Bài thí nghiệm số 1 xác định hoạt độ alpha amylase theo phương pháp wohlgemuth

BẢNG PHÂN CÔNG NHIỆM VỤ STT THÀNH VIÊN Đặng Thị Phương Trinh Phan Nguyễn Ngọc Vi MSSV 21116261 21116272 Nguyễn Thị Tường Vy Phan Thị Kiều Xuân 21116277 21116283 NHIỆM VỤ Báo cáo + Tổng hợp báo cáo Báo cáo +Word 4+ Excel Báo cáo + Word + Excel Báo cáo TỶ LỆ HOÀN THÀNH 100% 100% 100% 100% MỤC LỤC BÀI THÍ NGHIỆM SỐ 1: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ALPHA AMYLASE THEO PHƯƠNG PHÁP WOHLGEMUTH 1 Tổng quan 1 Giới thiệu enzyme 1.2 Cơ chế xúc tác – phản ứng 1.3 Mục tiêu thí nghiệm 1.4 Phương pháp thí nghiệm 2 Quy trình tiến hành 2.1 Nguyên liệu – Dụng cụ 2.2 Pha hóa chất 2.3 Cách tiến hành 3 Kết : 3.1 Kết thí nghiệm 3.2 Cơng thức tính: 10 3.3 Xử lý số liệu 11 Bàn luận 12 4.1 Bàn luận kết 12 4.2 Các nguyên nhân gây ảnh hưởng kết 15 4.3 Phương pháp giảm thiểu sai số 16 Kết luận 17 TÀI LIỆU THAM KHẢO 18 BÀI THÍ NGHIỆM SỐ 2: KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ LIPASE 19 Mục tiêu nguyên tắc thí nghiệm 19 1.1 Mục tiêu thí nghiệm 19 1.2 Giới thiệu enzyme lipase 19 1.3 Nguyên tắc chung 20 Chuẩn bị thí nghiệm 20 2.1 Dụng cụ 20 2.2 Thiết bị 20 2.2 Hóa chất 21 Cách tiến hành thí nghiệm 21 3.1 Cách tiến hành thí nghiệm 21 3.2 Giải thích quy trình 22 3.3 Những lưu ý thực thí nghiệm 23 Kết thí nghiệm 24 Tính toán kết 24 Bàn luận kết 25 6.1 Bàn luận kết 25 6.2 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết 26 6.3 Biện pháp khắc phục 26 Kết luận 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 BÁO CÁO THÍ NGHIỆM BÀI 3: KHẢO SÁT HOẠT ĐỘ 28 INVERTASE 28 Tổng quan invertase 28 1.1 Mục đích thí nghiệm 29 1.2 Nguyên tắc 30 Dụng cụ hóa chất 30 2.1 Dụng cụ 30 2.2 Hóa chất 31 Cách tiến hành 31 3.1 Điều chế dung dịch invertase 31 3.2 Sơ đồ quy trình 33 Kết thí nghiệm 37 4.1 Kết thí nghiệm xác định hoạt độ invertase từ men bánh mì thể bảng sau 37 4.2 Tính tốn kết 38 Bàn luận 40 5.1 Nhận xét 40 5.2 Các yếu tố dẫn đến sai số trình tiến hành thí nghiệm 41 5.3 Giảm thiểu sai số 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 BÀI THÍ NGHIỆM SỐ 4: KHẢO SÁT ĐỘNG HỌC VÀ XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ENZYME UREASE 43 Tổng quan: 43 1.1 Giới thiệu enzyme 43 1.2 Cơ chế xúc tác – phản ứng 43 1.3 Mục đích thí nghiệm 44 Dụng cụ hoá chất: 44 2.1 Dụng cụ: 44 2.2 Pha hóa chất 44 Cách tiến hành 45 3.1 Chuẩn bị dịch chiết urease: 45 3.2 Tiến hành khảo sát động học 45 3.3 Tiến hành khảo sát hoạt độ 47 Kết quả: 49 4.1 Khảo sát động học 49 4.2 Xác định hoạt độ: 55 Bàn luận 56 5.1 Vai trị hố chất: 56 5.2 Khảo sát động học: 57 5.3 Xác định hoạt độ: 58 5.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả: 59 5.5 Biện pháp khắc phục 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 DANH MỤC HÌNH Hình 1 Kết thí nghiệm khảo sát enzyme α-amylase với dung dịch NaCl 0,5% 30 phút Hình So màu ống nghiệm 11 .9 Hình Kết thí nghiệm khảo sát enzyme α-amylase với dung dịch NaCl 1% 30 phút Hình So màu ống nghiệm 11 .10 Hình Phản ứng thuỷ phân lipid thành acid béo xúc tác lipase 20 Hình 2 Sơ đị khối cách tiến hành thí nghiệm khảo sát hoạt độ lipase 22 Hình Cơ chế hoạt động enzyme invertase 28 Hình Enzyme invertase 29 Hình 3 Sơ đồ khối chiết dịch invertase từ men bánh mì 32 Hình Dịch chiết invertase suốt thu sau lần lọc 33 Hình Sơ đồ cách tiến hành khảo sát hoạt độ invertase 34 Hình Bình tam giác sau cho 5ml iodine vào .36 Hình Bình tam giác sau cho 7,5ml NaOH 0,1N 36 Hình Hình ảnh trước chuẩn dộ (bên trái) sau chuẩn độ (bên phải) 