(Luận văn) nghiên cứu chiết tách anthocyanin từ củ khoai lang tím và ứng dụng của nó

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA lu PHAN THỊ DIỆU HIỀN an va n NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH ANTHOCYANIN TỪ CỦ tn to p ie gh KHOAI LANG TÍM VÀ ỨNG DỤNG CỦA NĨ w d oa nl KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ Đà Nẵng - 2018 an Lu n va ac th si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH ANTHOCYANIN TỪ CỦ KHOAI LANG TÍM VÀ ỨNG DỤNG CỦA NĨ lu an va n KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP gh tn to p ie CỬ NHÂN KHOA HỌC d oa nl w lu Lớp nf va an Sinh viên thực : Phan Thị Diệu Hiền : 14CHP lm ul Giáo viên hướng dẫn : PGS TS Lê Tự Hải z at nh oi z m co l gm @ Đà Nẵng - 2018 an Lu n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM Độc lập - Tự - Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Phan Thị Diệu Hiền Lớp : 14CHP Tên đề tài: Nghiên cứu chiết tách Anthocyanin từ củ khoai lang tím ứng dụng Nguyên liệu, thiết bị, dụng cụ hóa chất lu an 2.1 Nguyên liệu: Khoai lang tím chợ Đống Đa, Đà Nẵng n va 2.2 Thiết bị: Máy đo quang UV-VIS hãng Thermo (Đức), tủ sấy, lò nung, bếp tn to cách thủy, máy pH, cân phân tích gh 2.3 Dụng cụ: cốc thủy tinh, bình định mức, bát sứ, chén sứ, cối sứ, chày sứ, bóp p ie cao su, pipet loại, đũa thủy tinh, phễu lọc, giấy lọc w 2.4 Hóa chất: Rượu etylic, dung dịch HCl đậm đặc, Dung dịch amoniac, nước cất oa nl lần hóa chất thơng dụng PTN d Nội dung nghiên cứu an lu • Nghiên cứu lựa chọn điều kiện tối ưu trình xử lý mẫu để nf va chiết tách anthocyanin từ khoai lang tím z at nh oi lm ul • Ứng dụng làm giấy thị an tồn phân tích hóa học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Lê Tự Hải Thời gian nhận đề tài: 9/2017 Giảng viên hướng dẫn gm (Ký ghi rõ họ tên) m co l (Ký ghi rõ họ tên) @ Chủ nhiệm khoa z Thời gian hoàn thành đề tài: 3/2018 an Lu PGS TS Lê Tự Hải PGS TS Lê Tự Hải n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày……tháng……năm 2018 Kết điểm đánh giá Ngày tháng… năm 2018 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (Ký ghi rõ họ tên) lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải MỤC LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC BẢNG LỜI MỞ ĐẦU 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .13 1.1 Khoai lang 13 lu an n va Định nghĩa .13 1.1.2 Nguồn gốc .13 1.1.3 Đôi nét khoai lang tím 14 gh tn to 1.1.1 Anthocyanin .15 p ie 1.2 1.2.1 Giới thiệu 15 nl w Cấu trúc 15 d oa 1.2.2 Tính chất vật lý .16 1.2.4 Tính chất hóa học 17 1.2.5 Tác dụng sinh học Anthocyanin .17 nf va an lu 1.2.3 lm ul Tổng quan chất thị 20 1.4 Kỹ thuật chiết tách hợp chất hữu 21 z at nh oi 1.3 Phương pháp chiết 21 1.4.2 Phương pháp kết tinh 22 1.4.3 Phương pháp chưng cất .23 z 1.4.1 co l gm @ m CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 25 an Lu 2.1 Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ 25 n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải 2.1.1 Nguyên liệu 25 2.1.2 Hóa chất 25 2.1.3 Dụng cụ 26 2.2 Sơ đồ nghiên cứu 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu .27 2.3.1 Phương pháp xác định số tiêu hóa lí khoai lang tím 27 2.3.2 Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết Anthocyanin 28 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 lu an 3.1 Chỉ tiêu hóa lý khoai lang tím .31 Độ ẩm khoai lang tím .31 3.1.2 Xác định hàm lượng hữu phương pháp tro hóa mẫu 31 n va 3.1.1 gh tn to 3.2 Nghiên cứu chiết tách Anthocyanin 32 p ie Quy trình .32 w 3.2.1 oa Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết tách Anthocyanin .35 d 3.2.3 Xác định bước sóng hấp thụ cực đại .35 nl 3.2.2 lu Nghiên cứu ảnh hưởng pH đến màu anthocyanin 41 3.4 Ứng dụng anthocyanin làm giấy thị để phát nhanh pH môi nf va an 3.3 lm ul trường .43 z at nh oi 3.4.1 Xác định thời gian tẩm dịch màu lên giấy 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 47 z m co l gm @ TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 an Lu n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải DANH MỤC CÁC HÌNH STT Số hiệu Tên hình hình Trang 1.1 Các ion flavinium, cấu trúc aglycon 11 1.2 Dụng cụ chiết Soxhlet 18 1.3 Dụng cụ chưng cất dung môi 20 1.4 Dụng cụ cất quay chân không 20 1.5 Khoai lang tím 21 2.1 Sơ đồ nghiên cứu 22 2.2 Khoai lang tím sau tro hóa 24 gh ie 3.1 Mẫu khoai lang tím ngâm chiết bếp cách thủy 29 3.2 Khoai lang tím trước sau ngâm tẩm 30 w Cô cạn dịch chiết bếp cách thủy 32 lu an n va tn to p 3.3 11 3.4 12 3.5 Đồ thị biểu diễn kết khảo sát thời gian 36 13 3.6 Đồ thị biểu diễn kết khảo sát tỉ lệ R/L 37 14 3.7 Đồ thị biểu diễn kết ảnh hưởng nhiệt độ 39 15 3.8 Màu anthocynin pH=1 đến pH= 12 41 16 3.9 Quá trình ngâm tẩm giấy lọc 42 17 3.10 Giấy lọc sau ngâm sấy khô 42 18 3.11 Giấy lọc ngâm 70 giây @ 43 19 3.12 Giấy lọc ngâm 130 giây 20 3.13 Giấy lọc ngâm 150 giây Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng tỉ lệ hệ dung môi oa nl 10 d 35 nf va an lu C2 H5 OH: H2 O z at nh oi lm ul z gm co l 43 43 m an Lu n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải DANH MỤC CÁC BẢNG STT Số hiệu Tên bảng bảng Trang lu an n va 1.1 Một số thị thường dùng chuẩn độ acid-base 17 3.1 Kết xác định độ ẩm khoai lang tím 27 3.2 Kết xác định hàm lượng hữu 28 3.3 Ảnh hưởng tỉ lệ hệ dung môi 34 3.4 Ảnh hưởng thời gian tối ưu 35 3.5 Tỉ lệ rắn/lỏng 37 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ 38 3.7 Màu dung dịch anthocyanin pH khác 40 p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến giảng viên hướng dẫn thầy Lê Tự Hải cho phép, tận tình hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian thực hồn thành khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô khoa Hóa, trường Đại học sư phạm Đà Nẵng dạy dỗ, truyền đạt kiến thức hữu ích cho suốt thời gian học tập trường tạo điều kiện thuận lợi để nghiên cứu, thực khóa luận Chân thành cảm ơn bạn tập thể lớp 14CHP nhiệt tình giúp đỡ tơi học tập, nghiên cứu, tìm kiếm tài liệu động viên suốt thời gian nghiên lu an cứu thực khóa luận n va Mặc dù thân cố gắng nỗ lực song khơng thể tránh có sai sót Rất tn to mong q thầy thơng cảm đóng góp thêm ý kiến để tơi hồn thiện báo cáo Tơi xin chân thành cảm ơn! p ie gh w