Bg vi sinh phan 1 4522

BÀI GIẢNG VI SINH Đơn vị biên soạn: KHOA Y Hậu Giang Năm 2017 PHẦN I ĐẠI CƯƠNG VI SINH Y HỌC ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU VÀ LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT HỌC Mục tiêu học tập Trình bày đối tượng nghiên cứu vi sinh vật học Trình bày lịch sử phát triển vi sinh vật học hướng giải bệnh nhiễm trùng I ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU CỦA VI SINH VẬT HỌC Vi sinh vật học (Microbiology) khoa học khảo sát hoạt động vi sinh vật (từ Hylạp micros nhỏ bé, bios sống logos khoa học) Vi sinh vật sinh vật nhỏ bé mắt trần không thấy phát kính hiển vi Muốn đo kích thước vi sinh vật, người ta sử dụng đơn vị sau: Micromet (m, micrometre) = 10-6m Nanomet (nm, nanometre) = 10-9m Angstrom = 10-10m Vi sinh vật bao gồm vi khuẩn, nấm men, nấm mốc, tảo, nguyên sinh động vật virus Trước khám phá vi sinh vật người ta chia sinh vật làm giới: giới động vật giới thực vật Sau khám phá vi sinh vật người ta nhận thấy vi sinh vật kết hợp đặc tính thực vật động vật với tất tổ hợp có, việc phân loại sinh vật thành hai giới làm phát sinh số điều không hợp lý Ví dụ nấm men phân loại thực vật phần lớn khơng di động chúng có tính chất thực vật cho thấy liên hệ sinh tiến hóa đậm nét với nguyên sinh động vật Năm 1866 nhà khoa học Đức E Haeckel đề nghị xếp vi sinh vật vào giới riêng, giới Protista Giới phân biệt với thực vật động vật tổ chức đơn giản chúng: dù đơn bào đa bào, tế bào chúng khơng biệt hóa thành mơ Protista phân loại sau : Protista lớp trên, cấu trúc tế bào giống tế bào động vật thực vật bao gồm: Tảo (trừ tảo xanh lục) Nguyên sinh động vật Nấm men Nấm mốc Protista lớp dưới, cấu trúc tế bào đơn giản nhiều bao gồm: Vi khuẩn Tảo xanh lục Protista lớp có tế bào nhân thật, Protista lớp có tế bào nhân nguyên thuỷ 185 Theo kiến nghị nhà sinh vật học Trung Quốc Trần Thế Tương năm 1979 vi khuẩn nằm nhóm giới sinh vật có nhân nguyên thuỷ, cịn virus thuộc nhóm giới sinh vật chưa có tế bào Tế bào nhân thật có nhân chứa số đôi nhiễm sắc thể, màng nhân nối liền với lưới nội chất nguyên sinh Nguyên tương tế bào nhân thật có lưới nội chất ngun sinh, khơng bào plastit tự chép Những plastit chứa ADN riêng nhân lên phân liệt Những plastit bao gồm ti lạp thể chứa hệ thống chuyên chở điện tử phosphoryl hóa lục lạp sinh vật quang hợp chứa lục diệp tố thành phần quang hợp khác Nguyên tương chất lipoprotein nằm bên màng tế bào Nhiều vi sinh vật tế bào nhân thật có vách tế bào tạo nên celluloza, chitin oxyt silic.Tế bào nhân thật di động nhờ lơng Những lơng gồm bó sợi nhỏ bao quanh sợi nhỏ trung tâm Tế bào nhân nguyên thuỷ có cấu trúc tế bào đơn giản Nhân gồm có nhiễm sắc thể không màng nhân, vách tế bào lại phức tạp Tế bào nhân nguyên thuỷ plastit tự chép ti lạp thể lục lạp Enzyme cytochrom tìm thấy màng tế bào; thể quang hợp, sắc tố quang hợp tìm thấy phiến mỏng nằm màng tế bào Vi khuẩn thường tích tụ vật liệu trữ hình thức hạt nhỏ khơng hịa tan, dạng polyme, trung tính, trơ thẩm thấu Vật liệu cacbon biến đổi số vi khuẩn thành polyme polyaxit-hydrobutyric vi khuẩn khác thành polyme glucoza tương tự glycogen gọi granuloza Những hạt nhỏ dự trữ sử dụng nguồn C lúc tổng hợp protein axit nucleic thực trở lại Một cách tương tự vài vi khuẩn oxy hóa sulfua biến đổi lượng thừa H2S mơi trường bên ngồi thành hạt sulfua nội bào Nhiều vi khuẩn tích trữ phốt phát hữu thành hạt nhỏ polymemetaphosphate gọi volutin Virus khác với tất thể có tế bào kể vi khuẩn Rickettsia Virion hạt virus gồm phân tử ADN ARN nằm bên vỏ protein gọi capsid Vào bên tế bào vật chủ, axit nucleic virus sử dụng máy tổng hợp tế bào để hình thành axit nucleic thành phần khác virus Axit nucleic thành phần protein đặc hiệu kết hợp thành hạt virus xâm nhiễm hòan chỉnh gọi virion Virion phóng thích vào mơi trường bên ngồi bắt đầu trình xâm nhiễm tế bào vật chủ II SƠ LƯỢC LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN CỦA VI SINH VẬT HỌC Sự phát vi sinh vật Sự phát vi sinh vật gắn liền với phát minh kính hiển vi Anton van Leeuwenhoek (1632 1723), người Hà lan, người kỷ 17 nhìn thấy vi sinh vật nhờ kính hiển vi độ phóng đại 270 - 300 lần mà ông chế tạo (1676) Trước người ta chế tạo kính hiển vi dùng để quan sát hồng cầu, phấn hoa, mao mạch phổi chưa đủ nhạy để phát vi sinh vật Sự trưởng thành vi sinh vật học Trong kỷ 17 suốt kỷ 18 vi sinh vật học trọng phần mơ tả, nhiên có số cơng trình xuất sắc Spallanzani sử dụng môi trường nuôi cấy khử khuẩn nhiệt, Edward Jenner phát minh vaccine đậu mùa, Zinke phát tác nhân bệnh dại nước bọt chó bị dại Thế kỷ 19 cho thấy bước phát triển lớn vi sinh vật học nhờ công lao Louis Pasteur Robert Koch 186 L.Pasteur (1822 - 1895) hoàn chỉnh việc nghiên cứu vi sinh vật Vi sinh vật mơ tả xác mà cịn khảo sát đầy đủ tính chất sinh lý L.Pasteur nhà vi sinh vật học vĩ đại có cơng: Chấm dứt tranh luận thuyết tự sinh thí nghiệm xuất sắc với bình cổ ngỗng Phát tác nhân lên men lên men rượu, lên men thối vi sinh vât: vi sinh vật phát triển tạo thành enzyme chịu trách nhiệm tượng lên men Xác định vai trò tác nhân gây bệnh vi sinh vật bệnh nhiễm trùng Khái quát hóa vấn đề vaccine tìm phương pháp điều chế số vaccine phịng bệnh vaccine bệnh than, vaccine bệnh tả gà phát minh vaccine dại R.Koch (1843 - 1910) đóng góp lớn lao cho vi sinh vật học nhờ cơng trình: Phát triển kỹ thuật cố định nhuộm vi khuẩn Sử dụng môi trường đặc để phân lập vi khuẩn ròng Nêu tiêu chuẩn xác định bệnh nhiễm trùng Khám phá vi khuẩn lao, vi khuẩn tả Nhờ công lao L.Pasteur, R.Koch nhiều nhà bác học khác, phần lớn vi khuẩn gây bệnh người động vật khám phá đầu kỷ 20 Lúc vi sinh học trở thành khoa học ứng dụng quan trọng lĩnh vực y học, nông nghiệp công nghiệp Trong lâm sàng, khoa lây thành lập để tiếp nhận bệnh nhân nhiêm trùng, khoa ngoại sử dụng phương pháp phẩu thuật sát trùng, tiền đề phương pháp phẩu thuật vô trùng ngày Những thành tựu đại Trong thập kỷ gần từ khoa học ứng dụng, vi sinh vật học trở thành khoa học làm phát sinh ngành khoa học mới: sinh học phân tử phân tử với ngành khoa học khác tạo nên cách mạng khoa học kỹ thuật đại Nhờ hiểu biết di truyền học đại mà mơ hình nghiên cứu E.coli, Watson Crick phát mẫu cấu trúc ADN chế chép bán bảo tồn làm sở cho hình thành sinh học phân tử phân tử Những phát kỳ diệu cấu mã di truyền cấu trúc khác tế bào sống sử dụng làm sở cho phát triển công nghiệp sinh học, ngành công nghiệp cho phép người can thiệp vào trình hình thành phát triển sinh vật để phục vụ lợi ích người Gần kỹ thuật tổng hợp gen, tháo ghép gen làm cho công nghệ sinh học trở thành lực lượng sản xuất mũi nhọn kinh tế giới Trong lĩnh vực y học kỹ thuật có nhiều triển vọng giải bệnh di truyền, phòng chống bệnh