Nghiên cứu ảnh hưởng của một số yếu tố đến nhân nhanh in vitro cây trầu bà cẩm thạch (epipremnum aureum)

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN NHÂN NHANH IN VITRO CÂY TRẦU BÀ CẨM THẠCH (Epipremnum aureum) HÀ NỘI - 2023 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN NHÂN NHANH IN VITRO CÂY TRẦU BÀ CẨM THẠCH (Epipremnum aureum) Người thực : LÊ TÚ UYÊN Mã sinh viên : 645035 Chuyên ngành : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Người thực hướng dẫn: PGS.TS ĐỒNG HUY GIỚI HÀ NỘI – 2023 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan: khóa luận tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thực cá nhân, thực dựa sở nghiên cứu lý thuyết, kiến thức chuyên ngành, nghiên cứu khảo sát tình hình thực tiễn hướng dẫn khoa học PGS.TS Đồng Huy Giới Các số liệu, kết quả, hình ảnh, bảng thành nghiên cứu cá nhân, chưa tùng sử dụng cơng trình nghiên cứu khoa học trước Tôi xin cam đoan thông tin, tài liệu tham khảo luận văn ghi rõ nguồn gốc Tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm lời cam đoan trước hội Đồng học viện Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên thực Lê Tú Uyên i LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, ngồi nỗ lực cố gắng thân, nhận nhiều quản tâm giúp đỡ nhiệt tình thầy cơ, bạn bè người thân Trước hết xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Bạn chủ nghiệm Khoa Công Nghệ Sinh Học với thầy truyền đạt cho than kiến thức, kỹ quý báu suốt thời gian học tập rèn luyện Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Đồng Huy Giới tận tình bảo hướng dẫn tơi thời gian học tập thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn tới anh chị Phòng 216 – Bộ môn Sinh Học tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tơi nhiệt tình q trình thực đề tài Cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bà hết lòng động viên giúp đỡ tạo điều kiện mặt vật chất lẫn tinh thần để tơi hoàn thành đề tài Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Sinh viên thực Lê Tú Uyên ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC III DANH MỤC BẢNG .v DANH MỤC HÌNH vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT viii PHẦN I: MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích thí nghiệm 1.3 Yêu cầu thí nghiệm PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .4 2.1 Giới thiệu chung chi Monstera Trầu bà cẩm thạch(Epipremnum aureum) 2.1.1 Sơ lược chi Monstera .4 2.1.2 Nguồn gốc - vị trí phân bố .4 2.1.3 Phân Loại 2.1.4 Đặc điểm thực vật .7 2.1.5 Đặc điểm sinh thái .7 2.1.6 Cách chăm sóc trầu bà 2.1.7 Ý nghĩa Trầu bà cẩm thạchlá xẻ đột biến 10 2.2 Nghiên cứu nhân giống invitro loại thuộc họ Ráy (Araceae) 10 2.2.1 Các nghiên cứu nước nhân giống invtro Trầu bà cẩm thạchvà số loại họ Ráy 10 2.2.2 Các nghiên cứu giới nhân giống invtro Trầu bà cẩm thạchvà số loại họ Ráy 13 2.3 Nghiên cứu ứng dụng nano bạc nhân giống invitro trồng 15 PHẦN III: VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 20 iii 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 20 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 20 3.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 20 3.2 Phương pháp nội dung nghiên cứu 20 3.2.1 Phương pháp nghiên cứu 20 3.2.2 Nội dung nghiên cứu 21 3.3 Các tiêu theo dõi 25 3.4 Điều kiện nuôi cấy 25 PHẦN IV: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 26 4.1 Tạo nguồn vật liệu khởi đầu 26 4.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nano bạc đến khả khử trùng mẫu trầu bà cẩm thạchcẩm thạch 26 4.1.2 Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử trùng nano bạc đến khả khử trùng mẫu trầu bà cẩm thạchcẩm thạch 29 4.2 Giai đoạn nhân nhanh in vitro Trầu bà 31 4.