kiểm tra an toàn, hiệu lực và độ dài miễn dịch của vắc xin vô hoạt xuất huyết thỏ

TĨM T T KHỐ LU N tài c th c hi n t ngày 01/03/2008 n 01/08/09 t i công ty thu c thú y Trung Ương Navetco v i n i dung “Ki m tra an toàn, hi u l c dài mi n d ch c a v c xin vô ho t xu t huy t th ” V c xin xu t huy t th dùng ki m tra c công ty Navetco cung c p Ki m tra vô trùng lô v c xin môi trư ng: th ch máu, th ch n m, nư c th t dinh dư ng, mơi trư ng y m khí Sau ngày theo dõi không th y vi sinh v t m c môi trư ng lô v c xin t tiêu chu n vô trùng Ki m tra an tồn lơ v c xin th : m i lô v c xin dùng th kh e m nh, tiêm b p v i li u g p ôi li u quy nh (2 ml/con) Sau ngày theo dõi, th v c xin khơng có nh ng bi u hi n b t thư ng lô v c xin t tiêu chu n an toàn Ki m tra hi u l c lô v c xin: m i lô v c xin dùng th , th xin v i li u 1ml/con th sau công cư ng c toàn b th K t qu t t c th ng t 1/20 - 1/160 Trong ó th dài mi n d ch lơ v c xin tháng: 20 th c K t qu th c tiêm v c xin i ch ng không tiêm C 1, 2, 3, tháng sau c tiêm v c xin th HGKT công cư ng i ch ng ch t t tiêu chu n v hi u l c tiêm b p v i li u ml/con 12 th tiêm, ch n th c tiêm v c xin c t 24 - 48 gi v i nh ng tri u ch ng b nh tích c a b nh xu t huy t th lô v c xin Ki m tra c tiêm v c i ch ng không tiêm Sau 21 ngày, l y máu ki m tra HGKT ti n hành công cư ng s ng kh e m nh HGKT dao c tiêm i ch ng ti n hành l y máu ki m tra c b o h 100%, dài mi n d ch kéo dài nh t tháng Sau tiêm v c xin, HGKT tăng d n cao nh t Ki m tra hi u l c lô v c xin sau b o qu n tháng th - 8oC tháng: ki m tra v c xin theo phương pháp ki m tra hi u l c K t qu v c xin - 8oC 3, tháng v n hi u l c b o h th t 80 - 100% Ki m tra hi u l c lô v c xin sau nhi t phòng (25 - 30oC) 1, ngày: ki m tra v c xin theo phương pháp ki m tra hi u l c K t qu v c xin sau nhi t 25 - 30oC 1, 2, ngày v n hi u l c b o h 100% th iii M CL C Trang Trang t a i L i c m t ii Tóm t t khóa lu n iii M c l c iv Danh sách ch vi t t t vii Danh sách b ng bi u viii Danh sách hình ix Chương M U 1.1 .1 TV N 1.2 M C ÍCH VÀ YÊU C U 1.2.1 M c ích .2 1.2.2 Yêu c u Chương T NG QUAN 2.1 B NH XU T HUY T TH 2.1.1 Khái ni m .3 2.1.2 L ch s phân b a lý 2.1.2.1 L ch s b nh 2.1.2.2 Tình hình nhi m b nh th gi i 2.1.2.3 Tình hình nhi m b nh Vi t Nam 2.1.3 Căn b nh .5 2.1.3.1 c i m hình thái c u trúc 2.1.3.2 c i m nuôi c y phân l p 2.1.3.3 S c kháng c a virus 2.1.4 Truy n nhi m h c .6 2.1.4.1 Loài v t m c b nh 2.1.4.2 Ch t ch a m m b nh 2.1.4.3 ng xâm nh p .6 2.1.4.4 Cách sinh b nh 2.1.4.5 Cách th c lan truy n iv 2.1.5 Tri u ch ng h c 2.1.5.1 Th c p .7 2.1.5.2 Th c p bán c p tính 2.1.5.3 Th mãn tính 2.1.6 B nh tích .8 2.1.6.1 B nh tích i th 2.1.6.2 B nh tích vi th 11 2.1.7 Các phương pháp ch n oán 13 2.1.7.1 Ch n oán lâm sàng 13 2.1.7.2 Ch n ốn phịng thí nghi m 13 2.1.8 Các bi n pháp phòng b nh 14 2.1.8.1 Khi chưa có d ch x y 14 2.1.8.2 Khi có d ch x y 14 2.2 MI N D CH VÀ V C XIN PHÒNG B NH XU T HUY T TH 15 2.2.1 Mi n d ch b nh xu t huy t th 15 2.2.1.1 Mi n d ch d ch th 15 2.2.1.2 Mi n d ch t bào 15 2.2.2 V c xin phòng b nh xu t huy t th .16 2.2.2.1 V c xin nguyên lý tác d ng 16 2.2.2.2 Phương pháp s n xu t v c xin vô ho t xu t huy t th (theo OIE, 2000) 17 2.2.2.3 Nh ng i u c n ý s d ng v c xin .18 2.2.2.4 Nh ng công trình nghiên c u v v c xin xu t huy t th 19 Chương N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP TI N HÀNH 20 3.1 TH I GIAN VÀ A I M 20 3.2 N I DUNG THÍ NGHI M 20 3.3 V T LI U VÀ D NG C THÍ NGHI M 20 3.3.1 V t li u