Khả năng sinh tổng hợp axit béo không no đa nối đôi từ chủng nấm men hkc2

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Khả sinh tổng hợp axit béo không no đa nối đôi từ chủng nấm men HKC2 LƯU THỊ HUYỀN Ngành: Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Tô Kim Anh Viện: Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm HÀ NỘI, 4/2023 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Khả sinh tổng hợp axit béo không no đa nối đôi từ chủng nấm men HKC2 LƯU THỊ HUYỀN 201402020@student.hust.edu.vn Ngành: Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: PGS TS Tô Kim Anh Bộ môn: Viện: Vi sinh – hóa sinh – sinh học phân tử Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm HÀ NỘI, 4/2023 Chữ ký GVHD CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lâp – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Lưu Thị Huyền Đề tài luận văn: Khả sinh tổng hợp axit béo không no đa nối đôi từ chủng nấm men HKC2 Ngành: Công nghệ sinh học Mã số SV: 20202949M Tác giả, người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày… tháng … năm ……với nội dung sau: Ý kiến hội đồng Nội dung chỉnh sửa Đã chỉnh sủa - Loại bỏ phần PUFA động Giản lược tổng quan, tập trung vật thực vật vào đối tượng nghiên cứu - Lược bỏ phần đường sinh tổng hợp PUFA Chỉnh sửa lại tài liệu tham Đã chỉnh sửa lại, tên VSV viết khảo cho thống định dạng nghiêng Bổ sung phần mở đầu Đã bổ sung Bổ sung thêm từ viết tắt Đã bổ sung danh mục từ viết tắt Lỗi tả soạn thảo Đã chỉnh sửa Ngày tháng năm 2023 Giáo viên hướng dẫn Tác giả luận văn PGS TS Tô Kim Anh Lưu Thị Huyền CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG GS TS Trần Văn Cách LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng NGƯỜI THỰC HIỆN LƯU THỊ HUYỀN ĐỀ TÀI LUẬN VĂN Họ tên học viên: Lưu Thị Huyền MSHV: 20202949M Khóa: CH2020B Ngành: Cơng nghệ sinh học Tên đề tài: Khả sinh tổng hợp axit béo không no đa nối đôi từ chủng nấm men HKC2 Giáo viên hương dẫn: PGS TS Tô Kim Anh Ngày giao nhiệm vụ luận văn: Ngày hoàn thành luận văn: Giáo viên hướng dẫn Ký ghi rõ họ tên LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Tô Kim Anh, Bộ mơn Hóa Sinh – Vi Sinh – Sinh học phân tử, Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình hướng dẫn tạo điều kiện cho em tham gia nghiên cứu phịng thí nghiệm Kỹ thuật lên men – Trung tâm nghiên cứu phát triển cơng nghệ sinh học để em hồn thành luận văn thạc sỹ Em xin cảm ơn đến TS Phạm Tuấn Anh, Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình bảo, hướng dẫn em trình tham gia nghiên cứu Em xin cảm ơn TS Đàm Thúy Hằng, Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến giúp em suốt thời gian thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn đến tập thể giảng viên Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực Phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội giảng dạy truyền đạt kiến thức vô bổ ích cho em suốt q trình học tập Em xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể cán sinh viên nghiên cứu làm việc Trung tâm Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học – Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực Phẩm Đại học Bách khoa Hà Nội giúp đỡ tạo điều kiện nhiều cho em trình thực luận văn Cuối em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình bạn bè người thân động viên, khuyến khích, giúp đỡ em vượt qua khó khăn suốt trình học tập nghiên cứu TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN Sàng lọc chủng nấm men sinh tổng hợp PUFA nguồn carbon khác o Sàng lọc 97/110 chủng nấm men sinh tổng hợp lipid nhuộm màu Nile red, 12/57 chủng nấm men dương tính với thuốc thử TTC có khả sinh tổng hợp PUFA o Tuyển chọn chủng HKC2 sinh tổng hợp PUFA carbon khác xylose N-Acetylglucosamin Đánh giá tính an tồn định danh HKC2 thuộc chi Sakaguchia xây dựng phát sinh chủng loài dựa kết hợp so sánh đồng thời năm trình tự gen: ITS, D1/D2, RPB1, RPB2 TEF1 dựa thuật toán Maximum likelihood Bayesian Inference Đánh giá khả sinh tổng hợp PUFA nấm men HKC2 