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA(Benzyl aminopurine) đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch 31 4.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch 34 4.3 Nội dung 3: Giai đoạn tạo hoàn chỉnh 37 4.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ α- NAA đến khả rễ Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch 37 4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch 39 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1: Ảnh hưởng nano bạc đến khả khử trùng mẫu 27 trầu bà cẩm thạch 27 Bảng 4.2: Ảnh hưởng nano bạc đến khả khử trùng mẫu trầu bà cẩm thạch 29 Bảng 4.3: Ảnh hưởng nồng độ BA(Benzyl aminopurine) đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạch 32 Bảng 4.4: Ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạch 34 Bảng 4.5: Ảnh hưởng nồng độ α- NAA đến khả rễ Trầu bà cẩm thạch 37 Bảng 4.6: Ảnh hưởng than hoạt tính đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạch 39 v DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Ảnh số trầu bà cẩm thạch thuộc họ Monstera Hình 2.2 : Ảnh thực tế trầu bà cẩm thạch .5 Hình 2.3 : Ảnh trầu bà cẩm thạch vàng Hình 2.4: Trầu bà cẩm thạch Nam Mỹ xẻ Hình 4.1: Đoạn thân mang mắt ngủ nuôi cấy sau khử trùng 27 Hình 4.2: Đoạn thân mang mắt ngủ nuôi cấy sau khử trùng 31 Hình 4.3: Cụm chồi Trầu bà cẩm thạch sau tuần nhân nhanh 34 Hình 4.4: Cụm chồi Trầu bà cẩm thạch sau tuần nhân nhanh 37 Hình 4.5: Sự hình thành rễ Trầu bà cẩm thạchl xẻ đột biến sau tuần nuôi cấy môi trường có bổ sung α- NAA 39 Hình 4.6 Sự hình thành rễ Trầu bà cẩm thạch xẻ đột biến sau tuần ni cấy mơi trường có bổ sung than hoạt tính 41 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TB Trung bình CT Công thức ĐC Đối chứng Nano Ag Nano bạc LSD0,05% Sai số tối thiểu có ý nghĩa CV% Hệ số biến động (Correlation of Variants) BA 6-Benzyl amino purine MS Murashige and skoog α- NAA Naphlene axetic acid vii TÓM TẮT Cây trầu bà cẩm thạch (Epipremnum aureum) loại kiểng có hình dạng lạ mắt với khảm vàng đặc biệt, chúng du nhập vào Việt Nam vài năm gần Cây khỏe mạnh, bị sâu bệnh hại, có giá trị kinh tế cao, có giá trị ý nghĩa mặt sức khỏe cịn có ý nghĩa phong thủy Cây thường trồng để trang trí nội thất văn phòng nhà Đề tài thực nhằm nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến nhân nhanh invitro trầu bà cẩm thạchcẩm thạch Kết cho thấy: (i) Nồng độ dung dịch nano bạc thích hợp để khử trùng mẫu đoạn thân chứa mắt ngủ Trầu bà Cẩm Thạch 125ppm, tỷ lệ mẫu sống đạt 57,03% thời gian khử trùng mẫu tốt 25ph, đạt tỷ lệ mẫu 57,34%; (ii) Môi trường MS + 30g/l sucrose + 3mg/l BA + 4ppm Nano bạc + 7g/L agar, pH=5,8 mơi trường thích hợp để nhân nhanh in vitro chồi trầu bà cẩm thạch Hệ số nhân chồi đạt 2,65 lần; số mọc 2,87 lá; chiều cao chồi TB 3,86cm;(iii) Môi trường MS + 30g/l sucrose + 0,4 mg/l α- NAA+ 100 mg/L than hoạt tính + 7g/L agar, pH=5,8 mơi trường thích hợp để tạo rễ trầu bà cẩm thạch Tỷ lệ tạo rễ đạt 100%; số rễ trung bình đạt 6,93 rễ/chồi; chiều dài rễ trung bình đạt 7,43 cm viii VARIATE V005 SLMM LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ============================================================== =============== CT 113.31 0.000 56.4362 1.35556 677778 NL 1.36 0.257 282.181 * RESIDUAL 352 175.327 498089 -* TOTAL (CORRECTED) 359 458.864 1.27817 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCAO FILE TN3CT1 9/ 2/23 20:48 - :PAGE THI NGHIEM VARIATE V006 CCAO LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES LN 49 SQUARES ============================================================== =============== CT 77.1599 ****** 0.000 15.4320 NL 488150E-01 244075E-01 3.12 0.044 * RESIDUAL 352 2.75701 783242E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 359 79.9658 222746 