Luận án tiến sĩ nghiên cứu một số chỉ thị trên nhiễm sắc thể y để ứng dụng trong giám định pháp y

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - HÀ HỮU HẢO NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỈ THỊ TRÊN NHIỄM SẮC THỂ Y ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG GIÁM ĐỊNH PHÁP Y LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC HÀ NỘI – 2023 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …… ….***………… NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỈ THỊ TRÊN NHIỄM SẮC THỂ Y ĐỂ ỨNG DỤNG TRONG GIÁM ĐỊNH PHÁP Y Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 42 02 01 LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hoàng Hà PGS.TS Lê Văn Sơn Hà Nội – 2023 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận án cơng trình nghiên cứu số kết nghiên cứu, cộng tác với nhà khoa học khác; Các số liệu kết trình bày luận án trung thực, phần công bố tạp chí khoa học chuyên ngành hội nghị nước quốc tế với đồng ý cho phép đồng tác giả; kết lại luận án chưa tác giả công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2023 Nghiên cứu sinh Hà Hữu Hảo LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Chu Hồng Hà - Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam hướng dẫn, bảo, giúp đỡ tận tình suốt trình thực luận án Thầy không truyền thụ cho tơi nhiều kiến thức chun mơn mà cịn giúp tơi bồi đắp lịng say mê, nghiêm túc, tính cẩn thận nghiên cứu khoa học Đó tảng cho trình thực luận án hành trang giúp tự tin vững bước đường khoa học sau Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Lê Văn Sơn - Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Người thầy sát dìu dắt, truyền lại cho tơi phương pháp nghiên cứu phân tích trình tự hệ gen ty thể niềm say mê nghiên cứu Hệ gen học Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ Ban phụ trách đào tạo Học viện Khoa học Công nghệ Viện Công nghệ sinh tận tình hướng dẫn tơi hồn thành thủ tục suốt trình học tập, làm nghiên cứu sinh học viện Tôi xin chân thành cảm ơn TS.BS Nguyễn Đức Nhự, Viện trưởng Viện Pháp y quốc gia nhiệt tình giúp đỡ, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực luận án Trong suốt trình thực Đề tài nghiên cứu, tơi nhận giúp đỡ tận tình chun mơn nhà khoa học, cán nghiên cứu công tác Khoa Y sinh học – Viện Pháp y quốc gia Họ bên cạnh giúp đỡ cổ vũ suốt thời gian qua Với tất lịng biết ơn, tơi xin dành cho bố mẹ, gia đình bạn bè ln tin tưởng, thơng cảm, động viên, tạo điều kiện chia sẻ khó khăn thời gian qua, giúptơi hồn thành tốt luận án Nghiên cứu sinh Hà Hữu Hảo MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Phân tích ADN giám định pháp y 1.2 Các loại thị phân tử (marker) 1.3 Tổng quan thị STR 1.3.1 Đặc điểm gen 1.3.2 Phân loại STR 1.4 STR nhiễm sắc thể giới tính Y 11 1.5 Các hướng ứng dụng thị STR nhiễm sắc thể giới tính Y 12 1.5.1 Y-STR nghiên cứu cấu trúc di truyền quần thể (genetic structure) 12 1.5.2 Ứng dụng Y-STR xác định huyết thống 14 1.5.3 Ứng dụng Y-STR lĩnh vực khoa học hình 15 1.6 Phương pháp phân tích thị Y-STR 19 1.6.1 Phân tích dựa phương pháp điện di mao quản 19 1.6.2 Phân tích sử dụng kit Y-STR thương mại hóa 25 1.6.3 Phân tích sử dụng chiến lược mini STR 28 1.7 Tầm quan trọng việc tính tốn tần suất alen thị STR 30 1.8 Tình hình nghiên cứu thị Y-STR 31 1.8.1 Tình hình nghiên cứu giới 31 1.8.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 35 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Vật liệu nghiên cứu 37 2.1.1 Mẫu nghiên cứu 37 2.1.2 Hoá chất nghiên cứu 37 2.2 Thiết bị sử dụng 39 Quantus™ Fluorometer 39 2.3 Phương pháp nghiên cứu 39 2.3.1 Phương pháp tách chiết ADN 39 2.3.2 Phương pháp định lượng ADN 42 2.3.3 Phương pháp điện di gel 42 Phương pháp điện di sử dụng để xác định có mặt ADN đồng thời phân biệt khác kích thước đoạn ADN quan tâm 42 2.3.4 Phương pháp PCR 43 2.3.5 Phương pháp điện di mao quản 45 2.3.6 Phương pháp giải trình tự gen 46 2.3.7 Phân tích xử lý số liệu 46 2.4 Đạo đức nghiên cứu 47 CHƯƠNG III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 48 3.1 Kết tách chiết ADN tổng số từ mẫu nghiên cứu 49 3.1.1 Mẫu tách chiết theo phương pháp Chelex 49 3.1.2 Mẫu tách chiết kit thương mại 50 3.2 Kết khảo sát 29 thị Y-STR từ kit PPY23 Yfiler Plus 51 3.2.1 Xây dựng hồ sơ Y-STR 51 3.2.2 Bảng phân bố tần suất alen thuộc 29 thị Y-STR 53 3.2.3 Đánh giá đặc điểm alen thuộc 29 thị Y-STR 70 3.2.4 Độ đa hình 29 thị Y-STR 73 3.2.5 Độ đa dạng haplotype (HD) khả phân biệt 76 3.3 Kết nghiên cứu số thị mini Y-STR 77 3.3.1 Lựa chọn thị mini Y-STR 77 3.3.2 Tối ưu hoá phản ứng PCR 78 3.3.3 Giải trình tự xác định cấu trúc lặp mini Y-STR 81 3.3.4 Tỷ lệ khuếch đại thành công mini Y-STR 83 3.4 Hiệu thị Y-STR xét nghiệm ADN 86 3.4.1 Hiệu phân tích mẫu bị phân huỷ 86 3.4.3 Hiệu sử dụng Y-STR phân tích mẫu lẫn (mixture sample) 95 3.4.1 Hiệu việc tăng khả phân biệt cá thể 98 3.4.4 Ứng dụng thị Y-STR để so sánh khoảng cách di truyền quần thể 102 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 107 KẾT LUẬN 107 KIẾN NGHỊ 108 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TIẾN SĨ 109 TÀI LIỆU THAM KHẢO 110 PHẦN PHỤ LỤC 118 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên đầy đủ ADN Acid deoxyribonucleic AMOVA Analysis of molecular variance (phân tích phương sai phân tử) AS-STR Autsomal STR (STR nhiễm sắc thể thường) Bp Base pair (Cặp base) CE