Luận án tiến sĩ dược học nghiên cứu tác dụng và cơ chế hạ glucose máu của dịch ép thân cây chuối tiêu (musa x paradisiacal l ) trên thực nghiệm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ ĐÔNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG VÀ CƠ CHẾ HẠ GLUCOSE MÁU CỦA DỊCH ÉP THÂN CÂY CHUỐI TIÊU (MUSA X PARADISIACA L.) TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THNGUYNGUYÊNNỄN THỊ ĐÔNGỊ ĐÔNG NGUYỄN THỊ ĐÔNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG VÀ CƠ CHẾ HẠ GLUCOSE MÁU CỦA DỊCH ÉP THÂN CÂY CHUỐI TIÊU (MUSA X PARADISIACA L.) TRÊN THỰC NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH DƯỢC MÃ SỐ: 62720408 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phùng Thanh Hương GS.TS Nguyễn Hải Nam HÀ NỘI, NĂM 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả luận án Nguyễn Thị Đơng LỜI CẢM ƠN Trong suố t quá trình học tập và hoàn thành luận án, đã nhận được sự hướng dẫn, giúp đỡ quý báu của các nhà Khoa học, thầ y cô giáo, các anh chi ̣, các em, các bạn bè đồng nghiệp gia đình Với lòng kính trọng và biế t ơn sâu sắ c tơi xin được bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới PGS TS Phùng Thanh Hương, GS.TS Nguyễn Hải Nam, hai người Thầy tâm huyết, tận tình ln sát cánh bên quan tâm giúp đỡ động viên tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hòan thành luận án Lời cảm ơn tiếp theo, xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiê ̣u trường Trường Đại học Dược Hà Nội, Trường Cao đẳng Dược Trung ương Hải Dương, tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thày giáo, cô giáo, anh chị em kỹ thuật viên Bợ mơn Hóa sinh, Bộ môn Dược lực, Phòng Sau đại học Trường Đại Học Dược Hà Nợi, Bộ mơn Hóa dược Trường Cao đẳng Dược Trung ương Hải Dương, đã tạo mọi điề u kiê ̣n thuận lợi giúp đỡ quá trình học tập và hoàn thành luận án Trong q trình làm thực nghiệm Khoa Sinh hóa Huyết học, Khoa Giải phẫu bệnh- Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương Viện Hóa sinh biển- Viện Hàn lâm Khoa học Việt Nam, Khoa Hóa sinh Vi sinh, Đại học Hóa học Cơng nghệ Praha, Cộng hịa Czech Tôi nhận giúp đỡ điều kiện trang thiết bị, hóa chất kỹ thuật giúp tơi hồn thành luận án Xin bày tỏ lòng biết ơn tới chuyên gia,các Bác sĩ, Dược sĩ, anh chị em kỹ thuật viên quan Xin gửi lời cảm ơn tới bạn bè, các em sinh viên Trường Đại học Dược Hà Nội, anh chi ̣ em đồng nghiệp Trường Cao đẳng Dược Trung ương Hải Dương, động viên và giúp đỡ thời gian qua Lời cảm ơn cuối muốn giành tặng cho người thân gia đình đã ln ở bên cạnh đợng viên, giúp đỡ giành thời gian để học tập làm viê ̣c và hoàn thành luận án NCS Nguyễn Thị Đông NCS Nguyễn Thị Đông MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 ĐẠI CƯƠNG VỀ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 1.1.1 Định