Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản của tôm tít (harpiosquilla harpax de haan 1884) trong điều kiện nuôi

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG BÙI NGUYÊN TOÀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC SINH SẢN CỦA TƠM TÍT (Harpiosquilla harpax de Haan, 1844) TRONG ĐIỀU KIỆN NI LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÁNH HỊA – 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG BÙI NGUYÊN TOÀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC SINH SẢN CỦA TƠM TÍT (Harpiosquilla harpax de Haan, 1844) TRONG ĐIỀU KIỆN NUÔI LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Nuôi trồng thủy sản Mã số: 60620301 Quyết định giao đề tài: 1224/QĐ-ĐHNT ngày 26/09/2013 Quyết định thành lập HĐ: 378/QĐ – ĐHNT ngày 11/05/2016 Ngày bảo vệ: 28/05/2016 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Lục Minh Diệp Chủ tịch hội đồng: PGS.TS Nguyễn Đình Mão Khoa sau đại học: KHÁNH HỊA – 2016 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan luận văn kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng bảo vệ học vị Kết nghiên cứu luận văn phần đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất giống nhân tạo tơm tít” cho phép ThS Bùi Văn Điền chủ nhiệm đề tài sử số liệu đề tài để hoàn thành báo luận văn Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Tác giả Bùi Nguyên Toàn iii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận này, ngồi nổ lực thân, nhận giúp đỡ thấy cô, đồng nghiệp, gia đình bạn bè Lời cảm ơn sâu sắc xin dành cho thầy hướng dẫn, TS Lục Minh Diệp, người định hướng, dạy bảo giúp đỡ tơi nhiều suốt q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn: ThS Bùi Văn Điền chủ nhiệm đề tài “ Nghiên cứu xây dựng quy trình sản xuất giống nhân tạo tơm tít ” tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện cho thực đề tài Anh chị em đồng nghiệp Trạm Nghiên cứu Thuỷ sản Nước lợ - Trung tâm Quốc gia Giống Hải sản miền Bắc tạo điều kiện thuận lợi cho thực hồn thành đề tài thời gian qua Gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG .viii DANH MỤC HÌNH ix TRÍCH YẾU LUẬN VĂN x MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số đặc điểm sinh học tơm tít 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Đặc điểm hình thái 1.1.4 Tập tính sống 10 1.1.5 Đặc điểm dinh dưỡng 10 1.1.6 Đặc điểm sinh trưởng 11 1.1.7 Đặc điểm sinh sản 11 1.2 Tình hình nghiên cứu sinh sản tơm tít giới Việt Nam 14 1.2.1 Tình hình nghiên cứu ấu trùng tơm tít giới 14 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Tơm tít Việt Nam 16 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tượng, thời gian