Capillary electrophoresis (Điện di mao quản) CRI Combined Paternity Index (chỉ số có quan hệ huyết thống kết hợp) DC Discriminating capacity (chỉ số khả phân biệt) DI Degration index (Chỉ số phân huỷ) ADN Deoxyribonucleic acid HD Haplotype diversity (Độ đa dạng Haplotype) HUGO Human Genome Organisation (Tổ chức gen người) GD Gene diversity (độ đa dạng gen) ISFN International Society for Forensic Genetic (Hiệp hội Di truyền Pháp y LR Likehood ratio (tỷ số tương đồng) MDS plot Multidimensional scaling plot (Đồ thị phân bố không gian đa chiều) MHL Minimal haplotype loci (Bộ haplotype tối thiểu) Mulitplex Mulitplex Polymerase chain reaction (Phản ứng PCR đa mồi) NIST National Institute of Standards and Technology (Viện tiêu chuẩn NGS Next generation sequencing (giải trình tự gen hệ mới) NST Nhiễm sắc thể OL Off ladder (Lệch thang) PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis (Điện di gel polyacrylamide) PCR Polymerase chain reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PD Power of discrimination (Khả phân biệt) PP Y23 PowerPlex® Y23 System RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism (đa hình chiều dài đoạn RM Y-STR Rapidly mutating Y – STR (Y-STR có tốc độ đột biến nhanh) RFU Relative fluorescence units (đơn vị đo tín hiệu huỳnh quang tương đối) SNP Single nucleotide polymorphism (đơn hình nucleotit) SSR Simple sequence repeats (Trình tự lặp lại đơn giản) STR Short tandem repeat (Trình tự lặp lại ngắn) SWGDAM Scientific Working Group on ADN Analysis Methods (Hiệp hội VNTRs Variable Number of Tandem Repeats (tiểu vệ tinh) X-STR STR nhiễm sắc thể giới tính X YHRD Y-STR Haplotype Reference Database (Cơ sở liệu tham khảo Y-STR Y Chromosome - Short tandem repeat (STR nhiễm sắc thể giới YPlus YfilerTM Plus PCR Amplification Kit (bộ kit khuếch đại YfilerTM Plus Yfiler AmpFLSTR™ Yfiler™ PCR Amplification Kit DANH MỤC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1 Cấu trúc lặp điển hình STR Hình Mơ hình di truyền marker theo kiểu tái tổ hợp (trên NST thường), theo dòng cha (trên NST Y) theo dòng mẹ (trên ty thể) 12 Hình Mơ hình biểu thị phân hố nhóm Y haplotype khác bắt nguồn từ tổ tiên chung [17] 13 Hình Cấu trúc MDS plot phân loại mô tả mối quan hệ quần thểdựa liệu Y – halotype [18] 14 Hình So sánh việc lập hồ sơ ADN dựa STR NST thường NST Y 16 Hình Ví dụ hồ sơ Y-STR từ cá thể với locus gồm alen (ngoại trừ locus DYS385 gồm tổ hợp locus DYS385a b) 18 Hình Minh họa trình khuếch đại lúc locus sử dụng cặp mồi khác phản ứng multiplex PCR 21 Hình Các bước hoạt động hệ thống điện di mao quản [35] 23 Hình Kết phân tích Y-STR từ mẫu nam giới với locus DYS389I, DYS439, DYS437, DYS389II bị đột biến lặp đoạn với alen locus Y-STR đơn vị lặp [35] 25 Hình 10 Minh họa vị trí khuếch đại locus STR cặp mồi PCR kích thước lớn cặp mồi mini STR [35] 30 Hình 1.11 Sự gia tăng số lượng hồ sơ Y-STR YHRD.org từ năm 1999 đến 2018 (số năm biểu thị từ đến 59 [56] 33 Hình 2.1 Vị trí 29 locus Y-STR đồ NST Y 44 Hình 2.2 Sơ đồ thí nghiệm nghiên cứu 48 Hình Ảnh điện di ADN tổng số tách chiết Chelex® 100 gel agarose 0.8% 49 Hình Dạng đỉnh lặp xuất locus DYS481 phân tích với PPY23 (mẫu phân tích ký hiệu ID101) Dạng đỉnh gai xuất locus DYS533 phân tích với Yfiler Plus (mẫu phân tích ký hiệu ID56) 52 127 Ký hiệu mẫu M1H1KA M3H1KA M5H1KA M6H1KA M8H1KA M9H1KA M10H1KA M11H1KA M13H1KA M18H2KA M19H2KA M20H2KA M21H2KA M22H2KA M29H2KA ADN đích Nồng độ ADN T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal 0.0572 0.0787 0.0721 0.0542 0.1028 0.0974 0.0718 0.0921 0.0886 0.0695 0.1279 0.0559 0.0539 0.0740 0.0576 0.0504 0.0511 0.0579 0.0666 0.1007 0.0975 0.0647 0.0909 0.0789 0.0124 0.0202 0.0196 0.0495 0.0559 0.0468 0.0572 0.0787 0.0721 0.0635 0.0808 0.0821 0.0671 0.0798 0.0824 0.0542 0.1028 0.0975 0.0679 Chỉ số phân hủy Ký hiệu mẫu 1.376 AS_51B5 1.897 AS_111B5 1.282 AS_151B5 1.839 AS_161B5 1.373 AS_221B5 1.014 AS_72B5 1.513 AS_82B5 1.406 AS_172B5 1.633 AS_233B5 1.129 AS_263B5 1.376 AS_303B5 1.272 AS_343B5 1.190 AS_373B5 1.897 AS_383B5 1.396 AS_403B5 ADN đích Nồng độ ADN T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal T.Small Autosomal T.Y T.Large Autosomal 0.047852 0.07685 0.0721 0.0635 0.1223 0.0675 0.0544 0.0947 0.0575 0.0862 0.1335 0.0559 0.0537 0.0633 0.0576 0.0635 0.0856 0.0579 0.0688 0.1123 0.0975 0.0665 0.1007 0.0975 0.03546 0.056321 0.0196 0.0465 0.0565 0.0468 0.0634 0.0734 0.0721 0.0962 0.1533 0.0821 0.0863 0.0963 0.0824 0.0334 0.0532 0.0975 0.0862 Chỉ số phân hủy 1.606 1.926 1.740 1.549 1.181 1.348 1.631 1.514 1.588 1.214 1.157 1.593 1.116 1.593 1.117 128 T.Small Autosomal T.Y 0.0947 0.0575 T.Small Autosomal T.Y 0.0963 0.0575 114 PHỤ LỤC 6: Hồ sơ Y-STR 200 mẫu sử dụng kit PowerPlex® Y23 System STT DYS 576 DYS 389 I DYS 448 DYS 389 II DYS 19 DYS 391 DYS 481 DYS 549 DYS 533 DYS 438 DYS 437 DYS 570 DYS 635 DYS 390 DYS 439 DYS 392 DYS 643 DYS 393 DYS 458 DYS 385a DYS 385b DYS 456 YGA TAH4 19 12 19.2 28 16 11 24 12 11 10 14 19 22 26 12 13 10 12 17 12 12 14 13 19 11 18 27 15 10 23 12 10 10 14 16 22 25 12 13 12 14 18 14 18 14 10 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 18 23 25 12 13 11 12 18 12 18 13 12 16 13 20 29 15 11 25 12 12 10 14 16 21 23 10 11 14 16 11 18 15 12 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 23 24 12 13 11 12 18 12 20 13 12 18 12 19 29 15 10 25 13 12 10 14 17 23 26 12 13 11 12 18 12 