nghĩa, dịch tễ, phân loại đái tháo đường 1.1.1.1 Định nghĩa 1.1.1.2 Dịch tễ 1.1.1.3 Phân loại đái tháo đường 1.1.1.4 Tiêu chuẩ n chẩ n đoán 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh 1.1.2.1 Bệnh sinh đái tháo đường typ 1.1.2.2 Bệnh sinh đái tháo đường typ 1.2 CÁC CƠ CHẾ GÂY HẠ GLUCOSE MÁU 10 1.2.1 Tăng cường số lượng insulin nội sinh 10 1.2.1.1 Tăng cường số lượng insulin thông qua ức chế kênh KATP, tăng nồng độ calci nội bào 10 1.2.1.2 Tăng cường số lượng insulin thông qua incretin 12 1.2.1.3 Tăng cường số lượng insulin thông qua ức chế DPP-4 12 1.2.2 Tăng cường nhạy cảm mơ đích với insulin 14 1.2.2.1 Tăng cường nhạy cảm mơ đích với insulin thơng qua hoạt hóa AMPK 14 1.2.2.2 Tăng cường nhạy cảm mơ đích với insulin thơng qua receptor PPAR 15 1.2.2.3 Tăng cường nhạy cảm mơ đích với insulin thơng qua q trình truyền tín hiệu insulin 16 1.2.3 Tác dụng điều hịa, chuyển hóa tương tự insulin 17 1.2.3.1 Tác dụng tương tự insulin thông qua enzym 18 1.2.3.2 Tác dụng tương tự insulin thơng qua hoạt hóa GLUT4 19 1.2.4 Ức chế tiêu hóa carbohydrat 19 1.2.5 Các chế khác gây hạ glucose máu 20 1.3 CÁC MƠ HÌNH THỰC NGHIỆM TRONG NGHIÊN CỨU THUỐC ĐIỀU TRỊ ĐÁI THÁO ĐƯỜNG 21 1.3.1 Các mơ hình thực nghiệm in vivo 21 1.3.1.1 Mơ hình gây bệnh ĐTĐ typ 21 1.3.1.2 Mơ hình gây bệnh ĐTĐ typ 22 1.3.2 Các mơ hình thực nghiệm in vitro 24 1.3.2.1 Đánh giá tác động lên hoạt tính enzym tiêu hóa chuyển hóa glucid 24 1.3.2.2 Đánh giá khả tiết insulin tế bào β đảo tụy 25 1.3.2.3 Đánh giá mức độ nhạy cảm mơ đích với insulin 25 1.4 CÂY CHUỐI TIÊU 26 1.4.1 Vị trí phân loại đặc điểm thực vật 26 1.4.1.1 Vị trí phân loại 26 1.4.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 27 1.4.2 Bộ phận dùng 27 1.4.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý chuối tiêu (Musa x paradisiaca L.) 27 1.4.3.1 Nghiên cứu thành phần hoá học 28 1.4.3.2 Nghiên cứu tác dụng dược lý 29 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 32 2.1.1 Dược liệu nghiên cứu 32 2.1.2 Động vật thí nghiệm 32 2.1.3 Các dòng tế bào cho nghiên cứu in vitro 33 2.2 DỤNG CỤ, HÓA CHẤT NGHIÊN CỨU 33 2.2.1 Thiết bị, dụng cụ 33 2.2.2 Thuốc hóa chất nghiên cứu 34 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.3.1 Phương pháp điều chế mẫu nghiên cứu 38 2.3.1.1 Điều chế cắn toàn phần 38 2.3.1.2 Điều chế cắn phân đoạn 38 2.3.1.3 Phương pháp pha mẫu thử 38 2.3.2 Phương pháp đánh giá tác dụng hạ glucose máu thực nghiệm chuột 39 2.3.2.1.Trên chuột nhắt trắng tăng glucose máu thực nghiệm STZ liều 150 mg/kg 39 2.3.2.2 Trên chuột cống trắng ĐTĐ typ thực nghiệm 40 2.3.2.3 Trên khả dung nạp glucose chuột cống trắng ĐTĐ typ thực nghiệm 43 2.3.3 Các kỹ thuật định lượng hóa sinh thực nghiệm in vivo 44 2.3.3.1 Định lượng glucose máu 44 2.3.3.2 Định lượng insulin huyết 45 2.3.3.3 