(Luận văn) ình hình mắc bệnh ort do vi khuẩn ornithobacterium rhinotracheale gây ra ở đàn gà thả vườn nuôi tại huyện bình giang tỉnh hải dương và thừ nghiệm điều trị

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ LAN lu an va TÌNH HÌNH MẮC BỆNH ORT DO VI KHUẨN n ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE GÂY RA tn to ie gh Ở ĐÀN GÀ THẢ VƯỜN NI TẠI HUYỆN BÌNH GIANG p TỈNH HẢI DƯƠNG VÀ THỬ NGHIỆM ĐIỀU TRỊ d oa nl w ll u nf Thú y 64 01 01 TS Hoàng Minh Sơn oi z at nh Người hướng dẫn khoa học m Mã số va an lu Ngành z PGS.TS Lại Thị Lan Hương m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP – 2020 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin cam đoan thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2020 Tác giả luận văn lu an n va Nguyễn Thị Lan p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, cố gắng thân, nhận quan tâm giúp đỡ tổ chức, quan, nhà khoa học, thầy cô giáo, bạn bè đồng nghiệp người thân gia đình Nhân dịp này, tơi xin cảm ơn giúp đỡ giảng viên khoa Thú y - Học viện Nông nghiệp Việt Nam giảng dạy suốt thời gian học tập Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc hướng dẫn, giúp đỡ chân tình, đầy trách nhiệm hết lịng khoa học TS Hồng Minh Sơn PGS.TS Lại Thị Lan Hương Tôi xin gửi lời cảm ơn tới người thân gia đình, đồng nghiệp ln quan tâm, động viên giúp tơi hồn thành luận văn lu an Hà Nội, ngày tháng năm 2020 n va Tác giả luận văn gh tn to p ie Nguyễn Thị Lan d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH viii TRÍCH YẾU LUẬN VĂN ix lu THESIS ABSTRACT xi an PHẦN MỞ ĐẦU n va ĐẶT VẤN ĐỀ 1.2 MỤC ĐÍCH ĐỀ TÀI tn to 1.1 Ý NGHĨA CỦA ĐỀ TÀI 1.3.1 Ý nghĩa học tập p ie gh 1.3 Ý nghĩa thực tiễn 1.3.2 nl w PHẦN TỔNG QUAN TÀI LIỆU GIỚI THIỆU VỀ BỆNH ORT 2.1.1 Lịch sử bệnh 2.1.2 Căn bệnh 2.1.3 Truyền nhiễm học 2.1.4 Triệu chứng bệnh tích 10 2.1.5 Chẩn đoán 12 2.1.6 Biện pháp phòng trị bệnh 14 2.2 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN SỰ CẢM NHIỄM VÀ TIẾN TRIỂN CỦA BỆNH ORT TRÊN ĐÀN GÀ 15 2.2.1 Ảnh hưởng giống gà 15 2.2.2 Ảnh hưởng lứa tuổi 16 2.2.3 Ảnh hưởng tính biệt 16 2.2.4 Điều kiện chăn nuôi 16 2.2.5 Phương thức chăn nuôi 18 d oa 2.1 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th iii si 2.2.6 Mật độ nuôi 18 2.2.7 Yếu tố dinh dưỡng 18 2.2.8 Vệ sinh phòng bệnh 19 PHẦN ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 lu an n va ĐỐI TƯỢNG VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 22 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.3.1 Điều tra vấn 22 3.3.2 Chẩn đoán lâm sàng 22 3.3.3 Mổ khám, kiểm tra bệnh tích 23 3.3.4 Lấy mẫu nuôi cấy phân lập vi khuẩn 24 3.3.5 Phương pháp kiểm tra khả mẫn cảm kháng sinh chủng vi khuẩn ORT phân lập 25 tn to 3.1 Điều trị bệnh vi khuẩn ORT gây gà 25 3.3.7 Phương pháp xử lý số liệu 26 p ie gh 3.3.6 TÌNH HÌNH CHĂN NI VÀ CƠNG TÁC PHỊNG CHỐNG DỊCH BỆNH TRÊN ĐÀ GÀ THẢ VƯỜN NI TẠI HUYỆN BÌNH GIANG 27 d oa nl w 4.1 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 lu Giới thiệu đố giống gà nuôi phổ biến huyện Bình Giang 27 4.1.2 Chuồng trại 27 4.1.3 Bệnh phổ biến gà thả vườn huyện Bình Giang tỉnh Hải Dương 28 4.1.4 Cơng tác phịng chống dịch bệnh cho gà thả vườn ni huyện Bình Giang 29 4.1.5 Phòng bệnh vaccine 32 4.2 TÌNH HÌNH MẮC BỆNH ORT TRÊN ĐÀN GÀ THẢ VƯỜN NUÔI TẠI MỘT SỐ XÃ TRÊN ĐỊA BÀN HUYỆN BÌNH GIANG 34 4.2.1 Tỷ lệ mắc bệnh ORT đàn gà thả vườn số xã địa bàn huyện Bình Giang 34 4.2.2 Tỷ lệ mắc bệnh ORT theo lứa tuổi 35 4.