thí nghi m .20 3.3.2 Thi t b d ng c ……………………………………………………… .21 3.4 PHƯƠNG PHÁP TI N HÀNH 21 3.4.1 Ki m tra vơ trùng, an tồn hi u l c c a v c xin 21 3.4.1.1 Ki m tra vô trùng .21 v 3.4.1.2 Ki m tra an toàn 21 3.4.1.3 Ki m tra hi u l c .22 3.4.1.4 Phương pháp ki m tra kháng th th 23 (1) Phương pháp ngưng k t h ng c u HA (theo OIE, 2000) 23 (2) Phương pháp ngăn tr ngưng k t h ng c u HI (theo OIE, 2000) 25 3.4.2 Ki m tra dài mi n d ch lô v c xin tháng 26 3.4.3 Ki m tra hi u l c c a lô v c xin sau b o qu n - 8oC tháng 27 3.4.4 Ki m tra hi u l c c a v c xin sau nhi t phòng (25 – 30oC) 1, 2, ngày 28 3.5 PHƯƠNG PHÁP X LÝ S LI U .29 Chương K T QU VÀ TH O LU N 30 4.1 K T QU KI M TRA VƠ TRÙNG, AN TỒN VÀ HI U L C C A LÔ V C XIN XU T HUY T TH 30 4.1.1 K t qu ki m tra vô trùng 30 4.1.2 K t qu ki m tra an toàn 30 4.1.3 K t qu ki m tra hi u l c 31 4.2 K T QU KI M TRA DÀI MI N D CH 35 4.3 K T QU KI M TRA HI U L C C A V C XIN SAU KHI B O QU N - 8oC TRONG VÀ THÁNG 37 4.4 K T QU KI M TRA HI U L C C A V C XIN SAU KHI NHI T PHÒNG (25 - 30oC) TRONG 1, VÀ NGÀY 38 Chương K T LU N VÀ NGH 41 5.1 K T LU N 41 5.2 NGH .41 TÀI LI U THAM KH O 42 PH L C .44 vi DANH SÁCH CÁC CH VI T T T Vi t t t Nguyên ch nư c Nghĩa ti ng vi t RHD Rabbit Haemorrhagic Disease B nh xu t huy t th RHDV Rabbit Haemorrhagic Disease Virus Virus gây b nh xu t huy t th HA Haemagglutination Ph n ng ngưng k t h ng c u HI Haemagglutination Inhibition Ph n ng ngăn tr ngưng k t h ng c u OIE Organization International T ch c d ch t th gi i Epidemiology Navetco National Veterinary Company Công ty thu c thú y trung ương Ig Immunoglobulin Globulin mi n d ch TSB Tryptone Soya Broth TSA Tryptone Soya Agar PBS Phosphate Buffer Saline BSA Bovine Serum Albumin Albumin huy t bò HGKT Hi u giá kháng th TN Thí nghi m C MG i ch ng Medica Geometrica Trung bình hình h c vii DANH SÁCH CÁC B NG VÀ BI U Trang B ng 3.1: B trí thí nghi m ki m tra an toàn 22 B ng 3.2: B trí thí nghi m ki m tra hi u l c……………………………………… 23 B ng 3.3: Tóm t t q trình th c hi n ph n ng HA 24 B ng 3.4: Tóm t t q trình th c hi n ph n ng HI .25 B ng 3.5: B trí thí nghi m ki m tra dài mi n d ch 27 B ng 3.6: B trí thí nghi m ki m tra hi u l c c a v c xin sau b o qu n tháng - 8oC………………………………………………………………………28 B ng 3.7: B trí thí nghi m ki m tra hi u l c c a v c xin sau nhi t phòng (25 - 30oC) 1, 2, ngày…………………………………………………………29 B ng 4.1: K t qu ki m tra an toàn .30 B ng 4.2: K t qu công cư ng c sau tiêm v c xin 21 ngày 31 B ng 4.3: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 21 ngày………………….31 B ng 4.4: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 1, 2, 3, tháng 35 B ng 4.5: K t qu công cư ng c 1, 2, 3, tháng sau tiêm v c xin .36 B ng 4.6: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 21 ngày v i v c xin b o qu n – 8oC tháng 37 B ng 4.7: T l b o h c a v c xin c b o qu n - 8oC tháng 38 B ng 4.8: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 21 ngày v i v c xin 25 – 30oC 1, 2, ngày .39 B ng 4.9: T l b o h c a v c xin Bi u 4.1: Bi n nhi t 25 - 30oC 1, 2, ngày 39 ng ch s MG qua 1, 2, 3, tháng sau tiêm v c xin ……… 36 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: B n phân b b nh RHD th gi i (4/2000) Hình 2.2: Hình thái c a Calicivirus t bào gan Hình 2.3: Th trào máu mũi Hình 2.4: Các thùy gan sưng ph ng, nh t màu .9 Hình 2.5: Khí qu n ch a Hình 2.6: Tim có y b t khí, ph i có nhi u v t l m m phù th ng m xu t huy t 10 Hình 2.7: Lách to sung huy t 10 Hình 2.8: Th n có nh ng