Đang tải... (xem toàn văn)
Giao trinh tu tuong B� GIÁO D C VÀ ĐÀO T�O TRƯ�NG Đ�I H�C TÂY NGUYÊN ����������������� Đ� TH� THÙY DƯƠNG XÁC Đ�NH KI!U GEN C#A VIRUS GÂY VIÊM GAN SIÊU VI B (HEPATITIS B VIRUS�HBV) VÀ M*I LIÊN QUAN GI[.]
B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O TRƯ NG Đ I H C TÂY NGUYÊN Đ TH THÙY DƯƠNG XÁC Đ NH KI!U GEN C#A VIRUS GÂY VIÊM GAN SIÊU VI B (HEPATITIS B VIRUS HBV) VÀ M*I LIÊN QUAN GI-A KI!U GEN V.I M T S* Đ/C ĐI!M LÂM SÀNG, C1N LÂM SÀNGTRÊN B2NH NHÂN NHI3M HBV T I Đ4K L4K LU1N VĂN TH C SĨ SINH H C BUÔN MA THU T, NĂM 2010 B GIÁO D C VÀ ĐÀO T O TRƯ NG Đ I H C TÂY NGUYÊN Đ TH THÙY DƯƠNG XÁC Đ NH KI!U GEN C#A VIRUS GÂY VIÊM GAN SIÊU VI B (HEPATITIS B VIRUS HBV) VÀ M*I LIÊN QUAN GI-A KI!U GEN V.I M T S* Đ/C ĐI!M LÂM SÀNG, C1N LÂM SÀNG TRÊN B2NH NHÂN NHI3M HBV T I Đ4K L4K Chuyên nghành: Sinh h c th c nghi m Mã s : 60.42.30 LU N VĂN TH%C SĨ SINH H(C Ngư*i hư+ng d-n khoa h c: TS Lê Huy1n Ái Thúy BUÔN MA THU T, NĂM 2010 M Đ U Đ t v n ñ Viêm gan siêu vi B HBV (Hepatitis B virus) gây m t b nh ph bi n toàn c"u, có di%n ti n ph&c t'p, t( l chuy)n sang m'n tính cao, thư,ng d-n t.i xơ gan hay ung thư gan Theo báo cáo c4a t ch&c Y t th gi.i (WHO) có kho9ng t( ngư,i nhi%m virus gây viêm gan siêu vi B (HBV) toàn th gi.i, có kho9ng 6% nhi%m viêm gan siêu vi B c>p – 10% sB chuy)n sang m'n tính C ngư,i l.n, riêng đBi v.i trD em t( l lên ñ n 90% T( l tF vong giai đo'n c>p tính 1%, bi n ch&ng c4a viêm gan B c>p viêm gan m'n, xơ gan, xơ gan m>t bù ung thư gan nguyên phát, d-n ñ n tF vong vào kho9ng m t tri u ngư,i mHi năm M t sB k t qu9 ñiLu tra cho th>y nư.c C Đông nam Châu Á, Trung quBc Châu Phi nhRng nơi có t( l ngư,i nhi%m HBV cao nh>t th gi.i [10], [44], [42] T'i Vi t Nam có kho9ng 15% W 20% ngư,i nhi%m HBV, có kho9ng 80W 92% b nh nhân xơ gan ung thư gan nguyên phát có nhi%m HBV [4] Có đ n ki)u gen (genotype) HBV, tY ki)u gen A ñ n H ki)u gen ph[ adw, adr, ayw ayr S^ hi)u bi t vL s^ phân bB giRa ki)u gen c4a virus HBV có vai trị r>t quan tr`ng cơng vi c ñiLu tra theo dõi di%n ti n c4a b nh, phịng ngYa đưcc bi n ch&ng c4a b nh Đdc bi t ñiLu r>t có ý nghĩa cơng tác qu9n lý giám sát vL mdt dach t% h`c ph[c v[ cho công tác phòng chBng b nh viêm gan siêu vi B Xu>t phát tY th^c t ti n hành ñL tài “Xác ñ nh ki u gen c a virus gây viêm gan siêu vi B (HBV) m i liên quan gi!a ki u gen v"i m#t s ñ%c ñi m lâm sàng, c'n lâm sàng b)nh nhân nhi*m HBV t+i Đ-k L-k ” 2 M c tiêu nghiên c u c a ñ tài W Xác ñanh ki)u gen (genotype) c4a virus gây viêm gan siêu vi B b nh nhân nhi%m virus gây viêm gan siêu vi B (HBV) t'i khu v^c tlnh Đmk Lmk W Xác ñanh mBi liên quan giRa ki)u gen c4a virus HBV v.i m t sB ñdc ñi)m lâm sàng lâm sàng b nh nhân Ý nghĩa khoa h!c Bpng vi c hH trc c4a kq thuot sinh h`c phân tF chrn đốn y khoa, có th) ñanh danh ñưcc ñ n ki)u gen c4a virus HBV v.i ñ nh'y cao ñ ñdc hi u t ñBi K t qu9 nghiên c&u giúp hi)u