Định lượng cholesterol toàn phần huyết 46 2.3.3.4 Định lượng triglycerid huyết 47 2.3.4 Kỹ thuật xét nghiệm mô bệnh học 47 2.3.5 Phương pháp xác định hoạt độ enzym G6Pase gan (EC 3.1.3.9) 48 2.3.6 Phương pháp đánh giá khả ức chế enzym in vitro 49 2.3.6.1 Đánh giá khả ức chế enzym α-amylase (EC 3.2.1.1) 49 2.3.6.2 Đánh giá khả ức chế enzym α-glucosidase (EC 3.2.1.20) 51 2.3.6.3 Đánh giá khả ức chế protein tyrosin phosphatase 1B (PTP1B - EC 3.1.3.48) 52 2.3.7 Phương pháp đánh giá ảnh hưởng phosphoryl hóa AMPK IRS-1 53 2.3.8 Phương pháp đánh giá khả ức chế biệt hóa tế bào mơ mỡ 3T3-L1 56 2.3.9 Các phương pháp nghiên cứu thành phần hóa học cắn tồn phần thân chuối tiêu 57 2.3.9.1 Định tính nhóm chất hóa học 57 2.3.9.2 Phân lập chất 57 2.3.9.3 Xác định cấu trúc 57 2.3.10 Xử lý số liệu 58 CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 59 3.1 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM 59 3.1.1 Kết tác dụng hạ glucose máu cắn toàn phần 59 3.1.1.1 Tác dụng cắn toàn phần glucose máu chuột tiêm STZ liều 150mg/kg 59 3.1.1.2 Tác dụng cắn toàn phần glucose máu chuột ĐTĐ typ 60 3.1.1.3 Tác dụng cắn toàn phần khả dung nạp glucose chuột ĐTĐ typ 62 3.1.2 Kết tác dụng cắn phân đoạn 64 3.1.2.1 Tác dụng cắn phân đoạn glucose máu chuột tiêm STZ liều 150mg/kg 64 3.1.2.2 Tác dụng cắn phân đoạn chuột ĐTĐ typ 66 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC CỦA CẮN TỒN PHẦN THÂN CÂY CHUỐI TIÊU 68 3.2.1 Kết định tính nhóm chất 68 3.2.2 Kết phân lập hợp chất phân đoạn ethylacetat 69 3.2.2.1 Nhận dạng hợp chất (FE1C) 69 3.2.2.2 Nhận dạng hợp chất (FE6B) 71 3.2.2.3 Nhận dạng hợp chất (FE10A) 72 3.2.2.4 Nhận dạng chất (FE12A) 73 3.2.3 Kết phân lập hợp chất phân đoạn n-butanol 75 3.2.3.1 Nhận dạng hợp chất (FB2A) 76 3.3.3.2 Nhận dạng hợp chất (FB2B) 78 3.3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CƠ CHẾ HẠ GLUCOSE MÁU CỦA CẮN TOÀN PHẦN THÂN CÂY CHUỐI TIÊU 79 3.3.1 Kết mơ hình thực nghiệm in vivo 79 3.3.1.1 Nồng độ insulin huyết 79 3.3.1.2 Tình trạng mơ tụy nội tiết tế bào β chuột ĐTĐ typ 84 3.3.1.3 Nồng độ lipid huyết 85 3.3.1.4 Kết hoạt độ enzym G6Pase gan 86 3.3.2 Kết mơ hình thực nghiệm in vitro 89 3.3.2.1 Tác dụng ức chế enzym α-amylase 89 3.3.2.2 Tác dụng ức chế enzym α-glucosidase 90 3.3.2.3 Tác dụng ức chế enzym PTP1B 92 3.3.2.4 Tác dụng ức chế phosphoryl hóa IRS-1(Ser 307) dịng tế bào vân chuột nhắt C2C12 93 3.3.2.5 Tác dụng hoạt hoá AMPK dòng tế bào vân nguyên phát chuột nhắt C2C12 95 3.3.2.6 Tác dụng biệt hóa tế bào 3T3-L1 98 CHƯƠNG IV BÀN LUẬN 99 4.1.1 Lựa chọn liều thử nghiệm 99 4.1.2 Tác dụng cắn toàn phần 100 4.1.2.2.Trên chuột tiêm STZ liều 150 mg/kg 100 4.1.2.2 Trên chuột cống ĐTĐ typ 102 4.1.2.3 Trên khả dung nạp glucose chuột cống ĐTĐ typ 104 4.1.3 Tác dụng cắn phân đoạn 105 4.2 VỀ VIỆC PHÂN LẬP