Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu ảnh hưởng của tốc độ khuấy, nồng độ muối đến hiệu suất cố định và khả năng phân giải histamine của chủng exiguobacterium profundum ch21

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  NGUYỄN VĂN TÚ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA TỐC ĐỘ KHUẤY, NỒNG ĐỘ MUỐI ĐẾN HIỆU SUẤT CỐ ĐỊNH VÀ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI HISTAMINE CỦA CHỦNG Exiguobacterium profundum CH2.1 Hà Nội – Tháng 09/2021 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA TỐC ĐỘ KHUẤY, NỒNG ĐỘ MUỐI ĐẾN HIỆU SUẤT CỐ ĐỊNH VÀ KHẢ NĂNG PHÂN GIẢI HISTAMINE CỦA CHỦNG Exiguobacterium profundum CH2.1 Người thực : Nguyễn Văn Tú Mã sinh viên : 6207176 Khố : 62 Ngành : Cơng nghệ thực phẩm Giáo viên hướng dẫn : PGS.TS Nguyễn Hoàng Anh Bộ mơn : Hóa sinh - Cơng nghệ sinh học thực phẩm Hà Nội – Tháng 09/2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu khóa luận trung thực chưa sử dụng; giúp đỡ cho việc thực khóa luận cảm ơn thơng tin trích dẫn chun đề ghi rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2021 Sinh viên thực NGUYỄN VĂN TÚ LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, bên cạnh nỗ lực thân, nhận quan tâm giúp đỡ nhiều từ cá nhân tập thể Lời xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô cán Học viện Nơng nghiệp Việt Nam ln bảo tận tình tạo điều kiện thuận lợi để học tập suốt năm học vừa qua Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Hoàng Anh, ThS Phạm Thị Dịu, ThS Nguyễn Thị Hồng cử nhân Nguyễn Thị Phương Anh phịng thí nghiệm Trung tâm Khoa học Cơng nghệ thực phẩm - người nhiệt tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ suốt trình học tập nghiên cứu Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới người thân, bạn bè động viên tạo động lực cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 05 tháng 09 năm 2021 Sinh viên thực Nguyễn Văn Tú MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan nước mắm 2.1.1 Giới thiệu chung nước mắm .3 2.1.2 Nguyên liệu sản xuất nước mắm 2.1.3 Quy trình sản xuất nước mắm 2.2 Giới thiệu histamine 2.2.1 Giới thiệu chung 2.2.2 Sự hình thành histamine thực phẩm .6 2.2.3 Histamine nước mắm 2.2.4 Tác hại histamine 2.3 Phương pháp làm giảm histamine nước mắm .7 2.3.1 Kiểm soát chất lượng nguyên liệu đầu vào 2.3.2 Tác động công nghệ để ngăn ngừa hình thành, tích tụ histamine 2.4 Tổng quan phương pháp cố định 2.4.1 Phương pháp hấp phụ (Adrorption) .9 2.4.2 Phương pháp liên kết chéo (Cross-linking) 10 2.5 Tổng quan chất mang .10 2.5.1 Khái niệm chất mang vi sinh vật 10 2.5.2 Đặc điểm chất mang vi sinh vật 10 2.6 Giới thiệu chung chủng Exiguobacterium profundum 13 2.6.1 Giới thiệu chi vi khuẩn Exiguobacterium .13 2.6.2 Giới thiệu chủng vi khuẩn Exiguobacterium profundum .13 2.6.3 Cơ chế phân giải histamine chủng vi khuẩn Exiguobacterium profundum 14 2.7 Ảnh hưởng hai yếu tố tốc độ khuấy nồng độ muối trình cố định tế bào 14 2.7.1 Nồng độ muối Tris HCl 50mM; pH 7,0 .14 2.7.2 Tốc độ khuấy .14 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .15 3.1 Đối tượng nghiên cứu .15 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 15 3.1.2 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 15 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ hóa chất .15 3.2 Nội dung nghiên cứu 16 3.3 Phương pháp nghiên cứu 17 3.3.