địa điểm 18 2.2 Phương pháp nghiên cứu cách bố trí thí nghiệm 19 2.2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 19 2.2.2 Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản tơm tít điều kiện nuôi 19 2.2.3 Nghiên cứu thử nghiệm ni phát dục tơm tít bố mẹ 21 2.2.4 Phương pháp thu thập, phân tích xử lý số liệu 22 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh sản tơm tít điều kiện ni 23 3.1.1 Phân biệt giới tính 23 3.1.2 Các giai đoạn phát triển buồng trứng tôm tít 23 v 3.1.3 Xác định hệ số thành thục mùa vụ sinh sản tơm tít 29 3.1.4 Sức sinh sản tơm tít điều kiện ni 30 3.2 Kết thử nghiệm cho sinh sản nhân tạo tơm tít 31 3.2.1 Theo dõi sinh trưởng tơm tít điều kiện nuôi 31 3.2.1.1 Một số tiêu mơi trường bể ni tơm tít bố mẹ 31 3.2.1.2 Sinh trưởng tỷ lệ sống đàn tôm bố mẹ điều kiện nuôi 32 3.2.2 Kết nuôi phát dục tơm tít bố mẹ 33 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 35 4.1 Kết luận 35 4.2 Đề xuất 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC 41 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BW Khối lượng thân GSI (%) Hệ số thành thục LT Chiều dài toàn thân N Số mẫu Ppt Phần nghìn So/00 Độ muối TSD Tuyến sinh dục W Khối lượng vii DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Hệ số thành thục tơm tít qua tháng 29 Bảng 3.2 Sức sinh sản tơm tít đợt thí nghiệm 30 Bảng 3.3 Khối lượng số lượng trứng tơm tít ni bể 31 Bảng 3.4 Một số yếu tố mơi trường bể ni tơm tít (năm 2014) 32 Bảng 3.5 Tăng trưởng tỷ lệ sống đàn tôm nuôi 33 Bảng 3.6 Tỷ lệ thành thục tơm tít qua tháng 33 Bảng 3.7 Kết ni phát dục tơm tít bố mẹ 34 Bảng 3.8 Kết cho sinh sản nhân tạo tôm tít 34 viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Tơm tít (Harpiosquilla harpax De Haan, 1844) Hình 1.2 Phân bố tơm tít giới Hình 1.3 Phần trước giáp đầu ngực loài H harpax Hình 1.4 Đặc điểm hình thái ngồi tơm tít Hình 1.5 Sơ đồ phần trước giáp đầu ngực Hình 1.6 Hình dạng tơm tít Hình 1.7 Lồi Oratosquillina interrupta Hình 1.8 Lồi Miyakea neap Hình 1.9 Đặc điểm hình thái lồi ngồi tơm Harpiosquilla harpax Hình 1.10 Hệ tiêu hóa tơm tít nhìn từ mặt lưng 11 Hình 1.11 Tơm thành thục 12 Hình 1.12 Hình thức giao vỹ tơm tít Gonodactylus bredini 13 Hình 2.1 Ảnh tơm Tít (Mẫu thu ngày 18/3/2014 Đồ sơn – Hải Phịng) 18 Hình 3.1 Hình thái ngồi buồng trứng tơm tít 23 Hình 3.2 Các giai đoạn phát triển buồng trứng 24 Hình 3.3 Giai đoạn I (chưa trưởng thành) 25 Hình 3.4 Tế bào trứng loại 26 Hình 3.5 Tế bào trứng loại 26 Hình 3.6 Tế bào trứng loại 26 Hình 3.7 Tế bào trứng loại 26 Hình 3.8 Tế bào trứng bao quanh vỏ màu đậm hoàn chỉnh tế bào nang 27 Hình 3.9 Giai đoạn IV trứng 27 Hình 3.10 Buồng