Luận văn thạc sĩ khoa học lâm nghiệp nghiên cứu đặc điểm sinh học của nấm đông trùng hạ thảo tuyết (isaria tenuipes) có phân bố ở việt nam

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Nấm đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes (Peck.) Samson), tên trước (Paecilomyces tenuipes Peck.) lồi nấm dược liệu ni trồng sử dụng lâu đời Hàn Quốc Trong tự nhiên, loại nấm tồn hai giai đoạn: giai đoạn hữu tính có tên Cordyceps takaomontana Yakushiji, cịn giai đoạn vơ tính có tên Isaria tenuipes Peck Đây lồi nấm có giá trị dược liệu quý, tác dụng chủ yếu điều trị hỗ trợ điều trị bệnh ung thư nhờ tác dụng dược lý sinh học chúng Một hợp chất hóa học có hoạt tính sinh học có giá trị dược liệu chứa thể giai đoạn hữu tính giai đoạn vơ tính lồi nấm 4-acetyl12,13-epoxyl-9-trichothecene-3,15-diol (Oh, G.S et.al 2001) Đây hợp chất dùng để điều trị bệnh ung thư, đặc biệt bệnh máu trắng nước giới, đặc biệt sử dụng rộng rãi Hàn Quốc (Eiji Yokoyama et al., 2003) Đây loài nấm dược liệu quý lần mô tả ghi nhận có phân bố Việt Nam Qua đợt điều tra, Trung tâm nghiên cứu bảo vệ rừng - Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam thu số mẫu Đông trùng hạ thảo nhiều nơi như: Vườn Quốc gia Ba Vì, Vườn quốc gia Tam Đảo, Khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử, và nguồn gen loài đươ ̣c lưu giữ bảo quản ta ̣i phòng Việc nhân nuôi gây trồng nhân tạo thành cơng lồi nấm có ý nghĩa vơ to lớn việc bảo tồn phát triển lồi Việt Nam Để nhân ni nhân ta ̣o thành công loài nấ m này thì đặc điểm sinh học chúng Nghiên cứu đặc điểm sinh học loài nấm Isaria tenuipes sở khoa học quan trọng xem yếu tố định đến thành bại việc nuôi trồng thể nấm nhân tạo Với lý trên, tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu đặc điểm sinh học nấm Đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes) có phân bố Việt Nam” nhằm góp phần bảo tồn, nghiên cứu ứng dụng phát triển bền vững lồi Đơng trùng hạ thảo q Thành cơng đề tài có ý nghĩa lớn nghiên cứu khoa học y học nước nhà, đặc biệt sở để tiếp tục nghiên cứu quy trình ni trồng nhân tạo loại nấm thần dược Chương TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Nghiên cứu nước 1.1.1 Nghiên cứu phân loại nhóm nấm Đơng trùng hạ thảo nấm Đông trùng hạ thảo tuyết (Isaria tenuipes) Dựa đặc điểm hình thái đặc điểm cấu trúc phân tử, loài nấm đông trùng hạ thảo xếp 162 đơn vị phân loại thuộc họ Cordycipitaceae Ophiocordycipitaceae [14] Isaria tenuipes lồi nấm phổ biến tìm thấy nhiều khu vực miền núi Hàn Quốc [21] Hình dạng nấm mọc riêng lẻ hay thành cụm nhóm Có thể mọc thẳng đột xuất nhánh, dài lên 45 mm, thân nấm chủ yếu màu vàng chanh bên có bột màu trắng [13] Theo hệ thống phân loại truyền thống loài nấm Isaria tenuipes xếp vào họ Clavicipitaceae [11] Đây lồi nấm dược liệu ni trồng sử dụng lâu đời Hàn Quốc Trong tự nhiên, ký chủ, dễ dàng thấy dạng thể quả: dạng thể chứa bào tử hữu tính (stromata) có tên go ̣i là Cordyceps takaomontana Yakushiji & Kumazawa dạng thể chứa bào tử vơ tính (synnemata) chính là Isaria tenuipes 1.