nhiễm trùng, bệnh ung thư III NHỮNG VẤN ĐỀ HIỆN NAY CỦA VI SINH VẬT Y HỌC Trong y học, vi sinh vật nguyên bệnh nhiễm trùng Vì xét tầm quan trọng vi sinh vật y học phải đề cập tới tình hình bệnh nhiễm trùng Từ ngàn xưa bệnh nhiễm trùng tai họa cho nhân loại Bệnh đậu mùa, bệmh dịch hạch, bệnh dịch tả giết chết hàng triệu người, tàn phá nhiều làng mạc, thành phố Từ vi sinh vật học trưởng thành người có khả chế ngự bệnh nhiễm trùng Nhưng đường chế ngự để tiến tới xóa bỏ bệnh nhiễm trùng đường khó khăn lâu dài 187 Thành tựu vang dội xảy vào năm 1891 lúc Von Behring cứu sống em bé nhờ huyết kháng bạch hầu, mở đầu thời kỳ huyết liệu pháp Thực tế cho thấy huyết liệu pháp có mặt hạn chế hữu hiệu bệnh nhiễm độc tố vi khuẩn bạch hầu, uốn ván, hoại thư sinh v.v Thành tựu vang dội thứ hai công lao Domagk phát minh sulfonamit năm 1935 Nhưng vũ khí sulfonamit tỏ yếu không đủ khả điều trị phần lớn bệnh nhiễm trùng thường gặp Năm 1940 Fleming, Florey Chain phát minh penicillin đưa vào điều trị mở đầu thời đại kháng sinh Trong suốt hai thập kỷ, nhiều kháng sinh hữu hiệu phát minh người ta chế ngự cách hữu hiệu bệnh nhiễm trùng Nhưng thời gian cho thấy bệnh nhiễm trùng cịn lâu giải xong vi khuẩn kháng thuốc quan sát loài vi khuẩn May mắn kháng sinh hữu hiệu khám phá giữ không cho vi khuẩn kháng thuốc phát triển quy mô lớn không chế ngự Đầu thập kỷ 80, thực tế cho thấy vi khuẩn kháng thuốc xuất ngày nhiều kháng sinh hữu hiệu khám phá trở nên dần Trừ kháng sinh thuộc nhóm quinolon, kháng sinh gọi xắp xếp lại thay đổi cấu trúc phân tử kháng sinh khám phá từ trước kỹ thuật bán tổng hợp tổng hợp Hiện nay, phần lớn bệnh nhiễm trùng chế ngự cách hữu hiệu, vụ dịch dập tắt nhanh chóng cần nghiên cứu nhiều để chế ngự vi khuẩn kháng thuốc tìm thuốc hữu hiệu để điều trị bệnh virus Hướng giải bệnh nhiễm trùng sử dụng đồng thời ba biện pháp sau: Thực chiến lược kháng sinh để hạn chế vi khuẩn kháng thuốc - Tiếp tục tìm kiếm kháng sinh hữu hiệu để điều trị bệnh vi khuẩn phát minh thuốc kháng virus hữu hiệu - Điều chế vaccine hữu hiệu kỹ thuật phòng ngừa bệnh nhiễm trùng, tiến đến xóa bỏ chúng trường hợp bệnh đậu mùa phạm vi toàn giới HÌNH THỂ , CẤU TẠO VÀ SINH LÝ CỦA VI KHUẨN Mục tiêu học tập: Mô tả loại hình thể vi khuẩn Mơ tả cấu trúc tế bào vi khuẩn Trình bày nét sinh lý vi khuẩn I HÌNH THỂ CỦA VI KHUẨN Vi khuẩn thơng thường có hình thể định vách tế bào xác định Một số khơng vách ( hình thức L) Mycoplasma khơng có hình thể định Đường kính trung bình vi khuẩn khỏang 1m Những đại diện nhỏ Mycoplasma có đường kính khỏang 0,1 m đại diện lớn có kích thước hàng chục m Spirilium volutans 20m Các vi khuẩn gây bệnh có kích thước từ 0,2m đến 10m Về hình thể người ta chia vi khuẩn thành cầu khuẩn, trực khuẩn vi khuẩn hình xoắn 188 Cầu khuẩn : Là vi khuẩn hình cầu, hình trứng hay hình hạt cà phê 1.1 Micrococci (Đơn cầu) Đây cầu khuẩn xếp hàng khơng đều, tạp khuẩn tìm thấy khơng khí nước 1.2 Diplococci (Song cầu) Là cầu khuẩn xếp đôi phân chia mặt phẳng Một số gây bệnh cho người phế cầu, lậu cầu, cầu khuẩn màng não 1.3 Stretococci (Liên cầu): Là cầu khuẩn xếp thành chuỗi ngắn dài Một số lọai gây bệnh cho người Streptococcus pyogenes thuộc nhóm A Lancefield 1.4 Tetracocci (Tứ cầu) Các cầu khuẩn hợp thành 4, phân chia theo hai mặt phẳng, gây bệnh 1.5 Sarcina (Bát cầu) Các cầu khuẩn xếp thành 8-16 con, phân chia theo ba mặt phẳng, thường tìm thấy khơng khí 1.6 Staphylococci (Tụ cầu) Các cầu khuẩn hợp thành đám chùm nho, phân chia theo mặt phẳng, số loại gây bệnh cho người thường phát triển nhanh chóng tính đề kháng với nhiều kháng sinh Trực khuẩn Là vi khuẩn có hình que thẳng 2.1.Bacteria Là trực khuẩn hiếu khí, khơng tạo nha bào vi khuẩn đường mật, vi khuẩn bạch cầu, vi khuẩn lao 2.2 Bacilli Là trực khuẩn hiếu khí tuyệt đối tạo nha bào ví dụ trực khuẩn bệnh than 2.3.Clostridia Là trực khuẩn kỵ khí Gram dương tạo nha bào, ví dụ trực khuẩn uốn ván, trực khuẩn ngộ độc thịt Vi khuẩn hình xoắn 3.1 Phẩy khuẩn Chỉ có phần hình xoắn nên có hình dấu phẩy, ví dụ phẩy khuẩn tả 3.2 Xoắn khuẩn Có nhiều vịng xoắn, ví dụ xoắn khuẩn giang mai, Leptospira, Borrelia II CẤU TẠO CỦA TẾ BÀO VI KHUẨN Khác với thành viên protista lớp có nhân thật tế bào động vật thực vật, vi khuẩn có tế bào nhân sơ, nhân có nhiễm sắc thể, khơng có màng nhân, khơng có ti lạp thể, khơng có máy phân bào tế bào lại phức tạp Vách tế bào Sự diện vách tế bào vi khuẩn phát hiện tuợng ly tương, cách nhuộm phân lập trực tiếp Tác dụng học siêu âm phối hợp với ly tâm cho phép thu hoạch vách tế bào ròng, tách rời khỏi 189 nguyên tương 1.1 Vách tế bào vi khuẩn gram dương Kính hiển vi điện tử cho thấy vách tế bào dày từ 15 đến 50 nm Thành phần chủ yếu mucopeptit gọi murein, chất trùng hợp mà đơn vị hoá học đường amin N-acetyl glucosamin axít N-acetyl muramic chuỗi peptit ngắn chứa alanin, axít glutamic axít diaminopimelic lysin Ngoài vách tế bào số vi khuẩn gram dương cịn chứa axít teichoic Ở vài lọai vi khuẩn, axít teichoic chiếm tới 30% trọng lượng khô vách tế bào 1.2 Vách tế bào vi khuẩn Gram âm gồm ba lớp Lớp mucopeptit mỏng khỏang 10nm hai lớp lipoprotein lipopoly-sacharit bên ngồi, lớp lipoprotein chứa tất axít amin thơng thường Khơng có axít teichoic, vách tế bào vi khuẩn gram âm chứa lượng lipit đáng kể, khoảng 20 % trọng lượng khô vách tế bào 1.3 Chức vách tế bào Vách tế bào vi khuẩn có nhiều chức năng: Duy trì hình thể vi khuẩn: Vách cứng tạo nên khung, làm cho vi khuẩn có hình thể định Quyết định tính bắt màu gram vi khuẩn: Sự bắt màu gram khác vi khuẩn gram dương gram âm tính thẩm thấu khác cồn hai nhóm vi khuẩn Nếu dùng lysozym biến đổi vi khuẩn gram dương thành protoplast vách protoplast lại bắt màu gram âm Tạo nên kháng nguyên thân O vi khuẩn đường ruột: Để điều chế kháng nguyên vi khuẩn đường ruột xử lý vi khuẩn không di động nhiệt cồn Tạo nên nội độc tố vi khuẩn đường ruột Nội độc tố giải tỏa lúc vi khuẩn bị li giải Ở vi khuẩn đường ruột, nội độc tố phức hợp lipopoly-saccarit dẫn xuất từ vách tế bào Màng nguyên tương Là màng bán thấm dày khoảng 10nm nằm sát vách tế bào Người ta chứng minh diện tượng ly tương nhuộm với xanh Victoria 4R Nó chứa 60- 70% lipit, 20-30% protein lượng nhỏ hydrat cacbon Màng nguyên tương có chức rào cản thẩm thấu tế bào, ngăn cản không cho nhiều phẩm vật vào bên tế bào lại xúc tác việc chuyên chở họat động nhiều phẩm vật khác vào bên tế bào Hơn màng tế bào chứa nhiều hệ thống enzyme có chức giống ti lạp thể động vật thực vật Màng nguyên tương cho thấy chỗ lõm vào gọi mạc thể Ở vi khuẩn Gram dương mạc thể phát triển cho thấy hình ảnh nhiều đồng tâm Ở vi khuẩn Gram âm mạc thể vết nhăn đơn giản Nguyên tương Là cấu trúc bao bọc bên ngồi màng ngun tương, trạng tháí gel, cấu