THÔNG TIN TÀI LIỆU
i MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC CÁC BẢNG v DANH MỤC CÁC HÌNH vii DANH MỤC SƠ ĐỒ x MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI 1.2 THÀNH PHẦN HĨA HỌC TRONG THƠNG ĐỎ 12 1.3 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA THÔNG ĐỎ 19 1.4 TỔNG QUAN CÁC NGHIÊN CỨU VỀ CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP VÀ PHÂN TÍCH CÁC HỢP CHẤT TAXOID TỪ THƠNG ĐỎ 21 CHƯƠNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 33 2.2 DUNG MƠI, HĨA CHẤT 33 2.3 DỤNG CỤ, TRANG THIẾT BỊ 33 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP TAXOID TRONG LÁ THÔNG ĐỎ LÁ DÀI 46 3.2 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 69 3.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI CÁC TAXOID BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 87 CHƯƠNG BÀN LUẬN 103 ii 4.1 CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP, XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC VÀ ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG TAXOID TRONG LÁ THƠNG ĐỎ LÁ DÀI 103 4.2 THIẾT LẬP CHẤT ĐỐI CHIẾU 117 4.3 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI MỘT SỐ HỢP CHẤT TAXOID 118 TÍNH MỚI CỦA ĐỀ TÀI 124 KẾT LUẬN 125 KIẾN NGHỊ 127 DANH MỤC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 132 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu, chữ viết Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt tắt (M)Hz (Mega)Hertz ACN CĐC COSY Acetonitrile Chất đối chiếu Correlated Spectroscopy cs d cộng doublet Đỉnh đôi dd doublets of doublet Đỉnh đôi kép DCM Dichloromethan Distortionless Enhancement by DEPT EtOAc EtOH HMBC HPLC HSQC (Phổ) tương quan 1H – 1H Polarization Transfer Ethyl acetate Ethanol Heteronuclear Multiple Bond Correlation High Performance Liquid Sắc ký lỏng hiệu Chromatography Heteronuclear Single Quantum cao Correlation IR Infrared Hồng ngoại J L Coupling constant Liter Hằng số ghép Lít m MeOH Multiplet Methanol Đỉnh đa Medium Pressure Liquid Sắc ký lỏng áp suất trung Chromatography Mass Spectroscopy bình Khối phở MPLC MS iv Ký hiệu, chữ viết Từ nguyên Nghĩa tiếng Việt tắt NMR Nuclear Magnetic Resonance Cộng hưởng từ hạt nhân PDA Photo diode array Dãy diod quang PFP Pentafluorophenyl PE Petrolium ether Pđ PTN SKC Phân đoạn Phòng thí nghiệm Sắc ký cột SKĐ SKLM Sắc ký đờ Sắc ký lớp mỏng TLTK Tài liệu tham khảo TT Thuốc thử Tw1 Taxus wallichiana Tw2 Taxus wallichiana UV-Vis Ultraviolet Visible Ultra Performance Liquid Chromatography UPLC 10-DAB 10-deacetylbaccatin 10-DAT 10-deacetyltaxol Ether dầu hỏa Phân đoạn cao thông đỏ qua sắc ký cột Phân đoạn cao thông đỏ qua sắc ký cột Tử ngoại – Khả kiến Sắc ký lỏng siêu hiệu v DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Các hợp chất diterpen phân lập từ Taxus wallichiana 15 Bảng 1.2 Các hợp chất tinh dầu Taxus wallichiana Zucc 18 Bảng 1.3 Các phương pháp chiết xuất taxoid dung môi sử dụng 23 Bảng 1.4 Các phương pháp phân tích định lượng hợp chất taxoid 32 Bảng 2.1 Ký hiệu, thời gian địa điểm thu hái mẫu khảo sát 33 Bảng 3.1 Kết định tính thành phần hóa học dịch chiết 46 Bảng 3.2 Kết phân lập phân đoạn giàu taxoid sắc ký cột cổ điển 49 Bảng 3.3 Điều kiện sắc ký HPLC đánh giá độ tinh khiết tinh hợp chất (1) (2) 51 Bảng 3.4 Điều kiện sắc ký phân lập đánh giá độ tinh khiết hợp chất (3) 52 Bảng 3.5 