20 13 12 18 12 20 28 16 10 24 12 12 10 15 20 22 23 11 13 11 12 17 15 18 15 12 20 13 18 29 16 11 23 12 10 10 14 17 23 24 13 13 12 14 18 13 18 15 11 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 23 25 12 13 11 12 20 12 20 13 12 10 15 14 21 30 15 10 25 13 12 10 14 16 21 23 12 11 15 15 11 19 14 11 11 18 13 18.2 28 15 10 24 13 10 11 14 19 21 25 14 13 11 14 17 13 18 15 11 12 17 14 21 31 16 10 23 11 11 10 15 18 21 24 11 13 11 12 18 16 21 13 13 13 18 14 18 30 16 11 23 11 10 10 14 15 22 24 12 13 12 14 18 14 19 15 11 14 16 13 20 29 15 11 24 12 12 10 14 17 21 23 10 11 14 15 11 18 15 12 15 19 12 20 28 14 10 24 12 11 11 15 16 20 24 11 14 12 12 19 13 17 15 11 16 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 25 25 12 13 11 12 18 12 20 13 12 17 18 13 21 28 16 10 26 12 11 10 15 19 23 26 12 13 10 12 17 13 19 15 12 18 18 14 21 29 16 10 22 11 12 10 14 18 20 24 13 11 15 17 11 18 15 11 19 19 14 22 29 15 10 24 12 12 10 14 18 21 24 12 11 15 17 11 18 15 11 20 18 12 20 28 14 10 23 12 11 11 14 18 20 24 12 14 11 12 17 14 17 15 12 21 18 13 18 29 16 11 23 11 10 10 14 16 21 24 12 13 12 14 18 13 19 15 11 22 17 11 18 28 16 11 23 12 10 10 14 15 21 25 12 13 12 14 17 13 18 14 10 23 17 12 20 28 14 10 23 13 11 11 14 19 20 23 12 14 11 12 17 13 19 15 12 24 19 14 20 30 15 10 23 13 11 11 15 17 20 25 14 14 12 12 18 13 17 15 12 25 18 12 19 28 16 10 24 13 11 10 14 19 22 26 13 13 10 12 22 14 19 16 11 26 20 13 18 29 16 11 24 11 10 10 14 16 21 24 12 13 12 15 18 13 18 15 11 114 115 27 17 13 18 30 17 10 23 12 10 10 14 15 22 23 12 13 12 14 17 14 18 16 11 28 19 14 19 30 13 24 12 11 12 14 19 22 24 11 14 10 14 17 16 20 17 10 29 21 12 20 28 15 11 25 12 11 10 14 19 21 23 11 13 11 12 16 12 16 14 11 30 17 13 18 29 17 11 22 12 10 10 14 16 22 24 12 13 11 14 17 13 19 15 11 31 18 13 20 29 14 10 23 12 11 11 14 18 20 24 12 14 11 12 17 12 13 16 12 32 19 13 18 29 15 10 23 12 10 10 14 16 22 25 12 13 12 15 15 16 21 15 11 33 18 12 20 28 15 10 24 13 12 10 15 17 20 23 12 13 12 13 17 12 12 15 12 34 18 14 18 30 15 10 23 12 11 10 14 16 21 24 11 13 13 14 15 15 20 15 11 35 17 13 18 29 15 11 21 12 10 10 14 16 22 25 13 13 13 14 15 14 21 15 11 36 17 13 21 28 16 10 26 11 11 10 15 19 22 25 11 13 10 12 17 13 18 15 12 37 18 13 18 29 16 10 24 12 10 10 14 16 22 24 13 13 12 14 17 13 18 15 11 38 20 14 18 30 15 10 23 12 12 10 14 16 21 25 12 13 13 14 15 15 20 16 11 39 18 12 19 30 14 10 25 12 12 11 15 17 19 24 11 11 10 13 17 15 16 14 12 40 17 14 22 31 16 10 24 12 12 10 14 18 21 23 11 11 13 16 11 17 15 11 41 18 12 20 27 14 10 23 12 11 11 15 17 20 25 13 14 12 12 18 13 17 15 12 42 18 13 21 28 16 10 25 11 11 10 15 19 23 25 12 13 10 12 18 13 18 15 12 43 18 12 20 28 15 10 24 13 12 10 15 17 21 23 13 13 12 13 17 13 19 16 12 44 19 13 18 29 17 11 22 12 10 10 14 16 23 24 12 13 12 13 17 13 19 15 11 45 18 14 18 31 15 10 23 13 10 10 14 18 23 24 12 13 11 14 15 12 17 15 12 46 20 11 18 27 16 11 23 12 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 13 18 14 10 47 17 11 20 27 14 10 26 13 11 10 14 19 23 24 13 13 11 12 19 13 19 15 12 48 20 12 20 28 14 10 24 13 11 11 15 17 20 25 13 14 13 12 19 13 17 16 12 49 19 14 19 32 15 10 25 12 12 10 15 16 20 26 11 12 12 12 18 12 16 15 12 50 17 13 18 29 17 11 22 12 10 10 14 16 23 24 11 13 12 13 18 13 19 15 11 51 20 13 18 29 16 11 23 11 10 10 14 16 20 24 12 13 12 14 16 13 14 15 11 52 18 13 18 29 16 10 23 13 10 10 14 15 22 24 12 13 12 13 18 13 20 15 11 53 18 11 18 27 15 10 23 12 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 13 18 14 10 54 20 14 18 30 15 10 23 12 11 10 14 16 21 25 11 13 13 15 16 15 19 16 11 55 18 11 18 28 16 11 23 13 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 13 17 14 10 56 16 12 20 28 15 11 24 12 12 10 14 16 21 23 10 11 14 15 11 18 15 12 115 116 57 15 12 16 28 15 10 27 13 11 10 16 19 22 23 11 14 11 13 18 14 15 18 12 58 18 12 20 28 15 11 23 15 11 11 14 18 20 24 12 14 12 12 19 12 17 15 11 59 19 12 17 29 16 10 24 11 10 10 14 16 22 25 12 13 12 14 19 14 18 15 10 60 17 14 18 30 16 11 22 12 10 10 14 16 22 23 12 13 12 14 18 13 18 15 11 61 19 13 18 29 16 10 24 12 10 10 14 16 22 23 12 13 12 13 20 13 17 15 11 62 17 14 19 30 15 10 24 13 12 14 17 18 22 13 11 12 18 16 20 15 12 63 16 14 19 29 14 10 25 12 12 10 14 18 23 23 11 14 10 13 15 11 11 17 12 64 16 11 18 29 16 11 23 12 10 10 14 16 23 25 12 13 12 13 18 13 18 14 10 65 20 14 19 30 13 24 13 12 12 14 19 22 24 11 14 10 14 16 17 20 17 10 66 20 13 21 28 16 10 26 11 11 10 15 20 23 25 12 13 10 12 18 13 19 15 12 67 18 11 18 27 16 11 22 12 10 10 14 16 21 24 12 13 12 14 18 13 18 14 10 68 18 13 18 28 15 10 23 12 10 10 14 16 21 25 12 13 12 13 18 17 20 16 11 69 18 13 21 30 15 10 28 12 12 10 14 16 20 23 11 11 14 13 11 20 15 11 70 18 14 21 31 15 11 23 12 11 10 15 20 21 24 11 13 11 12 19 14 21 14 12 71 20 13 18 29 16 11 23 12 10 10 14 16 23 24 12 13 12 14 19 13 18 15 11 72 18 13 18.2 28 15 10 24 14 10 11 14 19 21 25 13 13 11 14 16 13 18 15 11 73 17 13 21 28 16 10 26 11 11 10 15 20 23 25 12 13 10 12 16 13 19 15 12 74 18 13 18 29 15 10 25 13 11 11 14 17 23 23 13 14 12 14 18 12 17 14 12 75 17 13 21 28 16 10 26 11 11 10 15 19 22 25 12 13 10 12 19 13 18 15 12 76 19 13 17 31 16 11 23 11 10 10 14 16 22 24 12 13 12 14 17 12 19 15 11 77 18 13 20 29 15 11 24 12 12 10 13 16 21 23 10 11 14 16 12 18 15 12 78 21 12 19 28 17 10 24 13 11 10 14 17 21 23 11 13 10 12 18 12 19 14 12 79 18 13 18 30 15 10 23 11 10 10 14 17 21 24 12 13 12 14 18 