i m xu t huy t 11 Hình 2.9: T bào gan b ho i t .11 Hình 2.10: T bào gan bình thư ng .12 Hình 2.11: C u trúc t bào gan b thay i 12 Hình 2.12: ng th n qu n c u th n xu t huy t 13 Hình 2.13: V c xin xu t huy t th c a công ty Navetco .14 Hình 4.1: Th ch t v i tư th u ng a v sau……………………………………… 32 Hình 4.2: Máu xu t huy t mũi…………………………………………………… 32 Hình 4.3: Khí qu n xu t huy t l n b t khí 33 Hình 4.4: Ph i sung huy t .34 Hình 4.5: Gan nh t màu, ho i t , xu t huy t 34 Hình 4.6: D dày xu t huy t 34 ix Chương M 1.1 U TV N Trong nh ng năm g n ây, ngành chăn ni th nư c ta ã có nh ng bư c ti n k , t quy mơ gia ình chuy n sang quy mơ cơng nghi p v i hàng ch c ngàn Nh t t nh thành phía nam Bình Dương, Thành Ph H Chí Minh, Nai, Ti n Giang, Long An… ã m nh d n ng u tư cho n n chăn ni cịn m i m y tri n v ng Có nhi u nguyên nhân nh hư ng n ngành chăn nuôi th , ó có b nh gây th gh , t huy t trùng, myxomatosis… M t nh ng b nh gây thi t h i l n th hi n b nh xu t huy t th (Rabbit Haemorrhagic Disease, vi t t t RHD) nuôi th hoang d i v i ây b nh truy n nhi m c p tính cho th c i m lây lan nhanh, gây thi t h i r t l n, t l nhi m t vong cao t 40 - 90% (Teifke.J.P cs, 2002) B nh xu t hi n u tiên Trung Qu c vào năm 1984 (Cooke.B.D, 2002) ã gi t hàng tri u th nư c ta, vào năm 2000 xu t hi n m t b nh l th c Trung tâm Ch n Trung ương xác Song Liên, 2004) oán Thú y nh b nh xu t huy t Calicivirus (Ph m Thành Long Phương c bi t vào tháng 4/2003 b nh xu t hi n th nuôi t i Thành Ph H Chí Minh, Bà R a - Vũng Tàu, ng Nai, Bình Dương, Long An, Ti n Giang… Do v y, yêu c u c n ph i có m t bi n pháp phòng b nh M t nh ng bi n pháp phòng b nh em l i hi u qu tiêm v c xin Xu t phát t tình hình th c t trên, c s phân công c a B môn Vi Sinh Truy n Nhi m, khoa Chăn Nuôi Thú y, trư ng s i H c Nơng Lâm Tp.H Chí Minh, ng ý c a công ty Navetco s hư ng d n c a ThS Tr n Th Bích Liên, TS Tr n Xuân H nh, BSTY Tô Th Ph n, chúng tơi th c hi n TỒN, HI U L C VÀ tài “KI M TRA AN DÀI MI N D CH C A V C XIN VÔ HO T XU T HUY T TH ” 1.2 M C ÍCH VÀ U C U 1.2.1 M c ích - ánh giá ch t lư ng c a v c xin xu t huy t th công ty Navetco s n xu t 1.2.2 Yêu c u - Ki m tra vơ trùng, an tồn, hi u l c c a v c xin xu t huy t th - Xác nh dài mi n d ch c a v c xin xu t huy t th - Xác nh dài b o qu n c a v c xin xu t huy t th - Ki m tra hi u l c c a v c xin xu t huy t th sau 30oC) 1, ngày 2 - 8oC nhi t phòng (25 - Chương T NG QUAN 2.1 B NH XU T HUY T TH 2.1.1 Khái ni m B nh xu t huy t th (Rabbit Haemorrhagic Disease - RHD) Calicivirus gây ra, m t b nh truy n nhi m c p tính th nuôi th hoang d i B nh lây lan r t m nh truy n tr c ti p t v t b nh sang v t lành ho c truy n gián ti p qua d ng c chăn nuôi, ngư i chăn nuôi B nh có t l nhi m t l t vong cao t 40 - 90% (Teifke.J.P cs, 2002) Th i gian nung b nh t - ngày, th i gian ch t bi n ng t 24 - 72 gi (OIE, 2000) sau có bi u hi n s t cao, khó th Tri u ch ng lâm sàng th c p tính d u hi u v th n kinh, hô h p B nh tích bi u hi n ph i H u h t t ch c gan, khí qu n u xu t huy t hi n tư ng máu khơng ơng Trong phịng thí nghi m virus không th nhân lên phôi tr ng hay môi trư ng t bào v y vi c phân l p virus không phù h p Ph n ng u tiên ch n oán b nh RHD ph n ng ngưng k t h ng c u (HA) ngư i nhóm máu O Ngồi có nh ng phương pháp ch n ốn khác có nh y cao như: reverse transcription polymerase chain reaction (RT - PCR), Western blotting, negative staining immunoelectron microscopy, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) 2.1.2 