Nghiên cứu ảnh hưởng của ánh sáng đèn led và chất điều hòa sinh trưởng tới sự sinh trưởng và phát triển của lan phi điệp tím (dendrobium anosmum)

LỜI CẢM ƠN Nhằm đánh giá chất lƣợng học tập sinh viên hồn tất chƣơng trình đào tạo sinh viên trƣờng Đại học Lâm nghiệp, đƣợc đồng ý Ban Chủ nhiệm Viện Công nghệ sinh học, môn công nghệ tế bào thực vật, Em tiến hành thực đề tài nghien cứu: Nghiên cứu ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED chất điều hòa sinh trƣởng tới sinh trƣởng lan phi điệp tím (Dendrobium anosmum) dƣới hƣớng dẫn PGS,TS, Nguyễn Văn Việt Sau thời gian nghiên cứu tinh thần khẩn trƣơng tích cực nghiên cứu học hỏi, theo chƣơng trình đạo tạo khóa 59 (2014 – 2018) đến nghiên cứu tƣơng đối hoàn thành, Có đƣợc kết này, trƣớc hết tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo toàn thể cán - viên chức trƣờng Đại học Lâm nghiệp Viện công nghệ sinh học tạo điều kiện thuận lợi để em hoàn thành tốt nhiệm vụ học tập Đặc biệt, tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc tới thầy PGS.TS, Nguyễn Văn Việt tận tâm hƣớng dẫn, bảo truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình nghiên cứu đề tài Tơi xin cảm ơn thầy cô, anh chị viện công nghệ sinh học – trƣờng Đại học Lâm nghiệp giúp đỡ tạo điều kiện cho em hồn thành khóa luận tốt nghiệp Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, bạn bè ngƣời động viên, khích lệ suốt q trình học tập hồn thành đề tài khóa luận Tuy cố gắng để hồn thiện chun đề nghiên cứu này, song thời gian trình độ có hạn nên báo cáo khóa luận khơng chánh khỏi sai sót, kính mong thầy bạn chân thành đóng góp để báo cáo khóa luận tơi đƣợc hồn thiện Hà Nội, Ngày 15 tháng năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Thành Trung i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, BIỂU ĐỒ vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Lan hoàng thảo phi điệp tím (Dendrobium anosmum Lindl) 1.2 Tổng quan nuôi cấy invitro 1.2.1 Khái niệm nuôi cấy in vitro 1.2.2 Cơ sở di truyền nuôi cấy mô tế bào 1.2.3 Các giai đoạn trình nhân giống in vitro 1.2.4 Những ƣu điểm hạn chế vi nhân giống 1.3 Tổng quan ánh sáng thực vật 10 1.3.1 Vai trò ánh sáng đến trình quang hợp thực vật 10 1.3.2 Vai trò ánh sáng trình sinh trƣởng phát triển thực vật 11 1.3.3 Vai trò số ánh sáng đơn sắc đến đời sống thực vật 14 1.3.4 Vai trò ánh sáng nhân giống in vitro thực vật 15 1.3.5 Đèn LED (Light-emitting diode) 17 CHƢƠNG MỤC TIÊU - NỘI DUNG - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Mục tiêu 24 2.2 Nội dung nghiên cứu 24 2.3 Đối tƣợng - Phạm vi nghiên cứu 24 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.4.1 Phƣơng pháp luận 25 2.4.2 Phƣơng pháp thực nghiệm 25 ii 2.5 Phƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 29 3.2 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả nhân nhanh chồi 31 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ 33 3.