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học I tenuipes Nấm I tenuipes xâm nhiễm nhộng hay sâu non sau hình thành dạng thể màu vàng mọc thẳng hay phân nhánh bên ngồi vật chủ Theo y học truyền thống Trung Hoa, dạng thể nấm I tenuipes có giá trị cao mặt dược liệu tác dụng dược lý sinh học chúng Các hoạt chất Ergosterol peroxide Acetoxyscirpenediol tách chiết từ nấm I tenuipes nuôi cấy nhân tạo có khả ức chế dịng tế bào ung thư người tế bào khối u dày, tế bào ung thư gan, tế bào ung thư ruột kết - ruột thẳng Hoạt tính Acetoxyscirpenediol mạnh Cisplatin hoạt chất dùng điều trị cho bệnh nhân ung thư đến 6,6 lần [16] Một hợp chất hóa học có hoạt tính sinh học có giá trị dược liệu chứa thể giai đoạn hữu tính giai đoạn vơ tính lồi nấm Isaria tenuipes 4-acetyl-12,13-epoxyl-9-trichothecene3,15-diol [17] Đây hợp chất dùng để điều trị bệnh ung thư, đặc biệt bệnh máu trắng nước giới, đặc biệt sử dụng rộng rãi Hàn Quốc [10] Trong dạng thể nấm Isaria tenuipes chứa hợp chất sinh học giá trị dược phẩm cao, chẳng hạn adenosine N6-(2hydroxyethyl) adenosine [13] Có tác dụng tăng cường hệ thống miễn dịch lấy lại lượng, tương tự chức bổ nhân sâm Một số thành phần sinh hoá, nguyên tố khoáng, acid amin vitamin nấm đông trùng hạ thảo I tenuipes xác định sau [30]: Bảng 1.1: Thành phần sinh hoá nguyên tố khoáng nấm I tenuipes STT Chỉ tiêu Đơn vị tính Hàm lượng Protein % chất khơ 7,75 Mannitol % chất khô 1,21 Lipid % chất khô 7,77 Cu mg/kg 21,1 Fe mg/kg 43,9 Mn mg/kg 22,2 Se mg/kg 0,32 Zn mg/kg 2,55 Ca mg/10g 12,0 10 Cr mcg/10g 0,80 11 K mg/10g 186,0 12 Na mg/10g 3,0 Bảng 1.2: Thành phần acid amin nấm đông trùng hạ thảo I tenuipes TT Acid amin ĐV Alanin % Glycin Hàm Hàm TT Acid amin ĐV 1,40 10 Methionine % 0,25 % 1,32 11 Glutamic acid % 2,46 Valin % 1,00 12 Phenylalanine % 1,30 Leucin % 1,44 13 Lysine % 2,66 Isoleucin % 0,69 14 Histidine % 0,80 Threonine % 0,83 15 Tyrosine % 2,89 Serin % 0,73 16 Cystine % 0,12 Proline % 2,83 17 Arginine % 5,30 Asparatic acid % 1,44 18 Tryptophan % 0,29 lượng lượng Bảng 1.3: Thành phần vitamin nấm Đông trùng hạ thảo I tenuipes STT Acid amin Đơn vị tính Hàm lượng Vitamin B1 mcg/10g 89,4 Vitamin B3 mg/10g 0,37 Vitamin B6 mcg/10g 19,1 Vitamin C mg/10g 1,25 Vitamin E mg/10g 0,23 Vitamin A mg/10g 0,12 Vitamin D mg/10g 242,0 1.1.3 Nghiên cứu giá trị dược liệu nấm Đông trùng hạ thảo Nấm Đông trùng hạ thảo loại nấm loại dược liệu quý, tốt cho sức khoẻ, phù hợp với lứa tuổi Đông trùng hạ thảo vị thuốc bồi bổ quý giá, có tác dụng tích cực với rấ t nhiề u bệnh rối loạn tình dục, thận hư, liệt dương, di tinh, hay có tác dụng làm tăng cường cơng tuyến thượng thận, cải thiện chức thận, nâng cao lực miễn dịch, kháng khuẩn, kháng virus, chống ung thư chất phóng xạ Isaria tenuipes lồi nấm có giá trị dược liệu q, tác dụng chủ yếu điều trị hỗ trợ điều trị bệnh ung thư nhờ tác dụng dược lý sinh học chúng Những hợp chất có hoạt tính chống khối u tác động đến hệ thống miễn dịch như: Leucinostatins A, D, Polygalactosamine, Saintopin, Sphingofungins E F, UCE1022, Paeciloquinones A, B, C, D, E F, Ergosterol peroxide, Acetoxyscirpenediol, … Đă ̣c biê ̣t, hoạt chất Ergosterol peroxide Acetoxyscirpenediol nuôi cấy nhân tạo có khả ức chế dịng tế bào ung thư người khối u dày, ung thư gan, ung thư ruột kết - ruột thẳng tách chiết thử nghiệm lâm sàng Không lồi nấm Isaria tenuipes cịn phát có hàm lượng dinh dưỡng cao: giàu vitamin D, vitamin B1, vitamin B6, nhiều nguyên tố khoáng K, Fe, Mg, Cu (Borchers et al., 1999; Liu et al., 1996; Lee et al., 1996) Trong thể nấm Isaria tenuipes chứa hợp chất sinh học giá trị dược phẩm cao, chẳng hạn adenosine N6-(2-hydroxyethyl) adenosine [13] Nấm sử dụng loại thuốc dân gian truyền thống thực phẩm thành phần tăng cường hệ thống miễn dịch lấy lại lượng, tương tự chức bổ nhân sâm Một kết thí nghiệm sức sống chuột cho thấy chuột uống dịch nấm đông trùng hạ thảo chiết nước, chiết cồn đối chứng (được uống nước vô trùng) sống khỏe mạnh tuần thí nghiệm biểu bình thường hình thái, tập tính ăn, uống hoạt động khác lần thí nghiệm dù liều dùng cho chuột/ngày cao so với thể trọng chuột Điều cho thấy với liều uống hàng ngày tương đương 890mg nấm đông trùng hạ thảo Isaria tenuipes/kg thể trọng an toàn chuột bạch Thời gian bơi chuột uống dịch chiết nấm nước cồn dài so với đối chứng Chuột đối chứng có thời gian bơi dao động từ đến giờ, cịn cơng thức uống dịch chiết nấm thường Điều cho thấy nấm tăng cường khả vận động chuột 1.1.4 Nghiên cứu nuôi trồng thể giá thể nuôi cấy sinh khối hệ sợi Trong năm gần với phương pháp nuôi cấy hệ sợi nấm môi trường lỏng (Xu cs, 2003; 2004; 2006) phương pháp ni cấy nấm nhân tạo giá thể tằm - nhộng để sản xuất nấm qui mô lớn làm dược liệu thức ăn bổ dưỡng phát triển nước Nhật Bản, Trung Quốc Hàn Quốc [22]; Kikuchi cs, 2004 Nuôi cấy thu sinh khối hệ sợi tác giả tiến hành môi trường dinh dưỡng lỏng với thành phần sau: 40 g/lít đường glucose, 10 g/lít cao nấm men, 0.5 g/lít KH2PO4, 0.5 g/lít K2HPO4:3H2O, 0.5 g/lít MgSO4.7H2O Ở Hàn Quốc dạng bào tử vơ tính Isaria tenuipes ni cấy mơi trường có chứa nhộng tằm, kết cho thấy tỷ lệ số ng cao đạt 97,6% giống tằm thử nghiệm Trọng lượng tươi bào tử vơ tính Isaria tenuipes khác tùy theo mùa, dao động từ 1,44 ~ 0,94 g Đạt cao nuôi cấy vào mùa xuân Bào tử vơ tính I tenuipes sản xuất nhộng màu trắng màu trắng sữa, tương tự hình dạng màu sắc thể thu thập tự nhiên [20] Trong năm gần với phương pháp nuôi cấy hệ sợi nấm mơi trường lỏng phương pháp ni cấy nấm nhân tạo giá thể nhộng tằ m [15] Ngoài nấm nuôi cấy môi trường gạo và nhộng tằm [20] Thành phần môi trường nuôi cấy nấm đề tài để nhà khoa học nghiên cứu tìm mơi trường thích hợp phù hợp với mục đích ni cấy Thành phần lít mơi trường [9]: 50g glucose, 1.84g NH4NO3, 0.39g KH2PO4, 1.42g Na2HPO4.12H2O, 0.60g MgSO4.7H2O, 0.1mg KCl, 2mg MnSO4.H2O, 10mg CoCl2.6H2O, 2mg Na2MoO4·2H2O, 20mg ZnSO4.7H2O, 3mg of CuSO4·5H2O, 2mg of FeSO4.7H2O and 60mg of EDTA Trong thành phần KH2PO4 phosphate làm ảnh hưởng đến sinh khối nấm nhiên lại có khả kích thích làm tăng số lượng thể 1.2 Nghiên cứu nước 1.2.1 Nghiên cứu thành phần loài loài nấm ký sinh côn trùng nấm đông trùng hạ thảo Các lồi nấm ký sinh