L ch s phân b a lý 2.1.2.1 L ch s b nh B nh xu t huy t th c phát hi n (Cooke.B.D, 2002) ã gi t ch t 140 tri u th u tiên Trung Qu c vào năm 1984 nơng tr i, sau ó b nh lan sang Hàn Qu c vào năm 1985 Ch ng sau b nh ã xu t hi n trư ng h p b nh c ghi nh n u tiên Châu Âu T i Châu Âu, Italia vào năm 1986 ã gi t ch t 64 tri u th tr i (Patton, 1989; Cancellotti Renzi, 1991) Pháp, b nh c phát hi n vào cu i năm 1987 (Morisse cs, 1991), Tây Ban Nha Th y Sĩ năm 1988 (Parra Prieto, 1990), c năm 1989 (Loliger Eskens,1991), an M ch năm 1990 (Rodak cs, 1991; Smid cs, 1989,1991) Tháng 10 - 1988 b nh xu t hi n Mexico Khí qu n xu t huy t l n b t khí Hình 4.3: Khí qu n xu t huy t l n b t khí Ph i sung huy t 33 Hình 4.4: Ph i sung huy t Gan ho i t , xu t huy t Hình 4.5: Gan nh t màu, ho i t , xu t huy t D dày xu t huy t Hình 4.6: D dày xu t huy t 34 4.2 K T QU KI M TRA V c xin xu t huy t th dùng ki m tra DÀI MI N D CH t tiêu chu n v vơ trùng, an tồn hi u l c Chúng dài mi n d ch tháng V i 20 th c tiêm v c xin (1ml/con) 12 th i ch ng không tiêm v c xin C sau 1, 2, ,4 tháng sau tiêm v c xin, ch n th c tiêm v c xin ti n hành l y máu ki m tra HGKT K t qu HGKT c a th c tiêm v c xin sau 1, 2, 3, tháng c trình bày b ng 4.4 B ng 4.4: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 1, 2, 3, tháng Th i gian theo dõi (tháng) HGKT c a th m i tháng MG 1/20 1/40 1/40 1/80 1/80 46 1/40 1/160 1/320 1/640 1/640 243 1/160 1/640 1/640 1/1280 1/1280 640 1/80 1/320 1/640 1/640 P 423 1/1280 < 0,05 Qua b ng 4.4 cho th y HGKT c a th sau tiêm v c xin 1, 2, 3, tháng dao ng t 1/20 n 1/1280 Th sau c tiêm v c xin, HGKT tăng d n t tháng th b t u gi m n tháng th tháng th N u so sánh ch s MG c a tháng th so v i tháng 2, 3, s khác bi t có ý nghĩa v i P < 0,05 M c dù sau tiêm v c xin, HGKT th có bi u hi n gi m t tháng th so v i tiêu chu n c a OIE (2000) m t s nghiên c u c a Tr n Th Liên cs (2005), c a Beata Gromadzka (2006) v n b o h th ch ng l i b nh xu t huy t th m c cao so v i hi u giá có kh i u ch rõ v c xin xu t huy t th cơng ty Navetco s n xu t ngồi tiêu chu n vơ trùng, an tồn, hi u l c cịn có mi n d ch nh t tháng 35 dài MG 700 640 600 500 423 400 300 243 200 100 46 Bi u 4.1: Bi n Tháng ng ch s MG qua 1, 2, 3, tháng sau tiêm v c xin ánh giá hi u qu mi n d ch không nh ng d a m c áp ng kháng th mà d a vào t l b o h th thách v i virus Do v y ti n hành xác nh t l b o h qua tháng K t qu B ng 4.5: K t qu công cư ng c trình bày c b ng 4.5 1, 2, 3, tháng sau tiêm v c xin Th i Lơ thí S lư ng Li u Ch ng S th T l K t gian nghi m th v c xin công/li u s ng/s b oh qu (con) (ml/con) công công (%) TN 5/5 100 t C 0/3 t TN Huy n d ch 5/5 100 t C RHDV v i 0/3 t TN HA = 1/2560, 5/5 100 t C ml/con 0/3 t TN 5/5 100 t C 0/3 t theo dõi (tháng) 1 Qua b ng 4.5 cho th y: t t c th h 100% Trong 100% th c tiêm v c xin sau tháng u cb o i ch ng ch t v i nh ng tri u ch ng b nh tích c a b nh xu t huy t th như: th ch t v i tư th u h t ng a v phía sau, trào máu mũi, khí qu n xu t huy t l n b t khí; gan m m b xu t huy t, ph i xu t huy t… 36 Như v y sau tiêm v c xin, t l th i u nói lên r ng c b o h 100% nh t tháng dài mi n d ch c a v c xin kéo dài c nh t tháng sau tiêm v c xin Do i u ki n v th i gian nên k t qu c a ch m i xác nh dài mi n d ch c a v c xin tháng N u so v i m t s k t qu nghiên c u c a Song Bao - Yun cs (2004) mi n d ch th c tiêm v c xin có th kéo dài th m chí năm (OIE, 2000), Pascale Joubert cs (2000) n tháng dài mi n d ch kéo dài t - 15 tháng k t qu c a