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ 35 CHƢƠNG KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 38 4.1 Kết luận 38 4.2 Tồn 38 4.3 Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT Nội dung chữ viết tắt STT Chữ viết tắt AS Ánh sáng BAP 6- Benzyl Amino Purin KH&CN Khoa học công nghệ LED Đi ốt phát quang (Light – Emitting diode) Môi trƣờng nuôi cấy MS Murashige Skoog (1962) NAA Axit α-naphtaleneacetic KI Kinetin IAA Axit β-indol-acetic TB Trung bình 10 STT Số thứ tự iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 25 Bảng 2.2 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến giai đoạn nhân nhanh chồi 26 Bảng 2.3 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ 27 Bảng 2.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ 28 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 29 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả nhân nhanh chồi 31 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ 33 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ 35 v DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH, BIỂU ĐỒ Hình 1.1 Hoa phong lan Hồng thảo phi điệp tím Hình 1.2 Các bƣớc sóng ánh sáng hấp thu bƣớc sóng loại sắc tố quang hợp cƣờng độ quang hợp Anacharis sp 11 Biểu đồ 3.1 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 30 Ảnh 3.1 Một số hình ảnh lan phi điệp tím giai đoạn nhân nhanh chồi, 30 Biểu đồ 3.2 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả nhân nhanh chồi 32 Ảnh 3.2 Một số hình ảnh chồi lan đƣợc ni dƣới ánh sáng đèn LED 32 Biểu đồ 3.3 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ 34 Ảnh 3.3 Một số hình ảnh lan phi điệp tím giai đoạn rễ 34 Biểu đồ 3.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ 36 Ảnh 3.4 Một số hình ảnh rễ lan đƣợc nuôi dƣới ánh sáng đèn LED 36 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Lan giới loài hoa, hoa lan loài hoa đẹp nhất, Hoa lan đƣợc coi loài hoa tinh khiết, hoa vƣơng giả cao sang vua loài hoa, Hoa lan khơng đẹp màu sắc mà cịn đẹp hình dáng, đẹp hoa lan thể từ đƣờng nét cánh hoa tao nhã đến dạng hình thân lá, cành duyên dáng Việt Nam quốc gia thuộc vùng khí hậu nhiệt đới thích hợp cho phát triển loài phong lan Theo Phong lan Việt Nam Trần Hợp nƣớc ta có 137 - 140 chi với 1000 loài phong lan, loài lan đẹp riêng Lan rừng khơng rực rỡ màu sắc nhƣ giống lan ngoại nhập nhƣng lại đẹp tự nhiên phần lớn có hƣơng thơm ln đƣợc ngƣời chơi lan ƣa chuộng Thế giới lan rừng phong phú với nhiều chủng loại, chi phổ biến chi Hoàng thảo (Dendrobium) Hiện nay, Dendrobium đƣợc trồng nhiều có giá trị kinh tế cao bên cạnh giá trị thẩm mỹ mà Dendrobium lại Dendrobium đƣợc tách chiết để phục vụ cho số ngành công nghiệp mỹ phẩm, y học Với giá trị nhƣ hoa lan Dendrobium hứa hẹn mang lại nguồn doanh thu to lớn cho ngành sản xuất, kinh doanh mặt hàng Chi lan hoàng thảo (Dendrobium) chi lớn họ lan (Orchidaceae) giới có đến 1600 lồi phân bố trải dài từ Triều Tiên, Nhật Bản qua Đông Dƣơng, Malaysia, Indonesia đến Australia đảo pơlynesi Ở Việt Nam