Luận án Tiến sĩ Nghiên cứu hiệu quả điều hòa enzyme chuyển hóa glucose của lá xoài non (Mangifera indica L.) và rễ me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benhth.) trên chuột bệnh đái tháo đường

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NGUYỄN THỊ ÁI LAN NGHIÊN CỨU HIỆU QUẢ ĐIỀU HỊA ENZYME CHUYỂN HĨA GLUCOSE CỦA LÁ XỒI NON (Mangifera indica L.) VÀ RỂ ME KEO (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) TRÊN CHUỘT BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ KHOA HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH: 62 42 02 01 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ NGUYỄN THỊ ÁI LAN NGHIÊN CỨU HIỆU QUẢ ĐIỀU HỊA ENZYME CHUYỂN HĨA GLUCOSE CỦA LÁ XOÀI NON (Mangifera indica L.) VÀ RỂ ME KEO (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) TRÊN CHUỘT BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ KHOA HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ NGÀNH: 62 42 02 01 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS ĐÁI THỊ XUÂN TRANG 2021 TÓM TẮT TIẾNG VIỆT Xoài (Mangifera indica L.) me keo (Pithecellobium ducle (Roxb.) Benth) trồng phổ biến Đồng sông Cửu Long Trong nghiên cứu này, khả chống oxy hóa, điều hịa hoạt động enzyme glucose-6phosphatase, glucose-6-phosphate dehydrogenase lactate dehydrogenase, bảo vệ tế bào min6 tụy tạng cao chiết methanol xoài non rễ me keo nghiên cứu in vitro Độc tính cấp cao chiết xoài non rễ me keo khảo sát chuột nhắt trắng Khả chống tăng glucose huyết, rối loạn lipid huyết, chống xơ vữa động mạch, điều hòa enzyme glucose-6phosphatase, glucose-6-phosphate dehydrogenase lactate dehydrogenase in vivo cao chiết xoài non rễ me keo thực mô hình chuột tăng glucose huyết Bên cạnh đó, nghiên cứu cịn đánh giá ảnh hưởng cao chiết xồi non rễ me keo đến cholesterol toàn phần, triglyceride, HDL-Cho, LDL-Cho số tim mạch (AI, CRI, CVRI) Mơ hình chuột tăng glucose huyết cảm ứng alloxan monohydrate tiến hành khảo sát 28 ngày Chuột tăng glucose huyết chia thành 11 nhóm, nhóm gồm chuột có khối lượng glucose huyết khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Nghiệm thức I nhóm đối chứng sinh lý (chuột bình thường không tiêm alloxan monohydrate hay uống loại thuốc nào) Nghiệm thức II, III nhóm chuột bình thường uống 450 mg/kg khối lượng cao chiết xoài non rễ me keo Nghiệm thức IV nhóm đối chứng bệnh lý (chuột tăng glucose huyết không điều trị) Nghiệm thức V nhóm chuột tăng glucose huyết dùng thuốc biệt dược glucophage (108 mg/kg khối lượng) Các nghiệm thức tiếp sau chuột tăng glucose huyết điều trị cao chiết xoài non rễ me keo (liều 150, 300, 450 mg/kg thể trọng/ lần x lần/ ngày) Cao chiết xoài non rễ me keo khảo sát khả gây độc tính cấp chuột nhắt trắng (Mus musculus L.) nồng độ 1000, 2500 5000 mg/kg khối lượng in vivo Cao chiết xoài non rễ me keo có chứa hợp chất flavonoid, alkaloid, tannin, triterpenoid, glycoside Cao chiết xồi non cịn chứa thêm chất courmarin quinon; rễ me keo chứa thêm chất phenol saponin Hàm lượng polyphenol tổng (total polyphenol content, TFC) xoài non (335,06 ± 1,84 mg GAE/g cao chiết) cao rễ me keo (246,5 ± 65,5 mgGAE/g cao chiết) Hàm lượng flavonoid toàn phần (total flavonoide content, TFC) xoài non (432,86 ± 10,01 mg QE/g cao chiết) cao rễ me keo (427,4 ± 4,9 mg QE/g cao chiết) Hoạt tính chống oxy hóa xác định phương pháp khác DPPH, ABTS+ RP Kết i cho thấy xoài non rễ me keo