thay đổi thành phần môi trường o Khảo sát nồng độ YE nồng độ nồng độ carbon: Glucose (20-150 g/l), Xylose (50- 150 g/l) NAG (20-150 g/l) ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp PUFA nấm men HKC2 Đánh giá khả sinh tổng hợp lipid chức khác nấm men HKC2 o HKC2 tích lũy carotenoid cao đạt 67.91, 64.68 68.34 ߤg/ gSKK môi trường chứa glucose, xylose NAG o HKC2 có khả sinh tổng hợp carotenoid Ⱦ-carotene, torulene, gamma- carotene torularhodin Người thực Ký ghi rõ họ tên MỤC LỤC CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 1.2 1.3 Lipid vi sinh vật 1.1.1 Thành phần lipid đơn bào 1.1.2 Axit béo không no đa nối đôi (PUFA) 1.1.3 Carotenoid Axit béo không no đa nối đôi 1.2.1 Cấu trúc 1.2.2 Chức Các nguồn sinh tổng hợp PUFA 1.3.1 Tảo 1.3.2 Nấm sợi 1.3.3 Nấm men 1.3.4 Vi khuẩn 1.4 Khả sử dụng chất từ phụ phẩm nông-công nghiệp cho tổng hợp SCO giá trị cao 12 1.5 Sinh tổng hợp PUFA nấm men 14 1.6 Các yếu tố ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp PUFA 15 1.7 1.6.1 Thành phần môi trường 15 1.6.2 Điều kiện nuôi cấy 16 Định danh nấm men 18 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị 19 2.1.1 Vật liệu 19 2.1.2 Hóa chất thiết bị 19 2.2 Sơ đồ nghiên cứu 21 2.3 Phương pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Nile red Sàng lọc chủng nấm men sinh tổng hợp lipid Nhuộm màu 22 2.3.2 Định danh nấm men 24 2.3.3 Xây dựng phát sinh chủng loài 25 2.3.4 Khảo sát khả sinh tổng hợp PUFA 26 2.3.5 Sinh tổng hợp đồng hành sản phẩm khác 26 2.4 Phương pháp phân tích 26 2.4.1 Xác định hàm lượng sinh khối khô 26 2.4.2 Xác định hàm lượng đường khử phương pháp DNS 27 2.4.3 Xác định hàm lượng lipid 27 2.4.4 Xác định hàm lượng PUFA 28 2.4.5 Xác định hàm lượng carotenoid tổng số 29 2.4.6 Phân tích thành phần carotenoid 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Tuyển chọn chủng nấm men có khả tích lũy lipid 32 3.2 Tuyển chọn chủng có khả tích lũy PUFA nguồn chất khác 36 3.3 Định danh chủng nấm men HKC2 37 3.4 3.3.1 Kết giải trình tự 37 3.3.2 Đặc tính sinh lý sinh hóa chủng HKC2 39 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả tổng hợp PUFA HKC2 40 3.4.1 Khả sinh trưởng nguồn chất khác 41 3.4.2 Khả sinh tổng hợp lipid PUFA HKC2 nguồn chất khác 42 3.4.3 3.5 Khảo sát ảnh hưởng thành phần môi trường 44 Khả sinh tổng hợp sản phẩm đồng hành carotenoid 50 CHƯƠNG KÊT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHỤ LỤC 68 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TAG Triacylglycerol PUFA Axit béo không no đa nối đôi PCR mtDNA Polymerase Chain Reaction DNA ty thể rRNA RNA ribosome RAPD Đa hình đoạn gen DNA khuếch đại ngẫu nhiên ITS Internal Transcribed Spacer NCBI Trung tâm thông tin công nghệ quốc gia Hoa Kỳ TTC 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride NAG N- acetylglucosamin YE Cao nấm men SKK Sinh khối khô CSDL Cơ sở liệu BCPYD β-carotene Producing Yeast Database HL-60 Human Leukemic MCF-7 Michigan Cancer Foundation-7 TNBC Triple-Negative Breast Cancer PKS Polyketide synthase FAS Fatty Acid Synthase [122] K D Pham et al., "Effect of light on carotenoid and lipid production in the oleaginous yeast Rhodosporidium toruloides", Biosc Biotechnol Biochem, Vol 84, No 7, pp 1501-1512, 2020/07/02 2020 [123] N M D Courchesne, A Parisien, B Wang, and C Q J J o b Lan, "Enhancement of lipid production using biochemical, genetic and transcription factor engineering approaches", Vol 141, No 1-2, pp 31-41, 2009 [124] N Elfeky, M Elmahmoudy, and Y Bao, "Manipulation of Culture Conditions: Tool for Correlating/Improving Lipid and Carotenoid Production by Rhodotorula glutinis," Processes, vol 8, no doi: 10.3390/pr8020140 [125] G De Bhowmick, L Koduru, and R Sen, "Metabolic pathway engineering towards enhancing microalgal lipid biosynthesis for biofuel application— A review", Renewable and Sustainable Energy Reviews, Vol 50, pp 12391253, 2015/10/01/ 2015 [126] L A Garay, K L Boundy-Mills, and J B German, "Accumulation of High-Value Lipids in Single-Cell