Đà Nẵng, ngày tháng năm 2018 d oa nl Sinh viên thực an lu nf va Phan Thị Diệu Hiền z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải LỜI MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Hiện nay, chất màu tự nhiên ngày quan tâm, chất tạo màu khơng độc hại, thân thiện với môi trường ứng dụng rộng rãi cho nhiều ngành công nghiệp Anthocyanin họ màu phổ biến, tồn hầu hết thực vật bậc cao tìm thấy số loại rau, hoa, quả, hạt có màu từ đỏ đến tím như: nho, dâu, bắp cải tím, cà tím, khoai lang tím, gạo nếp than,… Trong đó, khoai lang tím ngun liệu có hàm lượng Anthocyanin cao lu an Nhiều nghiên cứu cho thấy Anthocyanin khoai lang tím khơng n va tạo màu tốt mà cịn có tác dụng tốt sức khỏe người động vật Vì thế, gia đình Ngồi ra, đặc tính đặc biệt chất màu Anthocyanin thay đổi màu theo p ie gh tn to sử dụng rộng rãi để làm thuốc, màu thực phẩm, thực phẩm sử dụng w pH môi trường Do đó, Anthocyanin hồn tồn dùng làm chất thị để xác oa nl định nhanh môi trường pH Vai trị làm giấy thị tiện dụng d Chỉ cần mẩu giấy nhỏ hay lượng nhỏ, ta biết dung dịch sử dụng có lu an tính acid hay base độ mạnh yếu tính acid/base dựa vào thay đổi màu nf va sắc Hiện nay, chất thị tổng hợp metyl da cam, phenolphtalein,…có lm ul thể khơng tinh khiết, ảnh hưởng đến kết nghiên cứu thí nghiệm Do vậy, nghiên cứu sử dụng Anthocyanin làm chất thị việc làm cần thiết nhằm z at nh oi phát triển hợp chất hữu có nguồn gốc thiên nhiên Tuy nhiên, ứng dụng Anthocyanin làm chất thị an tồn hóa học phân tích phân tích z thực phẩm chưa đề cập cách đầy đủ hệ thống Và l gm @ lí em lựa chọn đề tài: m co “Nghiên cứu chiết tách Anthocyanin từ khoai lang tím ứng dụng nó” an Lu n va Page 10 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Bảo quản dung dịch Dung dịch chiết sau cạn, ngồi chất cần phân tích cịn có tạp chất Do đó, tiếp tục làm lạnh chậm tủ lạnh nhằm tạo điều kiện cho tạp chất lắng xuống Quá trình giúp cho giai đoạn tinh Anthocyanin tiến hành dễ dàng Làm giấy thị Bằng cách ngâm tẩm giấy lọc dịch chiết thời gian nồng độ phù hợp lu 3.2.2 Xác định bước sóng hấp thụ cực đại an va Để xác định bước sóng cực đại phân tích anthocyanin, chúng tơi lựa chọn n máy quang phổ UV-VIS Quét phổ dịch chiết khoảng bước sóng 400-800nm Để giảm ảnh hưởng dung môi tạp chất đảm bảo độ p ie gh tn to Kết cho thấy anthocyanin hấp thụ bước sóng cực đại 525nm oa nl 525nm w nhạy phương pháp phân tích Anthocyanin nên chọn bước sóng phát d Dựa vào tính chất Anthocyanin tan nước nên lựa dung môi chiết lu nf va an Anthocyanin nước Tuy nhiên, chiết thu lượng anthocyanin thấp lm ul Do đó, để tăng khả hịa tan Anthocyanin em lựa chọn thêm dung môi rượu etylic với xúc tác axit để khảo sát điều kiện tối ưu z at nh oi 3.2.3 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết tách Anthocyanin 3.2.3.1 Khảo sát tỉ lệ hệ dung môi C2H5OH : H2O z gm @ Để khảo sát tỉ lệ hệ dung môi tối ưu cho q trình chiết tách Anthocyanin, chúng tơi cân mẫu 20g khoai lang tím tiến hành ngâm l co 50mL dung môi vừa khảo sát ưng với tỉ lệ khác ngâm m vòng 60 phút, nhiệt độ phịng Sau ngâm chiết xong, lọc chân