chúng tơi cịn th p 4.3 K T QU KI M TRA HI U L C C A V C XIN SAU KHI B O QU N 2-8oC TRONG VÀ THÁNG Xác nh th i gian b o qu n c a v c xin m t ch tiêu quan tr ng lo i v c xin Trong i u ki n b o qu n - 8oC, c n ph i xác gian b o qu n iv im i nh nh hư ng c a th i n hi u l c c a v c xin V c xin t tiêu chu n vơ trùng, an tồn hi u l c s Sau tháng b o qu n, v c xin s ánh giá m c c b o qu n - 8oC c ki m tra l i hi u l c kháng th sau tiêm v c xin Trư c công cư ng ti n hành l y máu th c tiêm v c xin c, ki m tra HGKT K t qu th c tiêm v c xin sau 21 ngày có HGKT c trình bày b ng 4.6 B ng 4.6: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 21 ngày v i v c xin b o qu n Th i gian b o qu n (tháng) - 8oC tháng Hi u giá kháng th c a th MG 1/40 1/80 1/80 1/80 1/160 80 1/40 1/40 1/40 1/80 1/80 53 Qua b ng 4.6 cho th y: 100% th P > 0,05 c tiêm v c xin có HGKT >1/20 So sánh ch s MG c a th i gian b o qu n cho th y s khác bi t khơng có ý nghĩa v i P > 0,05 xác HGKT nh t l b o h th sau tiêm v c xin Sau l y máu ki m tra ngày th 21 sau tiêm v c xin, ti n hành công cư ng 37 c cho th thí nghi m th bày i ch ng (cho m i th i gian b o qu n) K t qu c trình b ng 4.7 B ng 4.7: T l b o h c a v c xin c b o qu n - 8oC tháng Th i gian Lơ thí S Li u Ch ng S th T l K t b o qu n nghi m lư ng v c xin công/li u s ng /s b oh qu th (ml/con) công công (%) Huy n d ch 5/5 100 RHDV v i 0/3 HA = 1/2560, 4/5 80 ml/con 0/3 (tháng) (con) TN C TN C Qua b ng 4.7 cho th y: v c xin sau b o qu n cho áp ng mi n d ch t t v i 100% th - 8oC tháng v n c Trong ó t t c th c trưng c a b nh RHD tháng, t l b o h th t c tiêm v c xin s ng kho m nh, bi u hi n b t thư ng sau công cư ng ch t v i tri u ch ng, b nh tích t i ch ng lô v c xin c b o qu n c tiêm v c xin gi m 80%, th i ch ng ch t 100% Do i u ki n v th i gian nên thí nghi m c a ch ki m tra hi u l c c a v c xin xu t huy t th - 8oC 3, tháng Nhưng theo k t c b o qu n qu nghiên c u c a Song Bao - Jun cs (2004) v c xin v n trì c hi u l c t t b o qu n 4oC th i gian năm Như v y v c xin xu t huy t th công ty Navetco s n xu t c b o qu n - 8oC tháng v n hi u l c b o h th t 80 - 100% 4.4 K T QU HI U L C C A V C XIN SAU KHI NHI T PHÒNG (25 - 30oC) TRONG 1, VÀ NGÀY V c xin b o qu n - 8oC r i nhi t phòng (25 - 30oC) 1, ngày Hi u l c c a v c xin c ánh giá b ng phương pháp công virus cư ng c cho th K t qu s khuy n cáo s c n thi t ph i s d ng v c xin th c t th cho t hi u qu i u ki n b o qu n khó khăn 38 ánh giá m c kháng th sau tiêm v c xin Trư c công cư ng ti n hành l y máu th c tiêm v c xin c, ki m tra HGKT K t qu th c tiêm v c xin sau 21 ngày có HGKT c trình bày b ng 4.8 B ng 4.8: Hi u giá kháng th c a th sau tiêm v c xin 21 ngày v i v c xin 25 - 30oC 1, 2, ngày Th i gian v c xin 25-30oC (ngày) Hi u giá kháng th c a th MG 1/20 1/40 1/80 1/160 1/160 70 1/20 1/40 1/40 1/80 1/640 53 1/20 1/20 1/80 1/80 1/80 P 46 Qua k t qu b ng 4.8 cho th y: t t c th áp ng mi n d ch t t v i HGKT bi n > 0,05 c tiêm v c xin sau 21 ngày có ng t 1/20 - 1/160 So sánh ch s MG gi a th i gian th thách hi u l c c a v c xin cho th y s khác bi t khơng có ý nghĩa v i P > 0,05 xác HGKT nh t l b o h th sau tiêm v c xin Sau l y máu ki m tra ngày th 21 sau tiêm v c xin, chúng tơi ti n hành cơng cư ng th thí nghi m th c trình bày i ch ng (cho m i th i gian Th i gian S v c xin Lơ thí lư ng 25-30oC nghi m th (ngày) 25-30oC) K t qu b ng 4.9 B ng 4.9: T l b o h c a v c xin v c xin c cho (con) TN C C C S th T l s ng b o K t /s h qu công (%) 5/5 100 Huy