trứng giai đoạn V 28 Hình 3.11 Giai đoạn VI buồng trứng 29 ix TRÍCH YẾU LUẬN VĂN Luận văn “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh sản tơm tít điều kiện nuôi” thực Trung tâm Quốc gia Giống hải sản miền Bắc- Viện nghiên cứu NTTS từ tháng đến tháng 11 năm 2014 Luận văn phần kết đề tài cấp Bộ “Nghiên cứu xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất giống nhân tạo tơm tít” Từ nguồn tơm tít bố mẹ đánh bắt từ vùng biển Cát Bà – Hải Phịng, luận văn tiến hành ni dưỡng ni thành thục tơm tít bố mẹ, theo dõi tiêu sinh học sinh sản Kết cho thấy tơm tít có kích cỡ 80g trở lên đạt kích cỡ thành thục sinh dục, q trình phát triển tuyến sinh dục qua 05 giai đoạn, buồng trứng thành thục có màu vàng đậm, 02 dải trứng kéo dài từ giáp đầu ngực đến Telson Hệ số thành thục tơm tít có xu hướng tăng dần từ tháng đến tháng 7, sau giảm dần đến tháng 10 Từ tháng đến tháng 7, hệ số thành thục tăng nhanh từ 0,55% đến 2,33% Tháng 1,25% giảm 1,08% rong tháng Tháng 10 hệ số thành thục giảm xuống 0,65% Sức sinh sản tuyệt đối tơm tít dao động từ 85.600105.300 trứng/một cá thể tơm cái, trung bình 94.380trứng/cá thể Sức sinh sản thực tế trung bình đạt 85.000 trứng/tôm mẹ Kết thử nghiệm nuôi phát dục tôm tít bố mẹ cho kết quả: tỷ lệ tơm thành thục đạt 70,2%, tỷ lệ tham gia sinh sản đạt 63,5%, tỷ lệ nở đạt 80%, số lượng ấu trùng thu 2340.000 Kết luận văn cho thấy việc ni phát dục tơm tít từ nguồn tơm bố mẹ khai thác từ tự nhiên hồn tồn thực điều kiện nuôi nhân tạo Kết luân văn góp phần quan trọng việc xây dựng quy trình cơng nghệ sản xuất giống nhân tạo tơm tít Từ Khóa: Tơm tít, sinh học sinh sản, tuyến sinh dục, Harpiosquilla harpax x Tháng 7/2014 Mẫu Khối lƣợng tôm (g) Khối lƣợng TSD (g) Hệ số thành thục (%) 98,8 10,20 10,32 99,2 11,20 11,29 99,2 11,20 11,29 98,2 10,20 10,39 98,2 10,20 10,39 98,4 10,50 10,67 99,0 11,20 11,31 97,0 11,20 11,55 99,0 13,40 13,54 10 97,0 13,45 13,87 Mẫu Khối lƣợng tôm (g) Khối lƣợng TSD (g) Hệ số thành thục (%) 102,0 6,77 6,64 101,0 5,60 5,54 103,0 5,60 5,44 102,0 5,10 5,00 104,0 5,10 4,90 102,0 9,22 9,04 103,0 9,88 9,59 103,0 9,55 9,27 102,0 9,22 9,04 10 102,0 6,73 6,59 Mẫu Khối lƣợng tôm (g) Khối lƣợng TSD (g) Hệ số thành thục (%) 105,0 4,27 4,07 107,0 4,67 4,36 105,0 4,47 4,26 106,0 4,59 4,33 106,0 4,59 4,33 106,0 4,43 4,18 106,0 4,47 4,22 105,0 4,83 4,60 105,0 4,67 4,45 10 106,0 4,67 4,40 Tháng 8/2014 Tháng 9/2014 46 Tháng 10/2014 Mẫu Khối lƣợng tôm (g) Khối lƣợng TSD (g) Hệ số thành thục (%) 109,0 2,34 2,15 108,0 2,31 2,14 107,0 2,31 2,16 109,0 2,33 2,14 110,0 3,44 3,13 108,0 2,01 1,86 109,0 2,44 2,24 109,0 4,22 3,87 108,0 3,22 2,98 10 108,0 1,98 1,83 47 Phụ lục