trúc gồm 80% nước, protein có tính chất enzyme, cacbohydrat, lipid ion vô nồng độ cao, hợp chát có trọng lượng phân tử thấp Nguyên tương chứa dày đặc hạt hình cầu đường kính 18nm gọi ribơsơm Ngồi cịn tìm thấy hạt dự trữ glycogen, granulosa polymetaphotphat Nhân tế bào Có thể thấy với kính hiển vi ánh sáng sau nhuộm soi trực tiếp kính hiển vi pha tương phản Nhân hình cầu, hình que, hình tạ hình chữ V Khảo sát kính hiển vi điện tử 190 nhân khơng có màng nhân máy phân bào Nó sợi DNA trọng lượng phân tử 3x109 dallon chứa nhiễm sắc thể dài khoảng 1mm không xoắn Nhân nối liền đầu với thể mạc Sự nối liền giữ vai trò chủ yếu tách rời nhiễm sắc thể sau sợi nhiễm sắc thể mẹ tách đôi Trong phân chia nhân hai mạc thể qua chổ nối liền với màng nguyên tương di chuyển theo hướng đối nghịch theo hai nhóm nối liền với chúng Như màng nguyên tương tự động máy thô sơ gián phân với mạc thể đảm nhận vai trò thai vô sắc Lông vi khuẩn Lông chịu trách nhiệm tính di động vi khuẩn Người ta quan sát di động vi khuẩn kính hiển vi nhìn giọt treo đặt giọt vi khuẩn lam kính phủ kính mỏng Lơng dài 3-12 m hình sợi gợn sóng, mảnh 10- 20nm ) nên phải nhuộm với axít tannic đê tạo thành lớp kết tủa làm dày lông dễ phát Lông phát xuất từ thể đáy bên màng ngun tương có chuyển động xoay trịn Bản chất protein tạo nên tập hợp đơn vị phụ gọi flagellin tạo thành cấu trúc hình trụ rỗng Cách thức mọc lơng đặc tính di truyền Ở số loại nhiều lông mọc quanh thân, số lọai lông mọc cực số loại khác chùm lông cực Nếu lông bị làm học lơng tạo thành nhanh chóng Lơng đóng vai trị kháng ngun kháng nguyên H vi khuẩn đường ruột Pili Là phụ hình sợi, mềm mại lơng, mảnh nhiều có xu hướng thẳng đường kính 23 nm dài từ 0,3-1nm, tìm thấy từ đến trăm mặt vi khuẩn, chất protein Pili phát xuất màng nguyên tương xuyên qua vách tế bào Pili tìm thấy vi khuẩn gram âm tìm thấy số vi khuẩn gram dương Pili F có nhiệm vụ giao phối Những pili khác giúp cho vi khuẩn bám vào niêm mạc bề mặt khác tế bào Vỏ vi khuẩn Vỏ cấu trúc nhầy bọc quanh vách tế bào số vi khuẩn, thường Polysaccarit, có vỏ B.anthracis polypepit acid D-glutamic Vỏ phát dê dàng huyền dịch mực tàu vùng sáng mơi trường mờ đục tế bào vi khuẩn trông rõ Cũng phát phản ứng phình vỏ kỹ thuật nhuộm đặc biệt Sự đột biến tạo thành vỏ dể nhận biết tế bào có vỏ tạo nên khuẩn lạc bóng láng nhầy M tế bào không vỏ tạo nên khuẩn lạc xù xì R Nhiệm vụ biết vỏ bảo vệ vi khuẩn chống thực bào chống virut muốn gắn vào vách tế bào Nha bào Những thành viên Bacillus, Clostridium Sporosarcina tạo thành nội nha bào ảnh hưởng mơi trường bên ngồi khơng thuận lợi, tế bào làm phát sinh nha bào Nha bào nằm giữa, đầu nút gần đầu nút tùy theo loài, vách nha bào chứa thành phần mucopeptit axít dipicolinic Sự dề kháng nha bào với hóa chất độc tính khơng thẩm thấu vách nha bào, đề kháng với nhiệt liên hệ đến trạng thái nước cao Vì chịu đựng với điều kiện khơng thụân lợi bên ngồi nha bào góp phần quan trọng khả lây bệnh trực khuẩn hiếu khí tạo nha bào trực khuẩn than trực khuẩn kỵ khí tạo nha bào Clostridia, trực khuẩn uốn ván, hoại thư, sinh hơi, ngộ độc thịt 191 III SINH LÝ VI KHUẨN Như sinh vật khác vi khuẩn dinh dưỡng, chuyển hoa phát triển Sự dinh dưỡng Để phát triển vi khuẩn địi hỏi mơi trường ni cấy chứa đầy đủ yếu tố dinh dưỡng bao gồm hợp chất cần thiết để cung cấp lượng hợp chất dùng làm nguyên liệu để tổng hợp vật liệu tế bào Về nguyên liệu tổng vi 2+ khuẩn đòi hỏi nhu cầu 3- hợp, + muối khoáng PO4 , K , Mg với lượng đáng kể, số ion ( nguyên tố vi lượng ) cần nồng độ thấp Fe2+, Zn2+, Mo2+, Ca2+, ion thường tìm thấy nước muối khống khơng tinh khiết Nguồn C thức ăn lượng cung cấp Nguồn N thơng thưịng protein muối amoni Phần lớn vi khuẩn cung cấp đầy đủ yếu tố có khả tổng hợp chất cấu tạo tế bào Nhưng số vi khuẩn khả tổng hợp vài hợp chất đòi hỏi đưọc cung cấp mơi trường ni cấy Đó yếu tố phát triển; chúng chia thành hai loại, loại cần cung cấp lượng nhỏ đảm nhận chức vụ xúc tác thành phần enzyme ví dụ vitamin B, loại cần cung cấp lượng lớn dùng làm nguyên liệu cấu tạo tế bào axit amin, purin, pyrimidin Ngoài điều kiện vật lý nhiệt độ pH, áp suất oxy ảnh hưởng đến phát triển cân điều chỉnh thích hợp Sự chuyển hóa Bao gồm tất phản ứng hóa học xảy tế bào sống Nhờ phản ứng lượng chiết từ mơi trường sử dụng cho sinh tổng hợp phát triển Trong chuyển hóa quan trọng oxy hóa sinh học 2.1 Sự oxy hóa sinh học Sự oxy hóa định nghĩa loại bỏ điện tử từ chất kèm theo loại bỏ ion hydrô tức loại bỏ nguyên tử hydrơ Vì oxy hóa xem vận chuyển nguyên tử hydrô Cơ chất bị oxy hóa gọi chất cho hydrơ phẩm vật bị khử gọi chất nhận hydro Phần lớn hợp chất hữu ion hydrô loại bỏ điện tử Điện tử trạng thái tự dung dịch loại bỏ khỏi chất khơng có chất thích hợp để nhận Sự vận chuyển điện tử cốt lõi oxy hóa khử Tùy theo chất chất nhận hydro cuối người ta chia oxy hóa sinh học thành ba hình thức : Hơ hấp hiếu khí, hơ hấp kỵ khí lên men Chất nhận hydrô cuối oxy phân tử (O2) hơ hấp hiếu khí, hợp chất vô (nitrat, sulfat, cacbonat ) hơ hấp kỵ khí, hợp chất hữu lên men Về nhu cầu oxy người ta chia thành : Vi khuẩn hiếu khí bắt buộc vi khuẩn lao vài trực khuẩn tạo nha bào, vi khuẩn địi hỏi oxy thiếu khả lên men Vi khuẩn kỵ khí bắt buộc Clostridia, Propionibactrium, chúng phát triển oxy Vi khuẩn tùy ý nấm men, vi khuẩn đường ruột Những vi khuẩn sống khơng có oxy đổi thành chuyển hóa hơ hấp lúc có oxy 2.2 Sự hơ hấp hiếu khí Chất nhận hydrô cuối oxy phân tử Cơ chất thơng thường đường axít 192 béo, axít amin Điện tử chuyển từ chất cho hydrô đến chất nhận hydrô qua nhiều bước Điện tử lấy từ chất cho hydro chuyển đến coenzyme thứ A, A bị khử thành AH2 Một enzyme khác lại xúc tác chuyển điện tử từ AH2 đến coenzyme thứ hai B AH2 oxy hóa trở lại thành A B trở nên trở thành BH Quá trình tiếp diễn qua nhiều bước tạo nên dây chuyền hô hấp điện tử từ chât cho hydrơ đến oxy Hình 1: minh hoạ dây chuyền điện tử Kết cuối hình thành sản phẩm oxy hóa, sản phẩm khử lượng Năng lượng phát sinh dự trữ dây nối sẵn lượng tỏa thành nhiệt 2.3 Sự hơ hấp kỵ khí Cơ chất hợp chất hữu chất vô Chất nhận điện tử khơng phải oxy khơng khí mà nitrat, sulfat, cacbonat 2.4 Sự lên men Cơ chất hợp chất hữu chât nhân điện tử hợp chất hữu Ở đây, dây chuyền điện tử thông thường có NAD chất mang điện tử trung gian Hình 2: Sự chuyển điện tử lên men So với hô hấp, lên men hiệu nhiều, cung cấp ATP 19 lần mol glucoza chuyển hóa Một vi khuẩn phát triển với lượng giới hạn glucoza cho thấy hiệu suất phát triển (trọng lượng khô vi khuẩn / trọng lượng chất chuyển hóa) lớn điều kiện hiếu khí so với điều kiện kỵ khí Sự phát triển vi khuẩn Tế bào nhân lên phát triển Ở vi khuẩn đơn bào, phát triển làm gia tăng số lượng vi khuẩn sản phẩm cấy Vi