CHẤT TRONG PHÂN ĐOẠN CÓ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU CHIẾM ƯU THẾ 106 4.3 VỀ CƠ CHẾ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU CỦA THÂN CÂY CHUỐI TIÊU 111 4.3.1 Cơ chế hạ glucose máu mức độ thể 112 4.3.1.1 Về tác dụng nồng độ insulin huyết 112 4.3.1.2 Về tác dụng tăng dung nạp glucose test dung nạp glucose đường uống 114 4.3.1.3 Về tác dụng nồng độ lipid huyết 114 4.3.2 Cơ chế hạ glucose máu mức độ tế bào, phân tử 116 Thích nghi uống nước/chế phẩm thử hàng ngày ngừng uống thuốc -5 42 28 Ngày Theo dõi hàng ngày cân hàng tuần Cân, lấy máu xét nghiệm, tim, gan, thận, lách Cân, lấy máu xét nghiệm, tim, gan, thận, lách Hình 6.2 Qui trình xác định độc tính bán trường diễn 28 ngày 6.2.3.2 Thơng số đánh giá - Tình trạng tồn thân: hàng ngày theo dõi biểu của động vật thực nghiệm (tình trạng da, lơng, mắt, tiết dịch mũi, miệng, hô hấp, phân, nước tiểu…), hoạt động tự nhiên, tư thế, hành vi, tiêu thụ thức ăn, nước uống Hàng tuần cân động vật thực nghiệm để theo dõi thay đổi khối lượng thể đồng thời điều chỉnh lượng thuốc uống - Các thông số huyết học: số lượng hồng cầu, nồng độ hemoglobin, tỷ lệ hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng tiểu cầu, số lượng bạch cầu - Các thông số hóa sinh: hoạt độ transaminase huyết (AST, ALT), glucose, cholesterol toàn phần, protein toàn phần creatinin huyết - Đại thể quan: quan sát cảm quan quan tim, gan, thận, lách Cân khối lượng quan tính tỷ lệ so với khối lượng tồn thể - Mơ bệnh học: sau giết động vật thực nghiệm, mẫu gan thận cố định dung dịch Carnoy, vùi parafin, cắt lát mỏng – µm, nhuộm hematoxylin – eosin quan sát kính hiển vi quang học để đánh giá cấu trúc hình thái vi thể gan, thận Tiêu thực Bộ môn Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Hà Nội Kết đánh giá PGS TS Lê Trung Thọ, Bộ môn Giải phẫu bệnh, Trường Đại học Y Hà Nội 6.2.4 Kết nghiên cứu 6.2.4.1 Ảnh hưởng chế phẩm cắn chuối tiêu đến tình trạng toàn thân chuột nhắt trắng - Ảnh hưởng chế phẩm cắn chuối tiêu đến tình trạng tồn thân chuột nhắt trắng Trong suốt trình nghiên cứu, chuột lơ ăn uống, hoạt động bình thường, phản xạ nhanh, mắt sáng, không tiết chất nhày mũi, miệng, lơng mượt, phân khơ, nước tiểu khơng có biểu bất thường - Ảnh hưởng chế phẩm cắn chuối tiêu đến tăng trưởng khối lượng thể chuột nhắt trắng Trong suốt trình nghiên cứu, chuột lơ ăn uống, hoạt độngbình thường, phản xạ nhanh, mắt sáng, không tiết chất nhày mũi, miệng, lơng mượt, phân khơ, nước tiểu khơng có biểu bất thường Chuột nhắt trắng theo dõi cân nặng hàng tuần suốt trình thực nghiệm.Kết thể hình 6.3 6.4 Hình 6.3 Khối lượng thể chuột nhắt đực dùng chế phẩm cắn chuối tiêu trình nghiên cứu Hình 6.4 Khối lượng thể chuột nhắt dùng chế phẩm cắn chuối tiêu trình nghiên cứu Nhận xét: Trong suốt 28 