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3CT1 9/ 2/23 20:48 - :PAGE THI NGHIEM MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SCHOI SLMM CCAO 60 1.00000 0.316667 2.23000 60 1.48333 1.45000 3.23217 60 1.55000 1.96667 3.25417 60 2.23333 2.85000 3.74117 60 1.80000 2.66667 3.29583 60 1.48333 2.63333 3.39867 SE(N= 60) 0.656708E-01 0.911125E-01 0.114254E-01 50 5%LSD 352DF 0.182632 0.253386 0.317744E-01 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS SCHOI SLMM CCAO 120 1.60833 1.90833 3.18492 120 1.59167 2.05833 3.18267 120 1.57500 1.97500 3.20842 SE(N= 120) 0.464363E-01 0.644263E-01 0.807900E-02 5%LSD 352DF 0.129140 0.179171 0.224679E-01 -MEANS FOR EFFECT MTCHOI -MTCHOI NOS SCHOI 360 1.59167 SE(N= 360) SLMM 1.98056 CCAO 3.19200 0.000000 0.000000 0.000000 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 51 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3CT1 9/ 2/23 20:48 - :PAGE THI NGHIEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION VARIATE |NL GRAND MEAN |MTCHOI | 360) | | 360 0.8794 SLMM 0.0000 | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.2568 0.62665 0.50868 8.6 1.9806 1.1306 0.70575 3.9 0.0000 360 0.0444 1.5917 0.0000 360 CCAO 0.0000 SD/MEAN | SCHOI 0.0000 | OBS | C OF V |CT | NO | DEVIATION | (N= | STANDARD 3.1920 0.47196 0.88501E-01 0.15 0.0000 Phụ lục 2: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ nano bạc đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch BALANCED ANOVA FOR VARIATE SCHOI FILE TN4 9/ 2/23 22:28 - :PAGE THI NGHIEM VARIATE V004 SCHOI 52 LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ============================================================== =============== CT 28.7800 15.82 0.000 NL 126667 0.14 0.871 7.19500 633334E-01 * RESIDUAL 293 133.290 454915 -* TOTAL (CORRECTED) 299 162.197 542464 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE SLMM FILE TN4 9/ 2/23 22:28 - :PAGE THI NGHIEM VARIATE V005 SLMM LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ============================================================== =============== CT 8.03 0.000 14.7200 53 3.68000 NL 1.00667 1.10 0.336 503333 * RESIDUAL 293 134.310 458396 -* TOTAL (CORRECTED) 299 150.037 501795 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE CCAO FILE TN4 9/ 2/23 22:28 - :PAGE THI NGHIEM VARIATE V006 CCAO LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ============================================================== =============== CT 20.7268 ****** 0.000 NL 7.09 0.001 5.18170 289127E-01 144563E-01 * RESIDUAL 293 597575 203951E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 299 21.3533 714157E-01 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS 22:28 54 FILE TN4 9/ 2/23 - :PAGE THI NGHIEM MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SCHOI SLMM CCAO 60 2.11667 2.66667 3.29267 60 2.16667 2.71667 3.31950 60 2.86667 2.16667 3.86033 60 2.18333 2.43333 3.39433 60 1.98333 2.23333 3.05850 SE(N= 60) 0.870742E-01 0.874067E-01 0.583025E-02 5%LSD 293DF 0.242324 0.243250 0.162254E-01 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS SCHOI 100 2.24000 2.38000 3.37170 100 2.29000 2.52000 3.38850 100 2.26000 2.43000 3.39500 SE(N= 100) SLMM CCAO 0.674474E-01 0.677049E-01 0.451609E-02 55 5%LSD 293DF 0.187704 0.188420 0.125681E-01 -MEANS FOR EFFECT MTCHOI -MTCHOI NOS SCHOI 300 2.26333 SLMM CCAO 2.44333 SE(N= 300) 3.38507 0.000000 0.000000 0.000000 0.000000 0.000000 5%LSD 0DF 0.000000 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN4 9/ 2/23 22:28 - :PAGE THI NGHIEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION VARIATE |NL GRAND MEAN |MTCHOI | | C OF V |CT 300) SD/MEAN | % | | NO | DEVIATION | (N= | STANDARD BASED ON | 56 BASED ON OBS | | 300 0.8705 SLMM 0.0000 | 0.3356 