có hiệu chống oxy hóa thấp chất chống oxy hóa chuẩn Hiệu loại bỏ gốc tự DPPH xoài non (EC50= 27,6 ± 0,88 µg/mL) cao rễ me keo (28,9 ± 0,80 µg/mL) thấp chất chuẩn trolox (4,26 µg/mL) Ngược lại, rễ me keo có khả khử sắt (69,3 ± 1,34 µg/mL) trung hịa gốc tự ABTS+ (23,8 ± 2,4 µg/mL) cao xồi non hai phương pháp 321,4 ± 6,63 µg/mL 45,7 ± 0,5 µg/mL; thấp chất chuẩn BHA (30,1 µg/mL) phương pháp khử sắt trolox (0,037 µg/mL) phương pháp ABTS+ Kết thực nghiệm khảo sát hiệu điều hòa hoạt động enzyme chuyển hóa glucose cho thấy, LXN ức chế hoạt động G6Pase (IC 50 = 80,4 µg/mL), G6PDH (IC50= 82,6 µg/mL) tốt so với RMK (IC50 = 26,8 µg/mL, IC50 = 92,7 µg/mL) LXN (IC50 = 117,9 µg/mL) ức chế hoạt động enzyme LDH tốt so với RMK (IC50 = 122,4 µg/mL) Nồng độ thời gian tối ưu tunicamycin để gây chết tế bào min6 tụy tạng µg/mL thời điểm 24 48 Cao chiết xoài non rễ me keo không gây độc tế bào tế bào min6 48 tất nồng độ khảo sát từ 50-500 µg/mL Nồng độ cao chiết xồi non rễ me keo có khả bảo vệ tế bào min6 khỏi chết tác động tunicamycin 50 100 µg/mL khảo sát thời gian 24 48 Cao chiết xoài non (450 mg/kg) rễ me keo (150 mg/kg) kết luận có khả hạ glucose huyết, điều hòa lipid huyết chống huyết khối chuột tăng glucose huyết Kết quan sát cấu trúc mô bệnh học gan thận chuột cho thấy, xoài non (450 mg/kg) rễ me keo (150 mg/kg) có khả cải thiện mô gan thận chuột tăng glucose huyết trở tương đương với gan thận chuột bình thường Sau 14 ngày theo dõi, cao chiết xoài non rễ me keo chứng minh không gây ảnh hưởng bất thường đến hành vi lãnh cảm, tăng động, hệ hô hấp, nhịp tim thông số AST, ALT chuột suốt thời gian thí nghiệm Bên cạnh đó, kết cho thấy xoài non rễ me keo liều khảo sát không ảnh hưởng đến hành vi, tăng trọng bình thường chuột Các số glucose huyết, huyết học, chức gan thận nhóm chuột uống cao chiết xồi non rễ me keo liều khảo sát tương đương với chuột bình thường Điều cho thấy xồi non rễ me keo khơng gây độc tính cấp chuột nồng độ khảo sát 5000 mg/kg Cấu trúc mô học gan thận nhóm chuột uống cao chiết xồi non rễ me keo liều cao có ảnh hưởng đến cấu trúc mơ gan thận chuột bình thường Tóm lại, cao chiết xoài non (450 mg/kg) rễ me keo (150 mg/kg) có khả chống tăng glucose huyết, rối loạn chuyển hóa lipid, chống xơ vữa động mạch tốt Cao chiết xoài ii non rễ me keo sử dụng loại dược liệu hữu dụng điều trị tăng glucose huyết ngăn ngừa biến chứng tăng glucose huyết kéo dài gây Từ khóa: glucose-6-phosphatase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, lactate dehydrogenase, Mangifera indica L., min6 cell, Pithecellobium ducle (Roxb.) Benth iii ABSTRACT Mangifera indica L and Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth are popular in Mekong delta So in this research, the antioxidant role, regulating glucose-6-phosphatase (G6Pase), glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) and lactate dehydrogenase (LDH), protective effect min6 pancreatic β-cells, antidyslipidemic of Mangifera indica L young leaves and Pithecellobium ducle (Roxb.) Benth root were investigated in vitro Acute toxicity studies with MIL or PDR were performed in experimental mice The present study was also conducted to elucidate the anti-hyperglycemic, antidyslipidemia, anti- atherosclerosis The activities of key carbohydrate metabolism enzyme comprising G6Pase, G6PDH and LDH in liver and muscle of diabetic mice were determined The in vivo