Microorganisms: A Mechanistic Approach and Future Perspectives", Journal of Agricultural and Food Chemistry, Vol 62, No 13, pp 2709-2727, 2014/04/02 2014 [127] D Valdebenito, S Urrutia, A Leyton, Y Chisti, J A Asenjo, and C Shene, "Nitrogen Sources Affect the Long-Chain Polyunsaturated Fatty Acids Content in Thraustochytrium sp RT2316-16", Vol 21, No 1, p 15, 2023 [128] G López, C Yate, F A Ramos, M P Cala, S Restrepo, and S Baena, "Production of Polyunsaturated Fatty Acids and Lipids from Autotrophic, Mixotrophic and Heterotrophic cultivation of Galdieria sp strain USBAGBX-832", Scientific Reports, Vol 9, No 1, p 10791, 2019/07/25 2019 [129] A Dobrowolski, K Drzymała, P Mituła, and A M J B T Mirończuk, "Production of tailor-made fatty acids from crude glycerol at low pH by Yarrowia lipolytica", Vol 314, p 123746, 2020 [130] A Beopoulos, J.-M Nicaud, C J A m Gaillardin, and biotechnology, "An overview of lipid metabolism in yeasts and its impact on biotechnological processes", Vol 90, pp 1193-1206, 2011 [131] A Beopoulos, J Cescut, R Haddouche, J.-L Uribelarrea, C Molina-Jouve, and J.-M Nicaud, "Yarrowia lipolytica as a model for bio-oil production", Progress in lipid research, Vol 48, No 6, pp 375-387, 2009 [132] T Braunwald et al., "Effect of different C/N ratios on carotenoid and lipid production by Rhodotorula glutinis", No 1432-0614 (Electronic) [133] Z Zhu et al., "A multi-omic map of the lipid-producing yeast Rhodosporidium toruloides", Vol 3, No 1, p 1112, 2012 [134] P Baldrian, C in der Wiesche, J i Gabriel, F e Nerud, F e J A Zadražil, and E Microbiology, "Influence of cadmium and mercury on activities of ligninolytic enzymes and degradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by Pleurotus ostreatus in soil", Vol 66, No 6, pp 2471-2478, 2000 [135] P P Zhou, M B Lu, W Li, and L J J J o b m Yu, "Microbial production of docosahexaenoic acid by a low temperature‐adaptive strain 62 [136] [137] [138] [139] [140] [141] [142] [143] [144] [145] [146] [147] [148] Thraustochytriidae sp Z105: screening and optimization", Vol 50, No 4, pp 380-387, 2010 Z Ma, Y Tan, G Cui, Y Feng, Q Cui, and X J S r Song, "Transcriptome and gene expression analysis of DHA producer Aurantiochytrium under low temperature conditions", Vol 5, No 1, pp 1-13, 2015 F Hu, A L Clevenger, P Zheng, Q Huang, and Z Wang, "Lowtemperature effects on docosahexaenoic acid biosynthesis in Schizochytrium sp TIO01 and its proposed underlying mechanism", Biotechnology for Biofuels, Vol 13, No 1, p 172, 2020/10/16 2020 F Elinder and S Liin, "Actions and mechanisms of polyunsaturated fatty acids on voltage-gated ion channels", Review Vol 8, 2017-February-06 2017 A Adel, A El-Baz, Y Shetaia, and N A.-O Sorour, "Biosynthesis of polyunsaturated fatty acids by two newly cold-adapted Egyptian marine yeast", No 2190-572X (Print) H Yazawa, Y Iwahashi H Fau - Kamisaka, K Kamisaka Y Fau - Kimura, H Kimura K Fau - Uemura, and H Uemura, "Production of polyunsaturated fatty acids in yeast Saccharomyces cerevisiae and its relation to alkaline pH tolerance", No 1097-0061 (Electronic) P Davoli, V Mierau, and R W S Weber, "Carotenoids and Fatty Acids in Red Yeasts Sporobolomyces roseus and Rhodotorula glutinis", Applied Biochemistry and Microbiology, Vol 40, No 4, pp 392-397, 2004/07/01 2004 A M Kot et al., "Effect of exogenous stress factors on the biosynthesis of carotenoids and lipids by Rhodotorula yeast strains in media containing agro-industrial waste", World Journal of Microbiology and Biotechnology, Vol 35, No 10, p 157, 2019/10/01 2019 C Dutech et al., "Challenges of microsatellite isolation in fungi", Fungal Genet Biol, Vol 44, No 10, pp 933-49, Oct 2007 A Querol and D Ramon, "The application of molecular techniques in wine microbiology", Trends in Food Science & Technology, Vol 7, No 3, pp 73-78, 1996/03/01/ 1996 V López, A Querol, D Ramón, and M T Fernández-Espinar, "A simplified procedure to analyse mitochondrial DNA from industrial