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ CÁC BIỂU HIỆN LÂM SÀNG VÀ BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA GÀ MẮC BỆNH ORT 37 ll u nf va an 4.1.1 oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th iv si 4.3.1 Triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh ORT địa phương 37 4.3.2 Bệnh tích gà mắc bệnh ORT 39 4.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH TÍNH MẪN CẢM CỦA VI KHUẨN ORT PHÂN LẬP TỪ GÀ MẮC BỆNH VỚI MỘT SỐ LOẠI KHÁNG SINH VÀ THỬ NGHIỆM PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ 41 4.4.1 Kết xác định tính mẫn cảm vi khuẩn ORT phân lập từ gà mắc bệnh với số loại kháng sinh 43 4.4.2 Kết xác định tính mẫn cảm vi khuẩn ORT phân lập từ gà mắc bệnh với số loại kháng sinh 43 4.4.3 Kết sử dụng số loại kháng sinh phòng trị bệnh vi khuẩn ORT gây gà 46 lu PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 an n va 5.1 KẾT LUẬN 48 5.2 KIẾN NGHỊ 48 p ie gh tn to TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT lu an n va Nghĩa đầy đủ AGP Accelerated Graphics Port BEAs Boiled Extract Antigens BHB Brain Heart Infusion Broth CBA Columbia Blood Agar Cdna Complementary Deoxyribonucleic Acide CRD Chronic Respiratory Disease DIA Dot Immunobinding Assay ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay GAP Agar Gel Precipitation IB Infectious Bronchitis ILT Infectious Laryngo Tracheitis gh tn to Chữ viết tắt Ornithobacterium Rhinotracheale PAP Peroxidase - Anti Peroxidase p ie ORT Polymerase Chain Reaction lu Pleomorphic Gram Negative Rod va an PGNR Phosphate Saline Buffer d PCR oa nl PBS Pasteurella Broth w PB Ribonucleic Acide rRNA Ribosomal Ribonucleic Acide RT – PCR Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction ll u nf RNA oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Một số bệnh phổ biến thường gặp gà thả vườn huyện Bình Giang tỉnh Hải Dương 28 Bảng 4.2 Thực trạng phòng chống dịch bệnh cho gà thả vườn nuôi số xã địa bàn huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương (n=30 hộ) 30 Bảng 4.3 Quy trình vệ sinh số trang trại (n=30 hộ) 30 Bảng 4.4 Lịch vaccine sử dụng số trang trại (n=30 hộ) 32 Bảng 4.5 Tỷ lệ mắc bệnh ORT gà thả vườn xã địa bàn huyện 34 Bảng 4.6 Tỉ lệ mắc Ornithobacterium Rhinotracheale theo lứa tuổi 36 lu Bảng 4.7 Kết triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh ORT (n=1630) 37 an Bảng 4.8 Bệnh tích gà mắc bệnh ORT (n=30) 39 n va Bảng 4.9 Bảng tổng hợp kết thử tính mẫn cảm ORT với số loại Bảng 4.10 Kết sử dụng số kháng sinh điều trị bệnh ORT gây 46 p ie gh tn to kháng sinh .44 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Hình thái vi khuẩn ORT kính hiển vi Hình 4.1 Bãi thả gà trang trại 28 Hình 4.2 Thể tỷ lệ mắc bệnh ORT ba xã huyện Bình Giang 35 Hình 4.3 Thể tỷ lệ mắc, tỷ lệ chết mắc bệnh ORT theo lứa tuổi 36 Hình 4.4 Bảng tổng hợp kết thử tính mẫn cảm ORT với số loại kháng sinh 44 Hình 4.5 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh thạch 45 lu Hình 4.6 Tỷ lệ gà khỏi bệnh sử dụng số kháng sinh điều trị bệnh an ORT gây 47 n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Nguyễn Thị Lan Tên luận văn: Tình hình mắc bệnh ORT vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale gây đàn gà thả vườn nuôi huyện Bình Giang tỉnh Hải Dương thử nghiệm điều trị Mã số: 64 01 01 Ngành: Thú y Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu lu Xác định tình hình mắc bệnh ORT vi khuẩn Ornithobacterium rhinotracheale gây đàn gà thả vườn ni huyện Bình Giang tỉnh Hải Dương Từ làm sở cho việc phòng thử nghiệm điều trị bệnh an n va Phương pháp nghiên cứu Thời gian nghiên cứu: từ tháng 9/2019 đến tháng 4/2020 ie gh tn to Đối tượng nghiên cứu: Gà mắc nghi mắc ORT nuôi theo