trùng Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae, nghiên cứu vấn đề khác điều tra thành phần loài, loài sâu bị ký sinh, phân lập ni cấy phịng thí nghiệm đặc biệt nhân sinh khối, tạo chế phẩm để phịng trừ số lồi sâu hại nông nghiệp lâm nghiệp Phân lập sử dụng nấm Beauveria để phòng trừ mọt hại nông sản [2] Nghiên cứu sản xuất với quy mô công nghiệp thử nghiệm diện rộng chế phẩm nấm ký sinh côn trùng Beauveria Metarhizium thể nhiều cơng trình nghiên cứu [7] Trong báo cáo tổng kết đề tài "Nghiên cứu xây dựng cơng trình ni trồng nấm đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris (L.:Fr.) có giá trị dược liệu thương mại cao" PGS.TS Phạm Quang Thu [6] cho thấy điều tra nhiều mẫu nấm Isaria tenuipes Loài nấm I tenuipes lần phát mô tả Việt Nam vào năm 2010 [4] Loài nấm phân bố rừng tự nhiên nhiệt đới rộng thường xanh độ cao từ 800 - 1000 m so với mực nước biển Hiêṇ đã phát hiêṇ đươ ̣c nhiề u mẫu nấ m Isaria tenuipes các Vườn Quốc gia Ba Vì - Hà Nội Vườn Quốc gia Tam Đảo Vĩnh Phúc, Vườn Quố c gia Tây Yên Tử - Quảng Ninh Nấm mọc đơn lẻ mọc thành cụm, chùm nhộng thuộc Cánh vẩy [5] 1.2.2 Nghiên cứu giá trị dược liệu Tác dụng đông trùng hạ thảo nhiều tác giả Việt Nam khẳng định Theo tài liệu tổng hợp y học cổ truyền Việt Nam đơng trùng hạ thảo có tác dụng bổ phế thận, ích khí, huyết trừ đờm Chủ trị: trị ho lâu ngày, yếu mệt, thổ huyết, nhiều mồ hôi, di tinh, đau lưng mỏi gối Thận biểu bất lực, xuất tinh đau lưng đầu gối: Dùng đông trùng hạ thảo với Sơn thù du, Sơn dược Thỏ ti tử, dùng độc vị đông trùng hạ thảo Ho hen mạn tính ho có đờm máu, phế hư: Dùng đông trùng hạ thảo với Sa sâm, A giao Xuyên bối mẫu Ra mồ hôi nhiều thể mệt, ốm: đông trùng hạ thảo nấu với thịt gà, vịt heo [29] Đỗ Tất Lợi (1977) [1] cho Đông trùng hạ thảo vị thuốc bổ, dùng để chữa trị thần kinh suy nhược, chữa ho, ho lao, bổ tinh khí, chữa đau lưng, bổ thận Liều dùng - 12 g với hình thức ngâm rượu Một số sản phẩm từ nấm Đông trùng hạ thảo I tenuipes [30]: - Nấm khô: Nấm tươi sau thu hoạch sấy 600C 24 bảo quản tùi nylon hàn kín - Rượu Đơng trùng hạ thảo: phát triển sản phẩm rượu từ nấm Đông trùng hạ thảo nhằm mục đích tăng cường thể lực Thành phần rượu bao gồm: Nấm khô ngâm rượu nếp với tỷ lệ 20 gr nấm khơ 1lít rượu Rượu có màu vàng nâu, mùi vị thơm, ngon - Viên nang Đông trùng hạ thảo: Bột nấm Đông trùng hạ thảo bổ sung thêm chất phụ gia trộn ướt máy trộn siêu tốc sấy tầng sơi 700C 20 phút Sau trộn khơ, đóng viên nang, viên 400mg Đóng lọ 50 viên 1.2.3 Nghiên cứu nuôi trồng thể giá thể nuôi cấy sinh khối hệ sợi Ở Việt Nam nghiên cứu ni trồng thể nấm đơng trùng hạ thảo Isaria tenuipes có Quy trình sản xuất đơng trùng hạ thảo tằm dâu tiến sỹ Nguyễn Mậu Tuấn [30] Trung tâm Nghiên cứu Thực nghiệm Nông Lâm nghiệp Lâm Đồng Bảo Lộc hoàn tất mở hướng đầy triển vọng cho Lâm Đồng việc sản xuất dược liệu quý diện rộng Đây người nước đưa qui trình hồn chỉnh sản xuất đơng trùng hạ thảo tằm dâu, loại côn trùng người dân nuôi từ lâu đời với qui trình sản xuất đại trà loại dược liệu quý đất Lâm Đồng Cho đến tiến sỹ Tuấn hồn thiện qui trình nuôi