chi có đến 100 lồi xếp 14 tơng phân biệt phức tạp thân (củ giả), lá, hoa, Lan phi điệp (Dendrobium anosmum) loài chi hoàng thảo (Dendrobium) Đặc điểm loài hoa thƣờng mọc dọc theo đốt 2/3 thân phía Tùy vùng miền xuất xứ mà hình dáng hoa khác nhau, độ đậm nhạt khác nhau, độ bay cánh, hình dáng môi hoa, phân bố màu sắc khác Nguồn giống lan rừng ngày cạn kiệt, khóm lan rừng ngồi tự nhiên cịn khai thác cạn kiệt ngƣời dân Cần có phƣơng pháp nhân giống phù hợp đạt hiệu cao để giảm thiểu việc khai thác lan rừng Đồng thời giai đoạn sinh trƣởng, phát triển cần có chế độ chăm sóc khác phù hợp với giai đoạn vùng miền Hiện nay, đèn huỳnh quang nguồn chiếu sáng đƣợc sử dụng phịng ni cấy mơ thực vật Tuy nhiên, nguồn chiếu sáng phối trộn nhiều vùng quang phổ có bƣớc sóng lớn, có vùng bƣớc sóng ngắn khơng có lợi cho sinh trƣởng thực vật, có số phổ ánh sáng khơng cần thiết Hơn nữa, đèn huỳnh quang có tuổi thọ thấp, tiêu tốn nhiều điện phát nhiệt trình thắp sáng nên phải tiêu tốn thêm lƣợng điện làm mát để ổn định nhiệt độ phịng ni cấy Vì vậy, phát triển hệ thống chiếu sáng nhằm hạn chế đƣợc nhƣợc điểm mang lại lợi ích đáng kể vi nhân giống thực vật Nguồn sáng đƣợc nghiên cứu quan tâm để sử dụng thay đèn huỳnh quang đèn LED (Light emitting dioded) Đèn LED đƣợc trọng kích thƣớc thể tích nhỏ, tuổi thọ cao vùng quang phổ đƣợc kiểm soát Nhiều kết nghiên cứu đèn LED (Tanaka Sakanishi, 1980; Goins cs., 1997; Lian cs., 2002; Nhut, 2002; Nam cs., 2012) cho thấy ánh sáng đơn sắc đỏ, ánh sáng đơn sắc xanh phối hợp ánh sáng đỏ xanh có tác dụng kích thích sinh trƣởng, tăng chất lƣợng giống Tuy nhiên, loại trồng giai đoạn sinh trƣởng phản ứng với điều kiện chiếu sáng hoàn toàn khác Xuất phát từ vấn đề trên, tiến hành thực đề tài: Nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng đèn LED chất điều hòa sinh trưởng tới sinh trưởng phát triển lan phi điệp tím (Dendrobium anosmum) CHƢƠNG TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Lan hoàng thảo phi điệp tím (Dendrobium anosmum Lindl)  Vị trí phân loại, nguồn gốc Giới: Plantae Bộ: Asparagales Họ: Orchidaceae Chi: Dendrobium Loài: D Anosmum Tên khoa học : Dendrobium anosmum Hình 1.1 Hoa phong lan Hồng thảo phi điệp tím (Nguồn: phonglanrung.com)  Đặc điểm hình thái Lan phi điệp tím ( Dendrobium anosmum) giống lan thƣờng mọc quốc gia thuộc vùng Đông Nam Á nhƣng phổ thơng khắp giới dễ trồng, nhiều hoa hƣơng thơm ngào ngạt Thân lan dài tới 1,20 m buông rũ xuống, Lá mọc đối cách dài 8-12 cm, rộng từ 4-7 cm, hoa to tới 10 cm mọc từ 1-3 đốt rụng lá, nở vào mùa xuân, Dendrobium anosmum có hai màu sắc chính: tím hồng trắng Tuy nhiên có nhiều biến dạng hồng nhạt, hồng thẫm cánh trắng lƣỡi tím, nhƣng dễ nhầm lẫn với Dendrobium superbum ngƣời Hawaii gọi Dendrobium honohono có nghĩa mọc đối cách Ngƣời Việt thƣờng gọi Dã Hạc, Lƣỡng điểm hạc, Phi điệp Lan thƣờng mọc cành độ cao khoảng 1000-1300 m rừng thuộc Đô Lƣơng, Vinh, Krong Pha, Đà Lạt, Đắc Lắc Hƣơng thơm thực ngào