hình thức thả vườn hộ/trang trại chăn ni địa bàn huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương p Nội dung nghiên cứu: d oa nl w Đánh giá thực trạng tình hình chăn ni cơng tác phịng chống dịch bệnh cho đàn gà ni thả vườn huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương Từ chọn số địa điểm để tiến hành nội dung nghiên cứu; an lu Xác định tình trạng gà thả vườn mắc bệnh ORT địa điểm lựa chọn va Nghiên cứu số triệu chứng bệnh tích điển hình gà bị mắc bệnh ORT ll u nf Xác định tính mẫn cảm vi khuẩn ORT phân lập từ gà mắc bệnh với số kháng sinh thử nghiệm điều trị z at nh Chẩn đoán lâm sàng; oi Điều tra vấn; m Phương pháp nghiên cứu: z m co l Phương pháp xử lý số liệu gm Lấy mẫu bệnh phẩm để nuôi cấy thạch; @ Mổ khám bệnh tích; Kết kết luận an Lu Cơng tác phịng chống dịch bệnh cho gà thả vườn huyện Bình Giang đạt tỉ lệ cao Tỉ lệ hộ gia đình áp dụng biện pháp vệ sinh chuồng trại khu vực xung n va ac th ix si 4.3 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ CÁC BIỂU HIỆN LÂM SÀNG VÀ BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA GÀ MẮC BỆNH ORT 4.3.1 Triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh ORT địa phương Trong trình làm đề tài, với giúp đờ cán trạm thú y huyện Bình Giang cửa hàng thuốc thú y Tuyển Dịu Tôi thu thập tổng cộng 1630 gà mắc nghi mắc Theo dõi triệu chứng lâm sàng, thu kết thể thông qua bảng 4.7 Bảng 4.7 Triệu chứng lâm sàng gà mắc bệnh ORT (n=1630) Chỉ tiêu Triệu chứng Tỷ lệ (con) (%) Khó thở, ngáp gió, vươn cổ để thở 1534 94,11 Hắt hơi, vảy mỏ 1580 96,93 Sốt cao 1540 94,48 Gà lười vận động, rúc đầu cánh 1540 94,48 1593 97,73 1520 93,25 1554 95,34 82 5,03 lu Số gà có triệu chứng an n va p ie gh tn to w Chảy nước mắt, nước mũi an lu Chết d Sưng phù mặt oa nl Gà bỏ ăn, giảm uống u nf va Qua bảng 4.7 cho thấy biểu lâm sàng gà mắc bệnh ll O.Rhinotracheale gây khó thở, ngáp gió, vươn cổ để thở; chảy nước mắc oi m nước mũi; ho, hắt hơi, vảy mỏ; sưng phù mặt biểu điển hình z at nh gà mắc bệnh Trong 1630 gà theo dõi có: 1554 bị sưng phù mặt chiếm 95,34%; 1593 bị chảy nước mắt, nước mũi chiếm 97,73%; 1580 z bị ho, hắt hơi, vảy mỏ chiếm 96,93%; có 1534 bị khỏ thở, ngáp gió, vươn cổ gm @ để thở chiếm 94,11% Số chết 82 chiếm 5,03 l Các triệu chứng nêu xuất hầu hết bệnh đường hô hấp m co khác gà, để có kết chẩn đốn xác chúng tơi tiến hành chân đốn phân biệt bệnh ORT với bệnh hơ hấp khác như: CRD, IC, IB, ILT, an Lu Newcastle, Cúm gia cầm thu kết bảng 4.8 n va ac th 37 si Bảng 4.8 Chẩn đốn phân biệt bệnh hơ hấp khác gà dựa triệu chứng CRD (Viêm đường hô hấp mãn tính) lu Gà khó thở, thở khị khè, rướn cổ để thở chảy nước mắt, mắt sưng chân khô, sưng khớp an n va IC (Viêm mũi truyền nhiễm) ORT (Hen phức hợp) Sưng phù đầu mặt rõ rệt chảy nước mũi với chất tiết dạng lỏng Gà ủ rũ Khó thở, rướn cổ để thở Có dịch viêm mũi dịch viêm chuồng IB (Viêm phế quản truyền nhiễm) ILT (Viêm khí quản truyền nhiễm) Newcastle Cúm gia cầm thở khó, có tiếng ran chảy nước mắt, nước mũi Gà có tư chim cánh cụt Ho, lắc đầu, hắt hơi,ngáp, khó thở vươn cổ để thở dịch ho có chứa mẳ, xuất huyết hậu mơn - Kêu thành tiếng tốc tốc - Dốc ngược gà từ mồm thấy chảy chất nước mùi chua khắm - Phân màu trắng xanh - Triệu chứng thần kinh - Sưng phù đầu, mào, tích; màu tím sẫm - Da chân xuất huyết Triệu chứng thần p ie gh tn to MỘT SỐ HÌNH ẢNH TRIỆU CHỨNG CỦA GÀ MẮC BỆNH ORT d oa nl w u nf va an lu ll Hình 4.4 Gà sưng phù mặt, chảy nước mắt, nước mũi oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.5 Gà rướn cổ lên để thở n va ac th 38 si 4.3.2 Bệnh tích gà mắc bệnh ORT Mổ khám