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm 17 3.3.2 Phương pháp phân tích .17 3.3.3 Phương pháp xử lí số liệu 22 PHẦN 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .23 4.1 Ảnh hưởng tốc độ khuấy đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chủng Exiguobacterium profundum CH2.1 23 4.2 Ảnh hưởng nồng độ muối đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chủng Exiguobacterium profundum CH2.1 26 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .29 5.1 Kết luận 29 5.2 Kiến nghị 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO .30 PHỤ LỤC 34 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ cơng nghệ sản suất nước mắm Hình 2.2 Cơng thức cấu tạo cấu trúc khơng gian histamine .6 Hình 2.3 Sự hình thành histamine từ histidine .6 Hình 2.4 Phương pháp hấp phụ tế bào 10 Hình 2.5 Phương pháp liên kết chéo 10 Hình 2.6 Cấu tạo chất mang celite chụp qua kính hiển vi 11 Hình 2.7 Chất mang chitosan chụp qua kính hiển vi 12 Hình 2.8 Chất mang pigbone chụp qua kính hiển vi 12 Hình 2.9 Chất mang eggshell chụp qua kính hiển vi 13 Hình 4.1 Đồ thị ảnh hưởng tốc độ khuấy đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang celite sau 2h phản ứng 23 Hình 4.2 Đồ thị ảnh hưởng tốc độ khuấy đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang pigbone sau 2h phản ứng 24 Hình 4.3 Đồ thị ảnh hưởng tốc độ khuấy đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang chitosan sau 2h phản ứng 24 Hình 4.4 Ảnh hưởng tốc độ khuấy đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang eggshell sau 2h phản ứng .25 Hình 4.5 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ muối đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang celite sau 2h phản ứng 26 Hình 4.6 Ảnh hưởng nồng độ muối đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang pigbone sau 2h phản ứng 27 Hình 4.7 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ muối đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang chitosan sau 2h phản ứng 27 Bảng 4.8 Ảnh hưởng nồng độ muối đến hiệu suất cố định khả phân giải histamine chất mang eggshell sau 2h phản ứng .28 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần hóa học nước mắm Bảng 3.1 Thiết bị sử dụng nghiên cứu 15 Bảng 3.2 Danh sách hóa chất sử dụng nghiên cứu .16 Bảng 3.4 Chương trình dẫn xuất hóa tự động hệ thống HPLC .20 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT VÀ KÍ HIỆU Chữ viết tắt HPLC Tên đầy đủ High-performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam HA Halophilic OPA O-Phthalaldehyde BME β-mercaptoethanol EDTA Ethylene Diamine Tetracetic Acid FAO Food and Agricuture Organization of the United Nation 1-methoxy PMS 1-methoxy-5-methylphenazinium methylsulphate cs Cộng STT Số thứ tự v/p Vòng/phút HSCĐ Hiệu suất cố định KNPG Khả phân giải PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nước mắm gia vị truyền thống có giá trị dinh dưỡng cao Việt Nam Trong nước mắm chứa nhiều chất dinh dưỡng thiết yếu cho thể, lại chứa hàm lượng histamine cao amin sinh học mà tồn thể với nồng độ cao gây nguy hại cho sức khỏe Khi sử dụng sản phẩm chứa hàm lượng histamine cao thường gây triệu chứng bất co thắt phế quản, mề đay, phát ban, tiêu chảy nghiêm trọng gây giãn mạch, co thắt tim,…(Vũ Văn Đính, 2007) Hàm lượng histamine có nước mắm truyền thống nước ta cao vượt ngưỡng cho phép, dao động từ 1000-3000mg/l (Báo cáo Hiệp hội nước mắm Phan Thiết, 2013), theo Tiêu chuẩn Codex 302 năm 2011 hàm lượng histamine nước mắm quy định không vượt 400mg/l Để đáp ứng tiêu chuẩn khu vực quốc tế tính an tồn cho người tiêu dùng cần tìm phương pháp làm giảm hàm