Sức sinh sản tơm tít Đợt 1(10/6/2014): Theo dõi sức sinh sản tuyệt đối tơm tít Mẫu Khối lƣợng tơm mẹ (g) S Tƣơng đối (Trứng/1 S Tuyệt đối (Trứng/g tôm cá thể) cái) 102 92000 902,0 102 95000 931,4 102 92000 902,0 105 81000 771,4 102 84000 823,5 101 91000 901,0 105 101000 961,9 107 96000 897,2 105 101000 961,9 10 102 98000 960,8 11 102 102000 1000,0 12 105 105000 1000,0 Đợt (5/7/2014): Theo dõi sức sinh sản tuyệt đối tôm tít Mẫu Khối lƣợng tơm mẹ (g) S Tƣơng đối (Trứng/1 cá S Tuyệt đối (Trứng/g thể) tôm cái) 100 92000 920,0 99 95000 959,6 102 92000 902,0 101 96000 950,5 102 96000 941,2 101 92000 910,9 99 93000 939,4 102 83000 813,7 102 87000 852,9 10 105 97000 923,8 11 108 103000 953,7 12 105 93000 885,7 48 Đợt (12/8/2014): Theo dõi sức sinh sản tuyệt đối tôm tít Mẫu Khối lƣợng tơm mẹ (g) 10 11 12 13 14 15 100 102 102 101 102 102,6 103,2 103,8 104,4 105 105,6 106,2 106,8 102 108 S Tƣơng đối (Trứng/1 cá thể) 92000 95000 92000 96000 96000 92000 93000 88000 98000 96000 97000 94000 95000 92000 91000 S Tuyệt đối (Trứng/g tôm cái) 920,0 931,4 902,0 950,5 941,2 896,7 901,2 847,8 938,7 914,3 918,6 885,1 889,5 902,0 842,6 Thu mẫu sức sinh sản thực tế, đợt 1, 18/6/2014 STT Wct(g) 102,3 101,2 99,5 103,0 102,2 SL(trứng) 88000 82000 86000 85000 91000 Thu mẫu sức sinh sản thực tế, đợt 2, 12/7/2014 STT Wct(g) 100,4 101,5 102,2 103,0 102,1 SL(trứng) 83000 81000 82000 95000 96000 Thu mẫu sức sinh sản thực tế, đợt 3, 18/8/2008 STT Wct(g) SL(trứng) 101,6 86000 103,5 83000 102,2 87000 103,0 95000 102,5 91000 105,2 82000 102,7 87000 49 Phụ lục Môi trƣờng bể nuôi Môi trường bể ni tơm tít từ tháng 4-10/2014 Ngày Nhiêt nƣớc Ôxy (mg/l) pH ¼ 23 5.1 7.6 2/4 24.8 5.2 7.7 ¾ 24.8 5.1 7.8 4/4 24.5 5.2 7.9 5/4 22 5.1 7.9 6/4 CN 22.5 5.5 8.2 7/4 23 5.1 8.2 8/4 23.5 5.1 7.9 9/4 23.5 5.5 7.6 10/4 23.5 5.1 7.6 11/4 23 5.1 8.2 12/4 23.5 5.5 8.2 13/4 CN 23.5 5.5 7.9 14/4 24 5.2 7.9 15/4 25.5 5.2 8.2 16/4 24.8 5.2 8.2 17/4 26.5 5.3 7.8 18/4 26.5 5.3 8.2 19/4 26 5.4 8.3 20/4 CN 25.5 5.3 7.9 21/4 23.5 5.4 22/4 23.5 5.5 8.1 23/4 24 5.2 8.1 24/4 26 5.3 7.7 25/4 26.5 5.5 7.9 26/4 25.5 4.5 7.3 27/4 CN 24 5.0 7.8 28/4 22.5 5.0 8.2 29/4 21.5 5.0 8.2 30/4 21.5 5.0 8.2 50 Môi trường bể ni tơm tít, Tháng 5/2008 Ngày Nhiệt độ nƣớc Ôxy (mg/l) pH 1/5 26.5 5.4 7.9 25/ 26.5 5.5 7.9 3/5 26.5 5.2 7.9 4/5 CN 28.5 5.3 7.9 5/5 28.5 5.5 7.9 6/5 28.5 5.5 7.8 7/5 28,5 5.0 8.0 8/5 26.5 5.4 7.9 9/5 27.5 5.5 7.8 10/5 28.5 5.2 8.0 11/5 CN 28 5.3 7.8 12/5 28.5 5.5 8.0 13/5 28.2 5.2 7.9 14/5 28.5 5.3 7.9 15/5 28.5 5.5 7.9 16/5 28.5 5.5 7.9 17/5 28.5 5.0 7.9 18/5 CN 28.5 5.4 7.8 19/5 28 5.5 7.8 20/5 28.5 5.2 7.9 21/5 28.2 5.5 7.9 22/5 28.5 5.2 7.9 23/5 