phương pháp chủ yếu giải phẫu bệnh Qua mổ khám cho vật sống nghi bệnh phát biến đổi bất thường quan phủ tạng đề chẩn đoán nguyên nhân gây bệnh Tôi tiến hành mổ khám 30 có biểu triệu chứng điển hình chết tiến hành kiểm tra bệnh tích quan Kết trình bày qua bảng 4.9 Bảng 4.9 Bệnh tích gà mắc bệnh ORT (n=30) Chỉ tiêu Cơ quan tổn thương Bệnh tích Số gà có bệnh tích (con) Tỷ lệ (%) lu an n va bị hóa mủ tập trung rải rác bề mặt 28 93,3 Bệnh tích phế quản Xuất huyết, có kén mủ bên 25 83,3 Bệnh tích túi khí Viêm túi khí, túi khí bị phá hủy hồn tồn 30 100 Khí quản Xuất huyết, bên có dịch nhầy 26 86,7 Đầu Sưng, phù mặt 27 90 p ie gh tn to Bệnh tích phổi d oa nl w Qua bảng 4.9 cho thấy bệnh ORT gây ra, bệnh tích đại thể tập trung chủ yếu quan hơ hấp khí quản, phổi, túi khí mặt với bệnh tích đặc trưng: khí quản viêm, xuất huyết, có bã đậu; viêm phổi màng phổi, phổi có mủ tơ huyết, khí quản phổi có bã đậu; túi khí viêm dày lên, có dịch tiết bọt khoang bụng, dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu; mặt sưng phù thũng Đây nguyên nhân làm cho vật khó thở (chúng thường vươn cổ lên cao để thở; có liên tục vảy mỏ) Số liệu từ bảng cho thấy trường hợp nhiễm ORT địa bàn thường thể cấp tính ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 39 si MỘT SỐ HÌNH ẢNH BỆNH TÍCH CỦA GÀ MẮC BỆNH ORT lu an Hình 4.6 Thanh khí quản xuất huyết dịch n va p ie gh tn to d oa nl w an lu ll u nf va Hình 4.7 Đóng kén bên phế quản oi m z at nh z m co l gm @ an Lu Hình 4.8 Túi khí mờ đục n va ac th 40 si 4.4 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH TÍNH MẪN CẢM CỦA VI KHUẨN ORT PHÂN LẬP TỪ GÀ MẮC BỆNH VỚI MỘT SỐ LOẠI KHÁNG SINH VÀ THỬ NGHIỆM PHÁC ĐỒ ĐIỀU TRỊ 4.4.1 Kết nuôi cấy phân lập vi khuẩn lu Sau quan sát triệu chứng lâm sàng đàn gà biểu triệu chứng lâm sàng bệnh ORT, tiến hành lấy mẫu gửi mẫu gà mắc bệnh phịng Thí nghiệm Trung tâm Chẩn đốn thý y, Cục Thú y Chúng tơi tiến hành mổ khám, lấy mẫu bệnh phẩm nuôi cấy mơi trường thạch máu Colombia Blood Agar (có bổ sung 5% máu thỏ/máu cừu 10µg/ml Gentamycin), điều kiện 37ºC, CO 5%, ủ thời gian 24 - 72 để kiểm tra có mặt vi khuẩn có thể Kết ni cấy thể thơng qua hình 4.9 an n va p ie gh tn to d oa nl w u nf va an lu ll Hình 4.9 Kết nuôi cấy vi khuẩn ORT môi trường thạch máu oi m Kết hình 4.9 cho thấy: mơi trường CBA (Columbia Blood Agar), khuẩn lạc phát triển thành đám có kích thước khác nhau: khuẩn lạc nhỏ, to đầu đinh gim, trịn, đục, có mầu xám đến xám trắng gây dung huyết yếu không gây dung huyết Kết phù hợp với nghiên cứu trước công bố (Võ Thị Trà An & cs., 2014) z at nh z gm @ m co l Từ kết trên, tiến hành lấy khuẩn lạc đặc trưng kiểm tra số phản ứng sinh hóa chúng (Oxidase, catalase), kết thể thơng qua hình 4.10 an Lu n va ac th 41 si Hình 4.10 Kết kiểm tra số đặc tính sinh hóa vi khuẩn ORT lu Thơng qua kết hình 4.10 chúng tơi nhận thấy: với khuẩn lạc vi khuẩn ORT môi trường CBA cho kết phản ứng Catalase âm tính (ORT khơng có men Catalase nên chúng khơng có khả phân hủy H O tạo thành H O O phản ứng khơng tạo bọt); phản ứng Oxidase dương tính (phản ứng chuyển thành màu tím than) Kết phù hợp với nghiên cứu trước (Mohammed Zahra et al, 2013; Võ Thị Trà An cs, 2014) an n va p ie gh tn to Chúng tiếp tục lựa chọn khuẩn lạc điển hình trên, tăng sinh mơi trường BHB, ủ 37ºC thời gian 24 giờ, CO 5% Tiến hành lấy canh khuẩn thử phản ứng Indol, kết thu thể thơng qua hình 4.11 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z @ gm Hình 4.11 Kết kiểm tra phản ứng Indol vi khuẩn ORT m co l Như vậy, phản ứng Indol cho kết âm tính (kết phù hợp với nghiên cứu trước