rõ vL b nh, ñdc thù nhi%m virus HBV c4a cơng đtng dân cư khu v^c tlnh Đmk Lmk Đây tiLn ñL ñ) phát tri)n nghiên c&u C m&c cao hơn, mang t"m vóc c4a m t nghiên c&u dach t% h`c phân tF b nh nhi%m virus HBV C khu v^c Tây nguyên Ý nghĩa th#c ti$n K t qu9 nghiên c&u su chl ñưcc ki)u gen c4a HBV C nhRng b nh nhân nhi%m HBV khu v^c tlnh Đmk Lmk, ñiLu r>t quan tr`ng công tác ñiLu tra, qu9n lý phòng chBng b nh viêm gan siêu vi B ñaa bàn tlnh Chương T)NG QUAN TÀI LI1U 1.1 Đ2i cương v virus gây b8nh viêm gan siêu vi B (HBV) 1.1.1 L?ch s@ phát hi8n b8nh viêm gan siêu vi B Năm1965, Blumberg c ng s^ tìm th>y m t lo'i kháng th) C hai b nh nhân ba b nh máu khơng đơng đưcc truyLn máu nhiLu l"n Kháng th) có th) ph9n &ng v.i m t lo'i kháng nguyên m-u huy t c4a m t th dân châu Úc nên ñưcc g`i kháng nguyên Úc Châu (Asutralia antigen) Sau kháng ngun đưcc tìm th>y huy t c4a nhRng b nh nhân ba viêm gan siêu vi Ngày kháng nguyên Úc Châu ñưcc xác ñanh kháng nguyên bL mdt viêm gan siêu vi B, vi t tmt HBsAg D"n qua nhiLu nghiên c&u khmp th gi.i, nhà khoa h`c ñã thi t lop ñưcc b9n ñt dach t% viêm gan siêu vi B toàn c"u, nêu m t sB ñdc ñi)m n i bot giúp có th) phân bi t v.i lo'i siêu vi gây viêm gan khác Có ba lồi siêu vi có c>u trúc giBng nhau: lồi th& nh>t đưcc tìm th>y C đ ng vot có vú – khl Marmot (Woodchucks) sBng C miLn đơng Hoa Kỳ, lồi th& đưcc tìm th>y C lồi sóc xám (Grey squirrels) sBng C California, loài th& ba ngHng Bmc Kinh (penking ducks) Đdc ñi)m quan tr`ng nh>t c4a h` có enzyme reverse transcriptase có tính ñdc bi t v.i t bào gan [8] 1.1.2 Tình hình nhi$m HBV thD giEi F Vi8t Nam 1.1.2.1 Trên th3 gi"i Theo t ch&c Y t Th gi.i (WHO), th gi.i có kho9ng t( ngư,i ba nhi%m HBV 350 tri u ngư,i ba nhi%m m'n tính Ư.c lưcng có kho9ng 600.000 ngư,i ch t mHi năm nhi%m HBV c>p tính [46] 1.1.2.2 Vi)t Nam • Vi t Nam, c& 5W7 ngư,i dân có m t ngư,i nhi%m Virus B xâm nhop t bào gan, bi n chúng thành nơi s9n xu>t virus m.i Khi phát hi n s^ b>t thư,ng này, h mi%n dach su t>n công kD xâm lưcc N u “cu c chi n” thmng lci, t bào gan t n thương su ñưcc thay th bpng nhRng t bào khƒe m'nh b nh nhân su ph[c hti Nhưng C m t sB ngư,i h mi%n dach khơng lo'i trY đưcc virus h` trC thành ngư,i mang virus viêm gan B m'n tính Kho9ng 10% sB ngư,i nhi%m virus B rơi vào trư,ng hcp Trong trư,ng hcp x>u nh>t, t bào gan ba virus phá ho'i ba thay th bpng mơ sci b>t thư,ng, d-n đ n ung thư gan xơ gan Trên b9n ñt dach t% c4a t ch&c Y t Th gi.i, t( l dân sB Vi t Nam mang kháng nguyên HBsAg (ch&ng tƒ nhi%m HBV) 8%, x p vào hàng quBc gia có t( l nhi%m HBV cao nh>t th gi.i Nhon ñanh đưcc m t sB cơng trình nghiên c&u vL dach t% h`c nư.c xác nhon Tuy rpng không ph9i t>t c9 trư,ng hcp nhi%m HBV ñLu c"n ph9i ñdt v>n ñL ph9i ñiLu tra đa sB b nh nhân đLu có th) t^ khƒi nh, th) có th) t'o đáp &ng mi%n dach bpng kháng th) b9o v kháng th) kháng kháng nguyên bL mdt c4a virus Tuy nhiên v-n có m