n d ch 0/3 RHDV v i 5/5 100 HA = 1/2560, 0/3 ml/con 5/5 100 0/3 Ch ng v c xin công/li u (ml/con) công TN 25 - 30oC 1, 2, ngày Li u TN nhi t 1 39 t t t K t qu nhi t b ng 4.9 cho th y: t t c th 25 - 30oC 1, 2, ngày c gây mi n d ch b ng v c xin u c b o h t t sau công virus cư ng c ngày th 21 sau tiêm v c xin, th s ng kh e m nh bi u hi n b t thư ng Trong ó 100% th i ch ng ch t v i nh ng tri u ch ng b nh tích c trưng c a b nh xu t huy t th Như v y v c xin xu t huy t th công ty Navetco s n xu t nhi t phòng 25 - 30oC 1, ngày v n hi u l c b o h 100% th công virus cư ng c 40 Chương K T LU N VÀ Qua th i gian th c hi n NGH tài “KI M TRA AN TOÀN, HI U L C VÀ DÀI MI N D CH C A V C XIN VÔ HO T XU T HUY T TH ” t i công ty thu c thú y Trung Ương Navetco Chúng ti n hành ki m tra v c xin xu t huy t th công ty Navetco s n xu t có nh ng k t lu n - ngh sau: 5.1 K T LU N lô v c xin xu t huy t th t tiêu chu n v vô trùng, an toàn hi u l c dài mi n d ch c a v c xin xu t huy t th kéo dài nh t tháng - 8oC tháng tháng v n hi u l c b o h t V c xin b o qu n 80 - 100% th sau công virus cư ng V c xin c phòng 25 - 30oC 1, ngày v n hi u l c nhi t b o h 100% th sau công virus cư ng 5.2 c NGH Do th i gian th c t p có h n nên thí nghi m ch ti n hành t i phịng thí nghi m c a công ty thu c Thú y Trung Ương Navetco, chưa có i u ki n th nghi m th c a, ngh : Th nghi m v c xin th c Ti p t c ki m tra a dài mi n d ch c a v c xin xu t huy t th t tháng tr lên Ti p t c ki m tra th i gian b o qu n c a v c xin xu t huy t th - 8oC 9, 12 tháng lâu n a Ti p t c ki m tra hi u l c c a v c xin xu t huy t th sau b o qu n phòng (25 - 30oC) t ngày tr lên 41 nhi t TÀI LI U THAM KH O Ti ng Vi t Tr n Th Chính, 2007, chương IV - t bào B áp ng mi n d ch d ch th , mi n d ch h c, nhà xu t b n y h c, Trư ng i H c Y Hà N i Tr n Xuân H nh cs, 2007 S n xu t th nghi m vacxin vơ ho t phịng b nh xu t huy t cho th T p chí khoa h c k thu t thú y - t p XIV, s - 2007, tr 42 - 49 Lê Văn Hùng, 2002 Giáo trình mi n d ch h c thú y T sách Trư ng Lâm Tp.HCM i H c Nông Lâm Th Thu Hương, 2006 Bài gi ng mi n d ch h c thú y T sách Trư ng Nông Lâm Tp.HCM iH c Tr n Th Liên cs, 2005 Nghiên c u s n xu t th nghi m vacxin vơ ho t phịng b nh xu t huy t truy n nhi m th T p chí khoa h c k thu t thú y t p XII, s - 2005, tr 14 - 21 Ph m Thành Long Phương Song Liên, 2004 Phát hi n virus gây ch t c p tính cho àn th sinh s n Trung tâm nghiên c u dê th Sơn Tây T p chí khoa h c k thu t thú y - t p XI, s - 2004, tr 95 - 96 Lê Văn T o, 2006 Vacxin s d ng vacxin phòng b nh h c k thu t thú y - t p XIII, s - 2006, tr 73 - 82 ng v t T p chí khoa Nguy n Như Thanh, Phùng Qu c Chư ng, 2006 Phương pháp th c hành vi sinh v t thú y Nhà xu t b n Nông Nghi p, Hà N i, 223 trang Tô Long Thành, 2006 Các lo i áp ng mi n d ch T p chí khoa h c k thu t thú y - t p XIII, s - 2006, tr 67 - 81 Nư c 11 Abubakr, M.I, 2006 Maladie hémorragique virale du lapin au Bahaïn, 58 (4): 217 219 12 Mary Lou Berninger *, Carol House, 1995 Serologic comparison of four isolates of rabbit hemorrhagic disease virus Veterinary Microbiology, 47, p 157 - 165 13 Stephane Bertagnoli cs, 1996 Protection against myxomatosis and rabbit viral hemorrhagic disease with recombinant myxoma viruses expressing rabbit hemorrhagic disease virus capsid protein, p 5061 - 5066 42 14 Boucher, S cs, 2005 Etude du portage hépatique du virus RHVD chez des lapereaux de 35 et 57 jours issus de mères mortes de VHD avant le sevrage 11èmes Journées de la