13 19 15 12 80 16 13 18 29 15 11 21 12 10 10 14 17 21 25 12 13 13 14 16 15 18 15 12 81 18 12 19 28 15 10 25 13 11 10 14 17 23 25 12 13 11 12 18 12 21 13 12 82 17 15 18 32 16 11 23 11 10 10 14 16 23 24 12 13 12 14 19 12 18 15 11 83 19 12 20 27 16 10 24 11 12 10 15 20 21 23 11 13 12 12 17 15 18 15 12 84 18 12 20 28 16 10 24 12 12 10 15 22 24 23 12 13 11 12 17 15 19 14 12 85 18 14 19 29 17 10 23 12 11 10 14 17 23 24 12 13 10 12 19 12 19 14 13 86 18 13 18 29 16 11 23 11 10 10 14 15 21 24 12 13 12 14 19 13 19 15 11 116 117 87 18 14 19 30 14 12 22 12 11 11 14 18 22 23 12 14 13 15 12 12 16 13 88 17 11 19 28 16 11 24 12 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 12 18 14 10 89 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 23 26 12 13 11 12 18 12 21 13 12 90 19 13 21 28 16 10 26 11 11 10 15 19 23 25 12 13 10 12 17 14 18 15 12 91 17 12 18 29 15 11 25 12 11 10 14 18 19 23 12 13 11 14 15 13 14 16 12 92 20 12 19 29 15 10 26 13 11 10 14 18 23 25 12 13 11 12 18 12 19 13 12 93 18 14 18 30 15 11 21 12 10 10 14 18 22 24 12 13 10 14 17 13 18 14 10 94 18 12 18 28 15 11 27 12 11 10 15 21 20 22 13 14 11 13 14 13 13 16 11 95 18 11 18 28 16 11 23 13 10 10 14 17 21 25 11 14 12 14 19 13 18 14 10 96 20 14 18 31 15 11 23 13 10 11 14 16 21 24 11 13 11 14 16 13 18 15 10 97 18 13 21 28 16 10 27 12 11 10 15 19 23 25 12 13 10 12 18 13 20 15 12 98 19 14 18 31 15 10 23 12 10 11 14 16 20 24 11 13 12 14 15 14 19 15 10 99 18 12 19 30 17 10 24 14 11 10 15 18 21 24 11 13 10 12 19 13 19 14 12 100 19 13 21 28 16 10 26 12 11 10 15 19 23 24 12 13 10 12 18 13 19 15 12 101 17 12 20 27 17 10 22 12 11 10 15 20 24 24 11 13 10 12 19 13 21 15 12 102 18 13 18 29 16 10 23 11 10 10 14 16 21 24 12 13 12 14 18 13 20 15 11 103 19 14 18 31 15 11 24 12 10 10 14 15 20 25 12 13 12 14 15 15 21 15 11 104 16 13 18 29 14 10 26 12 12 10 14 19 19 23 11 14 11 13 16 11 14 15 12 105 18 12 20 28 13 10 23 13 11 11 15 17 20 26 13 14 12 12 19 13 16 15 12 106 18 12 20 28 16 10 24 12 13 10 15 20 21 23 12 14 11 12 17 15 18 15 12 107 19 12 16 30 15 11 25 12 11 10 14 17 19 23 12 14 11 13 16 13 13 17 12 108 19 13 18 30 16 11 23 11 10 10 14 16 21 24 12 13 12 14 19 13 19 15 11 109 20 13 19 30 15 11 24 11 11 11 14 18 24 25 11 11 14 19 11 13 16 12 110 17 13 18 28 16 11 23 11 10 10 14 16 24 24 11 13 13 14 17 13 17 15 11 111 18 11 18 28 16 11 23 13 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 13 18 14 10 112 18 13 18 29 15 11 24 12 10 10 14 16 22 24 13 13 12 14 17 13 19 15 11 113 19 12 20 28 14 10 23 13 11 11 15 18 20 25 11 15 11 12 19 13 19 16 12 114 17 12 20 28 14 10 23 15 11 11 15 17 20 23 12 14 11 12 18 15 19 15 12 115 19 12 21 27 14 11 24 12 11 11 15 17 20 24 11 14 12 12 16 13 19 15 12 116 18 13 21 28 16 10 26 11 11 10 14 23 23 25 12 13 10 12 17 13 18 15 12 117 118 117 17 12 18 30 15 10 24 12 12 10 14 19 24 23 11 14 11 13 15 12 14 16 12 118 16 14 19 30 14 10 24 12 11 10 14 19 19 23 12 14 11 13 16 13 14 15 12 119 19 14 19 29 17 10 24 12 11 10 14 18 23 24 12 13 10 12 19 12 19 14 13 120 18 13 19 30 16 11 23 11 10 10 14 16 21 24 13 13 12 14 19 13 19 15 11 121 20 13 20 29 14 10 22 12 11 11 15 19 20 24 12 14 10 12 19 13 17 15 12 122 16 11 18 28 15 10 24 12 12 10 14 21 21 23 12 14 11 13 15 13 13 16 12 123 18 11 18 28 15 11 23 12 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 13 18 14 10 124 20 13 18 28 15 11 23 12 10 10 14 16 21 24 12 13 13 14 16 15 21 15 11 125 16 13 20 29 16 11 24 12 12 10 14 16 21 23 10 11 14 16 11 18 15 12 126 19 13 19 29 15 10 22 12 11 10 15 16 19 25 13 13 11 12 19 13 13 15 12 127 20 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 22 25 12 13 11 12 18 12 20 13 12 128 19 14 21 29 16 10 26 11 11 10 15 20 23 25 12 13 10 12 18 13 19 15 12 129 18 11 18 28 16 10 24 12 10 10 14 16 22 25 12 13 12 14 18 13 18 14 10 130 19 12 18 29 15 11 23 12 12 10 14 16 25 25 13 13 10 12 18 14 21 18 11 131 15 13 18 28 14 10 25 12 12 10 15 22 21 22 12 14 11 13 14 13 13 15 12 132 21 12 20 28 14 10 22 13 11 10 15 17 20 23 13 12 11 12 20 11 15 16 13 133 18 12 21 29 16 10 23 11 11 10 15 19 21 24 12 13 11 12 16 13 18 15 12 134 19 13 18 29 16 11 23 12 10 10 14 17 22 24 13 13 12 14 18 13 18 15 11 135 18 13 20 30 17 10 25 12 11 10 14 17 21 23 12 14 10 12 17 12 12.3 15 11 136 19 13 18 29 15 10 23 12 10 10 14 16 21 25 11 13 12 15 15 16 21 16 11 137 20 12 19 29 13 10 22 13 13 10 15 19 22 25 12 12 13 17 12 12 14 12 138 20 13 19 29 15 10 22 12 11 10 15 16 19 24 13 13 11 12 18 12 12 15 11 139 18 14 19 29 17 10 24 12 11 10 14 18 24 24 12 13 10 12 18 13 20 14 13 140 18 14 20 30 16 10 27 12 11 15 20 21 24 12 14 11 12 17 13 20 16 12 141 16 14 18 31 16 12 23 11 10 10 14 16 25 24 12 13 12 14 18 12 18 15 11 142 17 14 18 29 15 10 23 12 11 10 14 16 21 24 11 13 13 14 15 15 19 16 11 143 20 13 18 30 16 11 23 12 10 10 14 17 22 24 12 12 12 13 18 13 19 14 11 144 17 12 19 30 14 10 24 12 12 11 14 18 19 24 11 11 10 13 16 14 16 14 11 145 18 11 18 28 16 10 24 12 10 10 14 16 21 25 13 13 12 14 18 12 18 14 10 146 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 22 25 11 13 11 12 18 12 19 13 12 118 119 147 16 12 18 28 16 10 24 12 11 10 14 19 20 23 11 14 11 13 17 13 13 16 12 148 17 14 19 29 17 10 24 13 11 10 14 17 23 24 11 13 10 12 18 12 18 14 12 149 19 14 19 30 13 24 12 12 12 14 19 22 24 11 14 10 14 16 16 20 16 10 150 17 12 19 28 17 10 24 12 11 10 14 20 22 26 13 13 10 12 22 14 19 14 11 151 19 13 18 30 16 