t t( l ngư,i nhi%m HBV c"n ph9i ñưcc ñiLu tra ñdc hi u bpng thuBc kháng virus m t có d>u hi u viêm gan m'n tính lưcng virus tăng cao [6] 1.1.3 D?ch t$ h!c c a b8nh viêm gan siêu vi B Hi n nay, theo thBng kê c4a t ch&c Y t Th gi.i (WHO), ư.c tính có kho9ng t( ngư,i ba nhi%m HBV, có kho9ng 350 tri u ngư,i mang m"m b nh m'n tính Viêm gan siêu vi B thư,ng nguyên nhân d-n ñ n viêm gan m'n, xơ gan ung thư gan nguyên phát v.i t( l tF vong 1W2 tri u ngư,i Tình hình nhi%m HBV thay đ i theo tYng khu v^c ñaa dư Tùy theo t( l ngư,i mang HBsAg (+) mà ngư,i ta chia làm khu v^c chính: 1.1.3.1 Vùng n#i d ch lưu hành cao (high endemic area) T( l HBsAg (+) vào kho9ng 5W20% khu v^c Đông Nam Á, Trung QuBc Châu Phi Đdc ñi)m dach t% h`c c4a vùng s^ nhi%m HBV ch4 y u x9y theo chiLu d`c (vertical contamination) tY m† lây sang con, thư,ng gdp C nư.c châu Á, tu i ba nhi%m thư,ng r>t s.m trD sơ sinh Ngoài ngư,i ta ghi nhon s^ lây nhi%m x9y C tu i thi u niên trD ba lây l-n gia đình hodc b'n bè Ki)u lây theo chiLu ngang (horizontal contamination) thư,ng gdp C trD em Châu Phi Vì voy, h"u h t dân sB ba nhi%m có huy t chrn đốn HBV dương tính r>t s.m, thư,ng sau 10 tu i Tuy nhiên b nh l'i thư,ng ñưcc phát hi n C tu i trưCng thành, lúc mà bi n ch&ng m'n tính c4a nhi%m HBV có th) ñã xu>t hi n viêm gan m'n, xơ gan ung thư gan nguyên phát Do ba nhi%m C tu i nhƒ nên nguy mang siêu vi m'n tính r>t cao NhRng phát hi n ch&ng tƒ rpng nhRng ngư,i trD mang HBV nhRng ngư,i có kh9 lây nhi%m cao nh>t [2],[41],[47] 1.1.3.2 Vùng n#i d ch lưu hành trung bình (intermediate endemic area) T( l HBsAg (+) vào kho9ng 2W7% C m t sB quBc gia miLn Nam châu Âu Đông Âu, Nga, Nam Mq Ki)u lây truyLn thư,ng phBi hcp lây nhi%m qua đư,ng tình d[c thư,ng quan tr`ng Tu i ba lây nhi%m cao nh>t tY 25 tu i (kho9ng 50% dân sB)[2],[41],[47] 1.1.3.3 Vùng n#i d ch lưu hành tht th>p vào kho9ng 0,1W1% dân sB C Bmc Mq, Tây Âu Úc T( l ngư,i mang HBsAg cao nh>t C kho9ng tu i tY 20W40, trD em hi m ba nhi%m HBV tình tr'ng nhi%m HBV thư,ng đưcc phát hi n C đBi tưcng có nguy theo ki)u lây truyLn hàng ngang [2],[41],[47] 1.2 C u trúc c a HBV(Hepatitis B virus) Chl vài năm sau phát hi n r>t quan tr`ng d-n ñ n gi9i Nobel Y h`c c4a Blumberg c ng s^ vL kháng nguyên Australia (1964), nhà nghiên c&u ñã xác ñanh ñưcc mBi liên quan giRa kháng nguyên v.i b nh viêm gan B Ti p theo đó, kháng ngun Australia ñã ñưcc ch&ng minh ñ'i di n cho quy t đanh kháng ngun bL mdt c4a HBV, voy ñưcc thay th bpng thuot ngR “kháng nguyên bL mdt virus viêm gan virus B” (Hepatitis B surface Antigen), ký hi u HBsAg Năm 1970, nghiên c&u dư.i kính hi)n vi n tF Dane mơ t9 h't virus HBV hồn chlnh, đưcc g`i h't Dane HBV thu c h` Hepadnaviridae C>u trúc c4a lõi (core) c4a HBV m t DNA m'ch đơi khơng khép kín, v.i tr`ng lưcng phân tF 2×106 dalton, đưcc c>u t'o bCi 3200 nucleotide Vƒ capsid hình h p có kích thư.c kho9ng 27 nm, vƒ bao (precore) c>u