yeasts", International Journal of Food Microbiology, Vol 68, No 1, pp 75-81, 2001/08/15/ 2001 T Boekhout, J W Fell, and C P Kurtzman, The yeasts: a taxonomic study Elsevier, 2011 M Hamamoto, T J I J o S Nakase, and E Microbiology, "Phylogenetic analysis of the ballistoconidium-forming yeast genus Sporobolomyces based on 18S rDNA sequences", Vol 50, No 3, pp 1373-1380, 2000 J W Fell, T Boekhout, A Fonseca, G Scorzetti, A J I j o s StatzellTallman, and e microbiology, "Biodiversity and systematics of basidiomycetous yeasts as determined by large-subunit rDNA D1/D2 domain sequence analysis", Vol 50, No 3, pp 1351-1371, 2000 63 [149] Q M Wang et al., "Phylogenetic classification of yeasts and related taxa within Pucciniomycotina", Studies in Mycology, Vol 81, pp 149-189, 2015/06/01/ 2015 [150] D Yarrow, "Chapter 11 - Methods for the isolation, maintenance and identification of yeasts," in The Yeasts (Fourth Edition), C P Kurtzman and J W Fell, Eds Amsterdam: Elsevier, 1998, pp 77-100 [151] J I Kim et al., "Isolation of Carotenoid-producing yeast, Rhodosporidium babjevae JI-1, and evaluation of cell extract toxicity against rat hepatic cells", Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry, Vol 55, No 1, pp 137-140, 2012/02/01 2012 [152] I R Sitepu et al., "An improved high-throughput Nile red fluorescence assay for estimating intracellular lipids in a variety of yeast species", Journal of Microbiological Methods, Vol 91, No 2, pp 321-328, 2012/11/01/ 2012 [153] I R Sitepu, M Jin, J E Fernandez, L da Costa Sousa, V Balan, and K L Boundy-Mills, "Identification of oleaginous yeast strains able to accumulate high intracellular lipids when cultivated in alkaline pretreated corn stover", Applied Microbiology and Biotechnology, Vol 98, No 17, pp 7645-7657, 2014/09/01 2014 [154] K Kimura, M Yamaoka, and Y Kamisaka, "Rapid estimation of lipids in oleaginous fungi and yeasts using Nile red fluorescence", Journal of Microbiological Methods, Vol 56, No 3, pp 331-338, 2004/03/01/ 2004 [155] K A Rostron and C L Lawrence, "Nile Red Staining of Neutral Lipids in Yeast," in Histochemistry of Single Molecules: Methods and Protocols, C Pellicciari and M Biggiogera, Eds New York, NY: Springer New York, 2017, pp 219-229 [156] P Greenspan, E P Mayer, and S D Fowler, "Nile red: a selective fluorescent stain for intracellular lipid droplets", The Journal of cell biology, Vol 100, No 3, pp 965-973, 1985 [157] M V Berridge, P M Herst, and A S Tan, "Tetrazolium dyes as tools in cell biology: New insights into their cellular reduction," in Biotechnology Annual Review, vol 11: Elsevier, 2005, pp 127-152 [158] M E Matalon and W E Sandine, "Improved Media for Differentiation of Rods and Cocci in Yogurt1", Journal of Dairy Science, Vol 69, No 10, pp 2569-2576, 1986/10/01/ 1986 [159] J C Stockert, R W Horobin, L L Colombo, and A Blázquez-Castro, "Tetrazolium salts and formazan products in Cell Biology: Viability assessment, fluorescence imaging, and labeling perspectives", Acta Histochemica, Vol 120, No 3, pp 159-167, 2018/04/01/ 2018 [160] V N Thanh et al., "New insight into microbial diversity and functions in traditional Vietnamese alcoholic fermentation", Int J Food Microbiol, Vol 232, pp 15-21, Sep 2016 [161] T Nagahama, M Hamamoto, T Nakase, and K Horikoshi, "Rhodotorula lamellibrachii sp nov., a new yeast species from a tubeworm collected at the deep-sea floor in Sagami Bay and its phylogenetic analysis", Antonie van Leeuwenhoek, Vol 80, No 3, pp 317-323, 2001/12/01 2001 64 [162] T Nagahama, M Hamamoto, and K Horikoshi, "Rhodotorula pacifica sp nov., a novel yeast species from sediment collected on the deep-sea floor of the north-west Pacific Ocean", Int J Syst Evol Microbiol, Vol 56, No Pt 1, pp 295-9, Jan 2006 [163] M M A Nagla, O E El Fadil, A H M Muzamil, A N Hisham, M B Bahaeldeen, and E.