khuẩn nhân lên phân liệt Một hệ định nghĩa tăng đôi tế bào Thời gian hệ khỏan thời gian cần thiết dể tăng đôi số tế bào Thời gian hệ thay đổi tùy lọai vi khuẩn, 20 phút E.coli, 20 - 24 vi khuẩn lao 3.1 Sự phát triển lũy thừa: 193 arabinose, dulcitol, glucose, lactose mannitol, làm lỏng gelatin, ADH (arginin đihydrolase) dương tính(+), citrat simmon dương tính(+), indol âm tính(-), khử nitrat thành N2 , di động mạnh 1.4 Sức đề kháng B pseudomallei có mặt tự nhiên, đặc biệt tìm thấy cánh đồng lúa nước vùng Đông Nam Á Chúng sống hàng tuần đến hàng tháng nơi ẩm gặp điều kiện thích hợp khơng có ánh sáng mặt trời lạnh 1.5 Miễn dịch Do vi khuẩn phân bố rộng rãi đồng ruộng, 30-50% nông dân khoẻ mạnh sống vùng B pseudomallei lưu hành có kháng thể chống vi khuẩn Khi bị bệnh, kháng thể tăng cao tồn vài tháng sau khỏi bệnh Tuy nhiên, kháng thể khơng có vai trị bảo vệ, bệnh nhân bị tái nhiễm tái phát cách dễ dàng Khả gây bệnh 2.1 Ở người Vi khuẩn gây bệnh Mélioidosis thường gặp Miến Điện, Thái Lan, Việt Nam, Lào, Campuchia, Indonesia châu Úc Vi khuẩn xâm nhập vào thể chủ yếu qua vết thương, chổ sây sát da Tại nơi xâm nhập chúng hình thành mụn mủ nhỏ, có tạo thành áp xe lớn Ở người suy giảm miễn dịch, mắc bệnh mạn tính kéo dài vi khuẩn thường vào máu gây bệnh cảnh lâm sàng nặng nhiểm khuẩn huyết Từ máu vi khuẩn đến phủ tạng gây nên áp xe nhỏ nhiều quan phổi, thận, gan, lách Sau áp xe nhỏ tạo thành áp xe lớn gây triệu chứng lâm sàng nhiều quan khác Vi khuẩn sống đại thực bào, điều giải thích trường hợp bệnh tái phát Bệnh diển biến cấp tính, bán cấp mãn tính Thể cấp tính nhiễm khuẩn huyết với ỉa chảy sốt ác tính, thường chết vài ngày Thể ban cấp dạng thương hàn với áp xe phổi, thận, gan, cơ, chết sau vài tuần lễ Thể mạn tính khu trú (áp xe xương da) nhiễm khuẩn huyết kiểu sóng 2.2 Khả gây bệnh thực nghiệm Người ta gây bệnh cho phần lớn động vật thỏ, chuột lang, chuột nhắt, ngựa nhiều đường khác nhau: qua da, tiêm tĩnh mạch, tiêm phúc mạc đường hô hấp Bệnh melioidose súc vật lây sang người Chẩn đoán vi sinh vật 3.1 Phân lập vi khuẩn Bệnh phẩm mủ áp xe, mụn mủ, máu nhiễm khuẩn huyết, đàm viêm phế quản, dịch màng phổi, dịch màng tim Cấy bệnh phẩm vào môi trường nuôi cấy thông thường thạch thường, thạch máu, canh thang mơi trường chọn lọc có chứa gentamicin Xác định vi khuẩn dựa vào hình thể, tính chất bắt màu, hình thái khuẩn lạc tính chất sinh hóa 3.2 Chẩn đoán huyết Trong điều tra dịch tễ học: dùng phản ứng ngưng kết hồng cầu thụ động tìm kháng thể ngưng kết Trong chẩn đoán bệnh: dùng phản ứng ngưng kết hồng cầu thụ động ELISA với kháng nguyên protein 274 Phòng ngừa điều trị 4.1 Phịng bệnh Hiện chưa có vaccine Tăng cường sức đề kháng chung, giữ gìn vệ sinh, tránh tổn thương da làm việc nơi có vi khuẩn 4.2 Điều trị Dùng kháng sinh tetracyclin, chloramphenicol, bactrim, ceftazidim Vì vi khuẩn lẫn tránh tế bào nên cần lưu ý chọn lựa kháng sinh khuếch tán tốt vào tế bào dùng thời gian dài để phòng ngừa tái phát Vi khuẩn kháng gentamycin, ampicillin, polymycin Dùng biện pháp chọc hút mủ ổ áp xe, tăng cường sức đề kháng, điều trị triệu chứng VIBRIO Mục tiêu học tập Trình bày đặc điểm sinh vật học Trình bày khả gây bệnh vi khuẩn tả V.parahaemolyticus .Trình bày phương pháp chẩn đốn vi sinh vật Giống Vibrio thuộc vào họ Vibrionaceae Chúng vi khuẩn hình que cong dấu phẩy, Gram âm, không sinh nha bào, di động nhờ lông đầu, oxydaza dương tính Giống Vibrio chia thành : Vibrio cholerae O1: thuộc nhóm huyết O1 có khả sinh độc tố ruột gây bệnh dịch tả Vibrio cholerae O1 bao gồm týp sinh học cổ điển týp sinh học El Tor Các sinh týp ngưng kết với kháng huyết nhóm 01 Trong nhóm có týp huyết Ogawa, Inaba Hikojima Vibrio cholerae O1/ khơng phải O139: bao gồm nhóm huyết từ O2 O138 khơng có khả gây dịch tả Có tính chất sinh hóa tương tự V.cholerae O1 không ngưng kết với kháng huyết O1 Các nhiễm trùng nhóm thường liên quan đến mơi sinh, chúng gây viêm ruột cấp chế gây bệnh chưa giải thích Vibrio cholerae O139: tác nhân gây bệnh dịch tả phát lần vào năm 1992 Ấn Độ Bangladesh Độc lực độc tố ruột kháng nguyên pili đồng điều hòa độc tố (Toxin coregulated pili - TCP) Các Vibrio khác : V mimicus; V parahaemolyticus; V.hollisae V fluvialis; V.furnissii; V.vulnificus; V.alginolyticus; V.damsela; V.cincinnatiensis; V.metschnikovii I VI KHUẨN TẢ (Vibrio cholerae) Đặc điểm sinh vật học 1.1 Hình thể Vi khuẩn tả hình que ngắn, cong hình cung hình dấu phẩy, Gram âm, di động nhờ lông đầu, vỏ, khơng sinh nha bào 1.2 Tính chất ni cấy Vi khuẩn tả hiếu khí, mọc môi trường dinh dưỡng thường, pH kiềm Thường dùng 275 nước pepton pH 8,5 , môi trường thạch TCBS (thiosulfate - Citrate - Bile salt) pH 8,6 , TTGA (Taurocholate - Tellurite - Gelatin Agar) pH 8,5 để nuôi cấy phân lập vi khuẩn tả 1.3 Tính chất sinh vật hóa học Vi khuẩn tả có oxidase, lên men không sinh glucose, saccharose, D-mannitol, maltose, không lên men arabinose Phản ứng indol dương tính, phản ứng Voges-Proskauer âm tính sinh týp cổ điển dương tính sinh týp El Tor 1.4 Cấu trúc kháng nguyên Kháng nguyên thân O: chất lipopolysaccharide Nó định tính sinh miển dịch vaccine tả cổ điển (vaccine tả chết) Người ta phân biệt thành nhiều nhóm huyết “O” V.cholerae sinh týp cổ điển sinh týp El Tor thuộc nhóm huyết O1 Trong nhóm O1 có týp huyết : Ogawa, Inaba Hikojima Kháng ngun lơng H: Khơng có giá trị thực tiển Kháng nguyên độc tố ruột chất protein, độc tố ruột V.cholerae 01 kích thích thể sinh kháng độc tố 1.5 Sức đề kháng Vi khuẩn tả chết nhiệt độ 100oC 80oC/5 phút bị tiêu diệt hóa chất cloramin, cresyl, vôi cục Khô hanh ánh nắng mặt trời làm vi khuẩn dễ chết Trong nước đá, nước biển, nước ao hồ vi khuẩn sống vài ngày Khả gây bệnh 2.1 Sinh bệnh học Các vi khuẩn tả xâm nhập thể đường tiêu hóa, chúng phải vượt qua hàng rào dịch vị dày có pH axít để xuống ruột non nơi có pH thích hợp cho phát triển vi khuẩn Độ axít bình thường dịch vị cản trở lớn trình sinh bệnh vi khuẩn tả Vào đến ruột non, V.cholerae bám dính vào tế bào niêm mạc ruột nhờ có yếu tố bám dính kháng ngun TCP, kháng nguyên ngưng kết hồng cầu nhạy cảm với mannoza , vi khuẩn nhân lên tiết độc tố ruột Các vi khuẩn không xâm nhập vào tế bào niêm mạc ruột Độc tố ruột vi khuẩn tả protein gồm tiểu phần A (Active) B (Binding) có chức riêng biệt Tiểu phần A có hai tiểu đơn vị A1 A2, tiểu phần B có tiểu đơn vị B1, B2, B3, B4 B5 Tiểu phần B có chức gắn độc tố ruột vào thụ thể ganglioside GM1 màng tế bào niêm mạc ruột, tiểu phần A mà chủ yếu A1 xâm nhập vào bên tế bào hoạt hóa enzymee adenylate cyclase, làm tăng nồng độ AMP vòng nội bào làm cho tế bào niêm mạc ruột giảm hấp thu Na+, tăng tiết nước Cl-, gây ỉa chảy cấp tính Nếu khơng điều trị tích cực bệnh nhân chết