cấy đông trùng hạ thảo sản phẩm nhộng trùng thảo (Cordyceps militaris) nhộng tằm dâu đông trùng hạ thảo tằm dâu (Cordyceps takaomontana hay Isaria tenuipes (còn gọi Paecilomyces tenuipes)) tằm dâu Theo Tiến sỹ Nguyễn Xuân Thám [30], Phó Giám đốc Sở Khoa học Cơng nghệ Lâm Đồng, việc hồn tất qui trình sản xuất đơng trùng hạ thảo tằm dâu có ý nghĩa đặc biệt cho người làm nghiên cứu sinh học đất Lâm Đồng, mở hướng cho việc nghiên cứu sản xuất loại dược liệu địa phương phục vụ phát triển kinh tế xã hội Nhận xét: Từ phần tổng quan tài liệu nghiên cứu Đông trùng hạ thảo cho thấy: nấm Đông trùng hạ thảo lồi nấm có giá trị dược liệu q, chữa trị nhiều loài bệnh nan y ung thư, kháng khuẩn, chống oxy hóa bệnh yếu sinh lý 10 Nghiên cứu thành phần loài, giá trị dược liệu nuôi trồng thể tiến hành nghiên cứu với trình độ cao nhiều nước giới đạt kết tốt Tại Việt Nam, nghiên cứu thành phần loài nấm Đông trùng hạ thảo công bố vào năm 1996 2001 có lồi nấm thuộc chi Cordyceps Về thành phần hóa học giá trị dược liệu chưa nghiên cứu nhiều, từ nguồn tài liệu khác nhau, nhà khoa học khẳng định nấm Đông trùng hạ thảo dược liệu quý Từ sở lý luận trên, việc nghiên cứu hệ thống nấm Đông trùng hạ thảo Việt Nam cần thiết Việc phân lập khiết chủng nấm Việt Nam để lưu trữ nguồn gen tiến hành xác định hàm lượng để tuyển chọn chủng có tiềm dược liệu cao Đây sở ban đầu để tiếp tục nghiên cứu quy trình ni trồng nấm điều kiện Việt Nam Phụ biểu 18: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng tươi Type III Sum of Mean Source Squares df Square F Corrected 11.269a 15 751 581.566 Model Intercept 1072.924 1072.924 8.306E5 k 001 000 315 CT 2.222 2.222 1.720E3 pH 5.701 950 735.526 CT * pH 3.345 558 431.621 Error 034 26 001 Total 1084.226 42 Corrected 11.302 41 Total Sig .000 000 732 000 000 000 Phụ biểu 19: pH Duncana Sig N 6 6 6 Phân cấp trọng lượng tươi Subset 4.4600 4.7500 4.8850 5.0000 5.2600 5.4400 5.5850 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 20: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng khô Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 1.321a 15 088 Model Intercept 21.272 21.272 k 000 000 CT 960 960 pH 328 055 CT * pH 032 005 Error 008 26 000 Total 22.600 42 Corrected 1.328 41 Total F Sig 299.863 000 7.245E4 738 3.270E3 186.485 17.915 000 488 000 000 000 Phụ biểu 21: pH Duncan a Sig N 6 6 6 Phân cấp trọng lượng khô Subset 5850 6250 6717 7150 7200 8200 1.000 1.000 1.000 618 1.000 8450 1.000 IV Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng lên hình thành thể nấm I.tenuipes Phụ biểu 22: ANOVA Trọng lượng tươi Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df 3808.266 027 12 3808.293 17 Mean Square 761.653 002 F Sig 3.377E5 000 Phụ biểu 23: CT Duncan a Sig Phân cấp trọng lượng tươi Subset for alpha = 0.05 N 2167 3333 4600 3.4667 15.3367 40.3000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 24: ANOVA Trọng lượng khô Sum of Squares 26.397 000 26.397 Between Groups Within Groups Total df Mean Square F 5.279 1.584E5 12 000 17 Sig .000 Phụ biểu 25: CT Duncan a Sig N 3 3 3 Phân