-A El-Nour, "Internal transcribed spacer for identification of yeast species isolated from cancer patients at the Isotope and Radiation Center, Khartoum, Sudan: A cross-sectional, case-control study", F1000Research, Vol 7, 2018 [164] A K Snyder, K Z Adkins, and R V Rio, "Use of the Internal Transcribed Spacer (ITS) Regions to Examine Symbiont Divergence and as a Diagnostic Tool for Sodalis-Related Bacteria", Insects, Vol 2, No 4, pp 515-31, Nov 30 2011 [165] E A da Silva-Filho, S K Brito dos Santos, M Resende Ado, J O de Morais, M A de Morais, Jr., and D Ardaillon Simoes, "Yeast population dynamics of industrial fuel-ethanol fermentation process assessed by PCRfingerprinting", Antonie Van Leeuwenhoek, Vol 88, No 1, pp 13-23, Jul 2005 [166] K Tamura, M Nei, and S Kumar, "Prospects for inferring very large phylogenies by using the neighbor-joining method", Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol 101, No 30, pp 11030-11035, 2004 [167] N Saitou and M Nei, "The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees", Molecular Biology and Evolution, Vol 4, No 4, pp 406-425, 1987 [168] J Van der Walt, "Methods for the isolation, maintenance, classification and identification of yeasts", The yeasts, a taxonomic study, pp 45-105, 1984 [169] P Olutiola, O Famurewa, and H J G H V u D G H Sonntag, "An introduction to general microbiology: a practical approach", 1991 [170] S Dolatabadi, G Walther, A H G Gerrits van den Ende, and G S de Hoog, "Diversity and delimitation of Rhizopus microsporus", Fungal Diversity, Vol 64, No 1, pp 145-163, 2014/01/01 2014 [171] Q M Wang et al., "Phylogeny of yeasts and related filamentous fungi within Pucciniomycotina determined from multigene sequence analyses", Studies in Mycology, Vol 81, pp 27-53, 2015/06/01/ 2015 [172] E G Bligh and W J Dyer, "A rapid method of total lipid extraction and purification ", Canadian Journal of Biochemistry and Physiology, Vol 37, No 8, pp 911-917, 1959/08/01 1959 [173] Jordi Folch, M Lees, and G H S Stanley, "A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues", The Journal of Biological Chemistry, Vol 226, pp 497-509, May 1956 [174] M Michelon, T de Matos de Borba, R da Silva Rafael, C A V Burkert, and J F de Medeiros Burkert, "Extraction of carotenoids from Phaffia rhodozyma: A comparison between different techniques of cell disruption", Food Science and Biotechnology, Vol 21, No 1, pp 1-8, 2012 65 [175] A R Dominguez-Bocanegra, T Ponce-Noyola, and J A Torres-Munoz, "Astaxanthin production by Phaffia rhodozyma and Haematococcus pluvialis: a comparative study", Appl Microbiol Biotechnol, Vol 75, No 4, pp 783-91, Jun 2007 [176] A Kavadia, M Komaitis, I Chevalot, F Blanchard, I Marc, and G Aggelis, "Lipid and γ-linolenic acid accumulation in strains of Zygomycetes growing on glucose", Journal of the American Oil Chemists' Society, Vol 78, No 4, pp 341-346, 2001/04/01 2001 [177] Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Xn Sâm, and Tơ Kim Anh, Thí nghiệm hố sinh cơng nghiệp Trường Đại Học Bách Khoa Hà Nội, 1997 [178] J Lin et al., "Microbial lipid production by oleaginous yeast ind-xylose solution using a two-stage culture mode", RSC Advances, Vol 4, No 66, 2014 [179] S Kitcha and B Cheirsilp, "Screening of Oleaginous Yeasts and Optimization for Lipid Production Using Crude Glycerol as a Carbon Source", Energy Procedia, Vol 9, pp 274-282, 2011/01/01/ 2011 [180] D T P Ly, N T Nga, D T M Tuyet, P M Quan, and A I Borisovich, "Comparison of lipid compositions of soft coral Sinularia brassica collected in different coastal regions of Vietnam", Vietnam Journal of Marine Science and Technology, Vol 19, No 2, pp 285-291, 09/04 2019 [181] H K Lichtenthaler, "[34] Chlorophylls and carotenoids: Pigments of photosynthetic biomembranes," in Methods in Enzymology, vol 148: Academic Press, 1987, pp 350-382 [182] T Spribille et al., "Basidiomycete yeasts in the cortex of ascomycete macrolichens", No 1095-9203 (Electronic) [183] A H Li et al., "Diversity and phylogeny of basidiomycetous yeasts from plant leaves and soil: Proposal of two new orders, three new families, eight new genera and one hundred and seven new species", No 0166-0616 (Print) [184] A M Millanes, P Diederich, and M Wedin, "Cyphobasidium gen nov., a new lichen-inhabiting lineage in the Cystobasidiomycetes (Pucciniomycotina, Basidiomycota, Fungi)", Fungal Biology, Vol 120, No 11, pp 1468-1477, 2016/11/01/ 2016 [185] D Libkind, J Sampaio, and M van Broock, "Cystobasidiomycetes yeasts from Patagonia (Argentina): Description of Rhodotorula meli sp nov from glacial meltwater", International journal of systematic and evolutionary microbiology, Vol 60, pp 2251-6, 10/01 2009 [186] F.