experiment, mice were orally treated with three different single doses 1000, 2500, 5000 mg/kg of the MIL or DPR extract and screened for signs of acute toxicity This study was assessed by determining its effect on blood glucose, body weight, total cholesterol, triglyceride, HDL- Cho, LDL- Cho, atherogenic index (AI, CRI, CVRI) incompared with those of controls Alloxan monohydrate (AM) induced diabetic male Mus musculus L mice were used as experimental models for a period of 28 days The experiment was designed to determine effect of MIL or PDR extract on diabetic mice The mice were allowed to acclimated to the laboratory environment for 48 hours, dictributed into eleven groups according to the similar weights and glucose blood with six animals in each group (n=6) Group I normal control consisted of normal mice that neither injected AM nor any drug Group II and III were taken MIL or PDR extract (450 mg/kg body weight) Group IV served as negative control (diabetic control) Group V was given standard drug, glucophage (170 mg/ kg body weight as possitive control Next groups, diabetic mice were treated with extract of MIL or PDR (150, 300, 450 mg/kg body weight/ twice a day) Hyperglycermia was resulted in the generation of free radicals So the in vitro studies including phytochemical screening of methanol extracts of MIL and PDR were examined the presence of bioactive compounds The antioxidant activities of MIL and PDR were demonstrated by employing established in vitro systems, which included radical scavenging DPPH, ABTS·+ and ferric reducing Pancreatic beta cell line closely associated with to diabetes mellitus So they become weak or die, insulin secretion will be affected immediately Protective effect of MIL or PDR extract against endoplasmic reticulum (ER) stress was conducted in min6 pancreatic β-cells in iv vitro The min6 cell line was cultured with µg/mL tunicamycin added in 24 hours of exposure and 5% CO2 to induce ER stress and cell death Cytotoxicity effect of MIL or PDR extract on min6 cells was observed concentration from 50 to 500 µg/mL To investigate the effect of MIL or PDR extract on ER stress, min6 cell were treatment tunicamycin with extract (50 500 µg/mL) for 48 hours at 37oC in a 5% CO2 humidified incubator The first result show that phytochemical investigation on the MIL and PDR methanol extracts revealed the presence of various phytoconstituents such as flavonoids, alkaloids, tannins, triterpenoids and glycosides MIL also contains phenols, coumarins and quinons while PDR contains saponins The total polyphenol of MIL extract (335.06 ± 0.05 mg GAE/g extract) is higher than amount of total polyphenols of PDR (246.5 ± 65.5 mg GAE/g extract) Total flavonoid content of MIL (432.86 ± 10.01 mg QE/g extract) is also higher than TFC of PDR (427.4 ± 4.9 mg QE/g extract) In addition, the antioxidant effects of the MIL and PDR indicate that both MIL and PDR extract against oxidation effect but there are lower than standard In DPPH assay, the anti-oxidation of MIL (EC50= 27.6 µg/mL) is higher than PDR (EC50= 67.9 µg/mL) and lower than Trolox standard (EC50= 4.26 µg/mL) In Fe2+ chelating and ABTS assay, the anti-oxidation of PDR extract (67.9 µg/mL, 7.03 µg/mL), is higher than MIL extract (45.7±0.50 µg/mL; 12.11±1.15 µg/mL, respectively) but lower than BHA standard (30.1 µg/mL) and Trolox standard (0.037 