28.5 5.3 7.9 24/5 28.5 5.5 7.9 25/5 CN 28 5.5 7.8 26/5 28.5 5.0 8.0 27/5 28.2 5.4 7.9 28/5 28.5 5.5 7.8 29/5 30.5 5.5 8.0 30/5 31.5 6.0 7.8 31/5 31.5 6.0 8.0 51 Mơi trường bể ni tơm tít, Tháng 6/2014 Nhiệt độ nƣớc Ôxy (mg/l) pH 2/6 30.5 5.2 8.0 3/6 28.5 5.5 7.8 4/6 28.5 5.2 8.0 5/6 29.5 5.3 7.9 6/6 29,5 5.5 7.9 7/6 29,5 5.2 7.9 8/6 CN 30.5 5.5 7.9 9/6 28.5 5.2 7.9 10/6 28.5 5.3 7.8 11/6 29.5 5.5 7.8 12/6 29,5 5.5 7.9 13/6 29,5 5.5 8.0 14/6 30.5 5.5 7.8 15/6 CN 28.5 8.0 16/6 28.5 5.5 8.0 17/6 29.5 8.0 18/6 29,5 8.0 19/6 29,5 4.5 8.0 20/6 29.5 8.0 21/6 30.5 8.0 22/6 CN 31 5.5 8.0 23/6 31.5 8.0 24/6 31.5 5.5 8.0 25/6 29.5 5.5 8.0 26/6 29.5 5,6 8.0 27/6 30.5 5.5 7.8 28/6 30.5 5.6 7.9 29/6 CN 31 65 7.8 30/6 31.5 5.5 7.9 TB 30.8 5.1 7.9 Ngày 1/6 CN 52 Mơi trường bể ni tơm tít, Tháng 7/2014 Ngày Nhiêt nƣớc Ơxy (mg/l) pH 1/7 31 5.8 8.0 2/7 31 5.6 8.0 3/7 30.5 5.5 7.9 4/7 30.5 7.9 5/7 6/7 CN 32 31 5.5 5.5 7.9 7.9 7/7 31.5 5.5 7.8 8/7 32 7.9 9/7 31 6.2 7.9 10/7 31.5 8.0 11/7 32 5.5 7.9 12/7 33 5.5 7.9 13/7.CN 30.5 5.5 7.9 14/7 32 7.9 15/7 31.5 6.2 7.8 16/7 31 7.9 17/7 30.5 5.5 7.9 18/7 31.5 8.0 19/7 31 5.8 20/7 CN 30.5 5.6 21/7 31 5.5 8.0 22/7 31.5 23/7 31.5 5.5 24/7 32 5.5 7.9 25/7 31 5.5 7.9 26/7 30.5 7.8 27/7.CN 31 6.2 7.9 28/7 31 7.9 29/7 31.5 5.5 30/7 32 5.8 7.8 31/7 32 5.6 53 Môi trường bể nuôi tơm tít, Tháng 8/2014 Ngày/tháng Nhiệt độ Ơ xy pH 1/8 28 5.5 8.0 2/8 28.5 5,2 7.9 3/8 CN 28.6 5,2 7.9 4/8 27.6 5,2 7.9 5/8 28 5.5 7.9 6/8 28 5,2 7.8 7/8 28.5 5,6 7.9 8/8 28 5,6 7.9 9/8 28 5.5 8.0 10/8.CN 28.5 5.5 11/8 28 5,6 12/8 28.5 5,6 8.0 13/8 29 5.5 14/8 29 5,4 15/8 28.5 5.5 7.9 16/8 28 5,2 7.9 17/8.CN 28.5 5,2 7.8 18/8 28.5 5.5 7.9 19/8 28.0 5,2 7.9 20/8 28.5 5,6 8.0 21/8 29.0 5,6 7.9 22/8 30.0 5.5 7.9 23/8 29.5 5.5 7.9 24/8.CN 29.0 5,6 7.9 25/8 28.5 5,6 7.8 26/8 28.0 5.5 7.9 27/8 27.5 5,4 7.9 28/8 28.0 5.5 8.0 29/8 28.0 5,2 30/8 27.5 5,2 31/8.CN 27.5 5.5 8.0 TB 28.3 5,2 7.6 54 Mơi trường bể ni tơm tít, Tháng 9/2014 Ngày/tháng Nhiệt độ Ô xy pH 1/9 27.5 5.0 7.9 2/9 29.0 6.0 7.8 3/9 26.5 5.5 7.9 4/9 27.0 5.0 7.9 5/9 27.5 5.0 8.0 6/9 27.5 5,6 7/9.CN 28.0 5,6 8/9 30.0 5.5 7.9 9/9 30.5 5.5 7.8 10/9 30.0 5,6 7.9 11/9 29.0 5,6 7.9 12/9 30.0 5.5 8.0 13/9 29.0 5,4 8,1 14/9.CN 27.5 5.5 8,0 15/9 28.0 5,6 7.9 16/9 28.0 5,6 7.8 17/9 27.5 5.5 7.9 18/9 28.0 5.5 7.8 19/9 28.5 5,6 7.9 20/9 28.0 5,6 7.9 21/9.CN 28.5 5.5 8.0 22/9 30.0 5,4 8,1 23/9 30.0 5.5 8,1 24/9 30.0 5,6 7.9 25/9 29.0 5,6 7.8 26/9 28.0 5.5 7.9 27/9 28.5 5.5 7.9 28/9.CN 28.5 5,6 8.0 29/9 27.5 5,6 8,0 30/9 26.5 5.5 8,0 TB 28.5 5,4 7.9 55 Môi trường bể ni tơm tít, Tháng 10/2014 Ngày/tháng Nhiệt độ Ô xy pH 1/10 26.5 4.0 7.7 2/10 26.5 4.5 7.5 