-Y Bai, Y Cai, Q.-M Wang, and H Ohkubo, "Rhodotorula oryzae sp nov., a novel basidiomycetous yeast species isolated from paddy rice", Antonie van Leeuwenhoek, Vol 86, No 4, pp 295-299, 2004/12/01 2004 [187] Y Yamda, K Maeda, and K Mikata, "The phylogenetic relationshipts of Rhodosporium dacryoidum Fell, Hunter et Tallma based on the partial sequences of 18S and 26S ribosomal RNAs: The proposal of Sakaguchia gen nov., a heterobasidiomycetous yeast genus", Bioscience Biotechnology and Biochemistry, Vol 58, pp 99-103, 1994 66 [188] T Nagahama, M Hamamoto, T Nakase, and K Horikoshi, "Rhodotorula lamellibrachii sp nov., a new yeast species from a tubeworm collected at the deep-sea floor in Sagami bay and its phylogenetic analysis", Antonie Van Leeuwenhoek, Vol 80, No 3-4, pp 317-23, Dec 2001 [189] I L Fell Jw Fau - Hunter, A S Hunter Il Fau - Tallman, and A S Tallman, "Marine basidiomycetous yeasts (Rhodosporidium spp n.) with tetrapolar and multiple allelic bipolar mating systems", No 0008-4166 (Print) [190] M DurmuŞ, "Fish oil for human health: omega-3 fatty acid profiles of marine seafood species", Food Science and Technology, Vol 39, 2019 [191] Z Tao et al., "Yeast Extract: Characteristics, Production, Applications and Future Perspectives", No 1738-8872 (Electronic) [192] F K Swoboda, "Nitrogen nutrition of yeast", Journal of Biological Chemistry, Vol 52, No 1, pp 91-109, 1922/05/01/ 1922 [193] N Maleki, M Safari, and M A.-O Eiteman, "Conversion of glucosexylose mixtures to pyruvate using a consortium of metabolically engineered Escherichia coli", No 1618-0240 (Print) [194] L Qvirist, F Mierke, R Vazquez Juarez, and T Andlid, "Screening of xylose utilizing and high lipid producing yeast strains as a potential candidate for industrial application", No 1471-2180 (Electronic) [195] M J Griffiths, R P van Hille, and S T L Harrison, "Lipid productivity, settling potential and fatty acid profile of 11 microalgal species grown under nitrogen replete and limited conditions", Journal of Applied Phycology, Vol 24, No 5, pp 989-1001, 2012/10/01 2012 [196] S Galafassi, D Cucchetti, F Pizza, G Franzosi, D Bianchi, and C Compagno, "Lipid production for second generation biodiesel by the oleaginous yeast Rhodotorula graminis", Bioresource Technology, Vol 111, pp 398-403, 2012/05/01/ 2012 [197] C Hu, S Wu, Q Wang, G Jin, H Shen, and Z K Zhao, "Simultaneous utilization of glucose and xylose for lipid production by Trichosporon cutaneum", Biotechnology for Biofuels, Vol 4, No 1, p 25, 2011/08/24 2011 [198] R Ueno, N Hamada-Sato, M Ishida, and N Urano, "Potential of carotenoids in aquatic yeasts as a phylogenetically reliable marker and natural colorant for aquaculture", Biosci Biotechnol Biochem, Vol 75, No 9, pp 1654-61, 2011 [199] C Kurtzman., J W Fell., and T Boekhout., The Yeasts: A Taxonomic Study 5th Edition © Elsevier Science 2010, 2011 [200] J Tkáčová, K Furdíková, T Klempová, K Ďurčanská, and M Čertík, "Screening of carotenoid-producing Rhodotorula strains isolated from natural sources", Acta Chimica Slovaca, Vol 8, No 1, pp 34-38, 2015 67 PHỤ LỤC A1 Đặc điểm hàm lượng lipid tập chủng nghiên cứu Lồi Nguồn Lipid Kí hiệu (% SKK) Cà tím CT2 Nd Cần tây CY1 28.88േ 1.93 Củ cải đỏ CCD1 18.2േ 4.45 Củ cải trắng CCT1 21.85േ 1.79 Hành HL1 14.9 Húng HU Nd L1 18.65േ 2.61 L2 22.85േ 1.32 Lá lốt Lá nho LN2 24.86േ 0.2 10 Mồng tơi MT1 22േ 1.62 TT2 19.5േ 