11 23 11 10 14 16 21 24 11 13 12 14 18 13 20 15 11 152 18 12 21 28 16 10 23 12 11 10 15 20 22 23 13 13 13 12 17 13 22 16 12 153 15 13 20 29 15 10 24 12 13 10 14 17 21 23 10 11 14 16 11 11 15 12 154 15 13 18 29 14 10 25 12 11 10 15 21 21 22 12 14 11 13 14 13 13 15 12 155 19 12 19 29 16 12 25 13 11 10 14 17 21 25 11 13 10 12 20 12 18 14 11 156 17 13 19 30 15 11 23 12 10 10 14 17 23 25 12 13 12 14 16 15 21 16 11 157 18 14 18 30 16 10 24 12 11 10 14 16 21 24 11 13 13 14 15 16 19 16 11 158 19 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 24 25 12 13 11 12 18 12 19 13 12 159 17 13 18 30 15 11 21 12 10 10 14 17 21 25 12 13 13 14 16 15 18 15 12 160 18 12 18 29 15 11 26 12 11 10 14 18 19 23 11 14 11 13 15 13 13 16 12 161 17 13 20 29 15 10 24 13 11 10 15 20 21 24 11 13 12 13 16 13 22 15 11 162 16 13 20 30 13 10 24 12 12 10 14 18 21 23 13 11 13 13 16 16 17 16 11 163 19 12 18 28 15 11 24 13 11 10 14 18 21 23 12 14 11 13 14 13 13 15 12 164 19 13 18 30 16 11 23 11 10 10 14 15 21 24 13 13 12 14 19 13 19 15 11 165 19 13 18 29 15 11 25 13 11 11 14 16 21 23 13 13 12 14 17 12 17 14 12 166 19 13 18 30 16 11 23 10 10 10 14 16 21 25 12 13 12 14 18 13 19 15 11 167 19 13 19 29 16 10 27 13 11 10 15 18 21 23 11 13 11 12 18 14 20 15 12 168 16 13 18 29 14 10 24 11 11 10 15 19 21 23 12 14 11 13 15 13 13 15 12 169 20 12 19 29 15 10 25 12 11 10 14 17 23 25 12 13 11 12 18 12 20 13 12 170 18 14 19 31 13 24 12 12 12 14 19 22 24 11 14 10 14 15 16 20 18 10 171 19 13 18 30 16 11 22 12 11 12 14 21 21 23 12 13 11 13 18 17 15 11 172 18 14 21 30 15 10 26 13 14 10 14 17 21 22 10 11 15 15 11 19 15 11 173 18 12 19 29 15 10 25 13 11 10 14 17 23 26 12 13 11 13 19 12 20 13 12 174 22 14 18 30 15 10 24 12 10 10 14 17 21 25 12 13 13 14 16 16 18 15 11 175 19 13 18 30 15 11 23 12 10 10 14 16 24 24 11 15 12 14 16 14 20 15 10 176 19 12 19 28 15 10 25 14 11 10 14 17 23 25 12 13 11 12 18 13 20 13 12 119 120 177 18 13 21 28 16 10 26 12 12 10 15 19 23 25 12 13 10 12 18 13 18 15 12 178 17 14 18 30 16 11 23 11 10 10 14 17 22 24 12 13 12 14 17 13 18 15 11 179 17 14 20 32 15 10 26 12 11 10 14 20 22 23 11 12 12 14 14 14 15 13 10 180 19 14 19 30 13 26 12 12 12 14 22 22 24 12 14 10 14 16 15 20 16 10 181 20 12 19 29 15 10 26 12 11 10 14 17 23 25 12 13 11 12 18 12 20 13 11 182 19 12 20 28 14 10 22 13 11 10 15 17 20 23 13 12 11 12 20 11 11 18 13 183 17 13 18 30 15 11 23 11 10 10 14 16 21 24 13 13 12 14 16 13 18 15 11 184 16 12 18 29 15 10 24 12 12 10 14 21 21 23 13 14 11 13 15 13 13 16 12 185 19 12 19 28 16 10 24 13 11 10 15 20 22 26 14 13 10 12 17 12 18 14 12 186 20 12 18 28 16 10 23 12 12 10 14 16 23 25 13 13 10 12 17 13 20 16 11 187 19 13 18 29 15 10 23 11 10 10 16 18 24 24 12 13 13 14 18 13 18 15 11 188 18 11 18 27 16 11 23 12 10 10 14 16 21 25 11 13 12 14 17 13 18 14 10 189 19 13 20 29 14 10 22 12 11 11 15 18 20 24 12 14 11 12 19 13 17 15 12 190 19 14 18 30 15 10 23 11 10 10 14 18 23 24 12 13 12 13 16 14 18 16 11 191 19 14 21 31 15 10 27 11 12 10 14 16 22 25 12 11 12 13 16 13 13 17 12 192 18 12 19 28 16 10 24 13 11 10 15 20 23 26 15 13 10 12 17 12 18 14 12 193 18 13 18 29 16 11 24 12 10 10 14 15 24 24 13 13 12 14 19 13 19 15 11 194 19 12 19 28 13 11 22 12 11 10 15 16 19 23 12 12 11 12 18 12 16 15 11 195 17 13 21 30 15 10 26 13 12 10 14 16 21 23 11 11 15 16 11 20 16 11 196 18 14 18 30 15 24 12 10 10 14 16 21 24 11 13 13 14 15 15 18 16 11 197 15 13 18 31 14 10 24 12 11 10 15 19 20 23 12 14 11 13 16 13 13 15 12 198 18 11 18 28 16 10 23 12 10 10 14 17 22 25 12 13 12 14 19 13 18 13 10 199 18 13 18 29 15 10 23 12 10 10 14 16 21 23 11 13 12 14 19 13 17 15 12 200 16 13 20 29 15 11 24 12 12 10 14 16 21 23 11 11 14 16 11 18 15 12 120 121 PHỤ LỤC 5: Hồ sơ Y-STR 200 mẫu sử dụng Yfiler™ Plus PCR Amplification Kit DYS 576 DYS 389I DYS 635 DYS 389II DYS 627 DYS 460 DYS 458 DYS 19 YGA TAH4 DYS 448 DYS 391 DYS 456 DYS 390 DYS 438 DYS 392 DYS 518 DYS 570 DYS 437 DYS 385 DYS 449 DYS 393 DYS 439 DYS 481 DYF 387S1 DYS 533 18 11 21 27 21 10 18 16 10 18 11 14 25 10 13 40 16 14 13, 19 25 14 12 26 37, 38 11 18 14 21 30 21 12 18 16 12 21 10 15 24 10 11 35 18 14 12, 18 30 15 12 24 34, 37 12 17 12 21 29 19 10 18 15 13 20 14 24 10 13 39 18 14 14, 19 28 12 11 24 36, 36 11 19 13 21 31 19 10 17 15 11 18 10 15 24 10 13 41 21 14 12, 20 30 14 12 23 34, 34 11 17 14 21 29 20 10 16 15 11 18 10 14 24 10 13 38 19 14 11, 17 28 14 11 23 36, 38 10 18 11 21 28 21 10 20 16 10 18 11 14 25 10 13 41 16 14 13, 18 23 14 12 23 38, 38 11 19 13 21 30 20 10 18 16 12 18 11 15 25 10 13 42 16 14 13, 19 25 14 12 23 36, 39 10 18 11 21 27 21 10 18 16 10 18 11 14 25 10 13 40 16 14 13, 19 25 14 12 23 37, 38 10 17 12 22 29 23 10 18 15 11 19 10 14 25 10 13 36 20 14 12, 12 31 12 12 24 36, 37 12 10 18 13 24 28 22 10 15 16 13 21 10 15 24 10 13 40 20 15 13, 18 34 12 11 26 40, 40 11 11 19 13 23 28 21 10 18 16 12 21 10 15 25 10 13 41 19 14 13, 18 35 12 12 26 39, 40 11 12 18 12 20 28 18 17 13 12 20 10 15 23 11 14 36 19 14 13, 19 36 12 11 23 35, 38 11 13 17 12 21 27 20 10 18 16 11 20 11 14 25 10 13 41 20 14 13, 19 27 13 11 26 36, 39 11 14 17 13 25 30 21 12 18 16 11 18 10 15 24 10 13 41 17 14 14, 16 27 14 12 23 37, 39 10 15 18 12 23 28 24 10 20 17 11 19 10 14 26 10 13 37 20 14 14, 19 31 12 13 24 36, 36 11 16 17 13 21 30 20 10 17 15 11 18 11 15 24 10 13 43 16 14 13, 19 26 14 13 23 37, 39 11 17 18 13 23 28 21 10 18 16 12 21 10 15 25 10 13 39 19 15 13, 19 