(Luận văn) bước đầu tuyển chọn một số chủng vi sinh vật ức chế nấm neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm nâu trên cây thanh long

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM HÀ THỊ THÚY lu an n va BƯỚC ĐẦU TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG VI SINH VẬT GÂY BỆNH ĐỐM NÂU TRÊN CÂY THANH LONG p ie gh tn to ỨC CHẾ NẤM NEOSCYTALIDIUM DIMIDIATUM oa nl w Bảo vệ thực vật Mã số: 60 62 01 12 d Chuyên ngành: va an lu TS Lương Hữu Thành ll u nf Người hướng dẫn khoa học: oi m z at nh z m co l gm @ an Lu NHÀ XUẤT BẢN ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP - 2016 n va ac th si LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng 12 năm 2016 Tác giả luận văn lu an n va tn to p ie gh Hà Thị Thúy d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th i si LỜI CẢM ƠN lu an n va p ie gh tn to Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo Lương Hữu Thành tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới, Ban Quản lý đào tạo Sau đại học – Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Viện Môi trường Nông nghiệp đặc biệt Bộ môn Sinh học Môi trường giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ d oa nl w an lu Hà Nội, ngày 04 tháng 12 năm 2016 ll u nf va Tác giả luận văn oi m z at nh Hà Thị Thúy z m co l gm @ an Lu n va ac th ii si MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Trích yếu luận văn viii Thesis Abstract x Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài lu 1.2 Mục tiêu đề tài an va 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài n 1.4 Đối tượng, phạm vi địa điểm nghiên cứu tn to Phần Tổng quan tài liệu sở khoa học đề tài gh 2.1 Cơ sở khoa học đề tài ie 2.2 Tình hình sản xuất tiềm phát triển long p 2.3 Bệnh hại long w 2.3.1 Bệnh thán thư oa nl 2.3.2 Bệnh thối thân, thối d 2.3.3 Bệnh virus 10 an lu 2.3.4 Những nghiên cứu bệnh đốm nâu hại long 10 va 2.4 Biện pháp sinh học sử dụng vi sinh vật đối kháng công tác bảo vệ u nf thực vật 18 ll 2.4.1 Mối quan hệ quần thể vi sinh vật chế hoạt động vi sinh vật m oi đối kháng 20 z at nh 2.4.2 Vi sinh vật đối kháng 23 Phần Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứuError! Bookmark not defined z 3.1 Vật liệu nghiên cúu 30 @ 3.1.1 Nguồn mẫu dùng nghiên cứu 30 gm 3.1.2 Vi sinh vật 30 l 3.1.3 Giống Thanh long 30 m co 3.1.4 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 30 an Lu 3.2 Nội dung nghiên cứu 30 3.3 Phương pháp nghiên cứu 30 n va ac th iii si 3.3.1 Phương pháp nghiên cứu vi sinh vật nghiên cứu 30 3.3.2 Phương pháp xác định tên vi sinh vật nghiên cứu 32 3.3.3 Phương pháp thí nghiệm khả đối kháng vi sinh vật tác nhân gây bệnh 33 3.3.4 Phương pháp xác định khả sản xuất chế phẩm vi sinh vật nghiên cứu 35 3.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 35 Phần Kết thảo luận 36 4.1 Phân lập, tuyển chọn đánh giá hoạt tính sinh học vi sinh vật đối kháng 36 4.1.1 Thu thập, phân lập tuyển chọn vi sinh vật đối kháng 36 lu 4.1.2 Hình thái khuẩn lạc, tế bào nhuộm Gram vi sinh vật 40 an 4.1.3 Hoạt tính sinh học vi sinh vật đối kháng 43 va 4.2 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình sinh trưởng phát triển vi n sinh vật nghiên cứu 48 tn to 4.2.1 Ảnh hưởng pH 48 gh 4.2.2 Ảnh hưởng nhiệt độ 49 p ie 4.2.3 Ảnh hưởng lượng khí cấp vào 51 4.2.4 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy 53 nl w 4.3 Xác định tên vi sinh vật nghiên cứu 56 oa 4.3.1 Dòng A3 56 d 4.3.2 Dòng C4 58 lu an 4.3.3 Dòng B7 59 u nf va 4.4 Nghiên cứu khả kiểm soát bệnh đốm nâu long vi