kiệt nước chất điện giải Độc tố tả gây nên ức chế miễn dịch tế bào cách tác động trực tiếp lên macrophage tế bào lympho T Trong trình sinh bệnh tả, độc tố tả vi khuẩn tả không gây nên thương tổn niêm mạc ruột Vì chế hấp thụ lại muối, nước glucose nguyên vẹn Đây sở sinh lý cho việc bù dịch đường uống dung dịch có điện giải glucose (ORESOL) có tác dụng tốt (glucose nhằm tạo điều kiện hấp thụ lại Na cao hơn, để cung cấp lượng) 2.2 Khả gây bệnh Trong điều kiện tự nhiên bình thường, V.cholerae gây bệnh tả cho người Bệnh tả bệnh 276 nhiễm trùng nhiễm độc cấp tính, lây mạnh gây thành dịch lớn Thời gian ủ bệnh từ đến ngày Dấu hiệu đặc trưng thời kỳ tồn phát bệnh tiêu chảy nơn, phân lỏng trắng nước vo gạo Bệnh nhân nước, muối nhanh, lít nước vài xuất hội chứng nước cấp tính làm cho toàn thân sút nhanh nặng Nếu không điều trị, tỷ lệ chết cao (50 đến 60%) Lâm sàng bệnh tả có nhiều biểu khác từ thể nhẹ dễ bỏ qua thể nặng với hội chứng tả điển hình 2.3 Miễn dịch Đáp ứng miễn dịch dịch thể bệnh tả làm xuất IgG máu IgA tiết niêm mạc ruột Các kháng thể chống lại vách tế bào vi khuẩn, ngăn cản vi khuẩn bám dính vào niêm mạc chống lại độc tố tả, ngăn cản độc tố tả (tiểu phần B) gắn vào màng tế bào niêm mạc ruột 2.4 Dịch tễ học Bệnh tả lây truyền qua đường tiêu hóa qua thức ăn, nước bị nhiễm khuẩn Nguồn truyền nhiễm người bệnh người lành mang vi khuẩn tả Kể từ năm 1817 giới xảy đại dịch tả Sáu đại dịch tả V.cholerae sinh type cổ điển gây nên Đại dịch tả lần thứ V.cholerae sinh týp El Tor gây nên, năm 1961 kéo dài ngày V.cholerae El Tor đề kháng với tác nhân hóa học, tồn lâu người sống thiên nhiên lâu V.cholerae sinh týp cổ điển Ngoài vùng bệnh tả El Tor lưu hành trường hợp nặng thường trường hợp nhẹ không triệu chứng lại nhiều Bắt đầu từ năm 1992 dịch tả xảy Madras nhiều nơi khác thuộc Ấn Độ Bangladesh Vibrio cholerae O139 gây nên với chế bệnh sinh hoàn toàn giống Vibrio cholerae O1 Sau dịch tả chủng O139 lây lan nước khác Chẩn đoán vi sinh vật 3.1 Chẩn đoán trực tiếp Bệnh tả bệnh cấp tính nên cấy phân để phân lập vi khuẩn tả phương pháp chẩn đoán tốt 3.1.1 Bệnh phẩm Lấy phân sớm thời kỳ đầu bệnh trước điều trị kháng sinh Bệnh phẩm phân cần đưa phòng xét nghiệm vòng Nếu gửi bệnh phẩm xa phải cho vào môi trường bảo quản vận chuyển Cary Blair, đưa phòng xét nghiệm sớm tốt 3.1.2 Xét nghiệm kính hiển vi Soi tươi thấy vi khuẩn tả di động nhanh Nhuộm Gram thấy nhiều phẩy khuẩn Gram âm Xét nghiệm bệnh phẩm kính hiển vi có tác dụng chẩn đốn sơ 3.1.3 Nuôi cấy Bệnh phẩm cấy vào môi trường chọn lọc môi trường phong phú để phân lập vi khuẩn Xác định tính chất sinh vật hóa học Làm phản ứng ngưng kết phiến kính với kháng huyết đa giá O1 với kháng huyết đơn giá đặc hiệu týp Inaba Ogawa để xác định chẩn đoán 3.1.4 Phương pháp chẩn đoán nhanh Để xác định nhanh vi khuẩn tả dùng kỹ thuật bất động vi khuẩn, kháng thể huỳnh quang trực tiếp 277 3.2 Chẩn đoán gián tiếp Phương pháp chẩn đốn huyết khơng giúp ích cho chẩn đốn bệnh Nó dùng điều tra dịch tể học Phòng bệnh chữa bệnh 4.1 Phòng bệnh 4.1.1 Phòng bệnh chung Giám sát dịch tể học, chủ động phát nguồn bệnh sớm, kịp thời cách ly, bao vây xử lý Làm môi trường sống biện pháp xử lý rác nước thải theo yêu cầu vệ sinh; kiểm tra vệ sinh thực phẩm; thực ăn chín uống sơi 4.1.2 Phịng bệnh đặc hiệu Vaccine chết, dùng đường tiêm da, có hiệu lực thấp thời gian bảo vệ ngắn Hiện nhiều nước không sử dụng loại vaccine cổ điển Vaccine sống giảm độc lực: tạo chủng đột biến không độc để làm vaccine uống Hiện thử nghiệm Vaccine chết, uống: Loại vaccine dạng toàn tế bào bất hoạt đơn dạng kết hợp với tiểu đơn vị B độc tố tả tinh chế Ở Việt Nam dùng loại vaccine tả đường uống đơn liên chứa tế bào Vibrio cholerae O1 cổ điển El Tor bất hoạt nhiệt formalin Hiện thử nghiệm loại vaccine tả bất hoạt (Vaccine biv-WC) gồm Vibrio cholerae O1 Vibrio cholerae O139 4.2 Chữa bệnh Phải bù nước điện giải sớm, nhanh đủ cho bệnh nhân Dùng kháng sinh Tetracycline, Doxycycline II VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS V.parahaemolyticus phân lập lần đầu Nhật Bản năm 1950 từ phân bệnh nhân tiêu chảy ăn cá biển Đặc điểm sinh vật học V.parahaemolyticus có hình cong ngắn Gram âm di động Là vi khuẩn ưa mặn (halophile) tồn nước biển động vật biển cá, tôm, sị, ốc Vi khuẩn mọc tốt mơi trường kiềm mặn Nhiệt độ thích hợp cho nhân lên 37oC V.parahaemolyticus có oxidase dương tính, lên men D-mannitol, maltose, L.arabinose, không lên men saccharose V.parahaemolyticus bị chết 65oC sau 10 phút, chúng không phát triển nhiệt độ 15oC Vi khuẩn có loại kháng nguyên : + Kháng nguyên thân O : chịu nhiệt, chia thành 12 type + Kháng nguyên lông H + Kháng nguyên vỏ K : không chịu nhiệt, chia thành 59 type Khả gây bệnh V.parahaemolyticus nguyên nhân gây nhiễm trùng nhiễm độc thức ăn Người mắc bệnh chủ yếu ăn phải thức ăn hải sản chưa nấu chín bị nhiễm 278 khuẩn q trình chế biến bảo Thời gian ủ bệnh bệnh ngắn từ - kiểu tả nhẹ tiêu chảy kiểu lỵ trực Bệnh vi khuẩn gây gặp nhiều quản Bệnh biểu triệu chứng nôn tiêu chảy khuẩn Nhật Bản, gặp nhiều nước khác Ở Việt Nam gặp nhiều lần vùng bờ biển Bắc Bộ Chẩn đoán vi sinh vật Phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm phân, chất nôn bệnh nhân Phân lập vi khuẩn từ hải sản trường hợp điều tra thực phẩm nhiễm khuẩn Phòng bệnh chữa bệnh Chưa có vaccine phịng bệnh Phịng bệnh chung cách nấu kỹ thức ăn hải sản, không ăn sống hải sản - Điều trị kháng sinh nhạy cảm tetracycline, chloramphenicol CAMPYLOBACTER VÀ HELICOBACTER Mục tiêu học tập Trình bày số tính chất vi khuẩn học Campylobacter Helicobacter Nêu khả gây bệnh vi khuẩn Trình bày số phương pháp chẩn đốn vi khuẩn học Campylobacter Helicobacter I CAMPYLOBACTER JEJUNI Giống Campylobacter thuộc họ Spirillaceae, gồm có lồi khác gây bệnh cho người Đặc điểm sinh vật học Campylobacter jejuni vi khuẩn bé, mảnh, Gram âm, hình dấu phẩy nhọn hai đầu, di động nhờ có lơng đầu, không sinh nha bào Nuôi cấy C.jejuni môi trường nhân tạo thường khó khăn vi khuẩn địi hỏi điều kiện vi hiếu khí (micro-aerophile) Mọc 37 o C mọc tốt 42o C, không mọc 25o C Thường dùng môi trường chọn lọc thạch máu Columbia, thạch máu tryptose để phân lập vi khuẩn C.jejuni mọc chậm sau - ngày Vi khuẩn có Oxydase Catalase, phân hủy nitrat, khơng oxy hóa khơng lên men loại đường C.jejuni có kháng nguyên O chịu nhiệt chia thành 23 typ huyết có kháng ngun H khơng chịu nhiệt Khả gây bệnh C.jejuni tác nhân gây viêm ruột cấp tính thường gặp người Chúng xâm nhập vào người ăn uống thức ăn nước bị nhiễm khuẩn, tiếp xúc với động vật, chủ yếu với gia cầm, gia súc Thời gian ủ bệnh 2-10 ngày Thể lâm sàng thường gặp bệnh cảnh viêm ruột cấp 279 tính với dấu hiệu đau bụng, tiêu chảy dội, phân nước có có máu