đây) an Lu Từ kết trên, lựa chọn mẫu cho kết phân lập đương tính, tiến hành chiết tách DNA vi khuẩn ORT tiến hành thực phản n va ac th 42 si ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu để kiểm tra có hay khơng DNA vi khuẩn ORT canh khuẩn Kết phản ứng PCR thực thể thơng qua hình 4.12 lu an va n Hình 4.12 Kết giám định có mặt vi khuẩn ORT kỹ thuật PCR tn to 100bp DNA ladder; Đối chứng dương (ONL); Đối chứng âm; 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, gh 15, 16 mẫu cần giám định p ie Kết hình 4.12 cho thấy: đối chứng dương lên vạch, cho sản phẩm PCR thiết kế (sản phẩm PCR thiết kế 784bp) Đối chứng âm không lên vạch tương đương đối chưng dương; chứng tỏ phản ứng hợp cách, cho độ tin cậy cao q trình phân tích đánh giá kết Các mẫu cần kiểm tra cho sản phẩm PCR nhỏ 800bp (khoảng 784bp) Như vậy, canh khuẩn có chứa DNA vi khuẩn ORT d oa nl w va an lu ll u nf 4.4.2 Kết xác định tính mẫn cảm vi khuẩn ORT phân lập từ gà mắc bệnh với số loại kháng sinh oi m Để xác định tính mẫn cảm vi khuẩn ORT phân lập từ gà mắc bệnh với số loại kháng sinh, từ làm sở cho việc đưa phác đồ điều trị có hiệu việc làm cần thiết bối cảnh Vì vậy, sau phân lập giám định chủng vi khuẩn ORT lưu hành đàn gà huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương, tiến hành tăng sinh khuẩn lạc môi trường BHB, ủ 37ºC, 5% CO thời gian 24 - 48 z at nh z l gm @ m co Pha loãng canh khuẩn đến nồng độ thích hợp (so với độ đục chuẩn) Tiến hành hút 100µl canh khuẩn cấy láng mơi trường Mueller Hinton chuẩn bị sẵn Đặt loại kháng sinh lựa chọn vào vị trí khác đĩa (đã đánh dấu trước); ủ 37ºC, 5% CO thời gian 24 - 48 tiến hành an Lu n va ac th 43 si đọc kết Kết kiểm tra mức độ mẫn cảm với loại kháng sinh vi khuẩn ORT phân lập huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương trình bày Bảng 4.10 hình 4.13 Bảng 4.10 Kết thử tính mẫn cảm ORT với số loại kháng sinh Loại kháng sinh Stt Số kiểm tra Số mẫn cảm Tỷ lệ (%) Số kháng Tỷ lệ (%) lu an n va Amoxicillin/Clavulanic acid 13 13 100,00 0,00 Ampicillin 13 12 92,31 7,69 Tetracycline 13 13 100,00 0,00 Erythromycine 13 61,54 38,46 Sulphamethaxazol/Trimethoprime 13 0,00 13 100,00 Lincomycine 13 0,00 13 100,00 Doxycycline 13 0,00 13 100,00 Tỷ lệ (%) p ie gh tn to w d oa nl Loại kháng sinh u nf va an lu ll Hình 4.13 Kết thử tính mẫn cảm ORT với số loại kháng sinh oi m Kết bảng 4.10 cho thấy: tổng số 13 mẫu ORT phân lập kiểm tra, mức độ mẫn cảm với loại kháng sinh Amoxicillin/Clavulanic acid Tetracycline chiếm tỷ lệ 100% (13/13 mẫu); kết phù hợp với nghiên cứu trước (Võ Thị Trà An & cs., 2014) Tiếp đến loại kháng sinh Ampicillin chiếm tỷ lệ 92,13% (12/13 mẫu) Erythromycine kháng sinh chuyên điều trị bệnh đường hô hấp; thời điểm kiểm tra, tỷ lệ kháng thuốc giảm xuống khoảng 61,54% (8/13 mẫu) Riêng loại kháng sinh Sulphamethoxazol/Trimethoprime, Lincomycine Doxycycline có tỷ lệ mẫn cảm thấp (0%) Hiện tượng giải thích sau: loại kháng sinh sử dụng thường xuyên thời gian dài z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 44 si trại nói chung hộ gia đình nói riêng để điều trị bệnh nhiễm khuẩn nói chung gây Vì vậy, gây tượng kháng thuốc chủng vi khuẩn kiểm tra chủng vi khuẩn kiểm tra thu nạp plasmid kháng thuốc tượng truyền ngang loài vi khuẩn khác gây nên lu an n va p ie gh tn to nl w d oa Hình 4.14 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn ORT loại kháng sinh thạch an lu u nf va 1) Kháng sinh Sulphamethaxazol/Trimethoprime; 2) Amoxicillne/Clavulanic acid; 3) Ampicillin; 4) Tetracycline; 5) Lincomycine; 6) Doxycycline 7) Erythromycin ll Kết Hình 4.14 