µg/mL) Addition, the second result indicate that at concentration µg/mL, tunicamycin had significant induced apoptosis after 24 hours MIL and PDR did not cause min6 cell to die for 48 hours The extract of MIL (50 µg/mL) or PDR (100 µg/mL) can protect min6 cells against cell death with ER stress respectively in 24 and 48 hours Next, the result screening of controlling glucose enzyme metabolism activities of extracts depicted the effect of MIL on G6Pase (IC50 = 42.9 µg/mL), G6PDH (IC50 = 82.6 µg/mL) activities is better than PDR (IC50 = 56 µg/mL, 92.7 µg/mL) In contrast, the effect of PDR extract on LDH(IC50 = 122.6 µg/mL) activity is higher than MIL (IC50 = 142.6 µg/mL, respectively) The results showed that the methanol extract of MIL or PDR showed significantly antidiabetic and antihyperlipidemic activities as evidenced by significant decrease in plasma glucose, TC, TG, LDL- Cho levels with elevation of HDL- Cho level and diminution of atherogenic index in diabetic mice Observation of the microscopic cross section of liver tissues revealed that mice treated with MIL or PDR extract had significantly improvement in liver tissues compared to those of the non-treated control group Futher more, throughout the 14 days observation acute period, no abnormal changes v attributable to the treatment tunicamycin were noticed in behavior such as apathy, hyperactivities, morbidity, respirations and hear rate etc Besides, the body weight, blood glucose, AST and ALT were not significant changed after the period of experiment Observation of the microscopic cross section of liver and tissues revealed that mice treated with high extracts had not change when compared in those of the control group In conclution, the MIL or PDR hold anti diabetic, antihyperlipidemic activity and antiatherogenicity in diabetic mice They can be utilized as useful remedy for alleviation of diabetes and its complication Keywords: glucose-6-phosphatase, glucose-6-phosphate dehydrogenase, lactate dehydrogenase, Mangifera indica L., min6 cell, Pithecellobium ducle (Roxb.) Benth vi vii MỤC LỤC TÓM TẮT TIẾNG VIỆT i ABSTRACT iv LỜI CAM ĐOAN Error! Bookmark not defined MỤC LỤC viii DANH MỤC HÌNH xii DANH MỤC BẢNG xiv DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT xvi CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Nội dung nghiên cứu 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa nghiên cứu 1.5 Tính luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu thực vật nghiên cứu 2.1.1 Cây xoài (Mangifera indica L.) 2.1.2 Cây me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth) 2.2 Giới thiệu bệnh đái tháo đường 11 12 2.2.1 Khái niệm bệnh đái tháo đường 12 2.2.2 Triệu chứng bệnh đái tháo đường 12 2.2.3 Phân loại bệnh đái tháo đường 13 2.3 Mối quan hệ tụy tạng bệnh đái tháo đường 14 2.3.1 Vai trò tụy tạng bệnh đái tháo đường 14 2.3.2 Tế bào beta tụy tạng bệnh đái tháo đường 18 2.4 Hoạt động enzyme chìa khóa chuyển hóa glucose người bình thường người bệnh đái tháo đường 19 viii M300D 31.817 A B M450N 31.050 A B P150D 29.750 A B C Glucophage 28.083 B C P300D 27.750 B C P450D 26.700 B C Diabetes 23.067 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% 4.3.4 Hiệu điều hòa lipid huyết chuột BĐTĐ cao chiết LXN RMK Cholesterol Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS F P Factor 10 253699 25370 33.57 0.000 Error 52 39303 756 Total 