0.21 TT3 14.9േ 1.13 11 12 Rhodotorula mucilaginosa Tía tơ 13 Thì TL 16.4 14 Rau lang RL 19.8േ 1.24 15 Cam sành CS2 26.49േ 3.72 16 Dưa lưới DL1 20.73േ 3.38 17 Kiwi KI 19.53േ 0.91 OI1 22.28േ 1.97 OI2 Nd 18 Ổi 19 20 Xoài X2 29.15േ 0.18 21 Quýt đường QD 17.95േ 1.87 22 Hồ Đống Đa DDS2 28.53േ 2.26 23 Hồ Thành Công TCI1 41.95േ 0.78 24 Cà chua CC 20.55േ 1.13 Cà rốt CR 43.5േ 0.18 Dền cơm DC6 60.97േ 1.44 Lá nho LN1 54.88േ 0.16 25 26 27 Sporidiobolus pararoseus 68 28 Ớt thiên 29 O1 47.33േ 0.55 O2 59.92േ 1.39 30 Rau sam RS1 45.09േ 1.22 31 Dâu tây DT1 54.64േ 2.03 32 Bơ B2 44.26 33 Quýt Q 48.1േ 1.24 DH1 39.65േ 5.83 NH2 46.55 T1 34േ 2.76 DC2 45.1േ 7.11 Khoai lang bí KLB1 29.21േ 2.41 Khoai lang bí KLB2 36.25േ 2.56 34 Đất 35 36 Táo 37 Dền cơm 38 39 Rhodosporidium toruloides 40 Rau sam RS5 51.95 41 Rau dền đỏ RDD Nd 42 Dền gai DG 37.8േ 1.16 43 Cam sành CS1 52.45േ 0.84 Dưa lưới DL3 45.4േ 2.79 45 Mồng tơi MT3 49.55േ 2.54 46 Đất NH3 48.85 47 Chơm chơm CH 46.78 Xồi X1 26.7േ 1.52 Hoa hồng đỏ HHD 42.5േ 1.17 Cam sành CS3 24.5 Hoa đá HD2 19.55േ 0.60 Cà tím CT1 47.38േ 2.93 Đu đủ DD 43.4േ 0.35 Dền cơm DC7 45.95േ 1.06 DH7 32.4േ 0.60 NH4 44.2േ 2.02 HKC2 24.65േ 5.71 44 48 49 Rhodosporidium paludigenum Rhodosporidiobolus ruineniae 50 Rhodosporidiobolus fluviale 51 Cystobasidium slooffiae 52 53 54 55 56 57 Rhodotorula taiwanensis Sakaguchia oryzae Moeziomyces rugulosus Sakaguchia sp Đất Hồ Hoàn Kiếm 69 A2 Trình tự mồi sử dụng để giải trình tự Vùng gen ITS D1/D2 RPB1 RPB2 EF1 Mồi ITS1 ITS4 NL1 NL4 RPB1-Af RPB1-Cr fRPB22-5f fRPB22-7cR 938F 2218R Trình tự 5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′ 5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′ 5′-GCA TAT CAA TAA GCG GAG GAA AAG-3′ 5′-GGT CCG TGT TTC AAG ACG G-3′ 5′-GARTGYCCDGGDCAYTTYGG-3′ 5′-CCNGCDATNTCRTTRTCCATRTA-3′ 5′-GAYGAYMGWGATCAYTTYGG-3′ 5′-ATGGGYAARCAAGCYATGGG-3′ 5′-GCYCCYGGHCAYCGTGAYTTYAT-3′ 5′-ATGACACCRACRGCRACRGTYTG-3′ A3 Đường chuẩn glucose, xylose, NAG với thuốc thử DNS Glucose y = 1.1357x - 0.0823 R² = 0.9995 OD( 540 nm) 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Nồng độ glucose (g/l) 70 Xylose 1.4 y = 1.3206x - 0.0877 R² = 0.9981 OD( 540 nm) 1.2 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 Nồng độ xylose (g/l) NAG y = 0.9705x - 0.1024 R² = 0.9975 OD (540 nm) 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 Nồng độ NAG (g/l) 71 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 STT HKC2 Bannoa bischofiae Bannoa hahjimensis Bannoa ogasawarensis Bannoa syzygii Buckleyzyma armeniaca Buckleyzyma aurantiaca Buckleyzyma kluyveri-nielii Buckleyzyma phyllomatis Buckleyzyma salicina Cyrenella elegans Cystobasidium benthicum Cystobasidium calyptogenae Cystobasidium laryngis Cystobasidium lysinophilum Cystobasidium minutum Cystobasidium pallidum Cystobasidium slooffiae Cystobasidiomycetes sp Erythrobasidium elongatum Erythrobasidium hasegawianum Erythrobasidium yunnanensis Loài HKC2 JCM 10338 JCM 10336 JCM 10326 JCM 10337 JCM 8977 JCM 3771/ CBS317 CBS7168 JCM 7549 JCM 2959 CBS 274.82 JCM 10901/CBS 9124 JCM 10899/ CBS9125 JCM 11697/ CBS2221 JCM 5951 CBS 319/ JCM 3777 JCM 3780/CBS320 CBS 5706 PYCC 6750 CBS 8080/JCM 5354 AS 2.1923/CBS 8253 JCM10687/CBS 8906 Chủng MW242935 AB082572 AB082571 AB082570 AB082573 AF189920 AF189921 AF189988 AF189991 AF189995 KJ708454 KY107427 KY107430 AF189937 AF189945 AF189962 AF189965 KU171072 AF189983 AF189899 AY335162 NR149346 AB078492 NR103568 KU171073 NR073306 AF444522 NR155098 ITS MW242949 NR153592 NR121198 AB035713 NR154870 AB038112 NR073293 NR073298 AB030350 AB038127 NR145383 KY103122 NR154832 NR154833 KJ708012 KF706506 KJ708015 KJ707782 KJ707776 KJ707779 KJ708300 KF706534 KJ708344 KJ708168 KJ708214 KJ708218 KJ708240 KJ708243 KJ708246 KJ708253 KJ708266 KJ708080 KJ708081 KJ708075 KJ708055 KJ708074 KJ708059 KJ708056 KJ708058 RPB2 RP754897 KJ708292 KJ708146 KJ708323 KJ708338 KJ708211 KJ708212 KJ708309 KJ708328 RP395744 KJ708018 KJ708014 KJ708017 KJ708011 KP216521 KJ707970 KJ707972 KJ707976 RP426551 KJ707777 