ngày nghiên cứu, cân nặng chuột nhắt giống tăng lên lơ chứng lơ thử Khơng có khác biệt tăng trưởng khối lượng thể lô chứng với lô thử tất thời điểm nghiên cứu 6.2.4.2 Ảnh hưởng chế phẩm Cắn chuối tiêu đến thông số huyết học chuột nhắt trắng Ảnh hưởng chế phẩm cắn chuối tiêutrên chức tạo máu chuột nhắt trắng thể qua thông số: số lượng bạch cầu (WBC), số lượng hồng cầu (RBC), nồng độ hemoglobin (HGB), tỷ lệ hematocrit (HCT), thể tích trung bình hồng cầu (MCV) số lượng tiểu cầu (PLT) Kết trình bày bảng 6.2 Bảng 6.2 Các thơng số huyết học chuột nhắt trắng dùng cắn chuối tiêu liều lặp lại 28 ngày Giống Liều dùng n (mg/kg) Đực Cái WBC RBC HGB HCT MCV PLT (109/L) (1012/L) (g/dL) (%) (fL) (109/L) Chứng 9,2±0,4 6,8±0,2 12,7±0,4 27,7±1,0 40,8±0,6 401,4±63,2 1000 11,3±0,8 6,9±0,2 11,7±0,4 28,9±1,0 41,9±0,4 505,0±27,5 3000 8,6±1,1 6,4±0,5 11,8±0,6 26,2±2,8 40,4±1,8 444,1±53,8 Chứng 7,1±0,5 6,9±0,2 12,7±0,3 26,7±0,9 39,8±0,2 476,9±57,4 1000 8,9±0,9 6,7±0,2 12,7±0,3 26,7±1,3 39,7±1,0 556,9±94,5 3000 8,0±0,8 6,9±0,3 11,8±0,6 28,4±1,9 41,3±0,8 433,6±79,1 (Số liệu biểu diễn dạng M±SD) Nhận xét: Tại thời điểm sau uống thuốc 28 ngày, khơng có khác biệt thơng số huyết học lô dùng chế phẩm thử cắn chuối tiêu so với lô chứng (p >0,05) 6.2.4.3 Ảnh hưởng chế phẩm Cắn chuối tiêu đến thông số sinh hóa chuột nhắt trắng Ảnh hưởng chế phẩm cắn chuối tiêu lên thơng số sinh hóa chuột thể qua thông số AST, ALT, cholesterol toàn phần, protein toàn phần, creatinin, glucose albumin huyết Kết trình bày bảng 6.3 Bảng 6.3 Các thơng số hóa sinh chuột nhắt trắng dùng Cắn chuối tiêu liều lặp lại 28 ngày Giống Đực Cái Liều dùng (mg/kg) n AST ALT Creatinin Protein Cholesterol Glucose (U/L) (U/L) (µmol/L) (g/L) (mmol/L) (mmol/L) Chứng 145,27±10,37 55,21±3,26 57,78±3,60 93,75±2,41 2,64 ±0,09 6,94±0,29 1000 152,25±17,46 55,50±5,37 55,84±4,42 88,95±2,97 2,55±0,12 6,28±0,28 3000 105,25±17,08 55,98±6,86 55,85±7,58 85,95±2,76 2,29±0,18 5,93±0,28* Chứng 104,59±10,89 45,33± 4,35 67,26±5,12 98,78±1,75 2,11±0,08 6,56±0,36 1000 110,68±8,78 57,19±4,88 56,43±8,27 96,10±2,12 2,40±0,14 6,83±0,76 3000 126,63±12,67 47,19±3,36 67,44±5,14 90,99±3,39 2,04±0,25 6,18±0,35 (Số liệu biểu diễn dạng M±SD, *, p 0,05) Riêng lô đực uống cắn chuối tiêu liều cao 3000 mg/kg liên tục 28 ngày, nồng độ glucose giảm so với lô chứng (p>0,05) 6.2.4.4 Thay đổi mô bệnh học chuột nhắt trắng Để đánh giá ảnh hưởng chế phẩm thử đến quan thời điểm sau uống thuốc 28 ngày, toàn động vật thực nghiệm mổ để quan sát đại thể quan Lấy ngẫu nhiên chuột lô để làm tiêu vi thể gan thận Về đại thể Ảnh hưởng chế phẩm Cắn chuối tiêu lên thay đổi tỷ lệ khối lượng quan so với khối lượng thể trình bày bảng 6.4 Bảng 6.4 Tỷ lệ khối lượng quan so với khối lượng thể chuột nhắt trắng dùng cắn chuối tiêu liều lặp lại 28 ngày Giống