cho thấy: loại kháng sinh Amoxicillne/Clavulanic acid Tetracycline có vịng trịn vơ khuẩn lớn (khả mẫn cảm vi khuẩn ORT với loại kháng sinh lớn nhất) Tiếp theo kháng sinh Ampicillin vòng tròn vơ khuẩn lớn; bên vịng trịn khơng trong/thuần (không phát thấy khuẩn lạc mọc bên vịng trịn vơ khuẩn) Cuối kháng sinh Erythromycin; có vịng trịn vơ khuẩn nhỏ bên vịng trịn vơ khuẩn khơng phát thấy khuẩn lạc mọc (kích thước vịng vơ khuẩn đạt ngưỡng mẫn cảm mẫn cảm yếu) Ba loại kháng sinh lại: Sulphamethaxazol/Trimethoprime, Lincomycine Doxycycline bị vi khuẩn ORT kháng lại (khuẩn lạc phát triển bình thường xung quanh kháng sinh oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 45 si Với kết thu phịng thí nghiệm nghiên cứu đưa khuyến cáo cho cán thú y sở: Amoxicillin Tetracycline hai loại kháng sinh đặc hiệu dùng q trình điều trị với vi khuẩn ORT (ngồi sử dụng kháng sinh Erythromycine để điều trị trường hợp gà bị nhiễm vi khuẩn ORT) Tuy nhiên, cần có chiến lược biện pháp cụ thể để hướng dẫn người chăn nuôi chủ trang trại sử dụng kháng sinh có ý thức thận trọng, tránh tượng vi khuẩn kháng đồng thời với nhiều loại kháng sinh khác Có vậy, việc sử dụng kháng sinh điều trị bệnh đem lại hiệu cao mong đợi 4.4.3 Kết sử dụng số loại kháng sinh phòng trị bệnh vi khuẩn ORT gây gà lu an n va p ie gh tn to Dựa kết thử tính mẫn cảm vi khuẩn ORT với số loại kháng sinh, tiến hành thử nghiệm điều trị bệnh 03 đàn gà 03 hộ chăn nuôi thuộc ba xã khác Tuy nhiên, điều kiện thực tế huyện Bình Giang, tỉnh Hải Dương thị trường khơng có sẵn số loại kháng sinh kết kháng sinh đồ Nhưng, để đáp ứng yêu cầu thực tế sản xuất, tiến hành sử dụng sản phẩm tương đương với loại kháng sinh sử dụng làm kháng sinh đồ để điều trị bệnh Kết thu tổng hợp trình bày thơng qua Bảng 4.11 w d oa nl Bảng 4.11 Kết sử dụng số kháng sinh điều trị bệnh ORT gây lít Tỷ lệ (%) 3-5 11 73,33 5-7 60,00 53,33 15 z @ 15 5-7 l gm Tetracyclin hydroclorid: 0,125 gam/lít nước uống 0,010,04 gam/gà Số gà khỏi bệnh (con) z at nh 1g/2 Kết điều trị 15 oi Eryvet powder: nước/ngày m Amoxin: 1ml/5-8kg TT, tiêm bắp sâu lần/ngày Số ngày khỏi trung bình ll u nf va an lu Loại kháng sinh Số gà điều trị (con) m co Kết Bảng 4.11 cho thấy: tổng số 15 gà điều trị kháng sinh Amoxin, sau - ngày điều trị, có 11 khỏi bệnh, chiểm tỷ lệ 73,33% có bị chết, chiếm tỷ lệ 26,67% an Lu n va ac th 46 si Khi sử dụng kháng sinh Erythromycin điều trị chúng tơi thấy, sau 5- ngày có tổng số 15 khỏi bệnh, chiếm tỷ lệ 60,00%; 6/15 bị chết chiếm tỷ lệ 40,00% lu Với kháng sinh Tetracyclin hydroclorid, cho kết 8/15 khỏi bệnh, chiếm tỷ lệ 53,33%; 7/15 bị chết, chiếm tỷ lệ 46,67% Điều giải thích sau: bệnh phức hợp gà; biểu triệu chứng lâm sàng dễ chẩn đoán nhầm với bệnh truyền nhiễm khác: Mycoplasma, viêm khí quản truyền nhiễm Mặt khác, nghi ngờ bệnh vi khuẩn ORT gây ra; thời gian nuôi cấy phân lập lâu (thời gian nuôi cấy 3-5 ngày, thời gian tăng sinh 1-2 ngày ) Do vậy, để tìm kháng sinh điều trị thơng qua phản ứng khuếch tán thạch cần 13 ngày Do đó, dùng kháng sinh điều trị bệnh vật trở nên trầm trọng, sức đề kháng yếu nên tỷ lệ chết tương đối cao an n va 73.33 80 gh tn to Tỷ lệ % ie 60 53.33 p 60 d oa nl lu w 20 40 Eryvet powder Tetracyclin hydroclorid va an Amoxi ll u nf Loại kháng sinh m oi Hình 4.15 Tỷ lệ gà khỏi bệnh sử dụng số kháng sinh điều trị bệnh z at nh ORT gây z m co l gm @ an Lu n va ac th 47 si PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ kết điều tra rút số kết luận sau: - Cơng tác phịng chống dịch bệnh cho gà thả vườn huyện Bình Giang đạt tỉ lệ cao - Tỷ lệ gà bị mắc bệnh ORT địa