ngạt có ngƣời khơng chịu nổi, Dù sắc hoa có khác nhƣng tất lâu tàn 3-4 tuần lễ thơm Một khỏe mạnh tới 50-70 hoa Lan cần nhiều ánh sáng,trồng nắng với lƣới che Nhiệt độ từ 600F 150C) vào ban đêm 950F (350C) vào ban ngày  Đặc điểm sinh học  Rễ hoàng thảo phi điệp tím thuộc loại rễ bì sinh, xung quanh rẽ thật đƣợc bao bọc lớp mô xốp giúp dễ dàng hút nƣớc, muối khoáng ngăn chặn ánh sáng mặt trời gay gắt Chóp rễ có màu xanh cây, phần rễ có sắc lạp khơng bị ngăn mơ xốp nên giúp quang hợp  Thân hồng thảo phi điệp tím thuộc nhóm lan thân có giả hành, Giả hành chứa diệp lục, dự trữ nƣớc chất dinh dƣỡng cần thiết cho phát triển giả hành Cấu tạo giả hành gồm nhiều mô mềm chứa đầy dịch nhầy, phía ngồi có lớp biểu bì với vách tế bào dày, nhẵn bóng bảo vệ để tránh nƣớc mặt trời Củ giả hành có màu xanh bóng nên với làm nhiệm vụ quang hợp[4]  Lá quan dinh dƣỡng hoa lan, xƣởng chế tạo chất dinh dƣỡng quang hợp Xếp thành hai dãy đối thân (lá đối), có hình xoang, gân chạy song song khe lõm xuống, rụng tạo thành giả hành  Hoa mọc giả hành mà mọc giả hành cũ Trên cánh có phủ lơng mịn có ánh kim, lƣỡi thƣờng có hai mặt tím đậm, hƣơng thơm ngào ngạt Bên hoa có cột nhị nhụy nằm hoa mang phần đực phía phần phía trƣớc mặt Nhị gồm hai phần bao phấn hốc phấn, Bao phấn nằm cột nhị nhụy cịn hốc phấn lõm lại mang khối phấn thƣờng song song với bao phấn, Khối phấn gồm tồn hạt phấn dính lại với cứng 88.33 90 81.1 80 70 61.65 60 50 35.43 40 30 20 10 Huỳnh quang (ĐC) LED Đỏ LED Xanh LED Trắng Biểu đồ 3.2 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả nhân nhanh chồi b a Ảnh 3.2 Một số hình ảnh chồi lan đƣợc ni dƣới ánh sáng đèn LED Ghi chú: a) Chồi lan công thức ánh sáng đèn LED xanh b) Chồi lan công thức ánh sáng đèn LED trắng Kết phân tích phƣơng sai ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả nhân nhanh chồi lan phi :Ftính(16,022) > Fcrit (4,066), chứng tỏ kết khác biệt công thức thí nghiệm có ý nghĩa 32 Qua kết bảng 3.2 biểu đồ 3.2 cho thấy điều kiện ánh sáng khác tác động khác đến tạo chồi trình nhân giống Với công thức môi trƣờng nhân nhanh: MS + 30g/l đƣờng saccharose + 7g/l Agar + 100g/l dịch chiết khoai tây + 100g/l chuối tiêu chín + 0,6 mg/l BAP + 0,3 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA dƣới ảnh hƣởng loại đèn LED ta thấy: Công thức đèn xanh đạt tỷ lệ mẫu tạo chồi (35,43 %), số chồi TB/mẫu (7,06), chiều cao TB/chồi (2,16 cm) Công thức thí nghiệm đèn LED trắng có kết tốt nhất: tỷ lệ mẫu tạo chồi (88,33 %), tỷ lệ số chồi TB/mẫu (14,22) chiều cao TB/chồi (3,43), chất lƣợng chồi khỏe chuyển sang mơi trƣờng rễ để tạo hoàn chỉnh 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ Để tạo có đầy đủ quan đƣa nghiên cứu ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ lan phi điệp tím Khi chồi đƣợc tạo với số lƣợng đủ lớn đạt tiêu chuẩn bắt đầu tiến hành cắt cấy chuyển qua môi trƣờng tạo rễ MS + 30g/l saccharose + 7g/l Agar + 100g dịch chiết khoai tây, 100g chuối tiêu chín + chất