38 Hình Sơ đồ tiến hành khảo sát động học 46 Hình Sơ đồ khảo sát hoạt độ .48 Hình Khảo sát động học enzyme urease điều kiện nhiệt độ 300C 49 Hình 4 Biểu đồ biểu diễn biến thiên 1/V theo 1/[S] 300C .51 Hình Dung dịch 400C sau chuẩn độ 52 Hình Biểu diễn biến thiên 1/V theo 1/[S] 400C 54 Hình Biểu đồ biểu diễn lượng chất bị thủy phân theo nồng độ chất ban đầu mốc nhiệt độ 55 Hình Dung dịch sau chuẩn độ .55 DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Màu ống nghiệm khảo sát enzyme α-amylase với dung dịch NaCl 0,5% 30 phút Bảng Màu ống nghiệm khảo sát enzyme α-amylase với dung dịch NaCl 1% 30 phút 10 Bảng Chỉ số pH trước chuẩn độ 24 Bảng 2 Thể tích NaOH dùng để chuẩn độ pH sau chuẩn độ 24 Bảng Chuẩn bị dãy ống nghiệm khảo sát hoạt độ invertase .33 Bảng Kết qủa thí nghiệm xác định hoạt độ invertase 37 Bảng 3 Số liệu tính tốn kết 39 Bảng Khảo sát động học enzyme urease điều kiện nhiệt độ 300C 50 Bảng Kết khảo sát động học 300C 50 Bảng Khảo sát động học ezyme urease điều kiện 400C 52 Bảng 4 Kết khảo sát động học 400C 53 Bảng Kết thu sau chuẩn độ 56 BÀI THÍ NGHIỆM SỐ 1: XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ ALPHA AMYLASE THEO PHƯƠNG PHÁP WOHLGEMUTH Tổng quan 1 Giới thiệu enzyme Alpha-amylase (α-amylase) enzym (EC 3.2.1.1) thủy phân liên kết alpha polysaccharid lớn, chẳng hạn tinh bột glycogen, tạo chuỗi ngắn chúng, dextrin maltose [1] Đây dạng amylase tìm thấy người động vật có vú khác Nó có hạt giống mà sử dụng tinh bột dạng lượng dự trữ, chất tiết nhiều lồi nấm α-amylase có nhiều loại hạt nói chung đại mạch nói riêng Trong sinh lý người, tìm thấy nhiều mơ, amylase chủ yếu có dịch tụy nước bọt αamylase có nhiều loại hạt nói chung đại mạch nói riêng.[2] Mức độ α-amylase hạt lúa mì lúa mạch mạch nha lúa mạch thông số chất lượng quan trọng Mức độ cao enzyme lúa mì lúa mạch sử dụng dấu hiệu cho thấy nảy mầm trước thu hoạch [3] Trong đại mạch, cần có hàm lượng α-amylase cao để xúc tác q trình hịa tan khử tinh bột q trình nghiền sản xuất bia Amylases nói chung α-amylase nói riêng có vai trị quan trọng công nghiệp, công nghiệp thực phẩm Chúng sử dụng nhiều ngành công nghiệp sản xuất bia rượu, mạch nha bánh mì 1.2 Cơ chế xúc tác – phản ứng Enzyme có tác dụng xúc tác q trình thủy phân tinh bột có hạt thành đoạn dextrin ngắn, cung cấp chất dinh dưỡng cần thiết cho việc nảy mầm Sự thủy phân tinh bột α-amylase tóm lược thơng qua phương trình phản ứng sau: Điều kiện hoạt động tối ưu cho α-amylase pH từ 4,2 đến 5,7; anion chất hoạt hóa gồm: Chloride bromide (hiệu nhất), iodine (ít hiệu hơn), sulfate phosphate (kém hiệu nhất) Vì thí nghiệm sử dụng NaCl làm chất hoạt hóa cho thí nghiệm.[4] 1.3 Mục tiêu thí nghiệm Biết cách tính tốn khối lượng, thể tích pha chế hóa chất thí nghiệm Xác định hoạt độ α-amylase theo phương pháp Wohlgemuth để biết nồng độ enzyme thấp để thủy phân tinh bột thành dextrin Tìm hiểu thêm số ứng dụng enzyme đời sống thực tiễn 1.4 Phương pháp thí nghiệm Phương pháp Wohlgemuth dựa vào nguyên tắc tìm nồng độ enzyme thấp để thủy phân tinh bột thành dextrin Đơn vị Wohlgemuth lượng enzyme cần thiết để thủy phân hoàn toàn mg tinh bột đến dextrin sau 30 phút 37°C có Cl- làm chất hoạt hóa Dùng Iodine 0,3% để kiểm tra có mặt tinh bột, mẫu thí nghiệm cịn xuất phức chất màu tím xanh chứng tỏ enzyme alpha-amylase chưa thủy phân hết lượng tinh bột có mẫu Quy trình tiến hành 2.1 Nguyên liệu – Dụng cụ - 11 ống nghiệm - Pipet 1mL (4 cái) - Tủ ấm - Dung dịch NaCl 0,5% - Dung dịch hồ tinh bột 0,5% - Iodine 0,3% KI 3% [5]