62 293002 S = 27.49 R-Sq = 86.59% R-Sq(adj) = 84.01% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ Normal 144.14 25.34 Diabetes 356.50 49.42 Glucophage 145.43 35.10 M450N 124.84 9.03 M150D 158.30 19.31 M300D 129.34 11.65 M450D 136.42 29.47 ( * -) P450N 139.64 20.35 ( * ) P150D 153.80 21.90 ( * ) P300D 155.73 36.11 ( * ) P450D 149.29 10.55 ( * -) ( -* ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ -140 210 Pooled StDev = 27.49 N Mean Grouping Diabetes 356.50 M150D 158.30 B P300D 155.73 B P150D 153.80 B P450D 149.29 B A 159 280 350 Glucophage 145.43 B Normal 144.14 B P450N 139.64 B M450D 136.42 B M300D 129.34 B M450N 124.84 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86 Triglyceride huyết One-way ANOVA: Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS F P Factor 10 248604 24860 13.06 0.000 Error 52 98959 1903 Total 62 347563 S = 43.62 R-Sq = 71.53% R-Sq(adj) = 66.05% Individual 95% CIs For Mean Based on StDev Level N Mean StDev Normal 134.22 24.02 Diabetes 315.63 39.44 Glucophage 153.80 21.90 M450N 162.24 42.13 M150D 113.86 13.55 M300D 75.22 4.85 M450D 92.18 19.58 P450N 117.99 22.85 P150D 184.37 89.27 P300D 112.09 68.01 P450D 126.84 42.50 -+ -+ -+ -+ -( * -) ( -* ) ( -* ) ( -* ) ( -* ) ( -* ) ( * -) ( * -) ( -* ) ( -* -) ( * -) -+ -+ -+ -+ -80 160 Pooled StDev = 43.62 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 315.63 P150D 184.37 B M450N 162.24 B C Glucophage 153.80 B C D Normal 134.22 B C D P450D 126.84 B C D A 160 240 320 Pooled P450N 117.99 B C D M150D 113.86 B C D P300D 112.09 B C D M450D 92.18 C D M300D 75.22 D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% LDL-Cho One-way ANOVA: Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS F P Factor 10 33776 3378 7.74 0.000 Error 52 22677 436 Total 62 56453 S = 20.88 R-Sq = 59.83% R-Sq(adj) = 52.10% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Normal 93.31 16.99 Diabetes 28.31 3.99 Glucophage 82.37 24.50 M450N 92.02 1.58 M150D 102.96 27.12 M300D 92.02 9.27 M450D 95.24 17.21 P450N 88.80 13.60 P150D 126.84 42.50 P300D 104.89 27.35 P450D 97.81 14.58 -+ -+ -+ -+-( * ) ( * ) ( * -) ( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+-35 Pooled StDev = 20.88 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping P150D 126.84 A P300D 104.89 A B M150D 102.96 A B P450D 97.81 A B M450D 95.24 A B Normal 93.31 A B 161 70 105 140 M300D 92.02 A B M450N 92.02 A B P450N 88.80 A B Glucophage 82.37 B Diabetes 28.31 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% HDL-Cho Source DF SS MS F P Factor 10 320666 32067 58.59 0.000 Error 52 28461 547 Total 62 349127 S = 23.40 R-Sq = 91.85% R-Sq(adj) = 90.28% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ - Normal 23.99 15.57 Diabetes 265.06 41.38 Glucophage 32.30 43.02 M450N 4.10 7.49 M150D 32.57 21.75 M300D 22.36 11.94 ( *-) M450D 22.75 15.19 ( *-) P450N 27.24 18.42 P150D 17.98 27.35 P300D 28.42 11.71 ( *-) P450D 26.11 6.58 (-* ) (-*-) (-* ) (-*-) ( *-) ( * ) (-* ) (-* ) + -+ -+ -+ 80 Pooled StDev = 23.40 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 265.06 M150D 32.57 B Glucophage 32.30 B P300D 28.42 B P450N 27.24 B P450D 26.11 B Normal 23.99 B M450D 22.75 B A 162 160 240 M300D 22.36 B P150D 17.98 B M450N 4.10 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% 4.3.4 Ảnh hưởng cao chiết LXN RMK lên số AI, CRI, CRIV Chỉ số AI One-way