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (1) taxinin B 55 Bảng 3.6 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (2) taxuspin F 58 Bảng 3.7 So sánh liệu phổ 1H-NMR C-NMR hợp chất (3) 10-deacetyl 13 taxinin B 62 Bảng 3.8 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (4) với taxuspin D 65 Bảng 3.9 So sánh liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất (5) với taxchinin B 68 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ tinh khiết hợp chất kỹ thuật HPLC 71 Bảng 3.11 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống phương pháp HPLC 71 Bảng 3.12 Kết khảo sát tính tuyến tính 74 Bảng 3.13 Kết khảo sát độ (n = 9) 77 Bảng 3.14 Dữ liệu phổ UV-Vis, MS điểm chảy, suất quay cực chất phân tích 79 Bảng 3.15 Dữ liệu phổ IR chất phân tích 79 Bảng 3.16 Khảo sát độ lặp lại taxinin B 80 Bảng 3.17 Khảo sát độ lặp lại taxuspin F 81 Bảng 3.18 Khảo sát độ lặp lại 10-deacetyl taxinin B 81 vi Bảng 3.19 Khảo sát độ lặp lại taxuspin D 82 Bảng 3.20 Kết kiểm tra độ đồng lô nguyên liệu chất đối chiếu 83 Bảng 3.21 Kết đánh giá phân tích thống kê ANOVA yếu tố 83 Bảng 3.22 Kết đánh giá liên PTN phân tích thống kê ANOVA yếu tố 84 Bảng 3.23 Xác định giá trị ấn định taxinin B 85 Bảng 3.24 Xác định giá trị ấn định taxuspin F 85 Bảng 3.25 Xác định giá trị ấn định 10-deacetyl taxinin B 86 Bảng 3.26 Xác định giá trị ấn định taxuspin D 86 Bảng 3.27 Chương trình rửa giải gradient định lượng đồng thời taxoid 92 Bảng 3.28 Kết khảo sát tính tuyến tính, giới hạn phát giới hạn định lượng 99 Bảng 3.29 Kết khảo sát tính tương thích hệ thống (%RSD) 99 Bảng 3.30 Kết khảo sát độ lặp lại độ xác trung gian (n = 6) 100 Bảng 3.31 Kết khảo sát độ (n = 9) 100 Bảng 3.32 Hàm lượng taxoid mẫu thử TW 101 Bảng 4.1 So sánh hệ số di chuyển Rf pic phân đoạn Tw1-3 khảo sát với hệ dung môi khai triển SKLM 108 vii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Thông đỏ dài mọc tự nhiên Hình 1.2 Thông đỏ dài trồng Hình 1.3 Vi phẫu Taxus caespitosa var latifolia Hình 1.4 Các dạng hạt Taxus sp Hình 1.5 Lá hạt Taxus contorta var contorta 10 Hình 1.6 Dạng Taxus contorta var mucronata có uốn cong, từ Bhutan 10 Hình 1.7 Taxus chinensis với hạt có đầu nhọn, từ Quý Châu, Trung Quốc 10 Hình 1.8 Cành Taxus chinensis núi Nga Mi, Tứ Xuyên, Trung Quốc 11 Hình 1.9 Cành Taxus wallichiana từ Khasia, Ấn Độ 11 Hình 1.10 Lá T wallichiana var yunnanensis, từ Vân Nam, Trung Quốc 11 Hình 1.11 Lá T wallichiana var wallichiana Đông Himalaya 11 Hình 1.12 Khung taxoid 13 Hình 1.13 Khung 6/8/6 hợp chất taxoid Thơng đỏ 14 Hình 1.14 Cấu trúc hợp chất taxoid có nitơ mạch nhánh C13 14 Hình 1.15 10,15-epoxy-11(151)-abeo-10-deacetylbaccatin III 16 Hình 1.16 Wallifoliol 16 Hình 3.1 Sắc ký đồ phân đoạn phân lập hợp chất sau triển khai cao MeOH 100% xử lý qua cột cổ điển Silica-gel 51 Hình 3.2 Tương quan HMBC COSY hợp chất (1) 56 Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất (1) 56 Hình 3.4 Tương quan HMBC COSY hợp chất (2) 59 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất (2) 59 Hình 3.6 Tương quan HMBC COSY hợp chất (3) 61 Hình 3.7 Cấu trúc hóa học hợp chất (3) 61 viii Hình 3.8 Tương quan HMBC COSY hợp chất (4) 64 Hình 3.9 Cấu trúc hợp chất (4) 64 Hình 3.10 Tương quan HMBC COSY hợp chất (5) 67 Hình 3.11 Cấu trúc hóa học hợp chất (5) 69 Hình 3.12 Sắc ký đồ SKLM kiểm tra độ tinh khiết hợp chất (1) 70 Hình 3.13 Sắc ký