cấp trọng lượng khô Subset for alpha = 0.05 0300 0933 1700 4167 2.1767 1.000 1.000 1.000 1.000 3.1500 1.000 1.000 Phụ biểu 26: ANOVA Chiều dài Sum of Squares Between Groups Within Groups Total Mean Square df 3433.111 4.000 12 3437.111 17 F 2.060E 686.622 333 Sig .000 Phụ biểu 27: CT Duncan Sig a N 3 3 3 Phân cấp chiều dài Subset for alpha = 0.05 11.6667 15.6667 21.3333 21.6667 39.6667 1.000 1.000 493 50.6667 1.000 1.000 Phụ biểu 28: ANOVA Thời gian Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 201.833 34.667 236.500 df Mean Square 40.367 12 2.889 17 F 13.973 Sig .000 Phụ biểu 29: Duncan a CT Sig Phân cấp thời gian Subset for alpha = 0.05 N 3 32.3333 33.0000 33.0000 35.6667 39.3333 40.0000 40.6667 640 079 379 V Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng thể nấm Isaria tenuipes Phụ biểu 30: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: thời gian Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig Corrected 136.389a 19.484 22.774 000 Model Intercept 17236.056 17236.056 2.015E4 000 k 7.444 3.722 4.351 044 CT 6.722 6.722 7.857 019 t 115.111 57.556 67.273 000 CT * t 7.111 3.556 4.156 049 Error 8.556 10 856 Total 17381.000 18 Corrected 144.944 17 Total Phụ biểu 31: Phân cấp thời gian Duncan a t 15 20 25 Sig N 6 27.5000 Subset 31.8333 1.000 1.000 33.5000 1.000 Phụ biểu 32: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Số lượng Type III Sum of Source Squares df Mean Square Corrected 3286.722a 469.532 Model Intercept 16989.389 16989.389 k 444 222 CT 1740.500 1740.500 t 1545.444 772.722 CT * t 333 167 Error 889 10 089 Total 20277.000 18 Corrected Total 3287.611 17 F Sig 5.282E3 000 1.911E5 2.500 1.958E4 8.693E3 1.875 000 132 000 000 203 Phụ biểu 33: Phân cấp số lượng Duncan a t 25 20 15 Sig N 6 20.3333 Subset 29.0000 1.000 1.000 42.8333 1.000 Phụ biểu 34: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Chiều dài Type III Sum of Mean Source Squares df Square Corrected 1144.422a 163.489 Model Intercept 34304.536 34304.536 k 551 276 CT 57.602 57.602 t 136.734 68.367 CT * t 949.534 474.767 Error 1.862 10 186 Total 35450.820 18 Corrected 1146.284 17 Total F Sig 877.924 000 1.842E5 1.480 309.320 367.127 2.549E3 000 274 000 000 000 Phụ biểu 35: Phân cấp chiều dài Duncana t 20 25 15 Sig N 6 40.6667 Subset 42.9833 1.000 1.000 47.3167 1.000 Phụ biểu 36: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng tươi Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 1416.811a 202.402 Model Intercept 9421.069 9421.069 k 004 002 CT 742.666 742.666 t 673.254 336.627 CT * t 887 443 Error 019 10 002 Total 10837.899 18 Corrected 1416.830 17 Total F Sig 1.044E5 000 4.859E6 983 3.830E5 1.736E5 228.713 000 408 000 000 000 Phụ biểu 37: Phân cấp trọng lượng tươi Duncana t 25 20 15 Sig N 6 16.7883 Subset 20.6033 1.000 1.000 31.2417 1.000 Phụ biểu 38: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng khô Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 14.046a 2.007 Model Intercept 98.842 98.842 k 001 000 CT 6.219 6.219 t 7.073 3.537 CT * t 753 376 Error 002 10 000 Total 112.890 18 