t'o bCi protein c>u trúc prôtêin l.n, prôtêin trung bình prơtêin nhƒ dày kho9ng nm Vƒ bao t'o cho virus có hình c"u đư,ng kính 42 nm (h't Dane) [5],[10] Hình 1.1 Sơ đt c>u trúc c4a h't Dane [10] 1.2.1 Thành phJn c u trúc kháng ngun HBV có lo'i kháng ngun chính: kháng nguyên bL mdt HBsAg, kháng nguyên lõi HBcAg HBeAg HBsAg: đưcc tìm th>y C huy t t bào gan c4a ngư,i ba nhi%m HBV dư.i d'ng hồn chlnh hay khơng hồn chlnh Kháng ngun bL mdt có hai d'ng hình c"u hình Bng Šng ph"n c>u t'o c4a hai d'ng gtm prơtêin, lipid, cacbohidrat, khơng có acid nucleic nên đưcc xem d'ng khơng hồn chlnh HBV HBsAg chl ñi)m huy t h`c thư,ng ñưcc dùng ñ) xác ñanh nhi%m HBV HBsAg xu>t hi n r>t s.m trư.c có tri u ch&ng lâm sàng, tăng cao d"n bi n m>t sau 4W8 tu"n k) tY có tri u ch&ng N u sau tháng mà v-n cịn HBsAg có nguy chuy)n thành ngư,i mang HBsAg m'n tính S^ hi n di n c4a HBsAg huy t ch&ng tƒ có DNA c4a virus t bào gan Đanh lưcng HBsAg có giá tra tiên lưcng, n u giai đo'n bình ph[c hàm lưcng HBsAg khơng nhƒ ¼ so v.i tra sB ban đ"u có nguy trC thành ngư,i mang virus m'n tính HBcAg: tìm th>y t bào gan c4a ngư,i nhi%m HBV Trong huy t thanh, HBcAg hi n di n m t thành ph"n c4a virus hồn chlnh ch& khơng C d'ng t^ HBcAg chl xu>t hi n t bào gan chl có th) phát hi n đưcc làm sinh thi t gan Khi m t t bào gan có HBcAg bao gi, có HBsAg màng t bào ntng đ DNA polymeraza ln ln tăng cao HBeAg: lo'i kháng nguyên hòa tan huy t thanh, C t bào gan HBeAg hi n di n t bào ch>t su đưcc gi9i phóng khƒi t bào lõi c4a virus sF d[ng ch>t try m'nh HBeAg xu>t hi n s.m giai ño'n tiLn vàng da S^ bi n m>t c4a HBeAg xu>t hi n AntiWHBe d>u hi u c4a b nh ñang lui d"n Ngưcc l'i, viêm gan m'n t>n cơng thư,ng th>y HBsAg(+) HBeAg (+) có t( l làm lây nhi%m r>t cao Đdc bi t C ph[ nR có thai n u đtng th,i HBsAg(+) HBeAg (+) h"u h t c4a h` ba lây nhi%m [5],[6] 1.2.2 C u trúc bK gen c a HBV Hình 1.2 Minh h`a cho va trí vùng gen c4a HBV [42] W DNA c4a HBV gtm m t sci đơi: kích thư.c c4a sci xi tY 3.0 – 3.3 kb (kích thư.c thay đ i giRa hepadnavirus) sci ngưcc 1.7 – 2.8 kb W Gen S gen mã hóa cho c>u trúc vƒ bL mdt c4a HBV gtm vùng: pre S1 (108 aa) pre S2 (55 aa); hai vùng mã hóa cho kháng nguyên bL mdt HBsAg, vùng S (226 aa) mã hóa ki)u gen W Gen C mã hóa cho c>u trúc lõi bao gtm hai vùng: pre C (29 aa) mã hóa cho HBeAg vùng C (183 aa) mã hóa cho HBcAg W Gen P (832 aa) gen dài nh>t mã hóa cho DNA polymerase v.i RNA trung gian tham gia vào trình chép ngưcc c4a virus W Gen X gtm 154 aa mã hóa cho hai protein c4a HBV mà ch&c c4a chúng tham gia vào giai ño'n phiên mã chép trình nhân vi DANH M C CÁC B NG B1ng Tên b1ng 1.1 S@ phân b? kiBu gen HBV cMa m`t s? tác giN nư9c nư9c khu v@c 16 3.1 T{ l= kiBu gen cMa HBV b=nh nhân tqnh Đrk Lrk 35 3.2 Tq l= kiBu gen cMa HBV phân b? theo nhóm tuDi 38 3.3 Tq l= kiBu gen cMa HBV phân b? theo gi9i tính 39 3.4 Tr s? huy+t áp tâm thu cMa b=nh nhân nhiem HBV t