Đực Cái Liều dùng (mg/kg) Tỷ lệ khối lượng quan so với khối lượng thể (%) n Tim Gan Lách Phổi Thận Chứng 0,62±0,05 5,85±0,20 0,57±0,04 0,58±0,05 1,24±0,03 1000 0,61±0,04 5,68±0,24 0,65±0,03 0,65± 0,02 1,19±0,05 3000 0,55±0,04 5,15±0,28 0,54±0,03 0,58±0,06 1,14±0,08 Chứng 0,54 ±0,03 5,11±0,11 0,58±0,04 0,71±0,04 1,05±0,05 1000 0,60±0,04 5,02±0,26 0,52±0,04 0,75±0,05 1,11±0,05 3000 0,58±0,03 5,32±0,32 0,62±0,07 0,73±0,06 1,06±0,06 (Số liệu biểu diễn dạng M±SD) Nhận xét: Tại thời điểm sau dùng liều lặp lại 28 ngày, tỷ lệ khối lượng quan tim, gan, thận, phổi, lách, thượng thận/khối lượng thể động vật lô dùng chế phẩm thử lơ chứng nhìn chung khơng có khác biệt Về vi thể Tiêu vi thể gan, thận thực đánh giá Bộ môn Giải phẫu bệnhTrường ĐH Y Hà Nội Kết cho thấy, sau 28 ngày dùng thuốc liên tục, cấu trúc vi thể gan thận chuột lô dùng chế phẩm thử nhìn chung khơng khác biệt nhiều so với lơ chứng tương ứng Hình ảnh cấu trúc vi thể gan thận đại diện lơ thể hình 6.5; 6.6; 6.7 6.8 Cấu trúc gan khơng bị xóa, nhận rõ tiểu thùy với tĩnh mạch trung tâm, khoảng cửa, bè gan xắp xếp hướng xuyên tâm Các tế bào gan có hình thái giới hạn bình thường, khơng có nhân lớn bất thường, khơng hoại tử Một số (khoảng 1-2%) tế bào gan thối hóa nhẹ (thối hóa nước, thối hóa hạt) Trong mơ gan khơng thấy xâm nhập tế bào viêm Khoảng cửa Lô chứng (Đực) không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Kết luận: Mô gan không thấy tổn thương Cấu trúc gan khơng bị xóa, nhận rõ tiểu thùy với tĩnh mạch trung tâm, khoảng cửa, bè gan xắp xếp hướng xun tâm Các tế bào gan có hình thái giới hạn bình thường, khơng có nhân lớn bất thường, khơng hoại tử Một số (khoảng 1-2%) tế bào gan thối hóa nhẹ (thối hóa nước, thối hóa hạt) Trong mô gan không thấy xâm nhập tế bào viêm Khoảng cửa Lô thử (Đực) 1.000 mg/kg không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Kết luận: Mô gan khơng thấy tổn thương Cấu trúc gan khơng bị xóa, nhận rõ tiểu thùy với tĩnh mạch trung tâm, khoảng cửa, bè gan xắp xếp hướng xuyên tâm Các tế bào gan có hình thái giới hạn bình thường, khơng có nhân lớn bất thường, khơng hoại tử Một số (khoảng 1-2%) tế bào gan thối hóa nhẹ (thối hóa nước, thối hóa hạt) Trong mơ gan không thấy xâm nhập tế bào viêm Khoảng cửa Lô thử (Đực) 3.000 mg/kg không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Kết luận: Mô gan không thấy tổn thương Hình 6.5 Hình ảnh mơ tả mảnh cắt từ mô gan chuột nhắt đực Gan: Cấu trúc gan khơng bị xóa, nhận rõ tiểu thùy với tĩnh mạch trung tâm, khoảng cửa, bè gan xắp xếp hướng xuyên tâm Các tế bào gan có hình thái giới hạn bình thường, khơng có nhân lớn bất thường, khơng hoại tử Một số (khoảng 1-2%) tế bào gan thối hóa nhẹ (thối hóa nước, thối hóa hạt) Trong mơ gan khơng thấy xâm nhập tế bào viêm Khoảng cửa không tăng sinh