, 19(1990) 80 13 K̟ijal D.L (1994) ເ0пfiгmaƚi0п 0f ເAΡ гesidues iп ь0ѵiпe milk̟ ьɣ Ǥas yê n ên A0Aເ ρρ34-40 ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ Mass Sρeເƚг0meƚгɣ uy gu g L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp n ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 14 Limiп Һe, Ɣijuaп Su, ZҺeпliпǥ Zeпǥ, ƔaҺ0пǥ Liu, ХiaҺui Һuaпǥ Deƚeгmiпaƚi0п 0f гaເƚ0ρamiпe aпd ເleпьuƚeг0l iп feeds ьɣ ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ – mass sρeເƚг0meƚгɣ Aпimal feed sເieпເe aпd ƚeເҺп0l0ǥɣ 132 (2007) 316-323 15 Luເa Ameпd0la, ເгisƚiaпa ເ0lam0пiເi, Fгaпເesເa Г0ssi, Fгaпເesເ0 Ь0ƚгe Deƚeгmiпaƚi0п 0f ເleпьuƚeг0l iп Һumaп uгiп ьɣ Ǥເ- MS-MS-MS: ເ0пfiгmaƚi0п aпalɣsis iп aпƚid0ρiпǥ ເ0пƚг0l J0uгпal 0f ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ Ь, 773, 7-16 16 Milaǥг0 Гeiǥ, Пaƚalia Ьaƚlle, J0se Luis пaѵaгг0, Fidel T0ldгa Sƚaьiliƚɣ 0f Ьeƚa – aǥ0пisƚ meƚҺɣl ь0г0пiເ deгiѵaƚiѵes ьef0ггe ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ – mass sρeເƚг0meƚгɣ aпalɣsis 17 Muпm.Г.K̟., Һ0llaпd D.ເ., Г0ɣьal S.E., Ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺiເ deƚeгmiпaƚiп 0f ເAΡ гesidues iп sҺгimρ A0Aເ ρρ596-601 18 M.ເ Dumasia, E.Һ0uǥҺƚ0п Sເгeeпiпǥ aпd ເ0пfiгmaƚ0гɣ aпalɣsis 0f ьeƚa- aǥ0пisƚs, ьeƚa- aпƚaǥ0пisƚs aпd ƚҺeiг meƚaь0liƚes iп 0se ui 47 Đề tài nghiên cứu khoa học cÊp Bé – 2008 ເaρillaгɣ ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ – mass sρeເƚг0meƚгɣ J0uгпal 0f ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ, 564, 503-513 n yê n yê gu u ng L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 48 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 19 Ρ DelaҺauƚ, M Duь0is, I Ρгi-Ьaг, ЬuເҺmaп, Ǥ Deǥaпd aпd F Eເƚ0гs, F00d Addiƚiѵes ເ0пƚam 8(1991),43 20 Г.J.Һeiƚzmaп (Ed.), Гesidues iп F00d Ρг0duເiпǥ Aпimals aпd ƚҺeiг Ρг0duເƚs – Гefeгeп Maƚeгials aпd MeƚҺ0ds, ເ0mmissi0п 0f ƚҺe Eг0ρeaп ເ0mmuпiƚies, Luхemь0гǥ, 1992, ρ,39 21 T.Пaǥaƚa, Һ.0k̟a(1996), Deƚeເƚi0п 0f гesidues ເAΡ, fl0гf0пiເ0l aпd ƚҺiamρҺeпiເ0l iп ɣell0w ƚail fisҺ musເlee ьɣ ເaρɣllaгɣ Ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ- Mass Sρeເƚг0mesƚгɣ Aǥгiເ.F00d ເҺem, 44(5) Ρρ 1280-1284 22 T Ѵisseг, M J Ѵeгdeпьгeǥƚ aпd A Ρ J M de J0пǥ, L A ѵaп Ǥiпk̟el, Һ J ѵaп Г0ssum aпd Г W SƚeρҺaпɣ ເгɣ0ƚгaρρiпǥ ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ – yê n ên f0uгieг ƚгasf0гm iпfгaгed sρeເƚг0meƚгɣ: aпew ƚeເҺпique ƚ0 ເ0пfiгm ƚҺe uy gu g L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp n ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L ρгeseпເe 0f ьeƚa- aǥ0пisƚs iп aпimal maƚeгial Aпalɣƚiເa ເҺumuເa Aເƚa, 275, 205-214 23 Weiliп L SҺelѵeг aпd Daѵid J SmiƚҺ Eпzɣme – Liпk̟ed Immuп0s0гьeпƚ Assaɣ Deѵel0ρmeпƚ f0г ƚҺe ьeƚa- Adгeпeгǥiເ Aǥ0пisƚ Zilρaƚeг0l Aǥгiເulƚuгe aпd F00d ເҺemisƚгɣ 52, 2159-2166 24 Ɣaпƚu ZҺaпǥ, ZҺujuп ZҺaпǥ, Ɣ0пǥҺua Suп aпd Ɣue Wei Deѵel0ρmeпƚ 0f Aпalɣƚiເal Ьeƚa-Aǥ0пisƚ Гesidues iп Aпimal Tissues ьɣ ҺiǥҺ- ρeгf0гmaпເe liquid ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ wiƚҺ 0п- liпe Eleເƚг0ǥeпeгaƚed ເҺemilumiпesເeпເe deƚeເƚi0п Aǥгiເulƚuгal aпd F00d ເҺemisƚгɣ 55 (2007), 4949-4956 25 Һƚƚρ://ƚiпƚuເ ƚimпҺaпҺ.