ANOVA: Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS F P Factor 10 679.111 67.911 200.02 0.000 Error 52 17.655 0.340 Total 62 696.767 S = 0.5827 R-Sq = 97.47% R-Sq(adj) = 96.98% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ - Normal 0.553 0.159 (-*) Diabetes 11.688 1.574 Glucophage 0.890 0.788 M450N 0.357 0.104 (0*) M150D 0.596 0.394 (-*-) M300D 0.415 0.155 (*-) M450D 0.426 0.074 (*-) P450N 0.597 0.303 (-*) P150D 0.313 0.427 (*) P300D 0.494 0.072 (*-) P450D 0.545 0.162 (-*) (*-) (-*) + -+ -+ -+ 0.0 3.5 Pooled StDev = 0.583 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 11.688 Glucophage 0.890 B P450N 0.597 B M150D 0.596 B Normal 0.553 B P450D 0.545 B A 163 7.0 10.5 P300D 0.494 B M450D 0.426 B M300D 0.415 B M450N 0.357 B P150D 0.313 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% Chỉ số CRI One-way ANOVA: Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS F P Factor 10 679.111 67.911 200.02 0.000 Error 52 17.655 0.340 Total 62 696.767 S = 0.5827 R-Sq = 97.47% R-Sq(adj) = 96.98% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+- Normal 1.553 0.159 Diabetes 12.688 1.574 Glucophage 1.890 0.788 M450N 1.357 0.104 (*) M150D 1.596 0.394 (-*) M300D 1.415 0.155 (*) M450D 1.426 0.074 (*) P450N 1.597 0.303 (-*) P150D 1.313 0.427 P300D 1.494 0.072 (*-) P450D 1.545 0.162 (*-) (*-) (*-) (*-) (-*) + -+ -+ -+3.5 Pooled StDev = 0.583 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 12.688 Glucophage 1.890 B P450N 1.597 B M150D 1.596 B Normal 1.553 B P450D 1.545 B P300D 1.494 B A 164 7.0 10.5 14.0 M450D 1.426 B M300D 1.415 B M450N 1.357 B P150D 1.313 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% Chỉ số CVRI One-way ANOVA: Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS Factor 10 543.689 54.369 Error 52 26.541 0.510 Total 62 570.230 S = 0.7144 R-Sq = 95.35% F 106.52 P 0.000 R-Sq(adj) = 94.45% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ Normal 1.462 0.278 Diabetes 11.301 1.797 Glucophage 1.997 0.591 M450N 1.758 0.441 M150D 1.179 0.417 ( * ) M300D 0.823 0.080 (-*-) M450D 1.009 0.330 (-*-) P450N 1.369 0.421 (-*-) P150D 1.478 0.689 (-*-) P300D 1.027 0.476 P450D 1.368 0.629 (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) -+ -+ -+ -+ 3.0 Pooled StDev = 0.714 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 11.301 Glucophage 1.997 B M450N 1.758 B P150D 1.478 B Normal 1.462 B P450N 1.369 B P450D 1.368 B M150D 1.179 B A 165 6.0 9.0 12.0 P300D 1.027 B M450D 1.009 B M300D 0.823 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% One-way ANOVA: Normal, Diabetes, Glucophage, M450N, M150D, M300D, M450D, Source DF SS MS F P Factor 10 679.111 67.911 200.02 0.000 Error 52 17.655 0.340 Total 62 696.767 S = 0.5827 R-Sq = 97.47% R-Sq(adj) = 96.98% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+- Normal 1.553 0.159 Diabetes 12.688 1.574 Glucophage 1.890 0.788 M450N 1.357 0.104 (*) M150D 1.596 0.394 (-*) M300D 1.415 0.155 (*) M450D 1.426 0.074 (*) P450N 1.597 0.303 (-*) P150D 1.313 0.427 P300D 1.494 0.072 (*-) P450D 1.545 0.162 (*-) (*-) (*-) (*-) (-*) + -+ -+ -+3.5 Pooled StDev = 0.583 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 12.688 Glucophage 1.890 B P450N 1.597 B M150D 1.596 B Normal 1.553 B P450D 1.545 B P300D 1.494 B M450D 1.426 B M300D 1.415 B M450N 1.357 B A 166 7.0 10.5 14.0 P150D 1.313 B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% 4.3.5.1 Enzyme