xơ, không xâm Lô chứng (Cái) nhập viêm Kết luận: Mô gan không thấy tổn thương Cấu trúc gan không bị xóa, nhận rõ tiểu thùy với tĩnh mạch trung tâm, khoảng cửa, bè gan xắp xếp hướng xuyên tâm Các tế bào gan có hình thái giới hạn bình thường, khơng có nhân lớn bất thường, khơng hoại tử Một số (khoảng 1-2%) tế bào gan thối hóa nhẹ (thối hóa nước, thối hóa hạt) Trong mô gan không thấy xâm nhập tế bào viêm Khoảng cửa Lô thử (cái) 1.000 mg/kg không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Kết luận: Mô gan không thấy tổn thương Cấu trúc gan khơng bị xóa, nhận rõ tiểu thùy với tĩnh mạch trung tâm, khoảng cửa, bè gan xắp xếp hướng xuyên tâm Các tế bào gan có hình thái giới hạn bình thường, khơng có nhân lớn bất thường, khơng hoại tử Một số (khoảng 1-2%) tế bào gan thối hóa nhẹ (thối hóa nước, thối hóa hạt) Trong mơ gan khơng thấy Lô thử (cái) 3.000 mg/kg xâm nhập tế bào viêm Khoảng cửa không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Kết luận: Mơ gan khơng thấy tổn thương Hình 6.6 Hình ảnh mơ tả mảnh cắt từ mô gan chuột nhắt Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái giới hạn bình thường, khơng thấy tăng sinh cuộn mao mạch cầu thận, màng đáy không dầy, khoang Bowman rõ, khơng bị hẹp Các ống thận có hình thái bình thường Tế bào ống thận khơng hoại tử Mô kẽ không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Các tế bào ống thận không Lô chứng (đực) lắng đọng glycogen, màng đáy ống thận không dầy Kết luận: Mô thận không thấy tổn thương Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái giới hạn bình thường, khơng thấy tăng sinh cuộn mao mạch cầu thận, màng đáy không dầy, khoang Bowman rõ, khơng bị hẹp Các ống thận có hình thái bình thường Tế bào ống thận khơng hoại tử Mô kẽ không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Các tế bào ống thận không lắng đọng glycogen, màng đáy ống Lô thử (đực) 1.000 mg/kg thận không dầy Kết luận: Mô thận không thấy tổn thương Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái giới hạn bình thường, khơng thấy tăng sinh cuộn mao mạch cầu thận, màng đáy không dầy, khoang Bowman rõ, không bị hẹp Các ống thận có hình thái bình thường Tế bào ống thận không hoại tử Mô kẽ không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Các tế bào ống thận không lắng đọng glycogen, màng đáy ống Lô thử (đực) 3.000 mg/kg thận không dầy Kết luận: Mô thận không thấy tổn thương Hình 6.7 Hình ảnh mơ tả mảnh cắt từ mô thận chuột nhắt đực Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái giới hạn bình thường, khơng thấy tăng sinh cuộn mao mạch cầu thận, màng đáy không dầy, khoang Bowman rõ, không bị hẹp Các ống thận có hình thái bình thường Tế bào ống thận khơng hoại tử Mô kẽ không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Các tế bào ống thận không