bàn huyện Bình Giang cịn cao, cao xã Nhân Quyền tỷ lệ mắc chiếm 42,4% thấp xã Tân Hồng chiếm 27% lu - Gà lứa tuổi mắc bệnh ORT với tỷ lệ mắc chung 32,6%, an gà độ tuổi 0-6 tuần tuổi mắc với tỷ lệ cao khoảng 57,47%, va n gà từ 7-20 tuần tuổi 23,92% thấp gà 20 tuần tuổi tn to - Biểu lâm sàng gà mắc bệnh ORT O.Rhinotracheale gây gh khó thở, ngáp gió, vươn cổ để thở; chảy nước mắc nước mũi; ho, hắt hơi, vảy p ie mỏ; sưng phù mặt biểu chung gà mắc bệnh - Bệnh ORT gây ra, bệnh tích đại thể tập trung chủ yếu quan hơ hấp nl w khí quản, phổi, túi khí mặt với bệnh tích đặc trưng: khí quản viêm, d oa xuất huyết, có bã đậu; viêm phổi màng phổi, phổi có mủ tơ huyết, khí lu quản phổi có bã đậu; túi khí viêm dày lên,có dịch tiết bọt khoang bụng, va an dịch tiết màu trắng giống sữa chua, có bã đậu; mặt sưng phù thũng u nf - Amoxicillin/Clavulanic acid Tetracycline kháng sinh mà vi khuẩn ll ORT có tính mẫn cảm cao, chiếm tỷ lệ 100%; tiếp đến Ampicillin, chiếm tỷ lệ khuẩn ORT không oi vi m 92,31%; mẫn cảm với kháng sinh: z at nh Sulphamethaxazol/Trimethoprime, Lincomycine Doxycycline (đặc biệt Gentamycine)(100% khơng có giá trị q trình điều trị) z 5.2 KIẾN NGHỊ @ gm - Phải thường xuyên tăng cường công tác quản lý, giám sát chặt chẽ việc l chăn thả gà gia cầm hộ chăn nuôi, khử trùng tiêu độc định kỳ, an Lu Ornithobacterium rhinotracheale gây m co tuyên truyền cho người chăn nuôi thấy nguy hiểm bệnh ORT - Đây đề tài mới, nghiên cứu bệnh hoàn toàn Việt Nam Tuy n va ac th 48 si nhiên, bệnh vi khuẩn ORT gây gà dễ nhầm với bệnh đường hô hấp khác: Mycoplasma, viêm khí quản truyền nhiễm, CRD Vì vây, cần có nghiên cứu sâu tượng đồng nhiễm lại bệnh khác nhằm tìm biện pháp chẩn đoán phân biệt hữu hiệu giúp người chăn ni q trình phịng, trị bệnh đàn gà - Hiện nay, tình trạng lạm dụng loại thuốc kháng sinh chăn nuôi diễn phổ biến Vì vậy, cần có chiến lược sử dụng kháng sinh cho hiệu trình điều trị bệnh gà nói chung bệnh đường hơ hấp gà nói riêng - Cho đến nay, Việt Nam chưa có văc xin phịng bệnh ORT cho đàn gà lu Vì vậy, cần có nghiên cứu chuyên sâu đặc tính sinh học, sinh học phân tử an để từ làm sở cho việc sản xuất chế phẩm sinh học văc xin n va phòng bệnh ORT Việt Nam p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 49 si TÀI LIỆU THAM KHẢO Back A., Halvorson D., Rajashekara G & Nagaraja K.V (1998) Development of a serum plate agglutination test to detect antibodies to Ornithobacterium rhinotracheale J Vet Diagn Invest 10: 84-86 Bock R., Frewidlin P., Tomer S., Manoim M., Inbar A., Frommar A., Vandamme P., Wilding P & Hickson D (1995a) Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) associater with a new turkry respiratory tract infectious agent Proe 33 rd Annual Convention of the Israel Branch of the World Veterinary Association 43-45 lu Bock R F., Tomer P., Manoim S., Inbar M., Frommar A., Vandamme A., Wilding P & Hickson D (1995b) Ornithobacterium Rhinotracheale (ORT) associater with a new turkry respiratory tract infectious agent Proe 33 rd Annual Convention of the Israel Branch of the World Veterinary Association 43-45 an n va ie gh tn to Charlton B R., Channing-Santiago S E., Bickford A A., Cardona C J., Chin R P., Cooper G L., Droual R J., Meteyer J S., Shivaprasad C U & Walker R (1993) Preliminary characterization of a pleomorphic gram-negative rod associated with avian respiratory disease J Vet Diagn Invest 47-51 p Ferreri M Z., Alkasir R., Yin T & Han B (2013) Isolation and characterizaition of small-colony variants of Ornithobacterium Rhinotracheale Journal of Clinical Microbiology 51(10): 3228-3236 