35 13 12 26 40, 40 11 18 19 12 21 28 18 17 14 12 20 10 15 24 11 14 36 17 15 13, 18 32 11 14 23 35, 38 11 19 17 11 21 28 21 10 19 16 10 18 10 14 25 10 13 40 16 14 13, 18 26 14 12 23 37, 38 11 20 18 12 23 28 20 11 19 16 12 19 10 15 26 10 13 37 21 15 12, 18 32 12 14 24 37, 38 11 21 20 12 20 28 18 10 18 14 12 20 10 15 25 11 14 35 16 15 13, 17 34 12 13 23 36, 38 11 22 19 13 21 29 22 10 16 15 12 18 10 15 23 10 13 39 17 14 13, 13 28 12 12 25 36, 36 11 23 20 12 22 29 20 10 18 15 12 19 11 13 24 10 13 37 17 14 12, 20 31 12 12 25 36, 38 11 24 19 12 23 29 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 36 17 14 12, 20 31 12 12 25 36, 38 11 25 20 12 21 28 22 10 17 16 12 19 10 17 25 10 14 38 16 16 12, 18 34 11 11 25 39, 41 13 26 18 12 20 27 18 17 14 11 20 11 15 24 11 14 36 21 15 13, 19 32 12 12 24 36, 38 11 27 18 13 22 30 22 10 17 15 11 18 10 17 25 10 13 40 16 14 15, 15 28 14 14 22 36, 37 11 28 16 13 22 29 21 10 18 16 10 18 11 15 24 10 13 43 14 14 13, 18 26 14 12 23 37, 38 10 29 17 13 25 29 23 10 18 15 10 18 10 15 24 10 13 37 17 14 14, 19 29 14 11 23 38, 38 10 30 17 13 22 29 20 10 18 16 13 18 11 15 24 10 13 41 17 14 13, 19 27 14 13 22 36, 39 10 31 18 12 20 28 22 10 17 15 12 19 11 16 23 10 12 36 18 15 13, 16 34 12 15 22 36, 40 11 STT 121 122 32 19 13 23 29 22 10 16 15 11 18 10 16 25 10 13 42 17 14 16, 19 30 14 12 25 37, 37 10 33 18 13 21 29 24 10 15 15 11 18 10 15 25 10 13 38 15 14 15, 21 29 14 12 23 36, 37 10 34 18 13 21 31 22 10 18 15 10 18 11 15 25 10 13 40 16 14 16, 21 32 14 12 23 37, 37 10 35 18 12 20 28 18 18 14 12 20 10 15 24 11 14 34 19 14 13, 18 35 12 12 21 35, 40 11 36 17 14 22 30 21 12 15 15 11 20 10 15 22 10 11 38 16 14 11, 18 29 14 12 26 39, 39 12 37 18 12 22 28 21 10 17 15 11 18 11 15 24 10 13 40 15 14 13, 18 26 14 12 22 37, 39 10 38 19 14 22 29 20 10 23 16 11 18 11 15 24 10 13 43 16 14 13, 18 27 14 12 22 36, 39 10 39 18 13 23 28 22 10 17 16 12 21 10 15 25 10 13 40 20 15 13, 13 36 12 12 26 41, 41 11 40 18 14 21 29 22 10 16 15 11 18 10 17 24 10 14 43 16 14 16, 20 28 14 12 23 38, 39 10 41 20 13 23 28 24 11 16 16 12 21 10 15 25 10 13 40 20 15 13, 18 35 12 12 21 36, 38 10 42 19 13 21 29 20 11 20 16 11 18 10 15 23 10 13 40 16 14 13, 18 26 14 12 26 39, 39 11 43 17 12 21 25 20 10 19 16 11 20 11 14 24 10 13 40 20 14 12, 19 28 13 11 24 38, 38 10 44 19 12 23 28 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 36 17 14 12, 20 32 12 12 26 36, 38 11 45 17 12 21 30 23 10 15 15 12 19 10 16 23 11 14 38 19 14 12, 14 28 13 12 25 36, 38 11 46 20 13 23 29 21 11 16 15 11 18 10 16 25 10 13 40 17 14 15, 20 28 14 12 25 36, 39 12 47 18 13 23 28 21 10 17 16 12 21 10 15 25 10 13 40 19 15 13, 18 36 12 13 22 36, 37 10 48 19 12 19 30 18 12 16 14 12 19 10 15 24 11 11 37 18 15 15, 16 25 13 11 26 39, 39 11 49 19 12 23 27 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 37 17 14 12, 20 32 12 12 24 36, 36 12 50 18 12 23 28 21 20 17 12 20 10 15 24 10 13 38 20 15 13, 22 33 12 11 26 36, 38 11 51 18 12 21 28 21 18 15 11 19 10 16 24 10 13 39 17 15 13, 21 33 12 12 22 36, 41 11 52 17 13 21 29 20 11 15 14 12 18 10 15 23 10 14 35 20 15 13, 14 31 13 12 28 38, 38 11 53 18 14 18 30 20 11 14 14 12 18 10 15 22 10 14 34 20 15 13, 13 32 13 12 24 36, 39 12 54 21 14 23 31 21 10 18 16 11 18 11 15 24 10 13 41 16 14 13, 20 26 14 12 25 36, 38 11 55 17 13 21 28 19 17 15 11 19 10 15 24 10 14 42 18 15 13, 13 34 12 13 22 36, 40 11 56 20 12 22 27 22 18 15 12 19 10 16 23 11 12 37 15 15 13, 16 32 12 11 28 37, 38 11 57 19 13 21 30 20 10 17 16 11 18 11 15 24 10 13 43 16 14 13, 17 25 14 13 22 35, 38 11 58 18 13 22 29 19 10 17 16 11 18 11 15 24 10 13 39 15 14 13, 19 27 14 12 23 36, 41 10 59 17 14 20 30 22 11 21 15 11 19 10 15 24 10 10 34 21 15 15, 16 31 12 11 23 37, 38 10 60 17 12 21 28 20 10 20 16 12 18 10 14 25 10 13 37 20 14 12, 19 32 12 11 27 37, 37 12 61 18 14 22 30 21 10 16 13 10 20 10 17 24 12 14 35 19 14 16, 20 30 14 11 23 35, 39 11 62 18 12 19 29 22 10 15 15 12 18 10 16 23 10 14 39 18 14 13, 13 30 13 11 24 37, 37 12 63 20 12 21 27 22 19 15 12 19 10 16 23 11 12 37 14 16 12, 16 32 12 11 25 38, 38 11 64 16 13 21 29 21 11 16 15 12 20 11 15 23 10 11 38 16 14 11, 18 31 14 10 22 35, 38 12 65 19 14 21 30 23 10 19 16 12 20 10 16 24 10 14 40 20 15 13, 20 30 12 13 24 36, 38 12 66 18 12 22 28 22 10 16 15 12 18 10 15 24 10 13 37 14 15 13, 15 30 13 12 26 36, 40 11 122 123 67 19 14 21 30 22 11 15 15 12 18 10 17 25 10 13 41 16 14 16, 19 29 14 11 24 39, 39 12 68 18 13 24 30 21 11 16 14 12 19 10 15 23 11 14 36 18 14 11, 12 28 13 13 23 37, 37 11 69 18 13 23 29 21 11 17 14 12 19 11 15 24 12 13 39 17 15 12, 14 31 13 12 22 38, 38 12 70 18 12 22 29 19 10 18 15 10 18 10 15 24 10 13 39 16 14 14, 16 27 15 10 19 35, 36 12 71 18 14 22 29 19 11 16 16 11 18 11 15 24 10 13 41 15 14 13, 18 27 14 12 24 37, 38 10 72 17 12 22 28 23 10 16 15 12 18 10 15 24 10 13 36 14 15 13, 16 31 13 11 23 36, 39 10 73 20 12 23 29 20 10 18 14 12 19 10 13 25 10 13 35 18 14 12, 19 31 12 12 24 39, 39 12 74 19 13 20 31 22 10 16 15 10 18 10 15 24 11 13 39 16 14 14, 18 26 14 11 25 36, 39 11 75 20 12 20 28 16 19 14 12 20 10 15 25 11 15 35 16 15 13, 17 32 12 13 23 36, 38 10 76 21 14 21 30 21 11 15 15 11 18 10 16 25 10 13 43 16 14 15, 20 29 14 11 23 35, 38 11 77 18 13 22 29 22 10 19 16 11 18 10 15 25 10 13 41 16 14 13, 20 26 15 12 23 37, 37 11 78 20 12 23 29 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 35 18 14 12, 19 