mủ Có trường hợp xảy nhiễm khuẩn huyết Tiêu chảy C.jejuni kéo dài 5-10 ngày Đa số trường hợp khỏi không cần điều trị kháng sinh Cơ chế gây bệnh chưa rõ C.jejuni có độc tố ruột, có ý kiến cho vi khuẩn có khả xâm nhập giống Shigella C.jejuni nhân lên chủ yếu hồi tràng hổng tràng Bệnh viêm ruột C.jejuni xảy nhiều nơi giới, gây tiêu chảy cấp người, đặc biệt trẻ em khách du lịch từ nước phát triển đến nước nhiệt đới Chẩn đoán vi sinh vật Chẩn đoán viêm ruột cấp C.jejuni phải dựa chủ yếu vào phân lập vi khuẩn từ phân bệnh nhân Cấy phân vào môi trường chọn lọc, để nhiệt độ 42oC từ - ngày khí trường có 5% oxy, 10% cacbonic 85% nitơ Phịng bệnh điều trị Chưa có vaccin Cần ý vệ sinh môi trường, vệ sinh ăn uống Kháng sinh nên dùng trường hợp nhiễm khuẩn huyết tiêu chảy kéo dài II HELICOBACTER PYLORI Từ năm 1900 đến năm 1980, người ta ghi nhận có diện vi khuẩn hình xoắn niêm mạc dày Nhưng phát khơng quan tâm mức, cuối kỷ 20 này, người ta quan niệm dày môi trường khơng có vi khuẩn độ pH acid Mãi đến năm 1979, Warren đưa giả thuyết vi khuẩn ngun gây viêm, loét dày - tá tràng Năm 1981, Marshall bắt đầu tìm phương pháp phân lập vi khuẩn này, đến năm 1982 ông nuôi cấy thành công thấy vi khuẩn giống Campylobacter jejuni , năm 1983 ơng thức cơng bố vi khuẩn tạp chí Lancet (Paris) với tên Campylobacter pyloridis, sau gọi Campylobacter pylori Năm 1989, Goodwin nghiên cứu cấu trúc tế bào vi khuẩn thấy chúng khác hẳn Campylobacter khác nên đề nghị xếp Campylobacter thành giống mới, giống Helicobacter từ Campylobacter pylori gọi Helicobacter pylori Đặc điểm sinh vật học Là vi khuẩn nhỏ, lúc phân lập từ mẫu sinh thiết niêm mạc dày có hình cong, hình chữ S, đứng thành đám Nếu cấy chuyển nhiều lần có hình que Vi khuẩn Gram âm, di động nhờ có 2-6 lơng đầu Vi khuẩn khơng sinh nha bào Vi khuẩn địi hỏi điều kiện vi hiếu khí u cầu dinh dưỡng cao, mơi trường ni cấy cần có máu động vật huyết Vi khuẩn mọc chậm, môi trường thạch máu Colombia thạch máu tryptose sau ngày ủ 37oC, thấy khuẩn lạc nhỏ, khơng màu, có đỉnh nhọn Vi khuẩn khơng lên men loại đường, có oxydase catalase, urease dương tính mạnh Urease dương tính mạnh tính chất dùng để phân biệt H pylori với vi khuẩn có hình cong khác Campylobacter Miễn dịch 2.1 Đáp ứng miễn dịch chỗ Tại nơi H pylori xâm nhập, xuất hiện tượng tập trung số lượng lớn bạch cầu trung tính tế bào lympho Các tế bào lympho bạch cầu giải phóng interleukin gốc tự oxy hoá, phản ứng viêm chỗ khơng có khả loại bỏ H pylori 280 2.2 Đáp ứng miễn dịch dịch thể Khi nghiên cứu tìm kháng thể máu bệnh nhân loét dày - tá tràng có mặt H pylori, người ta phát thấy có gia tăng kháng thể IgG, IgA đặc biệt IgM Các kháng thể giảm cách có ý nghĩa sau tiệt trừ hết H pylori Vấn đề ứng dụng chẩn đoán huyết học giám sát kết điều trị Khả gây bệnh người 3.1 Khả gây bệnh Từ Marshall phân lập thành công vi khuẩn này, nhiều công trình nghiên cứu vai trị gây bệnh H pylori thực Người ta tiến hành nghiên cứu người tình nguyện, người khơng có hội chứng viêm, lt dày; họ uống H pylori Sau thời gian, họ bị viêm dày; sau người ta lại dùng biện pháp tiêu diệt H pylori người lại hết viêm dày Gần đây, nhiều tác giả nhận xét rằng, trường hợp viêm loét dày - tá tràng liên quan đến nhiễm trùng H pylori; đặc biệt thể viêm teo, thể dễ dẫn đến ung thư dày mà lại thấy ln ln có mặt vi khuẩn 3.2 Cơ chế gây bệnh H pylori di động, xâm nhập qua lớp chất nhầy xâm lấn biểu mô dày, đặc biệt khoảng gian bào Vi khuẩn sản sinh urease mạnh, enzyme có hoạt tính phân giải urê thành amoniac Urê sản phẩm chuyển hố mơ tế bào, chúng vào máu phần đào thải qua thận Một lượng urê từ máu qua lớp niêm mạc dày vào dịch dày Amoniac có phản ứng kiềm làm tăng tạm thời pH chỗ đến khoảng 6,5 giúp cho vi khuẩn sống sót mơi trường axit dày Ngồi amoniac cịn gây độc trực tiếp tế bào niêm mạc dày H.pylori làm giảm chất nhầy bảo vệ thành dày axit dịch vị tác động trực tiếp lên thành dày Sự phối hợp nhiều yếu tố gây viêm, lóet dày Trên bệnh nhân bị viêm lóet dày - tá tràng phân lập H.pylori từ 80%-90% trường hợp 3.3 Dịch tể học Tình trạng kinh tế xã hội có ảnh hưởng lớn đến tượng nhiễm H pylori Ngay Mỹ, tỷ lệ nhiễm H pylori người da đen cao người da trắng, liên quan đến đời sống tinh thần, vật chất vệ sinh mơi trường Nguồn truyền nhiễm người, gặp khỉ không đáng kể Đường lây chủ yếu người truyền sang người Phương thức lây truyền đường phân - miệng đường miệng - miệng, đường phân - miệng đóng vai trị chủ yếu Chẩn đoán vi sinh vật 4.1 Chẩn đoán trực tiếp Phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm, bệnh phẩm thông thường mẫu sinh thiết niêm mạc dày nội soi, dịch dày Ni cấy lên mơi trường thích hợp thạch máu Colombia, ủ 37oC điều kiện vi hiếu khí, sau ngày thấy khuẩn lạc nghi ngờ trích biệt nhuộm Gram (cần thay đỏ Safranin đỏ Fuchsin để màu đỏ rõ vi khuẩn nhỏ), thử nghiệm tính chất sinh vật hóa học để xác định vi khuẩn 4.2 Chẩn đoán nhanh test ureaza Cho mẫu sinh thiết vào mơi trường Ure-christensen, mẫu nghiệm có H.pylori chúng phân hủy ure thành amonium carbon dioxide làm cho pH môi trường trở nên kiềm đổi màu 281 thị màu đỏ phenol từ màu hồng sang đỏ cánh sen 4.3 Thử nghiệm đo hàm lượng carbon đồng vị phóng xạ C13 thở Theo nguyên lý CO2 tạo thành sau phản ứng phân hủy ure theo máu tới phổi thải theo thở Đưa vào thể bệnh nhân ure gắn C13, đo hàm lượng C13 thải theo thở để xác định có hay khơng nhiễm H.pylori 4.4 Tìm kháng thể kháng H.pylori Tìm kháng thể kháng H.pylori huyết thanh, nước bọt dịch dày thử nghiệm ELISA Thường dùng điều tra dịch tễ học nhiễm H.pylori 4.5 Kỹ thuật khuếch đại gen (PCR) Kỹ thuật PCR phát đoạn gen đặc hiệu H.pylori mảnh sinh thiết dày, dịch dày, nước bọt phân bệnh nhân Phòng bệnh điều trị 5.1 Phòng bệnh Phòng bệnh chung: bệnh dày-tá tràng phụ thuộc nhiều vào điều kiện kinh tế - xã hội Việc nâng vao đời sống cho nhân dân cần thiết, vệ sinh mơi trường đóng vai trị quan trọng, bệnh lây chủ yếu qua đường phân miệng Phịng bệnh đặc hiệu: phịng bệnh có hiệu lý tưởng dùng vaccine Hiện nay, loại vaccine phòng bệnh viêm loét dày-tá tràng nhà nghiên cứu giới quan tâm thực nghiệm, hy vọng tương lai gần có vaccine để phòng bệnh 5.2 Điều trị Hiện nay, điều trị viêm loét dày - tá tràng, ngồi sử dụng thuốc kháng tiết, người ta cịn dùng kháng sinh để tiêu diệt nguyên vi khuẩn H pylori, thường dùng hai loại kháng sinh phối hợp Metronidazol Tinidazol với Amoxicilline Clarithrromycin hiệu tác dụng tốt dùng loại CÁC XOẮN KHUẨN GÂY BỆNH Mục tiêu học tập Mô tả trả lời câu hỏi tính chất vi khuẩn học xoắn khuẩn gây bệnh gồm vi khuẩn gaing mai, leptospira borrelia gây bệnh Trình bày trả lời tính chất gây bệnh xoắn khuẩn gây bệnh Nêu trả lời phương pháp chẩn đốn phịng thí nghiệm, ngun tắc