khơng thu an Lu dịch chiết n va Page 35 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Đem dịch chiết thu pha lỗng 25 lần, sau tiến hành đo mật độ quang Kết thể Bảng 3.3 Hình 3.4 Bảng 3.3 Tỉ lệ hệ dung môi độ hấp thụ màu Tỉ lệ hệ dung môi C2H5OH: H2O Độ hấp thụ màu 1:9 0,4721 2:8 0,4860 3:7 0,4913 4:6 0,5257 5:5 0,5964 6:4 0,5872 7:3 0,5832 8:2 0,5754 9:1 0,4996 lu STT an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page 36 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Mật độ quang(A) 0.65 0.6 0.55 0.5 0.45 0.4 10 Tỉ lệ C2H5OH: H2O lu an Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng tỉ lệ C2H5OH: H2O va n Nhận xét: Kết thu Bảng 3.4, nhận thấy với tỉ lệ gh tn to dung môi etanol - nước 1:1 (1% HCl), độ hấp thụ màu dịch chiết cao p ie Vì vậy, chọn tỉ lệ hệ dung môi etanol - nước (1%HCl) tối ưu cho trình Khảo sát thời gian tối ưu oa nl 3.2.3.2 w chiết anthocyanin 1:1 d Để khảo sát thời gian tối ưu cho q trình chiết tách Anthocyanin, chúng tơi lu nf va an tiến hành chiết tách số mốc thời gian khác Cân mẫu 20g khoai lang tím cho vào cốc thủy tinh khơ chuẩn bị sẵn lm ul tiến hành ngâm mốc thời gian khác nhau: 30 phút, 45 phút, 60 phút, 75 z at nh oi phút, 90 phút, 105 phút nhiệt độ phòng Sau ngâm chiết 50mL dung môi xong, lọc chân không thu dịch chiết z Đem dịch chiết thu pha loãng 25 lần, sau tiến hành đo mật độ quang @ m co l gm Kết thể qua Bảng 3.4 Hình 3.5 an Lu n va Page 37 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Bảng 3.4 Thời gian tối ưu chiết tách Anthocyanin STT Độ hấp thụ màu 0,4932 0,5538 0,6036 0,7440 0,7491 0,7523 Thời gian (phút) 30 45 60 75 90 105 0.8 lu n va p ie gh tn to Mật độ quang (A) an 0.75 0.7 0.65 0.6 0.55 0.5 0.4 20 oa nl w 0.45 40 60 80 100 120 d Thời gian (phút) an lu nf va Hình 3.5 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng thời gian đến trình chiết tách anthocyanin lm ul Nhận xét: Từ kết thu Bảng 3.4, ta thấy thời gian chiết z at nh oi tách chất màu tăng mật độ quang tăng Khi thay đổi thời gian chiết từ 45phút đến 75 phút mật độ quang tăng mạnh, nên hàm lượng anthocyanin tăng nhanh z Tuy nhiên, tăng từ 75phút đến 90 phút, 105 phút mật độ quang có tăng @ gm tăng chậm không đáng kể, đồng thời lượng tăng giảm dần Do đó, chúng l tơi chọn thời gian tối ưu cho trình chiết anthocyanin 75 phút hệ dung an Lu nghiên cứu m co môi etanol/nước (1:1, 1% HCl) Thời gian sử dụng cho trình n va Page 38 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp 3.2.3.3 GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Khảo sát tỉ lệ Rắn/Lỏng Để khảo sát tỉ lệ tối ưu cho trình chiết tách Anthocyanin, tiến hành chiết tách với tỉ lệ rắn/lỏng khác Cân mẫu khoai lang tím cho vào cốc thủy tinh khô chuẩn bị sẵn với tỉ lệ rắn/lỏng (g/mL) sau: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4và tiến hành ngâm thời gian khảo sát nhiệt độ phòng Sau ngâm chiết xong, lọc chân không thu dịch chiết Đem dịch chiết thu pha lỗng 25 lần, sau tiến hành đo mật độ quang lu Kết thể Bảng 3.5 Hình 3.6 an n va Bảng 3.5 Tỉ lệ Rắn/Lỏng p ie gh tn to Tỉ lệ R/L (g/mL) Độ hấp thụ màu 1:1 