Nghiên cứu khả năng nhân giống địa lan kiếm mặc đen bằng phương pháp in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ THU HÀ Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG ĐỊA LAN KIẾM MẶC ĐEN (Cymbidium atropurpureum) BẰNG PHƯƠNG PHÁP INVITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Đại học (chính quy) Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Khoa: CNSH-CNTP Khóa : 2018-2022 Thái Nguyên, năm 2023 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ THU HÀ Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG ĐỊA LAN KIẾM MẶC ĐEN (Cymbidium atropurpureum)0BẰNG PHƯƠNG PHÁP INVITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Đại học (chính quy) Chun ngành: Cơng nghệ sinh học Khoa: CNSH-CNTP Khóa: 2018-2022 Giảng viên hướng dẫn: ThS Nguyễn Thị Tình Thái Nguyên, năm 2023 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan tất thông tin, lẫn số liệu kể kết nghiên cứu khóa luận tối trung thực, khảo sát thực hướng dẫn Ths Nguyễn Thị Tình làm thực khoa Công nghệ sinh học - Công nghệ thực phẩm Thái Nguyên tham khảo thêm số tài liệu lan Tôi xin cam đoan rằng, công việc hay giúp đỡ việc thực khóa luận đích thân tơi cảm ơn thơng tin trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Thái Nguyên, ngày tháng Sinh viên Nguyễn Thị Thu Hà năm 2023 ii LỜI CẢM ƠN Được đồng ý Ban giám hiệu nhà trường Đại Học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm, xuyên suốt trình thực tập tốt nghiệp em thực đề tài:“Nghiên cứu khả nhân giống địa lan kiếm Mặc Đen phương pháp in vitro” Trang đầu tiên khóa luận em xin trân thành gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm cùng các thầy cô giáo Khoa tạo nhiều điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cứu Đặc biệt, em xin trân thành cám ơn ThS Nguyễn Thị Tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt tốt cho em xuyên suốt quá trình thực tập tốt nghiệp Cuối cùng, em xin cảm ơn nhiều tới gia đình tạo điều kiện kể vật chất chỗ dựa tinh thần vững cho em suốt thời gian thực tập vừa qua, em cảm ơn bạn bè đồng hành hết lòng động viên, giúp đỡ em suốt thời gian vừa qua Trong suốt thời gian quá trình thực tập qua, xuyên suốt quá trình làm báo cáo thực tập thời gian có hạn không tránh khỏi sai sót Em mong nhận nhận ý kiến đóng góp thầy cô các bạn để đề tài em hoàn thiện Lời cuối em xin kính chúc các thầy, cô giáo nhà trường, khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ thực phẩm, cùng các bạn đồng nghiệp có thật nhiều sức khỏe, thành cơng sống Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2203 Sinh viên thực Nguyễn Thị Thu Hà iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng môi trường tới khả nảy mầm hạt lan kiếm Mặc Đen sau tháng nuôi cấy 38 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến khả tái sinh chồi lan Kiếm Mặc Đen sau tháng nuôi cấy 40 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi từ phôi lan Mặc Đen(sau 40 ngày nuôi cấy) 42 Bảng 4.4 Nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Mặc Đen 45 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Mặc Đen (sau 30 ngày nuôi cấy) .47 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả rễ lan Kiếm Mặc Đen (sau 30 ngày ni cấy) .49 iv DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi từ phôi rễ lan Kiếm Mặc Đen 31 Hình 4.1 Hình Ảnh hưởng mơi trường tới khả nảy mầm hạt lan kiếm Mặc Đen sau tháng nuôi cấy 37 Hình 4.2 hình ảnh hưởng chất kích sinh trưởng để nâng cao khả tái sinh chồi lan Mặc Đen .41 Hình 4.3 Hình ảnh ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kiếm Mặc Đen (sau 40 ngày nuôi cấy) 43 Hình 4.4 Hình ảnh BA kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Kiếm Mặc Đen 46 Hình 4.5 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Mặc Đen (sau 30 ngày nuôi cấy) 48 v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ, thuật Nghĩa đầy đủ từ thuật ngữ ngữ viết tắt BA 6-Benzyl amino purine CT Công thức Đ/C Đối chứng Kinetin 6-Furfurylaminopurine MS Murashige & Skoog (MS medium) MT Mơi trường NAA α-Napthalene acetic acid THT Than hoạt tính TN Thí nghiệm vi MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC CÁC HÌNH iv DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT v MỤC LỤC vi Phần MỞ ĐẦU 1.1.