lắng đọng glycogen, màng đáy ống thận không dầy Lô chứng (cái) Kết luận: Mô thận không thấy tổn thương Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái giới hạn bình thường, khơng thấy tăng sinh cuộn mao mạch cầu thận, màng đáy không dầy, khoang Bowman rõ, không bị hẹp Các ống thận có hình thái bình thường Tế bào ống thận không hoại tử Mô kẽ không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Các tế bào ống thận không lắng đọng glycogen, Lô thử (1.000 mg/kg) màng đáy ống thận không dầy Kết luận: Mô thận không thấy tổn thương Cấu trúc thận nhận rõ đơn vị thận Các cầu thận có hình thái giới hạn bình thường, không thấy tăng sinh cuộn mao mạch cầu thận, màng đáy không dầy, khoang Bowman rõ, không bị hẹp Các ống thận có hình thái bình thường Tế bào ống thận không hoại tử Mô kẽ không tăng sinh xơ, không xâm nhập viêm Các tế bào ống thận không lắng đọng glycogen, Lô thử (3.000 mg/kg) màng đáy ống thận không dầy Kết luận: Mô thận không thấy tổn thương Hình 6.8 Hình ảnh mơ tả mảnh cắt từ mô thận chuột nhắt đực Sau 28 ngày uống chế phẩm cắn chuối tiêuvới liều lên đến3000 mg/kg/ngày, thông số cân nặng, huyết học, hóa sinh, đại thể quan mơ bệnh học gan, thận chuột nhắt trắng khơng có khác biệt so với lô chứng tương ứng Theo qui định, nghiên cứu không cần thực tiếp giai đoạn theo dõi sau 14 ngày dừng chế phẩm thử 6.2.5 Kết luận Các kết nghiên cứu cho thấy, chế phẩm cắn chuối tiêu dấu hiệu độc tính dùng liều lặp lại 28 ngày chuột nhắt trắng với mức liều thử 1.000 mg/kg/ngày(liều tương đương liều thể tác dụng dược lý) 3.000 mg/kg/ngày (liều gấp lần liều thể tác dụng dược lý).Do không quan sát thấy tác dụng khơng muong muốn suốt q trình thử nghiệm, mức liều 3.000 mg/kgđược coi mức liều không quan sát thấy tác dụng không mong muốn liên quan đến việc dùng chế phẩm cắn chuối tiêu Nhìn chung, dùng với liều lặp lại 28 ngày, cắn chuối tiêu khơng thể độc tính chuột nhắt trắng THAM KHẢO ĐỘC TÍNH Tiếng Việt Bộ Y tế, Viện Kiểm nghiệm (2005), Dự thảo hướng dẫn thử độc tính thuốc, Viện Kiểm nghiệm Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, Nhà xuất Y học, Hà Nội Tiếng Anh OECD (2002), Test No 420: Acute Oral Toxicity - Fixed Dose Procedure, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, OECD Publishing, Paris.DOI: http://dx.doi.org/10.1787/9789264070943-en OECD (2002), Test No 423: Acute Oral toxicity - Acute Toxic Class Method, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, OECD Publishing, Paris.DOI: http://dx.doi.org/10.1787/9789264071001-en OECD (2008), Test No 425: Acute Oral Toxicity: Up-and-Down Procdure, OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4, OECD Publishing, Paris.DOI: http://dx.doi.org/10.1787/9789264071049-en Shayne C G (2002), Drug safetey evaluation, John Wiley & Sons, New York