Recherche Cunicole, 29-30 novembre 2005, Paris 15 Cooke, B.D, 2002 Maladie hémorragique du lapin: épidémiologie de terrain et gestions des populations sauvages de lapins Rev sci tech Off int Epiz., 2002, 21 (2), p 347 - 358 16 Laurent Fischer cs, 1997 A recombinant canarypox virus protects rabbits against a lethal rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) challenge Vaccine, 15, p 90 - 96 17 Lavazza A, 1996 Serological evaluation of the immunity induced in commercial rabbit by vaccination for myxomatosis and RHD 18 Michael T McIntosh cs, 2007 A pandemic strain of calicivirus threatens rabbit industries in the Americas, Virology Journal 2007, 4:96 19 OIE, 2000 Maladie hémorragique du lapin, chương 2.8.3, tr 1045 - 1058 20 Smid B, L.Valizek, L.Rodak, J.Stepanek and E.Jurak, 1991 Rabbit haemorrhagic disease: An investigation of some properties of the virus and evaluation of an inactivated vaccine Veterinary Microbiology, Academia Sinica, Wuhan 430071, China 21 Song Bao-Yun, Luo Yi-Shan and Zhao Lin, 2004 Studies on rabbit hemorrhagic disease virus Wuhan Institute of Virology, Academia Sinica, Wuhan 430071, China 22 Teifke.J.P, Reimann I and shirrmeier.H, 2002 Subacute liver necrosis after experimental infection with rabbit haemorrhagic disease virus J.comp.Path., 126, p 131 - 234 23 Beata Tokarz cs, 2004 The immunity during immunization with the viral haemorrhagic disease in rabbits Centr Eur J Immunol 2004; 29 (2): 58 - 62 24 P.J White cs, 2003 Epidemiology of rabbit haemorrhagic disease virus in the United Kingdom: evidence for seasonal transmission by both virulent and avirulent modes of infection, 132: 555 - 567 25 Xue J B., Chen X X., Xu W Z, 2001 Rabbit haemorrhagic disease in China Institue of veterinary, Jiangsu Academy of Agricultural Science 210014, Nanjing, China 43 PH L C Ph n ng HA Pha dung d ch PBS pH 6,4 - Dung d ch 1: NaH2PO4.2H2O NaCl Nư c c t - Dung d ch 2: Na2HPO4.12H2O NaCl Nư c c t Pha (DD1: DD2) = (1:3) o ch nh pH Chu n b kháng nguyên 7,8 g 8,8 g lít 20,14 g 8,77 g lít Thu th p gan, lách c a th ch t sau công cư ng c Cho gan, lách vào l ng m u ch a dung d ch PBS có ch a kháng sinh Penicillin 2000 UI/ml Streptomycin 2000 µg/ml, yên 30 phút X lý ho c b o qu n -70oC cho n c x lý Các bư c ti n hành x lý sau: - L y m t lư ng gan, lách - 10 g cho vào c i nghi n có s n kho ng 0,5 - g cát vô trùng Dùng chày nghi n nhuy n - Thêm t t ph n dung d ch PBS pH 6,4 (lư ng gan ph n) vào c i ti p t c nghi n nhuy n thành huy n d ch - ng nh t Chuy n huy n d ch vào ng ly tâm nh a 20 ml - -70oC t i thi u gi ho c qua êm - tan dư i vòi nư c, vortex - l n trình làm tan - Ly tâm 1500 vòng/phút 10 phút Hút d ch n i sang ng ly tâm nh a 20 ml khác - Ly tâm l nh 10000 vòng/phút 20 phút (máy ly tâm l nh ã t l nh 4oC nh t 30 phút) - Dùng pipette hút nh nhàng ph n d ch n i qua ng ch a m i ây huy n d ch c dùng tìm virus RHD qua ph n ng HA 44 Ph n ng HI L y máu b o qu n M c ích: l y huy t xác nh hi u giá kháng th HI Cách l y máu b o qu n: dùng syringe ml hay ml kho ng 1ml 30 phút tĩnh m ch tai c a th , l y m t lư ng máu nghiêng cho máu ông syringe kho ng syringe ch a máu vào t m 37oC 30 phút sau ó chuy n vào ngăn mát c a t l nh (4 - 8oC) nh t gi ho c qua êm Chi t l y huy t eppendorf 1,5 ml ly tâm 3000 vòng/phút phút ph n nư c bên eppendorf khác, x lý -20oC cho lo i b t p ch t Hút làm HI hay b o qu n n s d ng X lý huy t Huy t ã c ly tâm làm s ch c x lý ti p theo trư c th c hi n ph n ng HI xác