sinh vật đối kháng 60 ll 4.4.1 Ảnh hưởng vi sinh vật nghiên cứu đến khả kiểm soát bệnh đốm m oi nâu long 60 z at nh 4.4.2 Ảnh hưởng vi sinh vật nghiên cứu đến sinh trưởng long 65 4.4 Xác định khả sản xuất chế phẩm 69 z Phần Kết luận kiến nghị 71 @ gm 5.1 Kết luận 71 5.2 Kiến nghị 72 l m co Tài liệu tham khảo 73 an Lu n va ac th iv si DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT lu an n va Nghĩa tiếng Việt BVTV Bảo vệ thực vật CFU (colony forming unit) Đơn vị hình thành khuẩn lạc cs Cộng TLB Tỉ lệ bệnh f.sp (forma specialis) Dạng chun tính G+ Gram dương NA Mơi trường NA PDA Môi trường PDA ISP4 Môi trường ISP4 STT Số thứ tự VSV Vi sinh vật p ie gh tn to Chữ viết tắt d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th v si DANH MỤC CÁC BẢNG lu an n va p ie gh tn to Bảng 2.1 Diện tích, sản lượng long Việt Nam tỉnh năm 2014 .7 Bảng 4.1 Danh sách vi sinh vật có khả ức chế nấm Neoscytalidium dimitiatum 36 Bảng 4.2 Danh sách vòng ức chế vi sinh vật phân lập từ đất trồng long 38 Bảng 4.3 Các vi sinh vật có khả ức chế nấm gây bệnh đốm nâu long 39 Bảng 4.4 Đặc điểm khuẩn lạc, tế bào vi sinh vật 40 Bảng 4.5 Kết nhuộm Gram chủng vi sinh vật đối kháng 43 Bảng 4.6 Hoạt tính đối kháng dịng vi sinh vật lựa chọn 43 Bảng 4.7 Hoạt tính phân giải tinh bột, xenluloza phốt phát khó tan dịng vi sinh vật lựa chọn 45 Bảng 4.8 Ảnh hưởng pH tới trình sinh trưởng phát triển vi sinh vật 48 Bảng 4.9 Ảnh hưởng nhiệt độ tới trình sinh trưởng 50 Bảng 4.10 Ảnh hưởng O2 đến sinh trưởng phát triển vi sinh vật 51 Bảng 4.11 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển vi khuẩn C4 53 Bảng 4.12 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển vi khuẩn B7 54 Bảng 4.13 Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển xạ khuẩn A3 55 Hình 4.11 Cây phân loại dòng B7 59 Bảng 4.14 Ảnh hưởng vi sinh vật nghiên cứu đến khả kiểm soát 61 Bảng 4.15 Ảnh hưởng vi sinh vật nghiên cứu đến khả sinh trưởng phát triển long 66 Bảng 4.16 Khả sống sót vi sinh vật nghiên cứu đất 68 Bảng 4.17 Mật độ vi sinh vật loại chất mang 69 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vi si DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 4.1 Khuẩn lạc dịng A3 .41 Hình 4.2 Khuẩn lạc dịng C4 41 Hình 4.3 Khuẩn lạc dịng B7 42 Hình 4.4 Hình dạng tế bào vi khuẩn đối kháng 42 Hình 4.5 Khả ức chế nấm vi sinh vật mơi trường nhân tạo 44 Hình 4.6 Hoạt tính phân giải xenluloza dịng B7 A3 46 Hình 4.7 Hoạt tính phân giải Ca3(PO4)2 dòng B7 47 Hình 4.8 Hoạt tính phân giải tinh bột dịng A3 47 lu an Hình 4.9 Cây phân loại dịng A3 57 n va Hình 4.10 Cây phân loại dịng C4 58 Hình 4.12 Khả ức chế bệnh đốm nâu long vi sinh vật nghiên gh tn to Hình 4.11 Cây phân loại dịng B7 59 cứu (hình a, b, c, d) 65 ie p Hình 4.13 Thí nghiệm ảnh hưởng vi sinh vật nghiên cứu đến long d oa nl w (hình a,b,c) 67 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th vii si TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Tên tác giả: Hà Thị Thúy Tên Luận văn: “Bước đầu tuyển chọn số chủng vi sinh vật ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm nâu long” Ngành: BVTV Mã số: 60620112 Tên sở đào tạo: Học viện Nông nghiệp Việt Nam Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu ứng dụng vi sinh vật làm tác nhân sinh học để kiểm soát bệnh đốm nâu long lu an n va ie gh tn to Phương pháp nghiên cứu Vật liệu nghiên cứu - Các mẫu đất trồng long - Nấm Neoscytalidium dimidiatum – Viện ăn Miền Nam cung cấp - Các hom giống long - Các môi trường nuôi cấy vi sinh vật p Nội dung nghiên cứu - Phân