nl w d oa Hafez H M (1996) Current status on the role of Ornithobacterium Rhinotracheale (ORT) in respiratory disease complexes in poultry Arch Gefluă gelkd 60: 208-211 lu va an Hafez H M (1998) Current status on the laboratory diagnosis of O rhinotracheale “ORT” in poultry ll u nf Hafez H M., W Kruse, J Emele & R Sting (1993) Eine Atemwegsinfektion bei Mastputen durch Pasteurella-ähnliche Erreger: Klinik, Diagnostik und Therapie In: Proceedings of the International Conference on Poultry Diseases, Potsdam German Veterinary Medical Society Publisher Giessen, Germany 105-112 oi m z at nh z Hinz K H., Blome C & Ryll M (1994) Acute exudative pneumonia and airsacculitis associated with Ornithobacterium Rhinotracheale in turkeys Vet Rec 135: 233-234 @ l gm Hinz K H & Hafez H M (1997) The early history of Ornithobacter - ium Rhinotracheale (ORT) Arch Gefluă gelkd 61: 95-96 m co Karrimi V., Hassanzadeh M., Fallah N & Ashrafi I (2010) Molecular characterizaition of Ornithobacterium Rhinotracheale isolated from broiler chicken flocks in Iran Turk J Vet.Anim Sci 34(4): 526-530 an Lu n va ac th 50 si Nguyễn Thị Lan, Nguyễn Vũ Sơn, Nguyễn Hữu Nam, Nguyễn Thị Hoa & Lê Văn Năm (2014) Bệnh Orninobacterium Rhinotracheale (ORT) gà thông tin để chẩn đốn, phịng trị bệnh (bài tổng hợp) Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 21(5): 77- 83 Nguyễn Thị Lan, Chu Đức Thắng, Nguyễn Bá Hiên, Phạm Hồng Ngân & Lê Văn Hùng, Nguyễn Thị Yến (2016) Đặc điểm vi khuẩn Ornithobacterium Rhinotracheale (ORT) phân lập từ đàn gà nuôi số tỉnh phía bắc Việt Nam Tạp chí KH Nơng Nghiệp Việt Nam 14(11): 1734-1740 Nguyễn Thị Lan, Chu Đức Thắng, Nguyễn Hữu Nam & Lê Văn Hùng (2017) Nghiên cứu lựa chọn phương pháp chẩn đoán bệnh Ornithobacterium Rhinotracheale (ORT) gà Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y XXIV (5): 2017-6973 lu Soriano V E L., Navarrete P G & Fernández R P (2002) Identification and Characterization of Ornithobacterium Rhinotracheale Isolates from Mexico Avian Diseases 46(3): 686-690 an n va gh tn to Sprenger S., Back J., Shaw A., Nagaraja D P., Roepke K V & Halvorson D A (1998) Ornithobacterium Rhinotracheale infection in turkeys: experimental reproduction of the disease Avian Dis 42: 154-161 p ie Van Empel P., Van Den Bosch H., Goovaerts D & Storm P (1996) Experimental infection in turkeys and chickens with Ornithobacterium Rhinotracheale Avian Dis 40: 858-864 nl w d oa Van Veen L., P Van Empel & T Fabri (2000) Ornithobacterium rhinotracheale, aprimary pathogen in broilers Avian Dis 44: 896-900 lu ll u nf va an Vandamme P., Segers P., Vancanneyt M., Van Hove K., Mutters R., Hommez J., Dewhirst F., Paster B., Kersters K., Falsen E., Devriese L A., Bisgaard M., Hinz K H & Mannheim W (1994) Ornithobacterium Rhinotracheale gen nov., sp nov., isolated from the avian respiratory tract Int J Syst Bacteriol 44: 2437 m oi Võ Thị Trà An, Nguyễn Thị Bích Liên, Trần Thị Ngọc Hân, Hồ Quang Dũng & Chansiripornchai N (2014) Nhận dạng, phân lập xác định mước độ mẫn cảm kháng sinh vi khuẩn Orninobacterium Rhinotracheale gà Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y 21(7): 23-27 z at nh z m co l gm @ Walters J., Evans R., Leroith T., Sriranganathan N., Mcelroy A & Pierson F W (2014) Experimental Comparison of Hemolytic and Nonhemolytic Ornithobacterium Rhinotracheale Field Isolates In Vivo Avian Diseases 58(1): 78-82 an Lu Wyffels & Hommez (1990) Pasteurella anatipestifer gei-soleerd uit ademhalingsletsels bij grijze patrijzen (Perdix predix) Vlaam Diergeneeskd Tijdschr 59: 105-106 n va ac th 51 si