điều hịa sinh trƣởng với nồng độ khác Thí nghiệm đƣợc tiến hành theo CT dƣới đây: Bảng 3.3 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ Chất ĐHST (mg/l) CTTN Tổng số mẫu cấy NAA IBA (mẫu) Tỷ lệ chồi rễ (%) Số rễ TB/mẫu (rễ) Chiều Số dài rễ ngày TB/mẫu rễ (cm) (ngày) CR1 0,3 30 65,08 4,37 0.97 32 CR2 0,3 30 67,40 5,1 1,16 30 CR3 0,1 0,2 30 72,45 5,5 0,77 30 CR4 0,2 0,2 30 75,68 6,53 0,56 29 CR5 0,4 0,6 30 87,29 7,37 1,57 31 CR6 0,5 0,2 30 83,21 6,02 1,33 32 CR7 0,1 0,3 30 77,15 5,45 1,24 29 33 87.29 90 83.21 80 70 72.45 65.08 77.15 75.68 67.4 60 50 40 30 20 10 CR1 CR2 CR3 CR4 CR5 CR6 CR7 Biểu đồ 3.3 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ a c b Ảnh 3.3 Một số hình ảnh lan phi điệp tím giai đoạn rễ Ghi chú: a, Rễ lan công thức CR1 b, Rễ lan công thức CR5 c, Rễ lan cơng thức CR6 Kết phân tích phƣơng sai ảnh hƣởng tổ hợp NAA IBA đến khả rễ lan phi điệp tím in vitro: Ftính(230,44) > Fcrit(2,847), chứng tỏ cơng thức thí nghiệm khác có ảnh hƣởng rõ rệt đến khả rễ 34 Số liệu bảng 3.3 cho thấy sau – tuần nuôi cấy môi trƣờng MS bổ sung chất ĐHST với công thức khác cho kết khác Nhìn vào bảng số liệu tơi chọn đƣợc công thức môi trƣờng CR5 cho kết tốt nhất: tỷ lệ rễ đạt (87,29 %), số rễ TB/mẫu (7,37), chiều dài rễ TB đạt 1,57 cm Nhƣ thí nghiệm tơi chọn cơng thức mơi trƣờng dinh dƣỡng CR5 (MS + 30g/l saccharose+ 7g/l Agar + 100g/l khoai tây + 100g/l chuối tiêu chín + 0,4mg/l NAA + 0,6mg/l IBA) để tiếp tục nghiên cứu hàm lƣợng chất điều hòa sinh trƣởng phù hợp cho chồi rễ tạo hoàn chỉnh 3.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ Cây lan phi điệp tím sau đƣơc nhân nhanh chồi,chồi đƣợc cắt đoạn dài cm, cấy vào mơi trƣờng tạo rễ có cơng thức thức cho kết tốt thí nghiệm 3: MS + 30g/l saccharose + 7g/l Agar + 100g dịch chiết khoai tây + 100g chuối tiêu chín + 0,4 mg/l NAA + 0,6 mg/l IBA Sau tuần nuôi cấy ta thấy điều kiện ánh sáng khác ảnh hƣởng đến khả rễ đƣợc mô tả bảng 3.4 dƣới đây: Bảng 3.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ CTTN Tổng mẫu cấy (mẫu) Tỷ lệ chồi rễ (%) Số rễ TB/mẫu (rễ) Chiều dài rễ TB/mẫu (cm) Chất lƣợng rễ Huỳnh quang (ĐC) 30 87,29 7,37 1,57 ++ LED Đỏ 30 94,6 8.57 2,27 +++ LED Xanh 30 73.8 4.20 0,93 + LED 30 92,4 6.55 1,85 ++ Trắng Ghi chú: +++ rễ khỏe,cứng cáp ; ++ rễ bình thường ; + rễ yếu, phát triển chậm 35 94.6 100 92.4 87.29 90 73.8 80 70 60 50 40 30 20 10 Huỳnh quang (ĐC) LED Đỏ LED Xanh LED Trắng Biểu đồ 3.4 Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ b a Ảnh 3.4 Một số hình ảnh rễ lan đƣợc ni dƣới ánh sáng đèn LED Ghi chú: a) Rễ lan công thức ánh sáng đèn LED trắng b) Rễ lan công thức ánh sáng đèn LED đỏ Kết phân tích phƣơng sai ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ: Ftính(19,532) > Fcrit(4,916), chứng tỏ kết khác biệt cơng thức thí nghiệm có ý nghĩa Qua kết bảng 3.4 biểu đồ 3.4 ta thấy điều kiện án sáng khác dẫn đến rễ khác q trình hình thành hồn chỉnh Với cơng thức môi trƣờng rễ MS + 30g/l saccharose + 7g/l Agar + 100g dịch chiết 36 khoai tây + 100g chuối tiêu chín + 0,4 mg/l NAA + 0,6 mg/l IBA dƣới ảnh hƣởng công thức đèn khác ta thấy : Công thức đèn LED xanh đạt tỷ lệ thấp về: tỷ lệ chồi rễ (73,8 %), số rễ TB/chồi (4,20) chiều dài rễ (0,93 cm) Kết tốt tiêu rễ công thức đèn LED đỏ: tỷ lệ chồi rễ (94,6 %),số rễ TB/chồi (8,57 ), chiều dài rễ (2,27 cm) chất lƣợng rễ tốt để tạo hoàn chỉnh 37 CHƢƠNG KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Đề tài nghiên cứu ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED chất ĐHST tới sinh trƣởng lan phi điệp tím ni in vitro đƣợc kết nhƣ sau: Môi trƣờng nhân nhanh tạo đa chồi : MS + 30g/l saccharose + 7g/l Agar + 100g/l khoai tây +100g/l chuối tiêu chín + 0,6 BAP mg/l + 0,3 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA cho kết tiêu chồi: tỷ lệ mẫu tạo chồi (81,10 %), số chồi TB/mẫu (12,45) chiều cao chồi TB/mẫu (3,07 cm) Điều kiện chiếu sáng ánh sáng LED trắng cho kết vƣợt trội chồi đạt đƣợc tỷ lệ mẫu tạo chồi (88,33%),số chồi TB/mẫu(14,22) chiều cao TB/mẫu (3,43 cm) Môi trƣờng tạo rễ: MS + 30g/l saccharose + 7g/l Agar + 100g/l khoai tây + 100g/l chuối tiêu chín + 0,4 mg/l NAA + 0,6mg/l IBA cho kết tiêu chồi: tỷ lệ mẫu tạo rễ (87,29 %), số chồi TB/mẫu (7,37) chiều dài rễ TB/mẫu(1,57 cm) Khả tạo rễ đƣợc nuôi dƣới điều kiện chiếu sáng ánh sáng đèn LED đỏ cho kết tốt tỷ lệ chồi rễ (94,6 %), số rễ TB/mẫu (8,57) chiều dài TB/mẫu (2,27 cm ) 4.2 Tồn – Do thời gian thực đề có hạn nên đề tài cịn tồn sau: Chƣa thử đƣợc nhiều thang nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng khác để nhân nhanh chồi Chƣa thử đƣợc nhiều thang nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng khác để rễ tạo hoàn chỉnh Chƣa thử đƣợc tổ hợp loại chất điều hòa sinh trƣởng với mức nồng độ khác Giới hạn thời gian sở vật chất nên thí nghiệm nghiên cứu ảnh hƣởng ánh sáng LED đến sinh trƣởng lan phi điệp tím ni 38 in vitro thực đƣợc công thức ánh sáng tƣơng ứng điều kiện chiếu sáng dƣới đèn LED 4.3 Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu với nhiều thang nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng để nhân nhanh chồi rễ tạo hồn chỉnh để đƣa cơng thức phù hợp cho hệ số nhân nhanh chồi rễ,nghiên cứu khả tăng trƣởng chồi lan phi điệp tím để quy trình đƣợc hồn thiện - Đề nghị tiếp tục nghiên cứu ảnh hƣởng đèn LED đến sinh trƣởng lan phi điệp tím với số cơng thức đèn LED hỗn hợp có thành phần tỉ lệ ánh sáng khác 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng việt Nguyễn Văn Kết, Nguyễn Thị Cúc, Nguyễn Trung Thành (2014) Khảo sát khả nhân giống Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana (Pierre) Sealy) in vitro Tạp chí khoa học ĐHQGHN: tập 30, số (2014) 17 – 25 Nguyễn Bá Nam, Nguyễn Phúc Huy, Vũ Quốc Luận, Nguyễn Đình Lâm, Dƣơng Tấn Nhựt (2014), “Hệ thống mới-Kết hợp công nghệ chiếu sáng LED truyền điện không dây-trong nghiên cứu sinh trƣởng Dâu tây (Fragaria SP,) ni cấy in