Đặt vấn đề .1 1.2 Mục đích đề tài 1.2.1.Mục tiêu tổng quát .2 1.2.2.Mục tiêu cụ thể 1.3.Ý nghĩa khoa học thực tiễn .2 1.3.1.Ý nghĩa khoa học đề tài .2 1.3.2.Ý nghĩa thực tiễn đề tài Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1.Tổng quan lan kiếm 2.1.1 Nguồn gốc, phân loại đặc điểm địa lan 2.1.2 Hiện trạng Địa lan kiếm Việt Nam .7 2.1.3 Tình hình sản xuất, tiêu thụ sản phẩm từ các loài địa lan kiếm giới 13 2.1.4 Tình hình sản xuất, tiêu thụ sản phẩm từ các loài địa lan kiếm Việt Nam 15 2.1.5 Tình hình nghiên cứu nhân giống địa lan kiếm giới Việt Nam 17 2.2 Giới thiệu giống địa lan kiếm Mặc Đen 20 2.2.1 Phân loại khoa học 20 2.2.2 Nguồn gốc phân bố 20 2.2.3 Hình thái 21 2.3 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào .22 2.3.1 Tính tồn tế bào thực vật 22 2.3.2 Sự phân hóa tế bào 23 vii 2.3.3 Sự phản phân hóa tế bào 23 2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình ni cấy mơ tế bào thực vật 23 2.4.1 Vật liệu nuôi cấy .23 2.4.2 Điều kiện nuôi cấy 24 2.4.3 Môi trường dinh dưỡng 24 2.7 Tình hình nghiên cứu ni cấy mô địa lan kiếm Mặc Đen giới nước 27 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU THÍ NGHIỆM 29 3.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 29 3.1.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 29 3.1.2 Hóa chất sử dụng .29 3.1.3 Thiết bị,dụng cụ nghiên cứu 29 3.2 Phạm vi, địa điểm thời gian nghiên cứu 29 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 29 3.2.2 Địa điểm nghiên cứu .29 3.2.2 Thời gian nghiên cứu 29 3.3 Nội dung nghiên cứu 29 3.3.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số môi trường đến khả tái sinh phôi lan Mặc Đen 29 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA, Kinetin, đến khả nhân nhanh chồi lan Kiếm Mặc Đen 30 3.3.3 Nội dung 2: Xác định mơi trường rễ tạo hồn chỉnh lan Mặc Đen 30 3.4 Phương pháp nghiên cứu 30 3.4.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy mô 30 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu 31 3.4.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm 31 3.5 Phương pháp đánh giá xử lý số liệu 35 3.5.1 Thu thập số liệu .35 viii 3.5.2 Các tiêu theo dõi 36 3.5.3 Phương pháp sử lý số liệu .37 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 38 4.1 Kết ảnh hưởng môi trường đến khả tái sinh chồi từ phôi lan Mặc Đen 38 4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích sinh trưởng để nâng cao khả tái sinh chồi lan Mặc Đen 40 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi lan Kiếm Mặc Đen(sau 40 ngày nuôi cấy) 42 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA kết hợp với Kinetin đến khả nhân nhanh chồi lan Mặc Đen 44 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Kiếm Mặc Đen .46 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả rễ địa lan Kiếm Mặc Đen 48 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Kiến nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC Phụ Lục Thí nghiệm Thí nghiệm Thí nghiệm Thí nghiệm Thí nghiệm Thí nghiệm XÁC NHẬN ĐÃ SỬA CHỮA THEO GÓP Ý CỦA HỘI ĐỒNG Thái nguyên ngày tháng năm Người nhận xét phản biện (ký ghi rõ họ tên) Người hướng dẫn (ký ghi rõ họ tên)