31 12 12 26 36, 39 11 79 18 13 23 28 22 10 17 16 12 20 10 15 25 10 13 39 22 15 13, 18 35 12 13 26 37, 41 11 80 18 12 20 28 21 18 14 12 20 11 15 23 11 14 40 17 15 15, 17 32 12 12 23 35, 39 11 81 17 12 22 28 19 17 15 12 20 10 14 23 10 13 38 21 15 15, 19 33 12 12 25 37, 41 12 82 18 11 21 27 22 10 18 16 10 18 11 14 25 11 13 40 16 14 13, 18 26 14 13 23 37, 38 10 83 14 13 24 30 20 12 15 14 12 19 10 18 23 10 14 35 18 14 11, 12 28 13 11 22 36, 36 13 84 17 13 21 29 21 11 14 14 12 18 10 15 22 10 14 36 21 15 13, 13 32 13 12 25 35, 39 11 85 19 13 21 30 21 10 18 16 11 18 10 15 24 10 13 42 18 14 13, 18 26 14 12 23 37, 38 10 86 19 12 23 30 20 10 16 17 11 18 10 17 24 14 13 39 18 14 15, 19 28 14 12 22 36, 37 10 87 19 12 24 29 20 10 18 15 12 19 10 14 25 10 13 36 17 14 12, 20 31 12 12 25 36, 38 11 88 17 12 22 28 22 10 21 16 11 19 10 15 26 10 13 36 20 14 14, 19 31 12 12 24 36, 36 11 89 18 12 20 28 17 10 19 14 11 20 10 15 24 11 14 33 18 15 15, 18 30 12 11 23 35, 38 11 90 19 13 21 29 20 10 17 16 11 18 11 15 25 10 13 40 16 14 13, 19 26 14 12 23 37, 39 11 91 18 11 21 28 19 10 18 15 10 18 11 14 25 10 13 42 16 14 13, 18 26 14 12 23 37, 38 10 92 17 12 20 28 22 12 15 15 10 18 10 15 23 10 14 38 19 14 13, 14 31 13 11 24 36, 40 11 93 18 13 23 29 21 10 17 15 12 18 11 16 24 10 13 40 17 14 16, 20 29 14 12 23 37, 37 10 94 18 11 22 28 21 10 18 16 10 18 11 13 25 10 13 40 16 14 13, 18 26 14 12 23 38, 38 10 95 18 11 23 28 20 10 18 16 10 18 12 14 25 10 13 41 17 14 12, 18 26 14 13 24 37, 37 10 96 18 13 22 30 18 10 17 16 11 18 10 15 24 10 13 43 18 14 13, 18 27 13 12 22 39, 39 11 97 19 13 22 30 22 10 17 15 11 18 10 17 25 10 13 40 16 14 13, 14 28 14 14 22 37, 37 10 98 17 13 21 29 20 11 19 15 11 18 15 23 10 13 40 16 14 12, 18 26 14 12 22 38, 38 10 99 19 11 21 27 22 10 18 16 10 18 11 14 25 10 13 42 16 14 13, 18 26 14 12 23 37, 38 10 100 20 14 22 30 23 10 16 13 10 19 16 24 12 14 35 19 14 15, 23 30 14 11 24 38, 38 12 101 18 14 22 30 22 11 15 16 11 18 10 16 24 10 13 41 16 14 16, 19 29 14 11 23 37, 39 12 123 124 102 16 12 23 27 24 10 17 17 11 18 10 15 23 10 13 32 19 15 13, 20 36 13 13 27 36, 36 12 103 19 13 22 29 22 11 16 15 11 18 10 15 25 10 14 42 16 14 15, 19 29 14 13 23 37, 38 10 104 17 12 21 30 20 10 19 17 12 18 10 14 24 10 13 38 19 15 14, 14 32 12 11 24 36, 38 11 105 17 13 23 30 23 11 16 15 11 18 11 16 25 10 13 41 17 14 15, 15 30 14 13 23 35, 37 10 106 19 14 21 30 20 11 15 15 11 18 11 16 25 10 13 41 15 14 15, 20 29 14 12 24 36, 37 10 107 18 12 21 29 18 10 17 14 12 20 11 15 24 11 14 36 18 15 13, 18 33 12 12 23 38, 38 10 108 17 13 20 29 22 11 18 16 11 21 10 15 24 10 11 37 17 14 11, 18 31 15 11 24 34, 36 12 109 16 13 21 30 21 11 15 16 12 18 10 16 24 10 14 37 20 14 13, 13 32 13 13 26 37, 38 12 110 18 13 21 29 20 16 15 11 20 10 15 24 10 13 40 19 15 13, 18 31 13 11 24 37, 39 12 111 16 12 20 28 21 11 17 14 12 18 10 15 24 10 13 38 19 16 13, 13 32 13 13 24 36, 40 11 112 19 13 21 29 19 11 19 16 11 18 10 15 23 10 13 39 16 14 13, 13 27 14 12 23 38, 38 10 113 19 11 21 29 21 10 19 16 10 19 11 14 25 10 13 42 16 14 14, 18 25 14 12 23 37, 38 10 114 19 14 23 31 21 10 16 14 12 18 10 15 24 10 13 42 16 14 15, 20 28 14 12 24 37, 38 10 115 17 14 21 31 21 10 16 15 10 18 10 15 24 10 12 38 19 14 15, 17 27 14 12 22 36, 38 11 116 16 12 21 30 20 10 15 15 12 17 10 15 22 10 13 38 20 14 12, 13 30 13 12 26 38, 38 12 117 18 12 22 27 20 10 17 14 11 18 11 15 23 10 13 41 15 14 13, 19 26 14 12 22 37, 39 10 118 19 13 22 29 22 10 16 15 11 18 10 15 25 11 14 43 16 14 15, 19 29 14 13 23 37, 38 10 119 18 13 23 28 22 10 17 16 12 20 10 15 25 10 13 39 20 15 13, 18 36 12 12 27 40, 40 11 120 19 14 21 30 23 10 16 16 10 18 11 14 24 10 13 42 18 14 13, 18 26 14 12 23 36, 36 10 121 19 13 20 29 21 10 12 15 12 18 11 15 25 10 13 43 18 14 15, 22 29 15 11 23 38, 38 10 122 19 13 21 29 22 10 16 16 11 18 10 15 26 10 13 42 17 14 13, 18 27 14 12 23 37, 37 10 123 18 13 20 29 21 10 12 15 12 18 11 15 25 10 13 43 17 14 15, 21 29 14 11 23 38, 38 10 124 17 13 23 29 21 10 18 17 11 18 11 15 24 10 13 39 16 15 13, 17 25 13 12 22 38, 39 10 125 15 12 21 29 22 11 15 15 12 19 10 16 23 10 14 37 19 14 13, 13 30 13 13 26 36, 41 12 126 15 13 23 29 20 11 16 15 12 20 11 15 23 10 11 38 16 14 11, 18 33 14 10 24 37, 39 12 127 18 12 19 29 22 10 15 15 12 18 12 16 23 10 14 37 19 14 13, 13 32 14 11 27 38, 40 11 128 18 11 21 28 21 10 19 16 10 18 10 14 25 10 13 41 16 14 13, 17 26 14 12 23 37, 38 10 129 19 13 23 28 21 18 16 12 21 10 15 25 10 13 41 19 15 13, 19 35 12 13 26 40, 40 11 130 19 12 20 27 22 10 17 15 12 19 11 15 23 10 12 37 16 15 12, 13 35 12 12 22 37, 39 12 131 16 13 22 30 21 10 19 15 11 18 10 14 24 11 14 41 17 14 13, 20 25 12 13 24 37, 37 10 132 18 12 22 28 19 11 18 16 11 18 10 15 25 10 13 41 18 14 13, 18 33 14 12 23 38, 39 10 133 18 12 22 28 20 10 17 14 11 17 11 15 24 10 13 41 19 14 13, 21 27 14 12 22 37, 39 11 134 16 14 21 32 20 10 18 14 11 20 10 15 23 11 10 37 20 15 12, 17 29 14 11 27 37, 40 11 135 19 13 19 29 24 10 16 15 12 19 10 15 24 10 13 37 19 15 12, 16 32 12 12 22 38, 39 12 136 18 12 24 28 20 17 16 12 20 10 14 23 10 13 37 19 15 15, 19 32 12 12 24 37, 40 12 124 125 137 18 11 21 27 23 10 18 16 10 18 11 14 25 10 13 42 16 14 13, 18 26 14 12 24 37, 39 10 138 19 13 22 31 20 16 15 11 18 11 15 25 10 13 41 17 14 13, 19 26 14 13 23 38, 38 11 139 19 12 20 28 18 19 14 12 20 10 15 24 11 14 35 17 15 13, 18 31 11 13 23 35, 38 11 140 19 12 20 29 22 16 16 12 