lập, tuyển chọn đánh giá hoạt tính sinh học vi sinh vật - Nghiên cứu xác định tên vi sinh vật lựa chọn - Nghiên cứu khả kiểm soát bệnh đốm nâu long vi sinh vật lựa chọn - Xác định khả sản xuất chế phẩm d oa nl w va an lu ll u nf Phương pháp nghiên cứu - Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học vi sinh vật Xác định hoạt tính đối kháng vi sinh vật theo 10TCN714-2005, 10TCN 876-2006, Nguyễn Lân Dũng (2005) Rupela et al (2003) - Phương pháp xác định tên vi sinh vật lựa chọn Xác định tên vi sinh vật phương pháp phân loại sinh học phân tử dựa sở giải trình tự đoạn den 16s ARN riboxom vi sinh vật nghiên cứu - Phương pháp bố trí thí nghiệm nhà lưới Đất trồng khử trùng, đựng hộp xốp (15kg đất/hộp) Thí nghiệm trồng nhà lưới, bố trí ngẫu nhiên, lần nhắc lại, trồng hom/hộp oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th viii si Công thức 1: Không nhiễm vi sinh vật Công thức 2: Nhiễm nấm bệnh (ĐC) Công thức 3: Nhiễm xạ khuẩn A3 Công thức 4: Nhiễm xạ khuẩn A3 + nấm bệnh (108CFU/ml, tỉ lệ 1:1) Công thức 5: Nhiễm vi khuẩn B7 Công thức 6: Nhiễm vi khuẩn B7+ nấm bệnh (108CFU/ml, tỉ lệ 1:1) Công thức 7: Nhiễm vi khuẩn C4 Công thức 8: Nhiễm vi khuẩn C4+ nấm bệnh (108CFU/ml, tỉ lệ 1:1) Phun dịch vi sinh vật với nồng độ 108 CFU/ml thời gian 15-20 phút trước trồng lu Chỉ tiêu đánh giá: Tỷ lệ bệnh (%) = (Số cành bị bệnh/ số cành điều tra) x 100 sau nhiễm bệnh 30 ngày, 60 ngày an n va p ie gh tn to Kết kết luận - Tuyển chọn dòng vi sinh vật có khả ức chế nấm gây bệnh đốm nâu long kí hiệu A3, B7, C4 Các chủng vi sinh vật có khả ức chế nấm gây bệnh cao với đường kính vịng ức chế > 2,0 cm - Bằng kỹ thuật phân tử xác định trình tự ARNr 16S dịng A3 tương đồng 100% (1500/1500 bp) với đoạn ADNr 16S Streptomyces fradiae Streptomyces rubrolavendulae; 99,8 % (1497/1500 bp) với Streptomyces roseoflavus Trình tự ARNr 16S dịng B7 tương đồng 100% d oa nl w lu an (1414/1414 bp) với đoạn ADNr 16S Bacillus polymenticus, Trình tự ll u nf va gen 16s rARN dòng C4 giống 99% (1333/1339) với đoạn 16s vi khuẩn Bacillus velezensis Kết hợp với kết đặc điểm sinh oi m lý, sinh hóa, hình thái xác định dịng A3 lồi Streptomyces fradiae , B7, loài Bacillus polymenticus C4 lồi Bacillus velezensis, tương ứng thuộc nhóm có độ an tồn sinh học cao chủng vi sinh vật có khả kiểm sốt bệnh đốm nâu long điều kiện lây nhiễm nhân tạo Hiệu giảm bệnh chủng nghiên cứu khác Ở cơng thức có phun Streptomyces fradiae A3, Bacillus polyfermenticus B7 hiệu giảm bệnh đạt 81,1% sau 60 ngày nhiễm bệnh hiệu giảm bệnh đạt 73,9% sau 60 ngày nhiễm bệnh cơng thức có dùng Bacillus velezensis C4 z at nh - z m co l gm @ an Lu n va ac th ix si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B7 2/12/16 16:26 -:PAGE MEANS FOR EFFECT MT -MT NOS 36 4.50000 3.20000 2.60000 OH lu an n va MT 24H 3.80000 7.10000 5.60000 3.80000 8.30000 5.90000 3.80000 3.60000 2.50000 0.816497E-01 0.163299 0.110554 0.282439 0.564877 0.382424 48 5.60000 8.60000 2.40000 60H 7.10000 9.40000 5.20000 SE(N= 3) 0.816499E-01 5%LSD 6DF 0.282440 tn to NOS 3 3 12H p ie gh SE(N= 3) 0.999999E-01 0.145297 5%LSD 6DF 0.345916 0.502605 d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 91 si ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B7 2/12/16 16:26 -:PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 3.8000 6.3333 4.6667 3.4333 5.5333 7.2333 OH 12H 24H 36 48 60H STANDARD DEVIATION C OF V |MT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.12247 0.14142 3.7 1.0000 2.1290 0.28284 4.5 0.0000 1.6386 0.19149 4.1 0.0000 