0,6189 1:2 0,6741 1:3 0,7446 1:4 0,7532 STT w d oa nl 0.75 lm ul 0.7 z at nh oi Mật độ quang (A) nf va an lu 0.8 0.65 0.6 z 0.55 1:01 1:01 1:02 1:03 1:04 1:04 Tỉ lệ rắn/lỏng (g/mL) m co l 1:00 gm @ 0.5 an Lu Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn kết khảo sát tỉ lệ R/L n va Page 39 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Nhận xét: Kết thu Bảng 3.5 Hình 3.6, chúng tơi nhận thấy với tỉ lệ rắn/lỏng từ 1:3 đến 1:4, độ hấp thụ màu dịch chiết tăng dần không đáng kể Vì vậy, dựa vào độ hấp thụ màu chúng tơi chọn tỉ lệ rắn/lỏng tối ưu cho trình chiết anthocyanin 1:3 3.2.3.4 Khảo sát nhiệt độ Để khảo sát nhiệt độ tối ưu cho trình chiết tách Anthocyanin, tiến hành chiết tách số mốc nhiệt độ khác Cân mẫu 20g khoai lang tím cho vào cốc thủy tinh khơ chuẩn bị sẵn tiến hành ngâm mức nhiệt độ khác nhau: nhiệt độ phòng, 45oC, 55oC, lu an 65oC,75oC,85oC Sau ngâm chiết xong, lọc chân không thu dịch chiết va n Đem dịch chiết thu pha lỗng 25 lần, sau tiến hành đo mật độ quang tn to Kết thể theo Bảng 3.6 Hình 3.7 p ie gh Bảng 3.6 Nhiệt độ độ hấp thụ màu trình chiết Độ hấp thụ màu Nhiệt độ phịng 0,7445 45 0,7593 55 0,7931 65 nf va 0,8439 75 lm ul 0,8291 85 0,7918 an lu d oa nl z at nh oi w Nhiệt độ(oC) STT z m co l gm @ an Lu n va Page 40 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Mật độ quang (A) 0.86 0.84 0.82 0.8 0.78 0.76 0.74 0.72 20 40 60 Nhiệt độ (oC 80 100 ) lu an Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ đến việc chiết tách anthocyanin va n Nhận xét: Khi tăng nhiệt độ làm giảm độ nhớt đồng thời tăng tốc độ tn to khuếch tán tạo điều kiện thuận lợi cho việc hòa tan chất từ dung mơi vào ie gh ngun liệu Do đó, mật độ quang dịch chiết tăng dần Tuy nhiên, mật độ p quang cao 65oC, điều phù hợp với tính chất đặc trưng anthocyanin w hòa tan tốt nước ấm.Tại 75oC , 85oC mật độ quang bắt đầu giảm dần oa nl nhiệt độ cao anthocyanin bị phân hủy Cho nên, để giảm bớt phân hủy d nhiệt đến mức thấp thường ta tiến hành nhiệt độ vừa phải Trong đề tài lu 3.3 nf va an này, chọn nhiệt độ chiết 65oC trình nghiên cứu Nghiên cứu ảnh hưởng pH đến màu anthocyanin z at nh oi - lm ul Cách tiến hành Pha dung dịch đệm phosphat có pH từ pH=1 đến pH=12 ✓ Đệm pH=1: Hòa tan 0,895g dinatri hydrophosphat khan 0,340g z kali dihydrophosphat nước vừa đủ 100mL Điều chỉnh pH gm @ acid phosphoric co l ✓ Đệm pH=2: Hòa tan 0,895g dinatri hydrophosphat khan 0,340g m kali dihydrophosphat nước vừa đủ 100mL Điều chỉnh pH an Lu acid phosphoric n va Page 41 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải ✓ Đệm pH=3: Pha lỗng dung dịch có pH=2 thành 10 lần thu dung dịch có pH=3 ✓ Đệm pH=4: Hòa tan 6,80g kali dihydrophosphat nước vừa đủ 100mL Điều chỉnh pH natri hydroxyd 10M ✓ Đệm pH=5: Hòa tan 0,272g kali dihydrophosphat 80mL nước.Điều chỉnh pH dung dịch kalihydroxyd 1M định mức đến 100mL ✓ Đệm pH=6: Hòa tan 0,68g natri hydrophosphat nước vừa đủ 100mL Điều chỉnh pH dung dịch natri hydroxyd 10M ✓ Đệm pH=7: Hòa tan 0,518g dinatri hydrophosphat khan 0,365g lu an natri dihydrophosphat 95mL nước, chỉnh pH acid n va phosphorid điều chỉnh mực nước đến 100mL tn to ✓ Đệm pH=8: Hòa tan 13,61g kali dihydrophosphat nước, điều gh chỉnh pH dung dịch natri hydroxyd 10M, định mức đến vạch p ie 100mL điều chỉnh pH dung dịch kali hydroxyd 1M, điều chỉnh đến oa nl w ✓ Đệm pH=9: Hòa tan 1,74g kali dihydrophosphat 80mL nước, d vạch 100mL an lu ✓ Đệm pH=10 đến pH= 14: Hòa tan 1,74g kali dihydrophosphat nf va 80mL nước Điều chỉnh pH dung dịch kali hydroxyd 1M, lm ul điều chỉnh đến vạch 100mL z at nh oi Bảng 3.7 Màu dung dịch anthocyanin pH khác pH=2 pH=3 pH=4 Đỏ Đỏ Đỏ Đỏ hồng Dung dịch pH=5 pH=6 pH=7 pH=8 Màu Đỏ hồng Tím nhạt Tím Tím nhạt Dung dịch pH=9 pH=10 pH=11 pH=12 Màu Xanh đậm Xanh co l gm @ Xanh chuối an Lu Màu m pH=1 z Dung dịch Vàng n va Page 42 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải lu an Hình 3.8 Màu Anthocyanin pH =1 đến pH=12 n va tn to Như vậy, màu anthocyanin thay đổi pH môi trường chuyển từ acid sang base giống thị acid-base khác (phenolphtalein metyl da gh p ie cam) Chứng tỏ anthocyanin có khả làm chất thị môi trường Ứng dụng anthocyanin làm giấy thị để phát nhanh pH w 3.4 oa nl môi trường d ❖ Nguyên tắc: dựa thay đổi màu sắc anthocyanin theo giá trị pH nf va an lu khác 3.4.1 Xác định thời gian tẩm dịch màu lên giấy lm ul Thời gian ngâm tẩm dịch màu lên giấy có ý nghĩa quan trọng việc xác z at nh oi định điều kiện làm giấy thị Các mốc thời gian chọn 1, 10, 30, 70, 130, 150 giây Giấy sau ngâm tẩm dịch màu sấy khô nhiệt độ 400C, z vòng m co l gm @ an Lu n va Page 43 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Hình 3.9 Quá trình ngâm tẩm giấy lọc lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu Hình 3.10 Giấy lọc sau ngâm sấy khô Sau khảo sát, tiến hành làm giấy thị pH dịch chiết z at nh oi lm ul anthocyanin theo quy trình sau: Giấy lọc rửa acid HCl 0,1N, sau rửa nước cất dung dịch amoniac 5%, rửa lại nước cất sấy khô Ngâm tẩm giấy lọc z dung dịch anthocyanin theo mốc thời gian chọn: 1, 10,30, 70, 130, 150 giây @ m co l gm Sấy khô đến khối lượng không đổi bảo quản nơi mát, tránh tiếp xúc ánh sáng an Lu n va Page 44 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải lu Hình 3.11 Giấy lọc ngâm 70 giây an n va gh tn to p ie d oa nl w nf va an lu Hình 3.12 Giấy lọc ngâm 130 giây z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu Hình 3.13 Giấy lọc ngâm 150 giây n va Page 45 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Qua kết quả, ta thấy thời gian tẩm dịch ảnh hưởng trực tiếp đến kết phát hiên pH giấy thị Nếu thời gian 130 giây, tăng thời gian ngâm tăng độ nhạy giấy Nhưng tăng đến 150 giây phát màu bắt đầu giảm Do vậy, thời gian ngâm tẩm giấy chọn 130 giây Sản phẩm thu có màu tím (mơi trường trung tính) Khi nhúng giấy thị anthocyanin vào mơi trường acid, base, màu tím giấy nhanh chóng chuyển sang màu đỏ màu xanh Nhờ vào đổi màu nhanh chóng mơi trường trung tính, acid, base, giấy thị anthocyanin sử dụng để phát nhanh pH môi trường đặc biệt thực phẩm y học lu an n va p ie gh tn to d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page 46 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trong q