20 10 16 22 10 13 37 17 14 11, 20 32 12 11 25 37, 39 11 141 18 14 20 32 24 18 15 12 19 10 14 26 10 12 36 16 15 12, 16 31 12 11 25 35, 40 12 142 19 13 22 30 18 10 17 16 11 18 11 15 24 10 13 40 16 14 13, 17 28 14 12 23 38, 39 10 143 19 12 23 29 21 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 36 18 14 12, 20 31 12 12 25 36, 38 11 144 19 14 21 30 23 12 16 15 11 18 10 16 23 10 13 40 16 14 15, 19 29 14 11 23 37, 37 11 145 17 12 21 28 20 11 16 15 12 18 10 15 23 10 14 35 20 14 13, 13 31 13 11 24 35, 38 11 146 20 13 21 30 23 10 15 15 11 17 11 15 25 10 13 39 16 14 14, 16 30 13 12 23 36, 37 10 147 18 13 22 29 22 12 18 16 11 17 11 15 24 10 13 41 17 14 13, 18 28 14 13 23 38, 39 10 148 18 13 21 29 22 12 21 16 12 18 11 16 24 10 13 39 19 14 12, 15 31 12 12 22 37, 39 10 149 18 14 21 30 24 10 18 16 11 18 10 16 25 10 14 41 16 14 15, 19 32 15 14 22 37, 38 10 150 17 11 21 27 23 10 18 15 10 18 12 14 25 11 13 42 16 14 13, 18 26 14 12 23 38, 38 10 151 15 12 24 28 22 12 17 15 11 19 11 15 25 11 11 39 23 14 15, 19 27 13 11 25 38, 38 12 152 19 12 23 29 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 36 17 14 12, 20 30 12 12 25 36, 38 11 153 18 13 22 30 19 10 16 16 11 18 11 15 24 10 13 40 16 14 18, 19 27 14 13 23 37, 38 10 154 17 14 22 30 19 11 18 16 11 18 11 15 24 10 13 42 17 14 13, 18 26 14 12 23 36, 39 10 155 19 12 21 29 22 10 20 17 12 19 11 14 23 10 14 36 18 14 13, 19 31 12 12 24 37, 38 10 156 18 14 22 30 21 10 13 17 11 17 11 15 24 10 13 40 16 14 13, 19 27 14 13 21 37, 37 10 157 17 11 21 27 21 10 18 17 11 17 11 14 25 10 13 42 16 14 13, 18 26 14 13 23 37, 38 10 158 20 13 23 31 19 10 18 15 11 18 10 15 23 10 13 41 23 14 12, 20 32 14 12 23 34, 34 10 159 19 14 22 29 21 11 15 15 11 18 10 15 25 10 13 41 16 14 15, 19 29 14 11 23 36, 38 11 160 20 13 22 29 20 10 17 17 11 19 10 15 24 10 13 41 15 14 13, 19 26 14 12 23 37, 38 10 161 19 12 22 29 22 10 16 15 12 19 10 13 25 10 13 36 18 14 12, 19 31 12 12 25 36, 38 11 162 20 14 21 30 22 11 15 15 11 18 10 16 24 10 13 42 16 14 15, 19 29 14 11 23 37, 38 11 163 18 13 20 30 19 10 18 14 12 20 10 16 24 11 14 37 19 14 12, 14 33 12 12 23 35, 37 11 164 17 13 20 29 20 11 14 14 12 18 10 15 23 10 14 36 20 15 13, 13 32 14 12 24 36, 39 11 165 21 13 23 29 21 10 16 15 11 18 11 15 25 10 14 45 16 14 15, 19 28 14 14 23 37, 38 10 166 16 12 21 30 13 11 15 15 11 18 10 15 23 10 14 36 20 14 13, 13 30 13 12 24 37, 39 11 167 18 14 21 29 22 10 16 15 12 18 10 15 24 10 13 39 19 14 12, 17 30 14 11 23 36, 38 10 168 19 13 21 30 20 10 18 16 11 18 11 15 24 10 13 41 16 14 13, 19 26 14 12 23 36, 39 10 169 18 12 24 29 21 10 18 16 11 18 10 15 25 10 13 38 16 14 13, 20 34 12 13 23 38, 38 12 170 19 11 21 27 20 10 18 16 10 18 11 14 25 10 13 42 16 14 13, 18 26 14 12 24 37, 38 10 171 17 13 22 29 22 11 19 16 11 18 11 15 23 10 15 41 16 14 13, 17 26 14 12 23 38, 39 10 125 126 172 17 13 21 29 23 10 15 12 11 17 11 14 24 13 40 16 14 13, 19 26 14 11 23 37, 38 10 173 17 13 21 28 22 10 15 15 11 18 11 15 25 10 13 38 17 14 15, 21 29 14 12 23 36, 37 10 174 18 13 21 29 23 10 18 16 11 18 11 16 26 13 42 16 14 13, 18 29 13 12 23 37, 37 10 175 19 12 23 28 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 37 17 14 12, 20 31 12 12 25 36, 37 11 176 19 14 21 30 23 10 15 15 11 19 11 12 25 10 13 42 15 14 13, 15 34 12 13 23 37, 37 10 177 19 13 21 30 21 11 17 17 11 17 12 15 24 10 13 43 18 14 13, 18 26 14 11 23 39, 39 10 178 18 12 21 27 23 10 16 15 11 18 11 16 25 11 13 41 14 14 13, 15 29 10 12 23 38, 39 10 179 16 12 21 28 22 10 17 16 12 18 10 15 23 11 13 37 17 15 12, 19 30 11 11 27 34, 40 11 180 18 12 19 29 23 10 15 15 12 18 11 16 23 10 14 37 18 14 13, 13 31 13 12 25 38, 40 11 181 18 14 21 30 22 11 15 15 11 18 10 16 24 10 13 42 16 14 15, 19 30 14 11 23 37, 37 11 182 17 14 20 31 20 11 16 15 12 18 10 15 24 10 13 38 18 14 12, 17 29 14 11 23 38, 40 11 183 16 14 21 29 21 10 16 15 11 18 10 14 24 10 13 38 19 14 12, 17 28 14 11 23 36, 39 10 184 18 11 23 27 24 10 17 15 12 21 10 15 25 10 13 40 20 15 13, 17 35 12 12 26 39, 40 11 185 18 13 21 28 24 10 17 17 11 17 12 15 24 10 13 42 18 14 13, 18 26 14 11 23 37, 39 10 186 18 14 23 31 21 11 15 14 11 19 11 16 24 11 14 36 18 14 11, 12 30 13 11 23 38, 40 12 187 18 12 19 29 23 10 17 15 13 18 10 17 23 10 14 37 19 14 13, 13 31 13 13 25 38, 40 11 188 18 14 23 31 18 11 17 15 13 20 10 15 25 11 11 44 19 14 11, 14 33 13 10 23 38, 38 11 189 19 12 22 28 23 10 18 15 12 19 14 25 10 13 35 18 15 12, 20 33 12 11 26 36, 39 11 190 18 13 21 28 22 18 16 12 19 10 16 22 10 13 39 17 15 11, 11 32 12 12 24 37, 40 12 191 18 13 21 30 19 10 18 16 11 18 14 22 10 13 40 17 14 13, 19 27 14 12 22 37, 39 10 192 16 13 21 29 20 20 15 10 20 11 15 23 10 11 38 20 12 13, 20 32 14 10 28 38, 40 11 193 19 13 22 29 22 10 16 15 11 18 11 15 26 10 13 39 16 14 15, 20 28 14 12 22 37, 38 10 194 19 12 24 29 20 10 18 15 12 19 10 13 25 10 13 36 17 14 12, 18 31 12 12 25 36, 37 12 195 18 14 21 30 22 10 15 15 11 19 10 16 24 10 13 43 22 14 14, 19 29 12 11 23 37, 37 11 196 20 12 21 28 18 20 14 12 19 15 24 11 14 36 17 15 13, 18 31 11 13 23 35, 38 11 197 17 14 23 20 10 20 17 11 18 11 15 24 10 13 43 16 14 12, 12 26 14 12 23 39, 40 10 198 18 13 23 29 23 10 17 16 12 21 10 15 25 10 13 40 20 15 13, 17 34 12 12 27 39, 39 11 199 19 11 23 27 19 10 19 14 12 20 10 15 25 10 13 39 19 15 13, 19 31 12 11 26 39, 40 11 200 18 12 21 28 18 13 17 15 12 20 10 15 24 11 14 36 20 15 12, 19 33 13 11 21 37, 37 11 31 126