0.85000 0.14142 4.1 0.0000 2.6893 0.17320 3.1 0.0000 1.8344 0.25166 3.5 0.0000 | | | | lu an n va p ie gh tn to d oa nl w ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 92 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE B77 FILE THUYMT 30/11/16 16:14 :PAGE VARIATE V003 B77 LN SOURCE OF VARIATION SQUARES DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER ==================================================================== ========= PH$ 75.3514 12.5586 183.15 0.000 * RESIDUAL 14 960001 685715E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 76.3114 3.81557 - lu BALANCED ANOVA FOR VARIATE C44 FILE THUYMT 30/11/16 16:14 :PAGE VARIATE V004 C44 an n va DF SUMS OF SQUARES MEAN LN F RATIO PROB ER tn to LN SOURCE OF VARIATION SQUARES p ie gh ==================================================================== ========= PH$ 78.3428 13.0571 247.02 0.000 * RESIDUAL 14 740010 528578E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 79.0829 3.95414 - d oa nl w u nf va an lu BALANCED ANOVA FOR VARIATE A33 FILE THUYMT 30/11/16 16:14 :PAGE VARIATE V005 A33 DF SUMS OF SQUARES MEAN LN ll LN SOURCE OF VARIATION SQUARES F RATIO PROB ER oi m z at nh ==================================================================== ========= PH$ 59.5200 9.92000 289.33 0.000 * RESIDUAL 14 480005 342861E-01 * TOTAL (CORRECTED) 20 60.0000 3.00000 - z m co l gm @ an Lu n va ac th 93 si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE THUYMT 30/11/16 16:14 :PAGE MEANS FOR EFFECT PH$ PH$ PH4.5 PH5 PH5.5 PH6 PH6.5 PH7 PH7.5 NOS 3 3 3 B77 5.40000 3.60000 4.10000 5.20000 4.30000 8.80000 8.20000 C44 7.20000 2.60000 7.50000 3.00000 4.50000 5.10000 7.40000 A33 3.40000 4.50000 3.20000 6.30000 8.30000 5.80000 4.20000 SE(N= 3) 0.151186 0.132738 0.106905 5%LSD 14DF 0.458580 0.402623 0.324267 - lu an n va ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE THUYMT 30/11/16 16:14 :PAGE gh tn to F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - p ie VARIATE (N= NO OBS B77 21 C44 21 A33 21 | d oa nl w GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |PH$ 21) SD/MEAN | | BASED ON BASED ON % | | TOTAL SS RESID SS | | 5.6571 1.9533 0.26186 4.6 0.0000 5.3286 1.9885 0.22991 4.3 0.0000 5.1000 1.7321 0.18516 3.6 0.0000 ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 94 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE A3 FILE NHIETDO 2/12/16 22:47 -:PAGE VARIATE V003 A3 LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= T0 19.4314 3.23857 58.13 0.000 * RESIDUAL 14 780000 557143E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 20 20.2114 1.01057 lu an BALANCED ANOVA FOR VARIATE C4 FILE NHIETDO 2/12/16 22:47 -:PAGE VARIATE V004 C4 n va gh tn to LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO p ie SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= T0 19.7829 3.29714 64.11 0.000 * RESIDUAL 14 720000 514286E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 20 20.5029 1.02514 d oa nl w u nf va an lu ll BALANCED ANOVA FOR VARIATE B7 FILE NHIETDO 2/12/16 22:47 -:PAGE VARIATE V005 B7 oi m SOURCE OF VARIATION ER z at nh LN PROB DF SUMS OF MEAN F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= T0 113.966 18.9943 511.38 0.000 * RESIDUAL 14 520007 371434E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 20 114.486 5.72429 m co l gm @ an Lu n va ac th 95 si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NHIETDO 2/12/16 22:47 -:PAGE MEANS FOR EFFECT T0 -T0 NOS 3 3 3 25 30 35 40 45 50 55 A3 3.40000 3.30000 2.40000 4.30000 5.20000 3.40000 2.20000 C4 5.50000 6.30000 4.40000 4.70000 6.20000 4.10000 3.60000 B7 2.50000 7.20000 5.10000 9.60000 3.50000 3.20000 5.90000 lu SE(N= 3) 0.136277 0.130931 0.111271 5%LSD 14DF 0.413358 0.397142 0.337508 an n va F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - gh tn to ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NHIETDO 2/12/16 22:47 -:PAGE p ie VARIATE d oa nl w A3 C4 B7 GRAND MEAN (N= 21) NO OBS 21 3.4571 21 4.9714 21 5.2857 STANDARD DEVIATION C OF V |T0 SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.0053 0.23604 6.8 0.0000 1.0125 0.22678 4.6 0.0000 2.3925 0.19273 3.6 0.0000 | | | | ll u nf va an lu oi m z at nh z m co l gm @ an Lu n va ac th 96 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE 0H FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE VARIATE V003 0H LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 9.68000 4.84000 103.71 0.000 * RESIDUAL 280000 466666E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 9.96000 1.24500 lu an n va tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE 12H FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE VARIATE V004 12H gh LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO p ie SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 42.3800 21.1900 244.50 0.000 * RESIDUAL 520002 866671E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 42.9000 5.36250 - d oa nl w u nf va an lu ll BALANCED ANOVA FOR VARIATE 24H FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE VARIATE V005 24H oi m SOURCE OF VARIATION ER z at nh LN PROB DF SUMS OF MEAN F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 740000 370000 10.09 0.013 * RESIDUAL 220000 366667E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 960000 120000 m co l gm @ an Lu n va ac th 97 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE 36H FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE VARIATE V006 36H LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 3.92000 1.96000 34.59 0.001 * RESIDUAL 340000 566666E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 4.26000 532500 lu an BALANCED ANOVA FOR VARIATE 48H FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE VARIATE V007 48H n va gh tn to LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO p ie SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 57.9800 28.9900 966.33 0.000 * RESIDUAL 180002 300003E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 58.1600 7.27000 d oa nl w u nf va an lu ll BALANCED ANOVA FOR VARIATE 60H FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE VARIATE V008 60H oi m SOURCE OF VARIATION ER z at nh LN PROB DF SUMS OF MEAN F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 25.2800 12.6400 632.01 0.000 * RESIDUAL 119998 199997E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 25.4000 3.17500 m co l gm @ an Lu n va ac th 98 si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE MEANS FOR EFFECT MT -MT NOS 36H 5.20000 5.20000 6.60000 0H lu an n va MT 24H 3.40000 1.60000 4.10000 3.40000 1.40000 3.80000 5.60000 6.10000 4.50000 0.124722 0.169968 0.110554 0.431433 0.587945 0.382425 48H 7.40000 1.70000 2.40000 60H 2.40000 1.20000 5.20000 SE(N= 3) 0.137437 5%LSD 6DF 0.475416 tn to NOS 3 3 12H p ie gh SE(N= 3) 0.100000 0.816491E-01 5%LSD 6DF 0.345917 0.282437 w d oa nl ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE A3 2/12/16 23:46 -:PAGE lu GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 4.1333 3.0333 4.1333 5.6667 3.8333 2.9333 STANDARD DEVIATION C OF V |MT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 1.1158 0.21602 5.2 0.0001 2.3157 0.29439 9.7 0.0000 0.34641 0.19149 4.6 0.0127 0.72973 0.23805 4.2 0.0008 2.6963 0.17321 4.5 0.0000 1.7819 0.14142 4.8 0.0000 | | | | oi m z at nh 0H 12H 24H 36H 48H 60H ll u nf va VARIATE an F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - z m co l gm @ an Lu n va ac th 99 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE 0H FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE VARIATE V003 0H LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN SQUARES SQUARES F RATIO LN lu ====================================================================== ======= MT 344330E-18 172165E-18 0.00 1.000 * RESIDUAL 600000E-01 100000E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 600000E-01 750000E-02 an n va tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE 12H FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE VARIATE V004 12H gh LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO p ie SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 11.7800 5.89000 196.33 0.000 * RESIDUAL 180001 300002E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 11.9600 1.49500 BALANCED ANOVA FOR VARIATE 24H FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE VARIATE V005 24H d oa nl w ll u nf va an lu DF SUMS OF MEAN z at nh SOURCE OF VARIATION ER oi m LN PROB F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 17.4600 8.73000 187.07 0.000 * RESIDUAL 280000 466667E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 17.7400 2.21750 m co l gm @ an Lu n va ac th 100 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE 36H FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE VARIATE V006 36H LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 20.5400 10.2700 171.17 0.000 * RESIDUAL 360001 600001E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 20.9000 2.61250 lu an n va tn to BALANCED ANOVA FOR VARIATE 48H FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE VARIATE V007 48H gh LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO p ie SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 14.0600 7.03000 234.33 0.000 * RESIDUAL 179999 299999E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 14.2400 1.78000 - d oa nl w u nf va an lu ll BALANCED ANOVA FOR VARIATE 60H FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE VARIATE V008 60H oi m SOURCE OF VARIATION ER z at nh LN PROB DF SUMS OF MEAN F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= MT 10.3200 5.16000 73.71 0.000 * RESIDUAL 420001 700001E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 10.7400 1.34250 m co l gm @ an Lu n va ac th 101 si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE MEANS FOR EFFECT MT -MT NOS 36H 4.80000 7.90000 4.60000 0H lu an n va MT 24H 3.60000 4.30000 7.60000 3.60000 5.60000 5.20000 3.60000 2.80000 4.30000 0.577350E-01 0.100000 0.124722 0.199715 0.345917 0.431433 48H 4.00000 4.60000 1.70000 60H 2.60000 4.20000 1.60000 SE(N= 3) 0.141422 5%LSD 6DF 0.489200 tn to NOS 3 3 12H p ie gh SE(N= 3) 0.999998E-01 0.152753 5%LSD 6DF 0.345915 0.528396 w d oa nl ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE C4 2/12/16 22:21 -:PAGE lu GRAND MEAN (N= 9) NO OBS 3.6000 4.2333 5.7000 5.7667 3.4333 2.8000 STANDARD DEVIATION C OF V |MT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.86603E-010.10000 2.8 1.0000 1.2227 0.17321 4.1 0.0000 1.4891 0.21602 3.8 0.0000 1.6163 0.24495 4.2 0.0000 1.3342 0.17320 