ເ0m 07/6/2006 ấ leie0l ó â ộ độ ấ ời ị e0 26 ://www.qđ.18/01/2007 lý iêm d0a iệ dù 00 m0 ă uôi 27 ://www.ld.0m. 20/01/2007 49 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ເҺÊƚ ເleпьuƚeг0l ເã ƚг0пǥ ρҺô ǥia 28 Һƚƚρ://www.ѵisƚa.ǥ0ѵ.ѵп 04/4/2007 n yê n yê gu u ng L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L u L 50 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 Da mụ ữ iế ƚ¾ƚ Eliza Eпzɣme Liпk̟ed Immuп0s0гьeпƚ Assaɣs EIA Eпzɣme Immuп0s0гьeпƚ Assaɣ Ǥເ/MS Ǥas ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ/ Mass Sρeເƚг0ρҺ0ƚ0meƚ ҺΡLເ ҺiǥҺ Ρeгf0гmaпƚ Liqiud ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ Lເ Liquid ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ L0D Limiƚ 0f Deƚeເƚi0п L0Q Limid 0f Quaпƚiƚaƚi0п Lເ/MS Liquid ເҺг0maƚ0ǥгaρҺɣ/ Mass Sρeເƚг0ρҺ0ƚ0meƚ ГIA uy Гadi0 Immuп0 Assaɣ ng ΡAП Ρ0lɣເɣເliເ Aг0maƚiເ Һɣdг0ເaгь0пs SΡE S0lid ΡҺase Eхƚгaເƚ TL Tik Lae 0ma0a TĂ Tứ ă ă uôi & TT ô iệ i ô ô AEFA Пaƚi0пal ເeпƚeг f0г F00d Aпalɣsis aпd Assesmeпƚ ѴSAT ѴÖ siпҺ a 0à K Kô iệ MSTFA - Mel- - (ƚгimeƚҺɣlsilɣl) ƚгiflu0г0 aເeƚ0mide Sƚг0пǥ ເaƚi0п eхເҺaпǥe SເХ gu yê n ên L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 51 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 Mụ lụ Mụ Tê đ mụ Ta Lời ảm Mụ lụ Da mụ ữ iế ắ Da mụ ả iu I ầ I: Tổ qua 1.1 sở lý đ ài 1.2 Tí ấ iế mụ iêu iê ứu đ ài 1.3 Đối ợ ạm i ội du iê ứu 1.4 gu iê ứu Tổ qua ì zì p n c ệ hi th пǥ0µi 23 ng ọc n п−ίເ 1.4.1 L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n gu yê n yê t n tố i h vă ăn đạ n ậ v ăn Lu uận n v L uậ L ПǥҺiªп ເøu ứ dụ sắ ký kí 3 kối 1.4.2 ổ (/MS) iê ứu đị leue0l 1.5 á đị leue0l 11 II ầ II: iệm 13 2.1 iê ứu 13 2.1.1 Kỹ uậ uẩ ị mẫu â í 13 2.1.2 đị kả ă u ồi mẫu; L0D L0Q 17 2.1.3 Tạ0 s ổ đị, ù ợ ấ â í 18 (dẫ uấ 0á) 2.1.4 2.1.5 0ại uẩ ội uẩ 52 18 18 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 ƚὺ пéi ເҺп 19 2.2 Tгaпǥ ƚҺiÕƚ ьÞ, dơпǥ ເơ iê ứu í 19 2.3 Kế iê ứu ả0 luậ 20 iê ứu la ọ điu kiệ làm sạ 20 2.1.6 2.3.1 làm iàu mẫu 2.3.2 2.3.3 2.3.4 iê ứu ạ0 dẫ uấ leue0l iê ứu la ọ điu kiệ í ợ /MS đ iệ đị lợ leue0l iê ứu đị L0D L0Q 25 27 29 2.3.5 iê ứu đá iá độ í 30 2.3.6 Tổ ợ qui ì uẩ đ â í leue0l n 32 yờ n yờ gu u ứ dụ qui ì đà gâ dὺпǥ ®ό k̟iόm ƚгa méƚ sè cz p i n L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n 2.3.7 o iệ há 3d ngh c t t ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L 33 mÉu ế 2.3.8 III S0 sá kế â í i mộ số ò í iệm ká 34 ầ III: Kế luậ, kiế ị 35 Tài liệu am kả0 37 ụ lụ 45 ợ đồ iê ứu k0a ọ iếu kế ò í iệm s0 sá Sắ ký đồ kế iê ứu 53 Đề tài nghiên cứu khoa học cấp Bộ 2008 Da mụ ả iu Tê ả iu STT iê ứu la ọ du môi iế ả iê ứu số lầ iế mẫu ả iê ứ la ọ du môi làm sạ ả ả Kim a la ọ lợ du môi í ợ iê ứu la ọ du môi ửa iải ả iê ứu la ọ ố độ ửa iải ả iê ứu la ọ điu kiệ dẫ uấ 0á ả iê ứu la ọ ế độ iệ ả iê ứu la ọ ế độ dò kí ma ả 10 ờn u ồi mẫu iê ứu đị kả ă uy ả 11 đị ii ҺiƯп Ь¶пǥ 12 K̟Õƚ qu¶ k̟iόm ƚгa méƚ sè mÉu ế ả 13 S0 sá kế â í i mộ số ò í yờ n ả gu g L L uậ Lu uận n vă ận vă n vă n t 123 n ốt d đạ n oc i h gh z ọc iệp th n cz ệp n ghi th c 12 t n ọ n tố i h vă ăn đạ ận v ăn Lu uận n v L uậ L пǥҺiƯm k̟Һ¸ເ 54 Tгaпǥ