lượng histamine vô cần thiết Thực tế có nhiều cơng trình nghiên cứu có sử dụng nhiều phương pháp khác vật lí, hóa học, vi sinh vật để làm giảm hàm lượng histamine nước mắm Trong phương pháp vi sinh vật, đặc biệt ứng dụng chủng vi khuẩn có khả phân giải histamine hướng đến phương pháp có hiệu cao nhất, khắc phục hạn chế phương pháp vật lí hóa học tốn chi phí đặc biệt ảnh hưởng tới sức khỏe người Phần lớn nghiên cứu sử dụng phương pháp bổ sung vi sinh vật tự trực tiếp vào trình sản xuất chượp mắm, nhược điểm phương pháp tốn thời gian, chi phí, khó kiểm sốt quy trình cơng nghệ, màu sắc, độ lên men (Robertson, 2005) Đồng thời nuôi vi khuẩn dạng tự vào nước mắm thành phẩm khó để vi khuẩn phân giải histamine cách hiệu quả, nên hướng đến phương pháp cố định tế bào vi khuẩn Tế bào cố định có nhiều ưu điểm so với việc sử dụng tế bào tự như: tế bào sau cố định sử dụng nhiều lần, khơng lẫn vào sản phẩm an tồn cho sức khỏe CL_TD = 100v subtracted from: CL_TD 300v 500v 50v Lower -10,131 -22,531 -15,571 Center -4,115 -16,515 -9,555 Upper 1,901 -10,499 -3,539 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -12 12 24 CL_TD = 300v subtracted from: CL_TD 500v 50v Lower -18,416 -11,456 Center -12,400 -5,440 Upper -6,384 0,576 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -12 12 24 CL_TD = 500v subtracted from: CL_TD 50v Lower 0,944 Center 6,960 Upper 12,976 -+ -+ -+ -+ ( * ) -+ -+ -+ -+ -12 12 24 One-way ANOVA: HSCD(%)_CL NDM versus CL_NDM Source CL_NDM Error Total DF S = 0,4578 SS 301,880 0,838 302,719 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 MS 100,627 0,210 R-Sq = 99,72% Mean 24,695 34,930 29,440 18,230 StDev 0,474 0,382 0,594 0,339 F 480,18 P 0,000 R-Sq(adj) = 99,52% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*-) (-*-) (-*-) (*-) -+ -+ -+ -+ -20,0 25,0 30,0 35,0 Pooled StDev = 0,458 Grouping Information Using Tukey Method CL_NDM 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 34,930 29,440 24,695 18,230 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CL_NDM Individual confidence level = 98,48% 40 CL_NDM = 10pt subtracted from: CL_NDM 15pt 25pt 5pt Lower 8,370 2,880 -8,330 Center 10,235 4,745 -6,465 Upper 12,100 6,610 -4,600 -+ -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (-*) -+ -+ -+ -+ -10 10 20 CL_NDM = 15pt subtracted from: CL_NDM 25pt 5pt Lower -7,355 -18,565 Center -5,490 -16,700 Upper -3,625 -14,835 -+ -+ -+ -+ (-*) (-*-) -+ -+ -+ -+ -10 10 20 CL_NDM = 25pt subtracted from: CL_NDM 5pt Lower -13,075 Center -11,210 Upper -9,345 -+ -+ -+ -+ (-*-) -+ -+ -+ -+ -10 10 20 One-way ANOVA: KNPG_CL NDM versus CL_NDM Source CL_NDM Error Total DF S = 0,8605 SS 450,557 2,962 453,519 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 MS 150,186 0,740 R-Sq = 99,35% Mean 25,040 36,355 29,290 15,625 StDev 0,057 1,407 0,976 0,163 F 202,82 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,86% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( *-) (-*-) ( *-) (-* ) + -+ -+ -+ 14,0 21,0 28,0 35,0 Pooled StDev = 0,861 Grouping Information Using Tukey Method CL_NDM 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 36,355 29,290 25,040 15,625 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CL_NDM Individual confidence level = 98,48% CL_NDM = 10pt subtracted from: 41 CL_NDM 15pt 25pt 5pt Lower 7,810 0,745 -12,920 Center 11,315 4,250 -9,415 Upper 14,820 7,755 -5,910 + -+ -+ -+ ( *-) ( *-) ( *-) + -+ -+ -+ -15 15 30 CL_NDM = 15pt subtracted from: CL_NDM 25pt 5pt Lower -10,570 -24,235 Center -7,065 -20,730 Upper -3,560 -17,225 + -+ -+ -+ (-* ) (-* ) + -+ -+ -+ -15 15 30 CL_NDM = 25pt subtracted from: CL_NDM 5pt Lower -17,170 Center -13,665 Upper -10,160 + -+ -+ -+ (-*-) + -+ -+ -+ -15 15 30 One-way ANOVA: HSCD(%)_PB TD versus PB_TD Source PB_TD Error Total DF S = 0,7063 SS 353,685 1,996 355,681 Level 100v 300v 500v 50v N 2 2 MS 117,895 0,499 R-Sq = 99,44% Mean 44,595 39,320 27,050 32,550 StDev 1,237 0,467 0,467 0,170 F 236,30 P 0,000 R-Sq(adj) = 99,02% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-(-* ) ( *-) (-*-) (-* ) -+ -+ -+ -+-30,0 36,0 42,0 48,0 Pooled StDev = 0,706 Grouping Information Using Tukey Method PB_TD 100v 300v 50v 500v N 2 2 Mean 44,595 39,320 32,550 27,050 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of PB_TD Individual confidence level = 98,48% PB_TD = 100v subtracted from: 42 PB_TD 300v 500v 50v Lower -8,152 -20,422 -14,922 Center -5,275 -17,545 -12,045 Upper -2,398 -14,668 -9,168 + -+ -+ -+ ( * ) (-* ) ( * ) + -+ -+ -+ -20 -10 10 PB_TD = 300v subtracted from: PB_TD 500v 50v Lower -15,147 -9,647 Center -12,270 -6,770 Upper -9,393 -3,893 + -+ -+ -+ ( * ) ( * ) + -+ -+ -+ -20 -10 10 PB_TD = 500v subtracted from: PB_TD 50v Lower 2,623 Center 5,500 Upper 8,377 + -+ -+ -+ ( *-) + -+ -+ -+ -20 -10 10 One-way ANOVA: KNPG(%)_PB TD versus PB_TD Source PB_TD Error Total DF S = 1,370 Level 100v 300v 500v 50v N 2 2 SS 408,90 7,50 416,40 MS 136,30 1,88 R-Sq = 98,20% Mean 43,890 38,090 24,850 31,295 StDev 0,849 0,057 2,602 0,092 F 72,67 P 0,001 R-Sq(adj) = 96,85% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( -* -) ( * -) ( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+28,0 35,0 42,0 49,0 Pooled StDev = 1,370 Grouping Information Using Tukey Method PB_TD 100v 300v 50v 500v N 2 2 Mean 43,890 38,090 31,295 24,850 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of PB_TD Individual confidence level = 98,48% PB_TD = 100v subtracted from: 43 PB_TD 300v 500v 50v Lower -11,378 -24,618 -18,173 Center -5,800 -19,040 -12,595 Upper -0,222 -13,462 -7,017 -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * ) ( * -) -+ -+ -+ -+ 24 -12 12 PB_TD = 300v subtracted from: PB_TD 500v 50v Lower -18,818 -12,373 Center -13,240 -6,795 Upper -7,662 -1,217 -+ -+ -+ -+ -( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 24 -12 12 PB_TD = 500v subtracted from: PB_TD 50v Lower 0,867 Center 6,445 Upper 12,023 -+ -+ -+ -+ -( -* ) -+ -+ -+ -+ 24 -12 12 One-way ANOVA: HSCD(%)_PB NDM versus PB_NDM Source PB_NDM Error Total DF S = 0,7123 SS 229,007 2,030 231,037 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 MS 76,336 0,507 R-Sq = 99,12% Mean 32,645 41,650 37,700 27,415 StDev 0,997 0,721 0,552 0,460 F 150,44 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,46% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( * ) (-* ) (-* ) ( * ) + -+ -+ -+30,0 35,0 40,0 45,0 Pooled StDev = 0,712 Grouping Information Using Tukey Method PB_NDM 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 41,650 37,700 32,645 27,415 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of PB_NDM Individual confidence level = 98,48% PB_NDM = 10pt subtracted from: 44 PB_NDM 15pt 25pt 5pt Lower 6,104 2,154 -8,131 Center 9,005 5,055 -5,230 Upper 11,906 7,956 -2,329 -+ -+ -+ -+-( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 PB_NDM = 15pt subtracted from: PB_NDM 25pt 5pt Lower -6,851 -17,136 Center -3,950 -14,235 Upper -1,049 -11,334 -+ -+ -+ -+-( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 PB_NDM = 25pt subtracted from: PB_NDM 5pt Lower -13,186 Center -10,285 Upper -7,384 -+ -+ -+ -+-( * ) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 One-way ANOVA: KNPG(%)_PB NDM versus PB_NDM Source PB_NDM Error Total DF S = 0,4870 SS 391,606 0,949 392,554 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 MS 130,535 0,237 R-Sq = 99,76% Mean 29,195 41,675 35,610 22,955 StDev 0,092 0,233 0,933 0,120 F 550,46 P 0,000 R-Sq(adj) = 99,58% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(-*) (*-) (*-) (*-) -+ -+ -+ -+ -24,0 30,0 36,0 42,0 Pooled StDev = 0,487 Grouping Information Using Tukey Method PB_NDM 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 41,675 35,610 29,195 22,955 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of PB_NDM Individual confidence level = 98,48% PB_NDM = 10pt subtracted from: 45 PB_NDM 15pt 25pt 5pt Lower 10,497 4,432 -8,223 Center 12,480 6,415 -6,240 Upper 14,463 8,398 -4,257 -+ -+ -+ -+-(*-) (*-) (-*) -+ -+ -+ -+ 12 12 24 PB_NDM = 15pt subtracted from: PB_NDM 25pt 5pt Lower -8,048 -20,703 Center -6,065 -18,720 Upper -4,082 -16,737 -+ -+ -+ -+-(-*-) (*-) -+ -+ -+ -+ 12 12 24 PB_NDM = 25pt subtracted from: PB_NDM 5pt Lower -14,638 Center -12,655 Upper -10,672 -+ -+ -+ -+-(*-) -+ -+ -+ -+ 12 12 24 One-way ANOVA: HSCD(%)_CTS TD versus CTS_TD Source CTS_TD Error Total DF S = 0,3682 SS 268,901 0,542 269,443 Level 100v 300v 500v 50v N 2 2 MS 89,634 0,136 R-Sq = 99,80% Mean 23,500 29,930 18,680 14,325 StDev 0,226 0,453 0,071 0,530 F 661,20 P 0,000 R-Sq(adj) = 99,65% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*) (-*) (*-) (-*) -+ -+ -+ -+ -15,0 20,0 25,0 30,0 Pooled StDev = 0,368 Grouping Information Using Tukey Method CTS_TD 300v 100v 500v 50v N 2 2 Mean 29,930 23,500 18,680 14,325 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CTS_TD Individual confidence level = 98,48% CTS_TD = 100v subtracted from: 46 CTS_TD 300v 500v 50v Lower 4,930 -6,320 -10,675 Center 6,430 -4,820 -9,175 Upper 7,930 -3,320 -7,675 -+ -+ -+ -+-(*-) (*-) (-*) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 CTS_TD = 300v subtracted from: CTS_TD 500v 50v Lower -12,750 -17,105 Center -11,250 -15,605 Upper -9,750 -14,105 -+ -+ -+ -+-(-*) (*-) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 CTS_TD = 500v subtracted from: CTS_TD 50v Lower -5,855 Center -4,355 Upper -2,855 -+ -+ -+ -+-(-*) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 One-way ANOVA: KNPG(%)_CTS TD versus CTS_TD Source CTS_TD Error Total DF S = 1,021 Level 100v 300v 500v 50v N 2 2 SS 513,04 4,17 517,21 MS 171,01 1,04 R-Sq = 99,19% Mean 25,425 31,285 17,870 9,980 StDev 0,375 1,464 0,580 1,245 F 164,12 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,59% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( *-) ( * ) -+ -+ -+ -+ 14,0 21,0 28,0 35,0 Pooled StDev = 1,021 Grouping Information Using Tukey Method CTS_TD 300v 100v 500v 50v N 2 2 Mean 31,285 25,425 17,870 9,980 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CTS_TD Individual confidence level = 98,48% CTS_TD = 100v subtracted from: 47 CTS_TD 300v 500v 50v Lower 1,702 -11,713 -19,603 Center 5,860 -7,555 -15,445 Upper 10,018 -3,397 -11,287 -+ -+ -+ -+-( * ) ( * ) ( *-) -+ -+ -+ -+ 15 15 30 CTS_TD = 300v subtracted from: CTS_TD 500v 50v Lower -17,573 -25,463 Center -13,415 -21,305 Upper -9,257 -17,147 -+ -+ -+ -+-( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 15 15 30 CTS_TD = 500v