đồ mẫu trắng 72 Hình 3.14 Sắc kí đồ HPLC taxinin B (λ = 280 nm) 72 Hình 3.15 Sắc kí đồ HPLC taxuspin F (λ = 280 nm) 73 Hình 3.16 Sắc kí đồ HPLC 10-deacetyl taxinin B (λ = 280 nm) 73 Hình 3.17 Sắc kí đồ HPLC taxuspin D (λ = 280 nm) 74 Hình 3.18 Sắc kí đồ HPLC taxinin B 75 Hình 3.19 Sắc kí đồ HPLC 3D kiểm tra độ tinh khiết taxinin B 75 Hình 3.20 Độ tinh khiết sắc ký taxuspin F 75 Hình 3.21 Sắc kí đồ HPLC 3D kiểm tra độ tinh khiết taxuspin F 76 Hình 3.22 Sắc kí đồ HPLC 10-deacetyl taxinin B 76 Hình 3.23 Sắc kí đồ HPLC 3D kiểm tra độ tinh khiết 10-deacetyl taxinin B 76 Hình 3.24 Sắc kí đồ HPLC taxuspin D 77 Hình 3.25 Sắc kí đồ HPLC 3D kiểm tra độ tinh khiết taxuspin D 77 Hình 3.26 Phổ hấp thu UV taxuspin F 87 Hình 3.27 Phổ hấp thu UV paclitaxel 87 Hình 3.28 Phổ hấp thu UV 10-deacetyl taxinin B 88 Hình 3.29 Phổ hấp thu UV taxuspin D 88 Hình 3.30 Phổ hấp thu UV taxinin B 88 Hình 3.31 Sắc ký đồ khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid HPLC bước sóng 280 nm 89 Hình 3.32 Sắc ký đồ khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid HPLC bước sóng 227 nm 89 ix Hình 3.33 Sắc ký đồ HPLC khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid với hệ pha động ACN – H2O (70 : 30) (λ = 227 nm) 90 Hình 3.34 Sắc ký đồ HPLC khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid với hệ pha động ACN – H2O (60 : 40) (λ = 227 nm) 91 Hình 3.35 Sắc ký đồ HPLC khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid với hệ pha động ACN – H2O triển khai gradient bảng 3.27 92 Hình 3.36 Sắc ký đồ HPLC khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid tốc độ dòng 0,8 ml/phút (λ = 227 nm) 93 Hình 3.37 Sắc ký đồ HPLC khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid tốc độ dòng 1,2 ml/phút (λ = 227 nm) 93 Hình 3.38 Sắc ký đồ HPLC khảo sát điều kiện định lượng đồng thời 05 hợp chất taxoid tốc độ dòng ml/phút (λ = 227 nm) 94 Hình 3.39 Sắc ký đồ taxuspin F (λ = 280 nm) 95 Hình 3.40 Sắc ký đồ paclitaxel (λ = 227 nm) 95 Hình 3.41 Sắc ký đồ 10-deacetyl taxinin B (λ = 280 nm) 95 Hình 3.42 Sắc ký đồ taxuspin D (λ = 280 nm) 96 Hình 3.43 Sắc ký đồ taxinin B (λ = 280 nm) 96 Hình 3.44 Sắc ký đồ mẫu trắng (λ = 280 nm) 97 Hình 3.45 Sắc ký đồ mẫu chuẩn (λ = 227 nm) 97 Hình 3.46 Sắc ký đồ mẫu chuẩn (λ = 280 nm) 98 Hình 3.47 Sắc ký đồ mẫu thử (λ = 227 nm) 98 Hình 3.48 Sắc ký đồ mẫu thử TW 101 Hình 4.1 SKĐ khảo sát tốc độ dòng 40 ml/phút 50 ml/phút 109 Hình 4.2 Sắc ký đồ HPLC độ tinh khiết hợp chất (1) trước tinh chế 110 Hình 4.3 Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn bước sóng 227 nm 120 Hình 4.4 Sắc ký đồ HPLC mẫu chuẩn bước sóng 280 nm 121 Hình 5.1 Cấu trúc hóa học hợp chất taxoid phân lập 126 x DANH MỤC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1 Các nội dung phương pháp nghiên cứu 35 Sơ đồ 3.1 Quy trình chiết xuất taxoid thô từ Thông đỏ dài 48 Sơ đồ 3.2 Quy trình chiết tách phân lập hợp chất taxoid (1), (2) (3) 50 Sơ đồ 3.3 Quy trình chiết tách phân lập hợp chất taxoid (4) (5) 53 PL-89 PL-90 PL-91 PL-92 PL3- Thiết lập chất đối chiếu • Kiểm tra nguyên liệu 10-deacetyl taxinine B bằng phương pháp HPLC PL-93 PL-94 • Kiểm tra nguyên liệu taxinine B bằng phương pháp HPLC PL-95 PL-96 PL3.2- Phiếu phân tích PTN đạt GLP PL-97 PL-98 PL-99 PL4- Thẩm định quy trình định lượng đồng thời PL-100 PL-101 PL-102 PL-103
Ngày đăng: 17/04/2023, 16:19
Xem thêm: