Nghiên cứu đa dạng di truyền giống na bở (annona squamosa) tại thái nguyên bằng chỉ thị phân tử rapd

LỜI CÁM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Bùi Văn Thắng, ThS Nguyễn Thị Huyền tận tình hƣớng dẫn, bảo hết lịng giúp đỡ để tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu Xin cám ơn Ban Lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, cán Phòng Quản lý tổng hợp tạo điều kiện giúp tơi hồn thành khóa luận Tơi xin bày tỏ biết ơn sâu sắc đặc biệt đến cán Bộ môn Công nghệ gen Di truyền phân tử giúp đỡ mặt tinh thần nhƣ tạo điều kiện mặt vật chất, trang thiết bị kĩ thuật cho tơi suốt q trình thực đề tài Xin chân thành cám ơn thầy cô, anh chị bạn bè đồng nghiệp Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp cho lời khuyên chân thành giúp đỡ quý báu Tôi xin bày tỏ biết ơn sâu sắc đến gia đình, ngƣời thân, bạn bè, ngƣời ln động viện, khuyến khích giúp đỡ mặt để tơi hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 14 tháng năm 2018 Sinh viên Hà Thị Bích i MỤC LỤC LỜI CÁM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Na 1.1.1 Phân loại, nguồn gốc phân bố Na 1.1.2 Đặc điểm sinh học 1.1.3 Giá trị sử dụng lợi ích kinh tế Na bở 1.2 Xác định đa dạng di truyền thị phân tử 1.2.1 Chỉ thị RFLP ( Restriction fragment length polymorphism) 1.2.2 Chỉ thị SSR (Simple Sequence Repeat – SSR) 10 1.2.3.Chỉ thị AFLP (Amplified Fragment Length Polymophism) 11 1.2.4 Chỉ thị RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) 11 1.3 Ứng dụng kĩ thuật sinh học phân tử nghiên cứu đa dạng di truyền ăn 13 1.3.1 Trên giới 13 1.3.2 Tại Việt Nam 15 CHƢƠNG MỤC TIÊU, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 18 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Vật liệu địa điểm nghiên cứu 18 2.3.1 Vật liệu nghiên cứu 18 2.3.2 Địa điểm nghiên cứu 19 2.4 Hóa chất thiết bị sử dụng cho nghiên cứu 19 2.4.1 Hóa chất 19 ii 2.4.2 Máy móc, thiết bị 19 2.5 Các mồi sử dụng nghiên cứu 19 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.6.1 Phƣơng pháp tách chiết DNA tổng số 21 2.6.2 Phƣơng pháp PCR - RAPD 22 2.6.3 Phƣơng pháp điện di gel agarose 23 2.6.4 Xây dựng giản đồ phả hệ 24 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Kết tách chiết DNA tổng số 25 3.2 Kết phân tích đa hình phân đoạn DNA nhận đƣợc từ 21 mồi RAPD 26 3.3 Xây dựng giản đồ phả hệ 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 Kết luận: 39 Kiến nghị: 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết đầy đủ STT Từ viết tắt DNA Deoxyribonucleic Acid CTAB Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide EDTA Ethylenediaminetetra Acetic Acid PCR RAPD Random Amplyfied Polymorphism DNA RELP Restriction fragment length polymorphism AFLP Amplified Fragment Length Polymophism SSR Simple Sequence Repeat TAE Tris – Acetic acid - EDTA 10 cs 11 NST Polymerase Chain Reaction Cộng Nhiễm sắc thể iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Kí hiệu mẫu Na bở sử dụng cho nghiên cứu 18 Bảng 2.2 Trình tự mồi RAPD sử dụng nghiên cứu 20 Bảng 2.3: Thành phần dung dịch đệm rửa 22 Bảng 2.4 Thành phần dung dịch đệm tách 22 Bảng 2.5 Thành phần phản ứng PCR với mồi ngẫu nhiên 22 Bảng 2.6 Chu kì phản ứng PCR 23 Bảng 3.1 Số liệu mã hóa băng DNA thu đƣợc điện di mồi OPB10 CP16 27 Bảng 3.2 Số liệu mã hóa băng DNA thu đƣợc điện di mồi CP02 CP03 29 Bảng 3.3 Số liệu mã hóa băng DNA thu đƣợc điện di mồi CP06 CP08 32 Bảng 3.4 Kết sử dụng mồi RAPD nghiên cứu 33 Bảng 3.5 Hệ số tƣơng đồng di truyền mẫu Na bở nghiên cứu 35 v DANH MỤC HÌNH Hình1.1 Na bở núi đá Hà Giang [4] Hình 1.2 Hình thái Na bở [5] Hình 3.1 Ảnh điện di DNA tổng số mẫu Na bở nghiên cứu tách chiết từ 25 Hình 3.2 Ảnh điện di sản phẩm PCR – RAPD với mồi OPB10 26 Hình 3.3 Ảnh điện di sản phẩm PCR – RAPD với mồi CP16 27 Hình 3.4 Ảnh điện di sản phẩm PCR – RAPD với mồi CP02 28 Hình 3.5 Ảnh điện di sản phẩm PCR – RAPD với mồi CP03 29 Hình 3.6 Ảnh điện di sản phẩm PCR – RAPD với mồi CP08 31 Hình 3.7 Ảnh điện di sản phẩm PCR – RAPD với mồi CP06 31 Hình 3.8: Sơ đồ hình thể mối quan hệ di truyền mẫu Na bở 36 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam nằm vành đai nhiệt đới gió mùa ẩm tạo nên đa dạng sinh thái, khí hậu có nhiều nét độc đáo đa dạng, tài nguyên đất, nƣớc phong phú Điều kiện tự nhiên thuận lợi cho việc phát triển nghề trồng ăn quả, có na Hiện nay, na không đƣợc biết đến với việc phủ xanh đất trống, đồi núi trọc mà đƣợc biết đến giá trị mà mang lại Ở số tỉnh nhƣ: Lạng Sơn, Tuyên Quang, Hà Giang, Quảng Ninh,v.v, na đƣợc xếp vào loại ăn chủ lực, thúc đẩy phát triển kinh tế, góp phần xóa đói giảm nghèo cho bà nơng dân Quả na đặc sản số địa phƣơng, khơng đƣợc tiêu thụ nƣớc mà cịn đƣợc xuất nƣớc Những năm gần đây, sản phẩm na trở thành hàng hóa đƣợc nhiều ngƣời tiêu dùng biết đến với mùi vị đặc trƣng, to cùi na có chứa nhiều tinh bột, ngồi na cịn có nhiều công dụng nhƣ làm dƣợc liệu chữa bệnh cho ngƣời, thuốc trừ côn trùng Cây na sớm cho quả, sản lƣợng lại cao, dễ dàng tiêu thụ nên na chiếm vị trí quan trọng sản xuất nơng nghiệp phát triển kinh tế nhiều địa phƣơng Na loại ăn dài ngày thích hợp với vùng đất trung du miền núi đặc biệt với núi đá vơi mà na không mang lại giá trị kinh tế cao mà cịn góp phần cải thiện mơi trƣờng sinh thái, hạn chế lũ lụt, xói mịn, sạt nở đất Với lợi ích na cần đƣợc nghiên cứu, bảo tồn phát triển giống để mở rộng quy mơ sản xuất, đem lại lợi ích cho ngƣời dân Để bảo tồn phát triển nguồn gen na hiệu quả, điều trƣớc tiên cần biết thông tin đa dạng di truyền làm sở khoa học Phƣơng pháp phân tích đa dạng di truyền phƣơng pháp phân tích biến dị cấu trúc di truyền cá thể bên loài, biến dị bên quần thể Chính nhờ mà đời thị phân tử nghiên cứu, chọn lọc, phân lập bảo tồn có ý nghĩa Chỉ thị RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) cho phép xác định tính đa hình đoạn DNA đƣợc nhân ngẫu nhiên đƣợc dùng nhƣ biện pháp hữu hiệu có độ xác cao đƣợc áp dụng thành công nhiều đối tƣợng trồng khác nhƣ lâm nghiệp, dƣợc liệu đặc biệt ăn Trên Thế giới có vài công bố việc xác định mức độ đa dạng di truyền số loài chi Annona nhƣ: Annona muricata L (Brown cs, 2003), giống lai A cherimola A Squamosa (Bonning cs, 1995) Tuy nhiên, Việt Nam chƣa có cơng trình công bố việc nghiên cứu đa dạng di truyền lồi na Chính vậy, vấn đề cần đƣợc quan tâm nghiên cứu Đề tài “Nghiên cứu đa dạng di truyền giống Na bở (Annona squamosa) Thái Nguyên thị phân tử RAPD” đƣợc thực nhằm đánh giá tiềm năng, tính đa dạng di truyền giống Na bở đƣợc canh tác nhƣ tạo điều kiện thuận lợi cho việc quản lý nguồn tài nguyên giống nƣớc Đồng thời, đề tài cịn góp phần tạo sở khoa học cho công tác lai tạo chọn giống để cải thiện phẩm chất giống Na bở nội địa CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Na 1.1.1 Phân loại, nguồn gốc phân bố Na  Phân loại Cây Na bở thuộc: Ngành: Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp: Ngọc Lan (Magnoliopsida) Phân Lớp: Ngọc Lan (Magnoliidae) Bộ: Na (Annonales) Họ: Na (Annonaceae) Chi : Annona Tên khoa học: Annona squamosa Tên khác: Sa lê, Mãng cầu ta, Mãng cầu dai, Mác kiếp (Tày), Phan lệ chi Chi Annona gồm loài: Annona glabra Annona muricata Annona reticulata Annona squamosa Annona montana Trong đó, giống Na bở thuộc lồi Annona squamosa Tên thơng thƣờng: tùy theo quốc gia mà na có tên gọi khác nhƣ: Anh: sweet sop, sugar apple; Pháp: attire, pomme cannelle (táo quế); Tây Ban Nha: annona, annona blanca; Haïti: cachiman cannelle; Mã Lai: no-na; Thái Lan: noi-na; Việt Nam: na, mãng cầu [19]  Nguồn gốc phân bố: Cây Na bở có nguồn gốc vùng châu Mỹ nhiệt đới Nguồn gốc địa loại quần đảo Angti, đƣợc trồng khắp nơi có Việt Nam - Trên Thế giới: Na đƣợc trồng Mexico, Trung Mỹ trƣớc lan xuống Nam Mỹ nhiệt đới Cây na đƣợc du nhập vào châu Á, châu Phi nhiệt đới bán nhiệt đới vào cuối kỷ 16 đầu kỷ 17 Ngày nay, Australia nƣớc sản xuất xuất nhiều na giới [20] - Ở Việt Nam: Ở nƣớc ta, na đƣợc trồng rộng rãi miền Bắc miền Nam, vùng phân bố na rộng Trừ nơi mùa đông lạnh, có sƣơng muối khơng trồng đƣợc na cịn hầu hết tỉnh trồng na Na ăn có giá trị tiềm kinh tế lớn góp phần khơng nhỏ việc xóa đói, giảm nghèo số vùng miền núi đồng thời góp phần phủ xanh đất trống đồi núi trọc tạo công ăn việc làm dƣ thừa lớn xã hội Trong năm gần na đƣợc trọng phát triển, số vùng trồng na nƣớc ta là: - Vùng đồi gò Hà Tây cũ: héc ta na giá trị sản phẩm đạt đƣợc khoảng 33 triệu đồng/1 năm, thu nhập đạt 23 triệu - Tây Ninh tỉnh có diện tích trồng na lớn nƣớc Diện tích trồng na tỉnh tập trung chân núi Bà Đen (thị xã Tây Ninh) Đến năm 2008, tỉnh Tây Ninh có khoảng 3,036 héc ta na (xã Thạch Tân có 600 ha) với sản lƣợng đạt 23,136 (Trần Thế Tục ,2008) - Na Chi Lăng (Lạng Sơn): Cây na đƣợc coi ăn đặc sản huyện Chi Lăng Trong năm gần đây, diện tích trồng na huyện tăng dần, từ 789,54 năm 2000 lên 936,9 năm 2005, 1.025,4 năm 2006 1.776,0 năm 2009 (Liên giám thống kê tỉnh Lạng Sơn, năm 2008) Vùng na tập trung nhiều xã Chi Lăng, thị trấn Chi Lăng, thị trấn Đồng Mô, xã Mai Sao, [21] Với hƣơng vị đặc trƣng giá trị dinh dƣỡng, na xứng đáng đƣợc xếp vào loại ăn nhiệt đới có giá trị Chính nhờ giá trị quan trọng nên năm gần đây, diện tích sản lƣợng na giới nói chung nƣớc ta nói riêng tăng liên tục Kết cho thấy, hệ số tƣơng đồng cặp mẫu Na bở nghiên cứu nằm khoảng từ 0,214 (mẫu B3 B4) đến 0,968 (mẫu B2 B7) Hệ số tƣơng đồng di truyền phản ánh quan hệ di truyền mẫu Na bở Hệ số tƣơng đồng mẫu lớn khoảng cách di truyền nhỏ ngƣợc lại mẫu có hệ số tƣơng đồng thấp mối quan hệ di truyền chúng xa Mẫu B4 có khoảng cách di truyền xa với mẫu khác từ 0,450 (1- 0,550) đến 0,786 (1- 0,214), có khoảng cách di truyền xa với mẫu B3 0,786, mẫu B3 B4 thu Lâu Thƣợng – huyện Võ Nhai – tỉnh Thái Nguyên nên có ý nghĩa chọn tạo giống Mẫu B7 (thu Thị trấn huyện Võ Nhai - tỉnh Thái Nguyên) có mức độ tƣơng đồng di truyền gần với tất mẫu trừ mẫu B4 Mẫu B7 có mức độ tƣơng đồng di truyền gần với mẫu B2 (0,968) Giản đồ phả hệ di truyền hay sơ đồ hình thể mối quan hệ di truyền mẫu nghiên cứu đƣợc trình bày hình 3.8 Nhóm Nhóm Hệ số tƣơng đồng Hình 3.8 Sơ đồ hình thể mối quan hệ di truyền mẫu Na bở Sơ đồ hình tính theo hệ số Jaccard kiểu phân nhóm UPGMA mức độ sai khác di truyền mẫu Na bở Mức độ khác đƣợc biểu 36 hệ số sai khác mẫu Các mẫu có hệ số di truyền giống tƣơng tự đƣợc xếp thành nhóm, nhóm lại có liên hệ với Qua hình 3.8, cho thấy mẫu Na bở đƣợc chia thành nhóm (kí hiệu Nhóm Nhóm 2) với mức độ tƣơng đồng di truyền 0,34 (34%) Nhóm gồm có mẫu chia thành phân nhóm với mức tƣơng đồng di truyền tƣơng đối 0,64 (64%) Phân nhóm gồm mẫu: B1, phân nhóm gồm mẫu: B2, B7, B3, B5, B6 Trong đó, B2 B7 có hệ số tƣơng đồng cao 0,97 (97%) Nhóm có mẫu B4, mức độ tƣơng đồng di truyền 0,34 (34%) với nhóm Hệ số tƣơng đồng di truyền mẫu B4 với nhóm cịn lại 0,34 (34%) mức thấp, hệ số tƣơng đồng di truyền B2 B7 lại cao 0,97 (97%) Kết phân tích cho thấy hệ số tƣơng đồng di truyền mẫu dao động từ 0,34 đến 0,97 mức độ đa dạng di truyền mẫu nghiên cứu dao động từ 0,03 (3%) đến 0,66 (66%) Nhƣ vậy, mẫu Na bở phân tích có mức độ đa dạng di truyền cao Kĩ thuật RAPD đƣợc nhiều tác giả Thế giới sử dụng để phân tích đa dạng di truyền lồi chi Annona Dựa vào việc sử dụng thị RAPD, Jennifer Brow cs (2003) nghiên cứu mối quan hệ di truyền giống thuộc loài Annona muricata L., có giống đƣợc thu thập Venezuela Brazil Mức độ tƣơng đồng di truyền dao động từ 0,2627 đến 1.000, hệ số trung bình 0,5333% Israr Ahmad cs (2010) nghiên cứu đánh giá mối quan hệ bốn loài thuộc chi Annona đƣợc thu thập từ nhiều nơi khác miền nam đảo Andaman với 20 mồi RAPD, kết phân tích với mồi RAPD cho thấy, mức độ tƣơng đồng di truyền dao động từ 0,31 (31%) đến 0,83 (83%) Hasan cs (2017) phân tích đa dạng di truyền loài Annona muricata L khu vực tây Java Indonesia thị RAPD Sử dụng thị RAPD với mẫu thu đƣợc kết khoảng cách di truyền đƣợc tính tốn dựa 37 hệ số tƣơng đồng Jaccard sử dụng phần mềm NTSYS-pc cho kết hệ số tƣơng đồng di truyền loài dao động từ 0,451 đến 0,902 cho thấy mối quan hệ mẫu nghiên cứu chặt chẽ Với kết nghiên cứu cho thấy mức độ tƣơng đồng di truyền mẫu nghiên cứu có khoảng cách di truyền xa Khoảng cách di truyền xa có ý nghĩa quan trọng cơng tác bảo tồn, nghiên cứu chọn tạo giống, đặc biệt lai tạo giống 38 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận: Với việc sử dụng thị phân tử RAPD phân tích đa dạng di truyền mẫu Na bở thu đƣợc tỉnh Thái Nguyên, đạt đƣợc số kết sau: 1) Tách chiết thành công DNA tổng số từ mẫu Na bở cho kết tốt, băng DNA nét, đủ hàm lƣợng chất lƣợng để thực phản ứng PCR-RAPD 2) Trong 21 mồi ngẫu nhiên sử dụng, chọn đƣợc mồi cho tỷ lệ phân đoạn đa hình cao mồi CP13, CP06, CP15, CP16, OPE14, OPG13 OPB18 3) Kết phân tích mức độ tƣơng đồng di truyền mẫu Na bở với 21 mồi ngẫu nhiên cho thấy mẫu Na bở nghiên cứu có hệ số đồng dạng di truyền phát sinh nằm khoảng từ 0,34 đến 0,97, tƣơng tứng với mức độ sai khác di truyền từ 3% đến 66% Chia thành nhóm lớn: nhóm gồm mẫu (B1, B2, B7, B3, B5 B6), nhóm có mẫu B4 với mức độ tƣơng đồng di truyền với nhóm 0,34 (34%) Hai mẫu Na bở B2 B7 có hệ số tƣơng đồng di truyền cao 0,97 (97%) Kiến nghị: 1) Với mẫu B2 B7 cần có thời gian PCR – RAPD với nhiều mồi để thu đƣợc kết tốt 2) Do điều kiện lấy mẫu xa nhƣ hạn chế mặt thời gian nên số lƣợng mẫu làm thí nghiệm khơng nhiều (7 mẫu), cần tiếp tục nghiên cứu với số lƣợng mẫu nhiều hơn, nhƣ cần sử dụng nhiều mồi hơn, để thu đƣợc kết có độ xác cao làm sở cho việc bảo tồn phát triển nguồn gen giống Na bở 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Nguyễn Thanh Bình, Đặng Trọng Lƣơng, Lê Huy Hàm (2009) Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống bƣởi địa Việt Nam (Citrus grandis) thị Microsatellite Tạp chí Cơng nghệ Sinh học, 7(4): 485 - 492 Đỗ Đình Ca (1992) Khả triển vọng phát triển quýt số ăn có múi khác vùng Bắc Quang - Hà Giang Luận án tiến sĩ, tr 36 - 37 Trần Nhân Dũng Trần Thị Lê Quyên (2012) Nghiên cứu đa dạng di truyền giống, dòng măng cụt dựa dấu phân tử ISSR tỉnh Bình Dƣơng.Tạp chí khoa học, 23a: 253 – 261 Trần Nhân Dũng, Đỗ Tấn Khang (2012) Nghiên cứu đa dạng di truyền 36 giống xoài đƣợc thu thập tỉnh Việt Namvới kết hợp tƣơng quan phân tích AFLP ITS Tạp chí khoa học, 22a: 175 – 185 Nguyễn Hữu Hiệp, Trần Nhân Dũng, Đặng Thanh Sơn, Nguyễn Văn Đƣợc (2004) Đa dạng sinh học nhóm có múi huyện Gị Quao, tỉnh Kiên Giang Tạp chí Khoa học, 1: 111 -121 Vũ Văn Hiếu, Nông Thị Huệ, Nguyễn Thị Oanh, Ninh Thị Thảo, Vũ Quang Sáng, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo (2015) Phân tích đa dạng di truyền mẫu giống mẫu cam sành Hà Giang thị RAPD ISSR Tạp chí khoa học vàphát triển, 13(6): 867 – 875 Nguyễn Thanh Nhàn, Nguyễn Minh Châu, Tokurou Shimizu, Mitsuo Omura (2004) Ứng dụng RAPD marker phân biệt giống phân tích nhóm giống/lồi thuộc chi Citrus Việt Nam Kết nghiên cứu khoa học công nghệ Rau Quả 2002- 2003 Nhà xuất Nông nghiệp tr 48 - 56 Nguyễn Bá Phú, Nguyễn Bảo Vệ, Bùi Thị Cẩm Hƣờng, Trần Nhân Dũng (2011) Nhận diện xác định mối quan hệ di truyền hai cá thể quýt đƣờng không hột đƣợc phát Đồng sông Cửu Long dấu phân tử DNA Tạp chí Khoa học, 20a: 108 - 118 Trần Thế Tục “Kĩ thuật trồng chăm sóc na – Thanh long”, NXB Nông nghiệp Hà Nội 2008, tr 7-36 10 Trần Thị Oanh Yến, Nguyễn Ngọc Thi, Luro Francois (2004) Phân biệt tính đa dạng di truyền nguồn gen ăn có múi Việt Nam Microsatellite marker Kết nghiên cứu khoa học công nghệ Rau Quả 2002-2003 NXB Nông nghiệp- tr 57 - 66 11 Thông tƣ 51/TT-BNNPTNT Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn Số: 51/2014/TT-BNNPTNT 12 Niên giám thống kê tỉnh Lạng Sơn, năm 2008 Tài liệu Tiếng Anh: 13 BrownJennifer, Hernán Laurentín, Martha Dávila (2003) Genetic relationships between nine Annona muricata L accessions using RAPD markers Fruitsvol 58: 255 – 259 14 Ebiamadon Andi Brisibe, Nneka Constance Ogbonna, Peter Nkachukwu Chukwurah (2017) Characterization and selection of exploitable genetic diversity in soursop (Annona muricata Linn.) accessions based on phenotypic attributes and RAPD markers Agroforestry Systems, 91(4): 781–793 15 Hasan A E Z., Bermawie N., Julistiono H., Riyanti E I., Hasim, Artika I M and Khana P (2017) Genetic Diversity Analysis of Soursop (Annona muricata L.) in West Java Region of Indonesia Using RAPD Markers Annual Research & Review in Biology, 14(6): - 16 Israr Ahmad, Bhagat S., Sharma T.V.R.S., Krishna Kumar, Simachalam P and Srivastava R.C, (2010) ISSR and RAPD marker based DNA fingerprinting and diversity assessment of Annona spp in South Andamans Indian Hort J 67(2): 147-151 17 Suratman, Ari Pitoyo, Sri Mulyani, Suranto (2015) Assessment of genetic diversity among soursop (Annona muricata) populations from Java, Indonesia using RAPD markers Biodiversitas, 16: 247 - 253 18 Ronning C.M and Schnell R.J (1995) Using Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) Markers to Identify Annona Cultivars J AMER SOC HORT SCI 120(5):726 - 729 Tài liệu Internet 19 http://uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/325 20 https://chatmasterweb.wordpress.com/2013/04/23/y-tuong-khai-thac-cay-na/ 21 http://dantocmiennui.vn/kinh-nghiem-lam-an/de-qua-na-chi-lang-vuon-ra-thegioi/141746.html 22 https://www.pinterest.com/pin/510595676486992555/ 23 https://cayanquatrongsanvuon.wordpress.com/cay-an-qua-trong-san-vuon/cayna/ 24 https://vov.vn/kinh-te/lam-giau-tu-cay-na-tren-vung-dat-son-la-429394.vov 25 http://vnbiology.blogspot.com/2014/01/chi-thi-phan-tu-molecular-marker.html PHỤ LỤC Phu lục 01 Số liệu mã hóa băng DNA thu đƣợc điện di 21 mồi RAPD CP08 B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 170 0 0 0 220 1 0 0 300 1 0 0 390 1 1 450 0 0 0 480 0 0 0 500 0 1 600 0 0 700 0 1 720 0 0 0 800 0 0 850 0 0 900 0 1 1000 0 1 1100 0 1 1200 0 1 1400 0 0 1800 0 0 200 0 0 350 0 1 370 1 0 0 950 0 0 0 1100 0 0 0 1500 0 0 0 1600 0 0 (bp) CP13 CP03 200 0 0 0 250 1 0 0 260 0 1 320 1 1 400 0 1 1 500 0 1 600 0 1 700 0 1 800 0 0 1000 0 0 1500 0 0 1600 0 0 1700 0 0 250 0 1 300 0 0 0 400 0 0 0 480 0 0 0 500 1 0 0 600 0 0 0 700 0 0 0 800 0 0 0 1000 0 1 1600 0 0 1700 0 1 300 1 0 450 1 0 0 560 1 0 0 820 0 0 900 0 1 1000 0 0 1100 0 1 CP06 CP09 1300 0 1 1400 0 0 0 1500 0 1 1800 0 0 400 0 1 550 0 1 1 700 0 1 900 0 1 1000 0 1 1400 0 1 1500 0 0 1600 0 0 0 210 1 0 0 280 0 1 1 300 0 0 500 0 0 750 0 0 900 0 1 1000 0 0 1300 0 1 1400 0 0 1500 0 0 2000 0 0 2200 0 0 350 0 1 420 0 0 0 600 0 1 700 0 0 0 950 0 0 1400 0 0 CP19 CP15 CP16 1500 0 0 1600 0 0 1700 0 0 200 0 0 0 300 0 0 0 320 1 1 370 0 0 0 400 0 0 0 600 0 0 700 1 1 800 1 1 900 0 1 1100 1 0 1200 0 1 1300 1 0 1400 1 1500 0 1 1600 0 0 1700 0 0 200 0 0 0 380 1 0 0 400 1 1 480 0 0 500 0 0 600 0 1 700 0 1 900 1 1 0 1000 0 1 1200 1 1 1300 0 1 1500 0 1 OPB10 OPE20 1600 0 0 1700 0 0 220 1 0 0 300 0 0 400 0 0 500 0 0 600 0 0 0 700 0 0 800 0 0 900 0 0 1000 0 0 1200 0 0 300 0 0 500 0 0 900 0 0 1300 0 0 200 1 1 0 280 0 1 0 300 0 0 0 350 0 0 0 400 0 0 1 430 1 0 550 0 0 0 700 0 1 800 0 1 900 0 1 1000 0 1 1200 0 1 1 1400 0 0 1500 0 0 RA46 RA142 CP02 1600 0 0 200 0 0 0 380 0 1 400 0 1 500 0 1 700 1 0 800 0 0 900 0 0 1000 0 0 1200 0 0 220 0 1 1 300 0 1 1 380 0 0 400 0 0 1 450 0 0 500 0 1 580 0 1 680 0 1 700 0 0 800 0 0 950 0 1 1100 0 0 220 0 1 0 350 0 0 380 0 0 0 400 0 0 500 0 0 800 0 0 1100 0 0 1200 0 0 OPE14 OPD11 RA159 RM01 300 0 1 1 500 0 1 600 0 1 800 0 0 900 0 1 1000 0 0 200 0 0 380 0 0 500 0 1 600 0 0 780 0 0 900 0 0 980 0 0 1100 0 0 1600 0 0 500 1 1 0 1100 0 0 200 0 1 300 0 0 320 1 0 0 400 0 0 0 500 0 0 0 600 0 0 700 0 1 750 0 0 800 0 0 900 0 1 1000 0 1 1100 0 0 RM02 OPG13 OPB18 1300 0 0 1600 0 0 200 1 0 0 220 0 0 1 350 0 1 400 0 1 500 1 1 0 600 0 1 700 0 0 800 0 0 900 0 1 1000 0 0 1200 0 1 1300 0 1 1600 0 0 0 CP17