subtracted from: CTS_TD 50v Lower -12,048 Center -7,890 Upper -3,732 -+ -+ -+ -+-( * ) -+ -+ -+ -+ 15 15 30 One-way ANOVA: HSCD(%)_CTS NDM versus CTS_NDM Source CTS_NDM Error Total DF S = 0,6329 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 SS 238,042 1,602 239,644 MS 79,347 0,401 R-Sq = 99,33% Mean 18,500 29,875 23,140 15,385 StDev 0,354 0,332 1,146 0,233 F 198,11 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,83% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*-) ( *-) (-* ) ( *-) + -+ -+ -+ 15,0 20,0 25,0 30,0 Pooled StDev = 0,633 Grouping Information Using Tukey Method CTS_NDM 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 29,875 23,140 18,500 15,385 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CTS_NDM Individual confidence level = 98,48% CTS_NDM = 10pt subtracted from: 48 CTS_NDM 15pt 25pt 5pt Lower 8,797 2,062 -5,693 Center 11,375 4,640 -3,115 Upper 13,953 7,218 -0,537 -+ -+ -+ -+-(-* ) ( *-) ( *-) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 CTS_NDM = 15pt subtracted from: CTS_NDM 25pt 5pt Lower -9,313 -17,068 Center -6,735 -14,490 Upper -4,157 -11,912 -+ -+ -+ -+-(-* ) ( *-) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 CTS_NDM = 25pt subtracted from: CTS_NDM 5pt Lower -10,333 Center -7,755 Upper -5,177 -+ -+ -+ -+-(-* ) -+ -+ -+ -+ 10 10 20 One-way ANOVA: KNPG(%)_CTS NDM versus CTS_NDM Source CTS_NDM Error Total DF S = 0,5872 Level 10pt 15pt 25pt 5pt SS 375,493 1,379 376,872 MS 125,164 0,345 N 2 2 R-Sq = 99,63% Mean 17,390 30,580 23,850 12,350 StDev 0,325 0,354 0,990 0,410 F 363,06 P 0,000 R-Sq(adj) = 99,36% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ -+ -12,0 18,0 24,0 30,0 Pooled StDev = 0,587 Grouping Information Using Tukey Method CTS_NDM 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 30,580 23,850 17,390 12,350 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of CTS_NDM Individual confidence level = 98,48% CTS_NDM = 10pt subtracted from: 49 CTS_NDM 15pt 25pt 5pt Lower 10,799 4,069 -7,431 Center 13,190 6,460 -5,040 Upper 15,581 8,851 -2,649 -+ -+ -+ -+-(-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ -+ 12 12 24 CTS_NDM = 15pt subtracted from: CTS_NDM 25pt 5pt Lower -9,121 -20,621 Center -6,730 -18,230 Upper -4,339 -15,839 -+ -+ -+ -+-(-*-) (-*-) -+ -+ -+ -+ 12 12 24 CTS_NDM = 25pt subtracted from: CTS_NDM 5pt Lower -13,891 Center -11,500 Upper -9,109 -+ -+ -+ -+-(-*-) -+ -+ -+ -+ 12 12 24 One-way ANOVA: HSCD(%)_EGG td versus EGG_td Source EGG_td Error Total DF S = 0,6028 SS 155,326 1,453 156,780 Level 100v 300v 500v 50v N 2 2 MS 51,775 0,363 R-Sq = 99,07% Mean 17,620 21,990 14,345 9,965 StDev 0,453 0,580 0,544 0,785 F 142,48 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,38% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( * ) ( * ) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+12,0 16,0 20,0 24,0 Pooled StDev = 0,603 Grouping Information Using Tukey Method EGG_td 300v 100v 500v 50v N 2 2 Mean 21,990 17,620 14,345 9,965 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of EGG_td Individual confidence level = 98,48% EGG_td = 100v subtracted from: EGG_td 300v Lower 1,915 Center 4,370 Upper 6,825 + -+ -+ -+( * -) 50 500v 50v -5,730 -10,110 -3,275 -7,655 -0,820 -5,200 ( * ) ( * -) + -+ -+ -+-8,0 0,0 8,0 16,0 EGG_td = 300v subtracted from: EGG_td 500v 50v Lower -10,100 -14,480 Center -7,645 -12,025 Upper -5,190 -9,570 + -+ -+ -+( * -) ( * ) + -+ -+ -+-8,0 0,0 8,0 16,0 EGG_td = 500v subtracted from: EGG_td 50v Lower -6,835 Center -4,380 Upper -1,925 + -+ -+ -+( -* ) + -+ -+ -+-8,0 0,0 8,0 16,0 One-way ANOVA: KNPG(%)_EGG td versus EGG_td Source EGG_td Error Total DF S = 0,5666 Level 100v 300v 500v 50v N 2 2 SS 118,403 1,284 119,687 MS 39,468 0,321 R-Sq = 98,93% Mean 14,745 18,915 11,880 8,430 StDev 0,700 0,219 0,863 0,042 F 122,94 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,12% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 10,5 14,0 17,5 21,0 Pooled StDev = 0,567 Grouping Information Using Tukey Method EGG_td 300v 100v 500v 50v N 2 2 Mean 18,915 14,745 11,880 8,430 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of EGG_td Individual confidence level = 98,48% EGG_td = 100v subtracted from: EGG_td 300v Lower 1,862 Center 4,170 Upper 6,478 + -+ -+ -+( * ) 51 500v 50v -5,173 -8,623 -2,865 -6,315 -0,557 -4,007 ( * ) ( * ) + -+ -+ -+-7,0 0,0 7,0 14,0 EGG_td = 300v subtracted from: EGG_td 500v 50v Lower -9,343 -12,793 Center -7,035 -10,485 Upper -4,727 -8,177 + -+ -+ -+( * ) ( * ) + -+ -+ -+-7,0 0,0 7,0 14,0 EGG_td = 500v subtracted from: EGG_td 50v Lower -5,758 Center -3,450 Upper -1,142 + -+ -+ -+( * ) + -+ -+ -+-7,0 0,0 7,0 14,0 One-way ANOVA: HSCD(%)_EGG NDM versus EGG_NDM_1 Source EGG_NDM_1 Error Total DF S = 0,5420 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 SS 149,934 1,175 151,109 MS 49,978 0,294 R-Sq = 99,22% Mean 15,335 22,475 18,180 10,570 F 170,12 P 0,000 R-Sq(adj) = 98,64% StDev 0,389 0,658 0,410 0,651 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-* ) (-* ) (-* ) (-* ) + -+ -+ -+ 12,0 16,0 20,0 24,0 Pooled StDev = 0,542 Grouping Information Using Tukey Method EGG_NDM_1 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 22,475 18,180 15,335 10,570 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of EGG_NDM_1 Individual confidence level = 98,48% EGG_NDM_1 = 10pt subtracted from: EGG_NDM_1 15pt Lower 4,932 Center 7,140 Upper 9,348 + -+ -+ -+( * ) 52 25pt 5pt 0,637 -6,973 2,845 -4,765 5,053 -2,557 ( *-) ( * ) + -+ -+ -+-8,0 0,0 8,0 16,0 EGG_NDM_1 = 15pt subtracted from: EGG_NDM_1 25pt 5pt Lower -6,503 -14,113 Center -4,295 -11,905 Upper -2,087 -9,697 + -+ -+ -+( *-) ( * ) + -+ -+ -+-8,0 0,0 8,0 16,0 EGG_NDM_1 = 25pt subtracted from: EGG_NDM_1 5pt Lower -9,818 Center -7,610 Upper -5,402 + -+ -+ -+(-* ) + -+ -+ -+-8,0 0,0 8,0 16,0 One-way ANOVA: KNPG(%)_EGG NDM versus EGG_NDM_1 Source EGG_NDM_1 Error Total DF S = 1,006 Level 10pt 15pt 25pt 5pt N 2 2 SS 208,05 4,05 212,10 MS 69,35 1,01 R-Sq = 98,09% Mean 12,515 21,815 17,445 8,260 StDev 0,870 1,704 0,049 0,622 F 68,49 P 0,001 R-Sq(adj) = 96,66% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) -+ -+ -+ -+-10,0 15,0 20,0 25,0 Pooled StDev = 1,006 Grouping Information Using Tukey Method EGG_NDM_1 15pt 25pt 10pt 5pt N 2 2 Mean 21,815 17,445 12,515 8,260 Grouping A B C D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of EGG_NDM_1 Individual confidence level = 98,48% EGG_NDM_1 = 10pt subtracted from: EGG_NDM_1 15pt Lower 5,202 Center 9,300 Upper 13,398 + -+ -+ -+( -* -) 53 25pt 5pt 0,832 -8,353 4,930 -4,255 9,028 -0,157 ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+-10 10 20 EGG_NDM_1 = 15pt subtracted from: EGG_NDM_1 25pt 5pt Lower -8,468 -17,653 Center -4,370 -13,555 Upper -0,272 -9,457 + -+ -+ -+( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+-10 10 20 EGG_NDM_1 = 25pt subtracted from: EGG_NDM_1 5pt Lower -13,283 Center -9,185 Upper -5,087 + -+ -+ -+( -* -) + -+ -+ -+-10 10 20 54