phịng điều trị xoắn khuẩn gây bệnh Các xoắn khuẩn có dạng hình xoắn, có khả di động, xoắn khuẩn có nhiều nơi tự nhiên, nhiều loại ký sinh thể người động vật Một số xoắn khuẩn gây bệnh cho người, khảo sát loại xoắn khuẩn Các Treponema Các Leptospira Các Borrelia 282 I XOẮN KHUẨN GIANG MAI ( TREPONEMA PALLIDUM ) Họ vi khuẩn Treponema bao gồm nhiều lồi, chia làm loại Loại không gây bệnh: Loại chiếm số đông, chúng sống nhiều nơi khác thể đường sinh dục có T.genitale; hốc miệng có T.macrodentium Loại gây bệnh: gồm lồi T carateum gây bệnh pinta, loài T.pallidum với loài T pallidium subspecies pallidum gây bệnh giang mai hoa liễu thường gặp người, thường gọi tắt T pallidum Đặc tính sinh vật học 1.1 Đặc tính hình thái: Vi khuẩn giang mai có dạng hình xoắn mảnh dài 8-20 µm, rộng 0,1-0,2 µm vi khuẩn có từ đến 14 vịng xoắn đều, mổi vịng xoắn cách khoảng µm Vi khuẩn khơng có vỏ, khơng tạo nha bào, chúng có lơng đầu không di động lông mà uốn khúc vòng lượn quay quanh trục Vi khuẩn giang mai bắt màu thuốc nhuộm Giemsa, vi khuẩn bắt màu tốt phương pháp nhuộm thấm bạc, nên phương pháp thông dụng dùng để nhuộm xoắn khuẩn, xoắn khuẩn giang mai bắt màu nâu đen màu nâu nhạt Treponema pallidum chưa nuôi cấy môi trường nhân tao, cách giữ chủng tiêm truyền nhiều lần qua tinh hồn thỏ 1.2 Tính chất đề kháng Xoắn khuẩn giang mai đề kháng kém, khỏi thể động vật vi khuẩn chết nhanh chóng Các chất sát khuẩn thơng thường iod, thủy ngân, xà phịng dể dàng giết chết vi khuẩn, nhiệt độ 42oC vi khuẩn bị giết chết khoảng 30 phút, huyết cất giử nhiệt độ 4oC vi khuẩn sống ngày, âm 70oC vi khuẩn tồn nhiều năm Vi khuẩn nhạy cảm với thuốc kháng sinh penicillin, tetracyclin 1.3 Tính chất kháng nguyên Cấu trúc kháng nguyên vi khuẩn giang mai biết, thân vi khuẩn chứa phức hợp protien, lipid polysaccharide Ở bệnh nhân mắc bệnh giang mai huyết có chứa loại kháng thể cho phản ứng với hợp chất lipit chiết xuất từ tim bê gọi cardiolipin, sở cho phản ứng huyết học cổ điển xác định bệnh giang mai Khả gây bệnh 2.1 Dịch tễ học Vi khuẩn lây truyền chủ yếu qua tiếp xúc sinh dục người lành người bệnh bị giang mai, khả lây truyền cao lúc bệnh nhân bị giang mai giai đoạn I Các đường lây truyền khác gồm niêm mạc mắt, niêm mạc miệng qua da bị xây sát Ở phụ nữ có thai bị bệnh giang mai vi khuẩn qua rau thai gây giang mai bẩm sinh, mặt khác đứa trẻ bà mẹ bị nhiễm trùng sinh, lúc trẻ qua đường sinh dục bà mẹ Vi khuẩn giang mai truyền qua đường truyền máu 2.2 Đặc điểm sinh bệnh bệnh lý 2.2.1.Giang mai mắc phải Vi khuẩn giang mai xâm nhập nhanh qua niêm mạc toàn vẹn bị xây sát Sau vài vi khuẩn có hệ thống bạch huyết vào máu Thời gian hệ vi khuẩn giang mai 30-32 Thời gian ủ bệnh tỷ lệ với số lượng vi khuẩn đưa vào Nói chung nồng độ vi khuẩn phải đạt 107 vi khuẩn/ 283 gam tổ chức trước xuất tổn thương lâm sàng Thực nghiệm cho thấy chích da số lượng vi khuẩn 106 gây nên tổn thương bệnh lý sau 72 giờ, chích liều thấp thời gian dài Trong nhiễm trùng tự nhiên người thời gian ủ bệnh trung bình 21 ngày Bệnh diễn biến qua thời kỳ Giang mai giai đoạn I: giai đoạn kéo dài đến tuần lễ, biểu tổn thương tiên phát thường phận sinh dục săng giang mai Vi khuẩn giang mai có nhiều tổn thương nên khả lây nhiễm cao Giang mai giai đọan II: từ tháng đến năm biểu giai đoạn ban đỏ da tổn thương quan nội tạng phát triển Giang mai giai đoạn III: tổn thương hình thành quan nội tạng tim, mạch máu, xương, tổ chức thần kinh dạng gôm giang mai Tổn thương hệ thống thần kinh trung ương gây liệt tàn phế 2.2.2 Giang mai bẩm sinh Ở phụ nữ có thai bị bệnh giang mai vi khuẩn qua rau thai gây bệnh cho thai nhi, đứa bé chết cịn bụng mẹ sống đến sinh Ở đứa trẻ thể có tổn thương giang mai quan làm cho đứa trẻ bị tàn phế Chẩn đốn phịng thí nghiệm Có nhiều phương pháp chẩn đốn phịng thí nghiệm tùy theo giai đoạn bệnh Hai phương pháp chẩn đốn phịng thí nghiệm thường dùng 3.1 Phương pháp chẩn đoán trực tiếp Phương pháp áp dụng với giang mai giai đoạn I có nhiều vi khuẩn tổn thương săng giang mai Bệnh phẩm chất tiết dịch từ tổn thương phát diện vi khuẩn kỹ thuật sau Khảo sát vi khuẩn kính hiển vi đen Nhuộm nhuộm thấm bạc Nhuộm kháng thể huỳnh quang trực tiếp Xác định DNA xoắn khuẩn giang mai kỹ thuật PCR 3.2 Phương pháp chẩn đoán gián tiếp Bằng dùng thử nghiệm huyết học có hai loại phản ứng huyết học dùng Loại phản ứng huyết với kháng nguyên không đặc hiệu loại phản ứng huyết với kháng nguyên giang mai đặc hiệu 3.2.1 Phản ứng huyết với kháng nguyên giang mai không đặc hiệu Trong loại phản ứng kháng nguyên dùng hợp chất lipid từ tim bê (cardiolipin) Có loại phản ứng Phản ứng lên phản ứng VDRL, RPR Đây phản ứng dễ thực hiện, cho kết nhanh thường dùng phịng thí nghiệm Phản ứng ELISA (VISUWELL) kháng nguyên dùng kháng nguyên phản ứng lên Đây kỷ thuật chẩn đoán cho kết tin cậy Phản ứng cố định bổ thể dùng trước đây, khơng cịn dùng Phản ứng lên bơng phản ứng cố định bổ thể có cho kết dương tính giả số 284 trường hợp bệnh sốt rét, bệnh thận hư nhiễm mở, bệnh lupus ban đỏ, phụ nữ có thai 3.2.2 Phản ứng huyết với kháng nguyên giang mai đặc hiệu Các phản ứng dùng gồm Phản ứng hấp thụ kháng thể huỳnh quang giang mai (Fluorescent treponema antibodyAbsorption: FTA-Abs) phản ứng dương tính sớm bệnh giang mai cịn dương tính kéo dài sau bệnh điều trị hiệu Phản ứng kháng thể ngưng kết hồng cầu giang mai (TPHA) Phản ứng ELISA xác định IgM: kháng thể kháng IgM (anti-IgM) gắn lên giếng, kháng thể bắt IgM có huyết bệnh nhân, kháng nguyên giang mai khiết xác định IgM đặc hiệu, phức hợp xác đinh cho kháng thể đơn dịng gắn enzyme Phản ứng hửu ích để chẩn đoán giang mai bẩm sinh trẻ em Phản ứng bất động xoắn khuẩn giang mai (Treponema pallidum Immobilization:TPI) Huyết bệnh nhân chứa kháng thể làm bất động kháng thể giang mai Phản ứng cần dùng vi khuẩn giang mai sống nên không dùng chẩn đốn phịng thí nghiệm Các phản ứng huyết với kháng nguyên đặc hiệu xác, địi hỏi trang thiết bị đắt tiền nên khó áp dụng rộng rải Các phản ứng đặc hiệu dương tính sớm thời gian cuối giang mai giai đoạn I nên loại phản ứng dùng để chẩn đóan sớm bệnh giang mai Tuy nhiên độ nhạy cao phản ứng dùng để theo dỏi đáp ứng với điều trị Sau điều trị có hiệu chuẩn độ kháng thể phản ứng VDRL giảm nhanh: giảm lần sau tháng giảm lần sau sáu tháng nên phản ứng thường dùng để theo dõi đáp ứng với điều trị Phòng bệnh điều trị 4.1 Phòng bệnh Chủ yếu dùng biện pháp chung trừ mại dâm, giáo dục phòng bệnh STD, vệ sinh hoạt động sinh lý tình dục 4.2 Điều trị Kháng sinh penicillin thuốc chọn lọc để diều trị bệnh giang mai, thuốc kháng sinh tetracyclin, erythromycin dùng cho trường hợp dị ứng với penicillin cho trẻ em II XOẮN KHUẨN GÂY SỐT VÀNG DA XUẤT HUYẾT ( LEPTOSPIRA) Leptospira gồm nhiều