Corrected 14.048 17 Total F Sig 8.599E3 000 4.236E5 2.000 2.665E4 1.516E4 1.613E3 000 186 000 000 000 Phụ biểu 39: Phân cấp trọng lượng khô Duncana t 25 20 15 Sig N 6 1.8367 Subset 1.9667 1.000 1.000 3.2267 1.000 V Ảnh hưởng pH tới sinh trưởng thể nấm Isaria tenuipes Phụ biểu 40: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Thời gian Type III Sum of Source Squares df Mean Square F Sig Corrected 250.571a 15 16.705 28.151 000 Model Intercept 37800.000 37800.000 6.370E4 000 k 571 286 481 623 CT 24.381 24.381 41.086 000 pH 192.667 32.111 54.113 000 CT * pH 32.952 5.492 9.255 000 Error 15.429 26 593 Total 38066.000 42 Corrected 266.000 41 Total Phụ biểu 41: tg Subset Duncan a pH Sig N 6 6 6 27.8333 27.8333 28.3333 28.3333 28.8333 31.6667 32.1667 299 271 271 33.3333 1.000 Phụ biểu 42: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Số lượng Type III Sum of Mean Source Squares df Square Corrected 5369.595a 15 357.973 Model Intercept 39070.500 39070.500 k 429 214 CT 3790.500 3790.500 pH 1244.000 207.333 CT * pH 334.667 55.778 Error 8.905 26 342 Total 44449.000 42 Corrected Total 5378.500 41 F Sig 1.045E3 000 1.141E5 626 1.107E4 605.369 162.859 000 543 000 000 000 Phụ biểu 43: Phân cấp số lượng Subset pH N Duncan 20.5000 27.3333 28.6667 6 30.3333 33.1667 34.6667 38.8333 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 a Phụ biểu 44: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Chiều dài Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 894.860a 15 59.657 Model Intercept 96106.734 96106.734 k 010 005 CT 298.134 298.134 pH 179.198 29.866 CT * pH 417.518 69.586 Error 097 26 004 Total 97001.690 42 Corrected 894.956 41 Total F Sig 1.605E4 000 2.585E7 1.345 8.019E4 8.033E3 1.872E4 000 278 000 000 000 Phụ biểu 45: pH Duncan a Sig N 6 6 6 Phân cấp chiều dài Subset 45.1000 45.2000 46.3667 48.7000 49.1833 1.000 1.000 1.000 1.000 50.1167 50.1833 1.000 069 Phụ biểu 46: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng tươi Type III Sum of Mean Source Squares df Square Corrected 5626.689a 15 375.113 Model Intercept 27159.749 27159.749 k 001 000 CT 3231.394 3231.394 pH 1963.618 327.270 CT * pH 431.676 71.946 Error 007 26 000 Total 32786.445 42 Corrected 5626.696 41 Total F Sig 1.378E6 000 9.979E7 1.085 1.187E7 1.202E6 2.644E5 000 353 000 000 000 Phụ biểu 47: Phân cấp trọng lượng tươi Subset pH N Duncana 16.0850 18.2433 21.8550 27.4167 6 27.9500 28.5600 37.8967 Sig 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 Phụ biểu 48: Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable: Trọng lượng khô Mean Source Type III Sum of Squares df Square Corrected 87.824a 15 5.855 Model Intercept 480.095 480.095 k 9.048E-5 4.524E-5 CT 31.929 31.929 pH 46.977 7.829 CT * pH 8.918 1.486 Error 001 26 2.473E-5 Total 567.920 42 Corrected 87.824 41 Total F Sig 2.368E5 000 1.942E7 1.830 1.291E6 3.167E5 6.011E4 000 181 000 000 000 Phụ biểu 49: pH Duncan Sig a N 6 6 6 Phân cấp trọng lượng khô Subset 1.3067 2.6467 3.0967 3.7017 4.0367 4.1800 4.6983 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000