vitro”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 12(4): 667-677 Nguyễn Bá Nam, Lê Thị Thanh, Lê Thị Thanh Trà, Vũ Quốc Luận, Nguyễn Đình Lâm, Dƣơng Tấn Nhựt (2014), “Ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED bổ sung vào ban đêm sinh trƣởng phát triển ban giống Cúc (đóa vàng, sapphire kim cƣơng) đƣợc trồng nhà kính”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 52(3): 311-328 Dƣơng Tấn Nhựt, Nguyễn Bá Nam (2009), Ảnh hƣởng hệ thống chiếu sáng đơn sắc lên sinh trƣởng phát triển hoa Cúc (Chrysanthemum morifolium cv, “Nút”) ni cấy in vitro, tạp chí Cơng nghệ sinh học, số 7(1): 93- 100 Dƣơng Tấn Nhựt, Nguyễn Bá Nam (2014), Đèn LED (Lightemitinhdiode) – nguồn sáng nhân tạo ni cấy mơ tế bào thực vật, Tạp chí Công nghệ Sinh học 12(3): 393-407 Nguyễn Thanh Phƣơng, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Hồng Thắm (2014), “Ảnh hƣởng số loại đèn chiếu sáng bình ni cấy đến sinh trƣởng, phát triển giống Cẩm chƣớng Hồng Hạc cấy mô”, Tạp chí khoa học phát triển 12(7): 1015-1022 Nguyễn Thị Mỹ Phƣợng (2014), “Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống in vitro trồng thử nghiệm lan gấm Ludisia discolor (Ker Gawler) Blume Đà nẵng”, khóa luận tốt nghiệp, Đại học Sƣ phạm-Đại học Đà Nẵng Nguyễn Thanh Sang, Nguyễn Bá Nam, Hoàng Thanh Tùng, Nguyễn Phúc Huy, Nguyễn Thị Kim Loan, Nguyễn Ngọc Thảo, Vũ Đức Trung, Nguyễn Văn An, Trần Thị Minh Loan, Nguyễn Văn Kết, Dƣơng Tấn Nhựt (2014), “Sinh trƣởng phát triển hàm lƣợng chlorophyll chồi cúc (Chrysanthemum Morifolium Ramat, CV) nuôi cấy in vitro dƣới ánh sáng LED”, Tạp chí Cơng nghệ Sinh học 12(2): 339-347 Nguyễn Thị Thứ (2009),”Nghiên cứu hồn thiện quy trình kĩ thuật nhân giống in vitro cho giống Mây đơn (Calamus simplicifolius Wei)”, Khóa luận tốt nghiệp, ĐH Lâm Nghiệp 10 Nguyễn Thị Út (2010) Ảnh hƣởng chất kích thích sinh trƣởng đến khả nhân hanh chồi in vitro Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn ).Tuyển tập báo cáo Hội nghị sinh viên Nghiên cứu khoa học lần thứ Đại học Đà Nẵng năm 2010 II Tài liệu tiếng anh Arditti J, Ernst R, 1993, Micropropagation of orchids, John Wiley, New York, USA Chen J,T, Chang C, Chang W,C, (1999), Direct somatic embryogenesis on leaf explants of Oncidium „Gower Ramsey‟ and subsequent plant regeneration, Plant Cell Reports, 19:143-149 Chen J,T, Chang W,C, (2001), Effects of auxins and cytokinins on direct somatic embryogenesis on leaf explants of Oncidium „Gower Ramsey‟, Plant Growth Regul, 34:229-232 Chen J,T, Chang W,C, (2003), Effect ofGA3, ancymidol, cycocel and paclobutrazol on direct somatic embryogenesis of Oncidium in vitro, Plant Cell Tissue Org, Cult, 72,105- 108 Gow W,P, Chen J,T, Chang W,C, (2008), Influence of growth regulators on direct embryo formation from leaf explants of Phalaenopsis orchids, Acta Physiol, Plant, 30:507-512 Gow W,P, Chen J,T, Chang W,C, (2009), Effects ofgenotype, light regime, explant position and orientation on direct somatic embryogenesis from leafexplants