KJ707750 KJ707781 KJ707778 KJ707762 KJ707757 KJ707759 KJ707761 KJ707758 KJ707830 KJ707842 KJ707840 KJ707824 KJ707845 KJ707825 KJ707826 KJ707828 GenBank accession number LSU (26S) TEF1 RPB1 A4 Trình tự gen ITS, D1/D2, RPB1, RPB2, EF1 nấm men HKC2 với chủng tham khảo ngân hàng genbank 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 26 23 24 25 Hasegawazyma lactosa Kriegeria eriophori Microsporomyces bloemfonteinensis Microsporomyces hainanensis (Rhodotorula sp z8) Microsporomyces magnisporus Microsporomyces orientalis Microsporomyces pini Naohidea sebacea Occultifur sp Occultifur externus Occultifur kilbournensis Occultifur tropicalis Rhodotorula chungnamensis Rhodotorula mucilaginosa Rhodotorula taiwanensis Rhodotorula sphaerocarpa Rhodotorula glutilis Rhodotorula glacialis Rhodotorula graminis Rhodosporidiobolus fluvialis Rhodosporidium paludigena Rhodosporidium toruloides Sporidiobolus salmonicolor Sporobolomyces roseus Sporidiobolus pararoseus Sakaguchia sp JCM 11898 CBS 8594 CBS 10735 CBS 8477 UFMG-CM-Y376 JCM10725/CBS 8732 NRRL Y-63695 DMKU SE59 KCTC 17150 AFTOL-ID 1548 CBS 11729 JCM8202 JCM 8208 CBS 10436 JCM3775 JCM10311 CBS 6567 AFTOL-ID 1547 CBS 2630 CBS 485 CBS 491 JCM 8162 CICC 33066 CBS 5826 CBS 8387 CBS 8598 NR077089 KY104892 DQ832193 EF592114 AY069996 NR155770 KJ778625 AB112078 NR155363 KY104260 NR121324 KM248526 NR111082 NR155564 NR148062 NR155772 DQ832200 NR157462 AB049026 AB026018 NR154358 KU296948 NR073295 NR119455 EU075189 EF592141 AY070012 AF189977 KJ708453 AF070422 AF070424 KY108773 KY109163 KP413160 NG060236 KM248525 AB111954 HM559718 EU075188 KU296947 NG057668 AF189905 EU075187 DQ832203 KJ707838 KJ707867 KJ707869 KJ707831 KJ707868 KJ707816 KJ707871 DQ859896 KJ707922 HM014023 HM014019 KJ707858 KJ707829 KJ707780 KJ707843 KJ707832 KF706487 AB127098 KJ707936 KJ708162 KJ708268 KJ708079 KJ708233 KJ708234 KJ708204 DQ832201 KJ708271 KJ708207 KJ708199 KJ708317 KJ708249 KJ708258 KF706535 KJ708239 KJ708174 KJ708215 KJ708104 KJ708067 KJ708093 KJ708046 KJ708092 DQ832202 KJ708066 KJ708086 KJ708060 KJ708013 KJ708078 KJ708084 KF706508 KJ708016 KJ708144 KJ708082 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 Sakaguchia lamellibrachiae Sakaguchia meli Sakaguchia dacryoidea Sakaguchia oryzae Sakaguchiae cladiensis Symmetrospora vermiculata Symmetrospora marina Symmetrospora symmetrica Symmetrospora gracilis Symmetrospora folIicola Symmetrospora coprosmae Fungal sp CBS 9598 CBS 10797 JCM 10313 AS2.2363 CBS10878 JCM 10224 JCM 3776 AS2.2299 JCM 2963 JCM 5355 JCM 8772 10B-T-2t-1 NR155767 NR155775 KY105302 AY335160 NR155829 NR077114 NR073272 NR158993 AB030346 NR073283 NR073317 KP122300 KY109533 KJ708452 KY109530 AY335161 FJ008049 NG057633 AF444504 AB279627 AF207882 AF189984 AF189980 KP122300 KJ707876 KJ707855 KJ707877 KJ707853 KJ707847 KJ707801 KJ707795 KJ707800 KJ707799 KJ707796 KJ707798 KJ707967 KJ707973 KJ707975 KJ707968 KJ707971 KJ707966 KJ708098 KJ708085 KJ708101 KJ708100 KJ708314 KJ708245 KJ708347 KJ708250 KJ708219 KJ708342 KJ708244 KJ708337 KJ708304 KJ708349 KJ708296 14:0 15:0 16:4n-3 16:3n-3 16:0 17:0 18:2n-6 18:1n-9 18:0 EPA DHA Others PUFA/Lipid C18:2/C18:1 PUFA/SKK gPUFA/ gSugar 0.80 0.05 0.38 0.99 13.17 46.02 35.04 2.29 1.25 47.40 1.31 4.00 0.02 N100 0.41 0.28 0.49 11.94 0.09 33.90 46.32 4.02 0.31 0.12 2.12 35.10 0.73 4.30 0.02 N100-2 g/l YE 0.79 0.06 0.34 0.68 16.97 0.08 33.10 41.81 3.79 0.11 2.27 34.23 0.79 2.64 0.01 N150 N-Acetylglucosamine 1.03 0.20 0.36 1.01 24.07 0.15 23.09 41.10 6.96 0.16 0.14 1.45 24.75 0.56 2.18 0.01 X50 X150- 8.05 G/L YE 0.93 0.05 0.18 0.53 24.78 0.08 29.79 35.92 6.66 0.15 0.07 0.86 30.72 0.83 3.93 0.02 Xylose 0.81 0.04 0.09 0.53 23.64 0.10 31.65 36.45 5.28 0.13 0.06 1.21 32.47 0.87 5.85 0.04 X150- 3.8 g/lYE A5 Thành phần axit béo nấm men Sakaguchia sp HKC2 môi trường khác 0.65 0.16 0.34 0.45 20.51 0.15 43.51 27.35 6.09 0.09 0.69 44.40 1.59 5.17 0.04 G20 1.20 0.03 0.10 0.52 31.09 0.05 22.19 39.98 4.17 0.12 0.06 0.30 23.00 0.56 6.25 0.02 G150 Glucose