glucose-6-phosphatase gan chuột thí nghiệm One-way ANOVA: G6PASE Normal, Glucophage, M150D, M300D, M450D, M450N, P150D, Source DF SS MS F P Factor 10 1234.607 123.461 756.13 0.000 Error 367 59.924 0.163 Total 377 1294.530 S = 0.4041 R-Sq = 95.37% R-Sq(adj) = 95.24% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ - Normal 36 3.3175 0.3375 Glucophage 36 1.7518 0.5033 M150D 18 2.1784 0.2405 (*) M300D 36 2.2979 0.7102 *) M450D 36 1.3962 0.3005 M450N 36 2.4846 0.2244 *) P150D 36 2.4783 0.5278 *) P300D 36 2.4188 0.1816 (*) P450D 36 3.1616 0.3850 P450N 36 2.5219 0.2631 Diabetes 36 8.3019 0.3779 (* (* (*) (* (* (* + -+ -+ -+ 2.0 4.0 Pooled StDev = 0.4041 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping Diabetes 36 8.3019 Normal 36 3.3175 B P450D 36 3.1616 B P450N 36 2.5219 C M450N 36 2.4846 C P150D 36 2.4783 C P300D 36 2.4188 C M300D 36 2.2979 C A 167 6.0 8.0 M150D 18 2.1784 Glucophage 36 1.7518 M450D 36 1.3962 C D E Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.86% 4.3.5.2 Hoạt động enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase gan chuột thí nghiệm Source DF SS MS F P Factor 10 14974449 1497445 57.79 0.000 Error 199 5156108 25910 Total 209 20130557 S = 161.0 R-Sq = 74.39% R-Sq(adj) = 73.10% Individual 95% CIs For Mean Based on Level N Mean StDev N 20 794.4 198.1 D 20 356.2 66.8 G 20 315.8 71.3 M450N 20 247.3 59.8 M150D 10 332.2 38.9 ( * ) M300D 20 304.4 62.0 (-* ) M450D 20 412.2 94.3 P450N 20 508.5 29.0 P150D 20 300.3 86.2 P300D 20 773.3 35.6 P450D 20 1107.5 442.7 Pooled StDev + -+ -+ -+ (-* ) (-*-) ( *-) (-* ) ( *-) (-*-) (-*-) ( *-) (-*-) + -+ -+ -+ 300 600 Pooled StDev = 161.0 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping P450D 20 1107.5 N 20 794.4 B P300D 20 773.3 B P450N 20 508.5 C M450D 20 412.2 C D D 20 356.2 C D M150D 10 332.2 C D G 20 315.8 D M300D 20 304.4 D P150D 20 300.3 D M450N 20 247.3 D A 168 900 1200 Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.87% One-way ANOVA: Đối chứng si, BT+450 LXN, 300LXN, 450LXN, BT+450RMK, 150RMK, Source DF SS MS F P Factor 2048531 256066 176.08 0.000 Error 54 78529 1454 Total 62 2127060 S = 38.13 R-Sq = 96.31% R-Sq(adj) = 95.76% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level + - N Mean StDev Đối chứng sinh lý 148.33 18.71 BT+450 LXN 135.83 16.95 + -+ -+ (-* ) (-* ) 300LXN ( *-) 550.17 40.72 450LXN ( *-) 534.67 26.09 511.00 48.34 BT+450RMK 129.83 8.61 ( *-) 150RMK ( *-) 300RMK 482.67 74.37 (- 450RMK 496.67 38.16 (- * ) * ) G ( *-) 534.14 26.70 + -+ -+ + 120 Pooled StDev = 38.13 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping 300LXN 550.17 A 450LXN 534.67 A B G 534.14 A B 150RMK 511.00 A B 450RMK 496.67 A B 300RMK 482.67 B 169 240 360 480 Đối chứng sinh lý 148.33 C BT+450 LXN 135.83 C BT+450RMK 129.83 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.79% One-way ANOVA: Đối chứng si, BT+450 LXN, 300LXN, 450LXN, BT+450RMK, 150RMK, Source DF SS MS F P Factor 860961 107620 24.53 0.000 Error 45 197462 4388 Total 53 1058423 S = 66.24 R-Sq = 81.34% R-Sq(adj) = 78.03% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level -+ N Mean StDev -+ -+ -+ Đối chứng sinh lý 148.33 20.50 ( -* ) BT+450 LXN 144.17 13.59 ( * ) 300LXN 451.00 69.46 ( 450LXN 426.67 50.55 ( * BT+450RMK 135.50 6.44 150RMK 417.17 109.05 300RMK 382.67 97.15 450RMK 280.00 77.46 G 400.83 64.31 * -) -) ( -* ) ( * - ) ( * -) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ + -120 480 Pooled StDev = 66.24 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping 300LXN 451.00 A 450LXN 426.67 A 150RMK 417.17 A G 400.83 A B 300RMK 382.67 A B 450RMK 280.00 B 170 240 360 Đối chứng sinh lý 148.33 C BT+450 LXN 144.17 C BT+450RMK 135.50 C Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.79% One-way ANOVA: Đối chứng si, BT+450 LXN, 300LXN, 450LXN, BT+450RMK, 150RMK, Source DF SS MS F P Factor 92739 11592 7.10 0.000 Error 45 73493 1633 Total 53 166232 S = 40.41 R-Sq = 55.79% R-Sq(adj) = 47.93% Level N Mean StDev Đối chứng sinh lý 148.33 20.50 BT+450 LXN 137.17 13.45 300LXN 231.00 46.82 450LXN 243.33 70.68 BT+450RMK 135.50 6.44 150RMK 217.17 61.09 300RMK 182.67 33.43 450RMK 164.33 34.02 G 234.83 29.35 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level + -+ -+ -+ - Đối chứng sinh lý ( * -) BT+450 LXN ( -* ) 300LXN ( -* ) 450LXN ( * -) BT+450RMK ( * ) 150RMK ( -* ) 300RMK ( * -) 450RMK ( * ) G ( * ) + -+ -+ -+ 100 150 Pooled StDev = 40.41 Grouping Information Using Tukey Method N Mean Grouping 450LXN 243.33 A G 234.83 A B 171 200 250 300LXN 231.00 A B 150RMK 217.17 A B C 300RMK 182.67 A B C D 450RMK 164.33 B C D Đối chứng sinh lý 148.33 C D BT+450 LXN 137.17 D BT+450RMK 135.50 D Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.79% Độc tính cấp LXN RMK lên glucose huyết trước uống One-way ANOVA: Normal, P5000N, P2500N, P1000N, M5000N, M2500N, M1000N Source Factor Error Total DF 35 41 S = 24.42 Level Normal P5000N P2500N P1000N M5000N M2500N M1000N N 6 6 6 SS 10892 20864 31756 MS 1815 596 F 3.05 R-Sq = 34.30% Mean 124.17 134.00 113.17 116.67 146.00 158.00 150.33 StDev 13.63 41.54 24.02 21.10 22.23 18.89 19.72 P 0.017 R-Sq(adj) = 23.03% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -100 125 150 175 Pooled StDev = 24.42 Grouping Information Using Tukey Method M2500N M1000N M5000N P5000N Normal P1000N P2500N N 6 6 6 Mean 158.00 150.33 146.00 134.00 124.17 116.67 113.17 Grouping A A B A B A B A B A B B Means that not share a letter are significantly different Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.64% Normal subtracted from: 172 P5000N P2500N P1000N M5000N M2500N M1000N Lower -34.22 -55.06 -51.56 -22.22 -10.22 -17.89 Center 9.83 -11.00 -7.50 21.83 33.83 26.17 Upper 53.89 33.06 36.56 65.89 77.89 70.22 + -+ -+ -+( * ) ( * ) ( * -) ( -* ) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+-50 50 100 Upper 23.22 26.72 56.06 68.06 60.39 + -+ -+ -+( * ) ( * -) ( -* ) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+-50 50 100 Upper 47.56 76.89 88.89 81.22 + -+ -+ -+( * ) ( * -) ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+-50 50 100 Upper 73.39 85.39 77.72 + -+ -+ -+( * ) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+-50 50 100 Upper 56.06 48.39 + -+ -+ -+( -* ) ( * ) + -+ -+ -+-50 50 100 Upper 36.39 + -+ -+ -+( -* ) + -+ -+ -+-50 50 100 P5000N subtracted from: P2500N P1000N M5000N M2500N M1000N Lower -64.89 -61.39 -32.06 -20.06 -27.72 Center -20.83 -17.33 12.00 24.00 16.33 P2500N subtracted from: P1000N M5000N M2500N M1000N Lower -40.56 -11.22 0.78 -6.89 Center 3.50 32.83 44.83 37.17 P1000N subtracted from: M5000N M2500N M1000N Lower -14.72 -2.72 -10.39 Center 29.33 41.33 33.67 M5000N subtracted from: M2500N M1000N Lower -32.06 -39.72 Center 12.00 4.33 M2500N subtracted from: M1000N Lower -51.72 Center -7.67 173