5.0 0.0000 1.1587 0.26458 9.4 0.0002 | | | | oi m z at nh 0H 12H 24H 36H 48H 60H ll u nf va VARIATE an F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - z m co l gm @ an Lu n va ac th 102 si BALANCED ANOVA FOR VARIATE A3 FILE OXY 3/12/16 0:13 -:PAGE VARIATE V003 A3 LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= OXY 114.240 14.2800 313.46 0.000 * RESIDUAL 18 820004 455558E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 26 115.060 4.42538 lu an BALANCED ANOVA FOR VARIATE C4 FILE OXY 3/12/16 0:13 -:PAGE VARIATE V004 C4 n va gh tn to LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO p ie SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= OXY 115.367 14.4208 447.54 0.000 * RESIDUAL 18 580001 322223E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 26 115.947 4.45949 - d oa nl w va an lu ll u nf BALANCED ANOVA FOR VARIATE B7 FILE OXY 3/12/16 0:13 -:PAGE VARIATE V005 B7 DF SUMS OF MEAN z at nh SOURCE OF VARIATION ER oi m LN PROB F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== ======= OXY 61.2600 7.65750 202.70 0.000 * RESIDUAL 18 680001 377779E-01 -* TOTAL (CORRECTED) 26 61.9400 2.38231 m co l gm @ an Lu n va ac th 103 si TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE OXY 3/12/16 0:13 -:PAGE MEANS FOR EFFECT OXY -OXY NOS 3 3 3 3 3 A3 1.20000 4.20000 3.60000 3.80000 5.20000 8.20000 7.80000 4.80000 3.50000 C4 2.20000 4.80000 2.40000 6.80000 8.40000 4.70000 2.40000 3.40000 6.10000 B7 3.30000 2.20000 3.40000 6.60000 7.20000 5.10000 5.20000 4.80000 4.20000 lu SE(N= 3) 0.123229 0.103638 0.112217 5%LSD 18DF 0.366130 0.307923 0.333413 an n va gh tn to ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE OXY 3/12/16 0:13 -:PAGE p ie F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - d STANDARD DEVIATION C OF V |OXY SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 2.1037 0.21344 4.5 0.0000 2.1117 0.17951 3.9 0.0000 1.5435 0.19437 4.2 0.0000 | | | | va an lu A3 C4 B7 GRAND MEAN (N= 27) NO OBS 27 4.7000 27 4.5778 27 4.6667 oa nl w VARIATE ll u nf BALANCED ANOVA FOR VARIATE 30N FILE DK 3/12/16 11: -:PAGE VARIATE V003 30N oi m SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN z at nh LN PROB F RATIO z SQUARES SQUARES LN ====================================================================== CT 1.03984 346613 159.91 0.000 * RESIDUAL 16 346802E-01 216751E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 19 1.07452 565537E-01 - m co l gm @ 60N FILE DK an Lu BALANCED ANOVA FOR VARIATE 3/12/16 11: n va ac th 104 si -:PAGE VARIATE V004 60N LN PROB SOURCE OF VARIATION ER DF SUMS OF MEAN F RATIO SQUARES SQUARES LN ====================================================================== CT 1.88632 628773 153.83 0.000 * RESIDUAL 16 654001E-01 408750E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 19 1.95172 102722 - lu TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE DK 3/12/16 11: -:PAGE MEANS FOR EFFECT CT - an va n CT 30N 0.670000 0.102000 0.170000 0.170000 60N 0.898000 0.170000 0.170000 0.234000 ie gh tn to NOS 5 5 p SE(N= 5) 0.208207E-01 0.285920E-01 5%LSD 16DF 0.624208E-01 0.857192E-01 oa nl w d ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE DK 3/12/16 11: -:PAGE an lu VARIATE STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.23781 0.46557E-01 16.7 0.0000 0.32050 0.63934E-01 17.4 0.0000 oi m | | | | z at nh GRAND MEAN (N= 20) NO OBS 20 0.27800 20 0.36800 ll 30N 60N u nf va F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - z m co l gm @ an Lu n va ac th 105 si