of Phalaenopsis orchids, Acta Physiol, Plant, 31:363-369 Huan L,V,T, Takamura T, Tanaka M, (2004), Callus formation and plant regeneration from callus through somatic embryo structures in Cymbidium orchid, Plant Science, 166:1443–1449 Ichihashi S, (1992), Micropropagation of Phalaenopsis through the culture of lateral buds from young flower stalks, Lindleyana, 7:208-215 hhii Y, Takamura T, Goi M, Tanaka M, (1998), Callus induction and somatic embryogenesis of Phalaenopsis, Plant Cell Reports, 17:446-450 10 Jheng F,Y, Do Y,Y, Liauh Y,W, Chung J,P, Huang P,L, (2006), Enhancement of growth and regeneration efficiency from embryogenic callus cultures of Oncidium „Gower Ramsey‟ by adjusting carbohydrate sources, Plant Science, 170:1133-1140 11 Mayer J,L,S, Stancato G,C, Appezzato-Da-Glória B, (2010), Direct regeneration of protocorm-like bodies (PLBs) from leaf apices of Oncidium flexuosum Sims (Orchidaceae), Plant Cell Tiss Organ Cult, 103(3):411-416 12 Mprel G,M, 1960, Producing virus-free cymbidiums, American Orchid Society Bulletin, 29: 495- 497 PHỤ BIỂU Phụ biểu Kết xử lý phƣơng sai số nhân tố ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi lan phi điệp tím in vitro Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average CN1 161,15 53,71667 20,07503 CN2 175,65 CN3 243,31 81,10333 24,45173 CN4 184,82 61,60667 2,601433 CN5 166,09 55,36333 4,818633 CN6 155,18 51,72667 4,029033 CN7 190,17 58,55 63,39 Variance 10,8829 0,6661 ANOVA Source of Variation PSS df MS F Between Groups value F crit 2,95E1760,1 293,35 Groups 135,0497 14 9,64641 Total 1895,15 20 Within 30,41028 07 2,847726 Phụ biểu Kết xử lý phƣơng sai nhân tố ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ lan phi điệp tím in vitro Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CR1 21,6 7,2 1,24 CR2 25,29 8,43 0,9139 CR3 34,13 11,37667 1,392933 CR4 38,65 12,88333 0,153733 CR5 82,69 27,56333 1,420933 CR6 68,58 CR7 42,25 14,08333 0,016033 22,86 0,0571 ANOVA Source of Variation PSS df MS F Between Groups value F crit 3,6E1026,057 171,0095 230,4429 Groups 10,38927 14 0,74209 Total 1036,446 20 Within 13 2,847726 Phụ biểu Kết xử lý phƣơng sai nhân tố ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả nhân nhanh chồi lan phi điệp tím in vitro SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 5,79 1,93 0,0273 4,8 1,6 0,03 3 3,39 1,13 0,0507 3,1 SS df 1,5782 0,526067 16,02234 0,00096 4,066181 0,032833 1,033333 0,023333 ANOVA Source of Variation MS F P-value F crit Between Groups Within Groups 0,262667 Total 1,840867 11 Phụ biểu Kết xử lý phƣơng sai nhân tố ảnh hƣởng ánh sáng đèn LED đến khả rễ lan phi điệp tím in vitro Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum 56,5 Average Variance 28,25 0,0128 85,64 0,6498 53,665 0,31205 75,505 0,19845 171,2 107,3 3 151,0 ANOVA PSource of Variation SS df 3887,33 Between Groups MS F value F crit 1295,77 19.5320 1,71E 4.9167 -07 0,29327 Within Groups 1,1731 Total 3888,51