nh hi u giá kháng th sau: 56oC 30 phút - Vô ho t huy t b ng cách - Rút l y 100 µl huy t (cịn l i b o qu n -20oC) chuy n vào eppendorf 1,5 ml Thêm 900 µl kaolin 25%, vortex (l c) 10 - 15 giây phòng 25oC nhi t 20 phút - Ly tâm 5000 vòng/phút 10 phút Hút d ch n i vào eppendorf khác - Thêm 1/10 lư ng h ng c u ngư i nhóm O n ng nhi t 50% L c nh tr n u phòng 25oC 20 phút - Ly tâm 1500 vòng/phút phút - Hút d ch n i vào eppendorf m i d ng cho ph n ng HI, có n ng ây huy t ã c x lý xong s 1/10 X lý h ng c u ngư i nhóm máu O Máu ngư i c khoa huy t h c b nh vi n Ch R y xác nh ch a h ng c u ngư i nhóm máu O c cung c p q trình thí nghi m Máu l y v c r a l n b ng PBS pH 6,4 (t l máu : PBS = 1:2), m i l n ly tâm 2000 vòng/phút - 10 phút, sau m i l n ly tâm hút b d ch n i, thêm PBS m i r a ti p Cu i thêm PBS pH 6,4 b ng lư ng máu ban 4oC Khi s d ng pha thành n ng c n thi t 45 u, b o qu n Ki m tra hi u l c lô v c xin One-way ANOVA: logndHGKT versus Lo Source Lo Error Total DF 12 14 SS 0.1450 1.0874 1.2324 S = 0.3010 Level MS 0.0725 0.0906 N 5 R-Sq = 11.76% Mean 1.6021 1.7225 1.8429 Ki m tra StDev 0.3010 0.2692 0.3298 F 0.80 P 0.472 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( -* -) ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+1.50 1.75 2.00 2.25 dài mi n d ch One-way ANOVA: logndHGKT versus thang Source thang Error Total DF S = 0.3982 SS 1.305 1.269 2.574 Level MS 1.305 0.159 N 5 R-Sq = 50.70% Mean 1.6623 2.3847 StDev 0.2519 0.5037 F 8.23 P 0.021 R-Sq(adj) = 44.54% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 1.60 2.00 2.40 2.80 One-way ANOVA: logndHGKT versus thang Source thang Error Total DF S = 0.3157 SS 3.2713 0.7974 4.0688 Level MS 3.2713 0.0997 N 5 R-Sq = 80.40% Mean 1.6623 2.8062 StDev 0.2519 0.3687 F 32.82 P 0.000 R-Sq(adj) = 77.95% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -1.50 2.00 2.50 3.00 One-way ANOVA: logndHGKT versus thang Source thang Error Total DF S = 0.3687 SS 2.320 1.087 3.407 MS 2.320 0.136 R-Sq = 68.09% F 17.07 P 0.003 R-Sq(adj) = 64.10% 46 Level N 5 Mean 1.6623 2.6256 StDev 0.2519 0.4565 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ 1.50 2.00 2.50 3.00 Ki m tra hi u l c v c xin b o qu n - 8oC tháng One-way ANOVA: logndHGKT versus thang Source thang Error Total DF S = 0.1904 SS 0.0816 0.2900 0.3715 Level MS 0.0816 0.0362 N 5 R-Sq = 21.95% Mean 1.9031 1.7225 StDev 0.2129 0.1649 F 2.25 P 0.172 R-Sq(adj) = 12.20% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( * ) ( * ) + -+ -+ -+1.65 1.80 1.95 2.10 Ki m tra hi u l c v c xin 25 - 30oC 1, 2, ngày One-way ANOVA: logndHGKT versus Lo Source Lo Error Total DF 12 14 S = 0.3562 SS 0.085 1.522 1.607 Level N 5 MS 0.042 0.127 R-Sq = 5.26% Mean 1.8429 1.7225 1.6623 StDev 0.3925 0.3432 0.3298 F 0.33 P 0.723 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( -* -) ( -* -) ( * -) -+ -+ -+ -+-1.50 1.75 2.00 2.25 47 ... Chương K T QU VÀ TH O LU N 4.1 K T QU KI M TRA VƠ TRÙNG, AN TỒN VÀ HI U L C C A LÔ V C XIN XU T HUY T TH 4.1.1 K t qu ki m tra vô trùng lô v c xin xu t huy t th sau s n xu t, c ki m tra vô trùng môi... y lô v c xin xu t huy t th lô v c xin ã t tiêu chu n vô trùng t tiêu chu n v vô trùng Chúng dùng ti n hành ki m tra an toàn 4.1.2 K t qu ki m tra an tồn Chúng tơi ti n hành ki m tra an tồn c... c xin sau s n xu t c ki m tra vô trùng môi trư ng ki m tra như: th ch máu, th ch n m, mơi trư ng y m khí nư c th t 50 ml V c xin ch dùng ki m tra an toàn hi u l c c t tiêu chu n v ki m tra vô