3/10 27.0 4.0 7.7 4/10 27.0 4.0 7.4 5/10.CN 27.0 4.5 7.6 6/10 27.0 4.0 7.2 7/10 26.5 4.5 7.6 8/10 26.5 4.5 7.6 9/10 27.0 4.0 7.68 10/10 27.0 5.0 7.8 11/10 26.0 5.0 7.6 12/10.CN 25.5 4.5 7.6 13/10 24.5 4.5 7.7 14/10 25.0 5.0 7.6 15/10 24.5 5.0 7.6 16/10 26.5 4.5 7.8 17/10 26.5 4.0 7.6 18/10 27.0 4.0 7.6 19/10.CN 27.0 4.5 7.3 20/10 26.5 4.0 7.5 21/10 26.5 4.0 7.3 22/10 27.0 4.5 7.5 23/10 27.0 4.5 7.7 24/10 26.0 5.0 7.6 25/10 26.5 4.5 7.4 26/10.CN 25.5 5.0 7.6 27/10 25.0 5.0 7.6 28/10 27.0 4.5 7.8 29/10 25.0 4.0 7.6 30/10 27.0 4.0 7.6 31/10 27.5 4.5 7.3 56 Phụ lục Các bƣớc thực cắt mô tuyến sinh dục tôm Bước 1: Loại nước khỏi mẫu Lần lượt chuyển mẫu qua cồn với nồng độ tăng dần Cồn 800: lần với thời gian 30 phút Tiếp đến cồn 950: lần lần 30 phút Sau cồn 100°: lần lần 30 phút Bước 2: Làm mẫu Đưa mẫu khử nước vào xylen 100%, lần lần 60 phút Bước 3: Thấm Parafin Chuyển mẫu làm vào cốc Parafin nóng chảy có nhiệt độ khoảng 58 - 600C với thời gian từ - 12h Bước 4: Đúc mẫu Đặt mẫu thấm Parafin vào giá đúc mẫu, đổ Parafin nóng chảy lấp đầy mẫu Bước 5: Cắt dán mẫu lên lam Gọt khối mẫu thành hình tháp cụt, cạnh cách mẫu cm Sau đặt khối mẫu vào vị trí máy cắt Cắt mẫu thành lát mỏng - 5qm Đưa lát cắt vào nước ấm 40 0C Dùng lam kính để nghiêng khoảng 400 lấy lát cắt khỏi nước Đặt lam vào tủ sấy nhiệt độ 40 0C Để mẫu khơ, sau nhuộm mẫu Mẫu nhuộm phương pháp Sheehan E Harpchark (1980) Gồm bước sau: Bước 1: Khử parafin Ngâm mẫu vào cốc Xylen Thời gian khử Parafin (ngâm mẫu Xylen) phụ thuộc vào độ dày lát cắt mẫu Bước 2: Khử xylen Mẫu khử Parafin chuyển qua cốc cồn với nồng độ 700, 950 1000, sau rửa nhanh mẫu nước Bước 3: Nhuộm Hematoxylin Mẫu ngâm Hematoxylin 15 phút sau rửa vịi nước với thời gian phút Bước 4: Nhuộm Eosin Mẫu ngâm eosin 2- phút sau rửa nước Bước 5: Làm nước Mẫu chuyển qua cồn có nồng độ thời gian sau: Cồn 700 với thời gian 3- phút Cồn 950 - phút lần cồn 100°, lần 3- phút Bước 6: Làm mẫu Chuyển mẫu qua Xylen lần, lần – phút Bước 7: Hoàn thiện tiêu Dùng lamen dán lên lam mẫu Baume Canada để bảo quản phân tích mẫu Phân tích mẫu kính hiển vi ánh sáng điện Ảnh hình thái tế bào trứng chụp máy Wild Leitz qua kính hiển vi Opton Ảnh mẫu noãn bào giai đoạn I- II chụp vật kính 10x thị kính 10x Ảnh mẫu nỗn bào giai đoạn III- IV chụp với vật kính 3,2x thị kính 5x 57 Phụ lục 6: Một số hình ảnh Tơm tít Tơm mẹ thành thục Bể ni tơm bố mẹ Tôm giao vỹ Tôm mẹ ôm trứng 58 MỘT SỐ HÌNH ẢNH CÁC GIAI ĐOẠN PHÁT TRIỂN ẤU TRÙNG Ấu trùng giai đoạn Pelagic I-II Ấu trùng giai đoạn Pelagic III-V Ấu trùng giai đoạn Pelagic V-VIII 59 Thu mẫu sinh học sinh sản Cân TSD xác định hệ số thành thục Cố định mẫu TSD để cắt mô 60