chủng khác chia làm loại Loại không gây bệnh chiếm đa số, chúng sống khắp nơi tự nhiên Loại gây bệnh sống ký sinh động vật gây bệnh cho động vật Ở Viêt Nam bệnh Leptospira thường xảy nhiều rơi, nhiều địa phương có ổ dịch lưu hành Đặc điểm sinh vật học 1.1 Đặc điểm hình thái Leptospira lọai xoắn khuẩn nhỏ dài 4-20 µm, rộng 0,1-0,2 µm đầu uốn cong hình móc câu, kính hiễn vi đen vòng xoắn sát Vi khuẩn bắt màu tốt với phương pháp nhuộm thấm bạc vi khuẩn bắt màu nâu đen 285 Hình hình thể vi khuẩn L ictero hemorhagie 1.2 Tính chất ni cấy Leptospira phát triển mơi trường ni cấy nhân tạo Vi khuẩn phát triển nhiệt độ thích hợp 28-30oC pH kiềm 7.2 - 7.5 Mơi trường ni cấy xoắn khuẩn Leptospira cần phải có huyết thỏ tươi môi trường Terskich, môi trường Korthof Trong môi trường xoắn khuẩn Leptospira mọc chậm khoảng tuần, làm mơi trường đục nhẹ Ngồi vi khuẩn phát triển phơi gà 1.3 Tính chất đề kháng Leptospira đề kháng kém, vi khuẩn sống lâu nước có pH kiềm nhẹ nhiệt độ > 22oC Leptospira bị giết chết đun 50oC 10 phút chịu lạnh, bệnh phẩm tạng phủ chuột giữ tủ lạnh vi khuẩn sống đến 25 ngày Ở pH axit vi khuẩn bị giết chết nhanh chóng, hóa chất có tác dụng bề mặt xà phịng hóa chất phenol giết chết vi khuẩn dể dàng Leptospira nhạy cảm với nhiều kháng sinh penicillin, tetracyclin, chloramphenicol 1.4 Tính chất kháng nguyên: Cấu trúc kháng nguyên Leptospira khác tùy theo mổi chủng Vi khuẩn có kháng nguyên thân, chất hóa học polysaccaride, gồm yếu tố đặc hiệu cho lồi có tính chất cố định bổ thể, yếu tố đặc hiệu nhóm có tính chất ngưng kết Hiện Việt Nam chọn 12 chủng Leptospira dùng chẩn đoán huyết học gồm L australis; L.autumnalis; L.bataviae; L canicola; L.soi; L grippotyphosa; L.hebdomadis; L.icterohemorrhagie; L.mitis; L pomona; L.saxkoebing; L sejroe Khả gây bệnh 2.1 Dịch tễ học Vi khuẩn Leptospira gây bệnh thường ký sinh thể động vật, thường chuột, vi khuẩn gây nên nhiễm trùng thể ẩn chuột chúng đào thải môi trường bên qua nước tiểu chuột gây nhiễm bẩn nguồn nước, vùng đất ẩm, hồ nước tù đọng, vũng nước hầm mỏ Trong điều kiện thuận lợi pH kiềm nhiệt độ 22oC vi khuẩn sống lâu nơi Vi khuẩn xâm nhập vào thể qua chổ da bị xây xát, qua niêm mạc, da lành ngâm lâu nước Do bệnh thường gặp người làm ruộng, thợ hầm mỏ, thợ rừng người tắm lội hầm nước bị nhiễm bẩn vi khuẩn Leptospira Bệnh truyền qua vết cắn chuột Bệnh xảy giới, gặp lứa tuổi, khơng có mùa rõ rệt 286 2.2 Bệnh lý người Thời gian ủ bệnh - 26 ngày, bệnh đặc trưng hội chứng nhiễm khuẩn nặng đồng thời biểu tổn thương nhiều hệ thống quan Hội chứng màng não Hội chứng tổn thương gan thận Hội chứng xuất huyết Bệnh thường kéo dài - 12 ngày Các trường hợp nặng tử vong tổn thương nặng nhiều quan suy thận Tuy nhiên hồi phục thường hồn tồn, khơng để lại di chứng quan, thời gian hồi phục kéo dài - tháng 2.3 Bệnh động vật Động vật nhạy cảm chuột, sau tiêm vào màng bụng chuột xoắn khuẩn gây bệnh, bệnh khởi phát với sốt vàng da xuất huyết nhiều tạng phủ Chuột chết mổ tử thi chuột tìm nhiều xoắn khuẩn gan chuột Chẩn đốn phịng thí nghiệm 3.1 Chẩn đoán trực tiếp Lấy bệnh phẩm máu nước tiểu bệnh nhân tuần lể đầu Soi tươi vi khuẩn kính hiễn vi đen, nhuộm xoắn khuẩn nhuộm Fontana -Tribondeau Bệnh phẩm nuôi cấy vào môi trường Terskich Korthoff Khảo sát vi khuẩn phát triển môi trường Tiêm truyền vào chuột lang kỷ thuật phân lập tin cậy, khảo sát bệnh chuột, tìm xoắn khuẩn Leptospira tạng phủ chuột Tìm acid nucleic Leptospira thực thử nghiệm lai DNA PCR 3.2 Chẩn đốn huyết học Có nhiều phản ứng huyết học khác nhau, thông dụng đặc hiệu cao phản ứng ngưng kết Martin- Pettit, gọi phản ứng ngưng kết tan Trộn huyết bệnh nhân với hỗn dịch có vi khuẩn Leptospira, huyết bệnh nhân có kháng thể tương ứng, vi khuẩn ngưng kết sau vi khuẩn bị ly giải Phòng bệnh điều trị 4.1 Phòng bệnh 4.1.1 Biện pháp chung Trang bị phương tiện bảo hộ lao động cho người tiếp xúc với nguồn lây, diệt chuột 4.1.2 Biện pháp đặc hiệu: dùng vaccine phòng bệnh dùng số nước 4.2 Điều trị -Nhiều kháng sinh có hiệu tốt với Leptospira penicillin, tetracyclin, chloramphenicol - Biện pháp điều trị hổ trợ III CÁC BORRELIA GÂY BỆNH Borrelia nhóm xoắn khuẩn gây bệnh cho người, phương thức truyền bệnh xoắn khuẩn truyền môi giới trung gian ve hay rận Các Borrelia gây nên bệnh sốt hồi quy gần Borrelia gây bệnh Lyme Đặc tính chung Borrelia 287 1.1 Hình thái bắt màu Đây xoắn khuẩn dài, vòng xoắn không chiều dài xoắn khuẩn Borrelia thay đổi từ - 30µm, rộng khoảng 0,3 - 1,4 µm Thân vi khuẩn nhỏ sợi tóc uốn cong kích thước thay đổi tùy theo thời kỳ, xoắn khuẩn phát triển dài 12-24 phân chia thành tế bào, vi khuẩn di động mạnh kính hiển vi đen Nhuộm Wright xoắn khuẩn bắt màu đỏ, nhuộm Giemsa xoắn khuẩn bắt màu tím sẫm 1.2 Ni cấy Borrelia loại vi khuẩn kỵ khí khó mọc mơi trường nhân tạo, vi khuẩn phát triễn nhiệt độ 33oC môi trường lỏng Borbozur - Stoenner Kelly cấy phôi gà Nhưng thông thường cấy phân lập qua cấy truyền chuột 1.3 Tính chất đề kháng: Vi khuẩn dể chết tác nhân vật lý hóa chất nhạy cảm với nhiều kháng sinh penicillin, tetracyclin, chloramphenicol Khả gây bệnh 2.1 Bệnh sốt hồi qui Chủ yếu xoắn khuẩn Borrelia obermejeri hay thường gọi B.recurentis thường gây tthành dịch lớn, vector trung gian truyền bệnh rận Ngồi cịn B.dultoni, mơi giới trung gian truyền bệnh ve, vi khuẩn gây bệnh có tính chất địa phương Vi khuẩn sốt hồi qui sau xâm nhập vào thể sau thời gian ủ bệnh 7-10 ngày bệnh đặc trưng sốt, buồn nôn, nôn mữa, sốt dài 5-7 ngày đợt đầu trở bình thường 5-7 ngày sốt trở lại Những đợt sốt tái phát sau ngắn hơn, rầm rộ thời gian ngưng sốt đợt kéo dài Nếu bệnh không điều trị tới lúc xoắn khuẩn bị tiêu diệt lúc bệnh khỏi hoàn toàn Những trường hợp nặng viêm tim gây chết 2.2 Bệnh Lyme Được mô tả năm 1977 xoắn khuẩn Borrelia burgdorferi gây nên Vector trung gian truyền bệnh loại ve Bệnh tìm thấy Mỹ, nhiều nước giới thông báo phát bệnh Sau xâm nhập vào thể qua vết cắn, vi khuẩn gây phản ứng viêm chổ lan tràn vào bạch huyết vào máu Bệnh tiến triển với triệu chứng đa dạng liên hệ đến phản ứng viêm nhiều quan tổ chức thể gồm da, hệ thống khớp, thần kinh, tim, gan, thận, tiêu hóa, mắt bệnh diễn tiến mãn, kéo dài nhiều năm phục hồi hồn tồn Chẩn đốn phịng thí nghiệm 3.1 Khảo sát trực tiếp Soi tươi kính hiễn vi đen, nhuộm trực tiếp bệnh phẩm máu với phương pháp Wright vi khuẩn bắt màu đỏ, nhuộm Giemsa vi khuẩn có màu tím 3.2 Tiêm truyền cho chuột Tiêm 1-2 ml máu lấy từ bệnh nhân tiêm vào màng bụng chuột theo dõi xoắn khuẩn máu chuột nhuộm trực tiếp, tìm xoắn khuẩn tạng chuột 3.3 Chẩn đoán huyết Trong chẩn đoán đoán bệnh Lyme, phản ứng ELISA dùng để xác định kháng thể lớp IgM B burgdorferi Phản ứng western blot xác định kháng thể IgG đặc hiệu với kháng 288