trình nghiên cứu chúng tơi rút số kết luận sau đây: Xác định số tiêu hóa lí khoai lang tím - Độ ẩm chiếm 73,55% khối lượng nguyên liệu - Hàm lượng hữu chiếm 10,949% khối lượng nguyên liệu Xác định bước sóng hấp thụ cực đại anthocyanin khoai lang tím 525nm Xác định điều kiện tối ưu cho trình chiết là: lu an n va Dung môi tối ưu C2H5OH : H2O(1:1) (1% HCl) - Thời gian chiết tối ưu 75 phút - Nhiệt độ tối ưu 65oC Đã tạo giấy thị pH từ anthocyanin Tiếp tục nghiên cứu chiết tách anthocyanin từ củ khoai lang tím để ứng dụng - Kiến nghị p ie gh tn to - nl w thử nhanh phát hàn the thực phẩm Tiếp tục nghiên cứu xác định thành phần chất màu độ bền màu d oa - nf va an lu Anthocyanin chiết từ củ khoai lang tím z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page 47 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt [1] Bộ y tế (2009), Dược điển Viêt Nam IV, nhà xuất y học, Hà Nội [2] Bộ y tế (2007), Hóa phân tích - tập – Phân tích hóa học, nhà xuất Y học, Hà Nội [3] Huỳnh Thị Kim Cúc, Phạm Châu Quỳnh, Nguyễn Thị Lan cộng (2004), : « Xác định hàm lượng anthocyanin số nguyên liệu rau phương pháp pH vi sai », Tạp chí Khoa Học Cơng Nghệ, Đại học Đà Nẵng lu an [4] Phạm Thị Thanh Nhàn, Nguyễn Hữu Cường Lê Trần Bình (2011), « Tách n va chiết phân tích hàm lượng Anthocyanin mẫu thực vật khác », Tạp tn to chí Sinh Học, 33(4), pp.79-85 ie gh [5] Nguyễn Thị Lan, Lê Thị Lạc Quyên (2006), « Nghiên cứu ảnh hưởng dung p môi đến khả chiết tách chất màu Anthocyanin có độ màu cao từ dâu Hội An », Tạp chí Khoa Học Công Nghệ, Đại học Đà Nẵng, 44, pp 71-76 d oa nl w Internet lu [7] nf va an [6] https://vi.wikipedia.org/wiki/Khoai_lang https://www.24h.com.vn/suc-khoe-doi-song/cong-dung-tuyet-voi-cua-khoai- z at nh oi lm ul lang-tim-c62a525628.html [8] https://en.wikipedia.org/wiki/Anthocyanin [9] http://tuaf.edu.vn/khoacnsh/bai-viet/vai-tro-cua-anthocyanin-trong-doi-song- z gm @ 2462.html m [11] https://vi.wikipedia.org/wiki/Chưng_cất co l [10] https://www.slideshare.net/lanhnguyen564/chuong6-26581669 an Lu n va Page 48 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si Luận văn tốt nghiệp GVHD: PGS TS Lê Tự Hải Tiếng anh [12] Cretu G.C, Morlock G.E (1 March 2014), “Analysis of anthocyanins in powdered berry extracts by planar chromatography linked with bioassay and mass spectrometry”, Food Chemistry, 146, pp 104 – 112 [13] Ovando A.C (2009), “ Chemical studies of anthocyanins: A review”, Food Chemistry, 113, pp 859 – 871 [14] Kumar Anil and Ashatha Singh (2012), “ Review on Hibicus rosa sinensis”, Pharmacy College, Itaura, Chandeshwar, Azamgarh, Uttar Pradesh, India, pp 534 lu – 538 an n va [15] Xu Z, Howard L.R (2012), “Analysis Methods of Anthocyanins”, Analysis of tn to Antioxidant – RichPhytochemicals, 5, pp 945 – 978 ie gh [16] Meenal Anil Kumar (2014), “Ameliorative Effect of Hibiscus rosa sinensis on p Phenylhydrazine Induced Haematotoxicity”, International Journal of Innovative Research in Science, Engineering and Technology d oa nl w nf va an lu z at nh oi lm ul z m co l gm @ an Lu n va Page 49 ac th SVTH: Phan Thị Diệu Hiền si