0.73652 0.67447 2.98 2.4433 0.70837 0.67705 2.77 0.0000 300 0.0011 2.2633 0.0000 300 CCAO 0.0000 RESID SS | SCHOI 0.0000 TOTAL SS 3.3851 0.26724 0.45161E-01 1.3 0.0000 Phụ lục 3: Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ α- NAA đến khả rễ Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch BALANCED ANOVA FOR VARIATE SORETB FILE TN5 12/ 2/23 21: - :PAGE THI NGHIEM VARIATE V004 SORETB LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ============================================================== =============== CT ****** 0.000 234.481 58.6203 * RESIDUAL 220 187104 850471E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 224 234.668 1.04763 57 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDRTB FILE TN5 12/ 2/23 21: - :PAGE THI NGHIEM VARIATE V005 CDRTB LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ============================================================== =============== CT 50.9674 ****** 0.000 12.7418 * RESIDUAL 220 288090 130950E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 224 51.2554 228819 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 12/ 2/23 21: - :PAGE THI NGHIEM MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SORETB 58 CDRTB 45 2.29756 5.49933 45 3.36044 6.36000 45 5.30756 6.93000 45 4.36000 6.13000 45 3.36000 5.91000 SE(N= 45) 0.434734E-02 0.539444E-02 5%LSD 220DF 0.121152E-01 0.150333E-01 -MEANS FOR EFFECT MRRE -MRRE NOS SORETB 225 CDRTB 3.73711 6.16587 SE(N= 225) 0.000000 0.000000 5%LSD 0.000000 0.000000 0DF -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 12/ 2/23 21: - :PAGE THI NGHIEM F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION VARIATE |MRRE GRAND MEAN STANDARD | 59 DEVIATION C OF V |CT (N= | 225) SD/MEAN | % | | | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS | | | | SORETB 0.0000 3.7371 1.0235 0.29163E-01 0.8 225 6.1659 0.47835 0.36187E-01 0.6 0.0000 CDRTB 0.0000 225 0.0000 Phụ lục 4: Nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính đến khả nhân nhanh chồi Trầu bà cẩm thạchcẩm thạch SINGLE EFFECT ANOVA FOR UNBALANCED DATA FILE TN6 12/ 2/23 21:46 - :PAGE THI NGHIEM ANOVA FOR SINGLE EFFECT - CT VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB SRTB 23.371 0.90082E-03 22025943.75 7.2688 0.62982E-03 22011541.02 0.000 CDRTB 0.000 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - NL - 60 VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB SRTB 0.31151E-02 0.42196 222 0.01 0.11933E-02 0.13158 222 0.01 0.993 CDRTB 0.992 ANOVA FOR SINGLE EFFECT - MRR VARIATE TREATMENT MS - DF RESIDUAL MS - DF F-RATIO F-PROB SRTB Infinity 0.41822 224 Infinit Infinity 0.13042 224 Infinit 0.000 CDRTB 0.000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6 12/ 2/23 21:46 - :PAGE THI NGHIEM MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SRTB CDRTB 45 5.28000 6.63000 45 5.32000 6.75000 45 6.93000 7.43000 45 5.76000 7.12000 45 5.21000 7.54000 SE(N= 45) 0.447418E-02 0.374113E-02 61 5%LSD 220DF 0.124687E-01 0.104258E-01 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS SRTB CDRTB 74 5.70378 7.09797 75 5.70373 7.09413 76 5.69263 7.09000 SE(N= 75) 0.750075E-01 0.418860E-01 5%LSD 222DF 0.209021 0.116722 -MEANS FOR EFFECT MRR -MRR NOS 225 SRTB CDRTB 5.69999 7.09400 SE(N= 225) 0.431133E-01 0.240757E-01 5%LSD 224DF 0.120136 0.670877E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6 12/ 2/23 21:46 - :PAGE THI NGHIEM 62 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION VARIATE |NL GRAND MEAN |MRR | 225) | | SRTB 0.0000 CDRTB 0.0000 | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 5.7000 0.64670 0.64670 11.3 0.36114 0.36114 5.1 0.0000 225 0.9917 SD/MEAN | 225 0.9933 | OBS | C OF V |CT | NO | DEVIATION | (N= | STANDARD 7.0940 0.0000 63