BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM PHẠM VĂN THI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA THỦY CHÂM CHẾ PHẨM CHỨA NỌC ONG TRÊN MÔ HÌNH ĐỘNG VẬT GÂY VIÊM VÀ THOÁI HÓA KHỚP GỐI LUẬN VĂN[.]
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM PHẠM VĂN THI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA THỦY CHÂM CHẾ PHẨM CHỨA NỌC ONG TRÊN MƠ HÌNH ĐỘNG VẬT GÂY VIÊM VÀ THỐI HĨA KHỚP GỐI LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC HÀ NỘI - 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM PHẠM VĂN THI NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA THỦY CHÂM CHẾ PHẨM CHỨA NỌC ONG TRÊN MÔ HÌNH ĐỘNG VẬT GÂY VIÊM VÀ THỐI HĨA KHỚP GỐI LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Chuyên ngành: Y học cổ truyền Mã số: 8720115 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Lê Văn Quân TS Phạm Hồng Vân HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Sau năm học tập khóa cao học Học viện Y học cổ truyền Việt Nam, đến tơi hồn thành chƣơng trình học tập Với lịng biết ơn kính trọng tơi xin chân thành cám ơn: - Ban Giám hiệu, phòng Đào tạo Sau đại học Học viện Y Dƣợc học cổ truyền Việt Nam - Ban Giám đốc, Viện nghiên cứu Học viện Y Dƣợc học cổ truyền Việt Nam - Tập thể môn Sinh lý bệnh Học viện Qn Y giúp đỡ tơi tận tình để hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới ngƣời Thầy TS Lê Văn Quân TS Phạm Hồng Vân trực tiếp giúp đỡ, hƣớng dẫn, đóng góp nhiều ý kiến quý báu, tận tâm dìu dắt tơi bƣớc hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới tất Giáo sƣ, Phó giáo sƣ, Tiến sỹ Hội đồng: Là ngƣời thầy, Nhà khoa học dạy dỗ tơi suốt q trình học tập đóng góp cho tơi ý kiến q báu để tơi hồn thành bảo vệ thành cơng luận văn Cuối tơi xin dành tình cảm trân trọng cảm ơn gia đình, quan nơi tơi công tác, anh chị em, bạn bè ngƣời quan tâm giúp đỡ tơi có đƣợc thành công ngày hôm Hà Nội, ngày tháng Học viên Phạm Văn Thi năm 2019 LỜI CAM ÐOAN Tôi Phạm Văn Thi, học viên cao học khóa 10 Học viện Y Dƣợc học cổ truyền Việt Nam, chuyên ngành Y học cổ truyền, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực dƣới hƣớng dẫn Thầy TS Lê Văn Quân TS Phạm Hồng Vân Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác đƣợc công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, đƣợc xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trƣớc pháp luật cam kết Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Ngƣời viết cam đoan Phạm Văn Thi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CFA: complete Freund’s adjuvant NGF: Yếu tố phát triển thần kinh TGF beta: Yếu tố tăng trƣởng chuyển dạng beta MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình bệnh thối hóa khớp gối giới Error! Bookmark not defined 1.2 Sinh lý bệnh thối hóa khớp gối Error! Bookmark not defined 1.3 Các mơ hình thực nghiệm gây thối hóa khớp gối 1.3.1 Mơ hình thối hóa khớp ngun phát Error! Bookmark not defined 1.3.2 Mơ hình thối hóa khớp thứ phát Error! Bookmark not defined 1.4 Phƣơng pháp đánh giá đau vận động động vật thực nghiệm Error! Bookma 1.4.1 Phƣơng pháp sử dụng tập hành vi trụ quay Rotarod Error! Bookmark 1.4.2 Phƣơng pháp sử dụng tập môi trƣờng mở Error! Bookmark not defined 1.4.3 Phƣơng pháp xác định ngƣỡng đau Error! Bookmark not defined 1.4.4 Phƣơng pháp xác định tầm vận động Error! Bookmark not defined 1.5 Sự thay đổi giá trị huyết học mediator viêm thối hóa khớp Error! Bookm 1.5.1 Sự thay đổi bạch cầu viêm 1.5.2 Vai trò cytokin viêm 1.6 Tổng quan sản phẩm nọc ong dự kiến nghiên cứu nghiên cứu ứng dụng chế phẩm chứa nọc ong điều trị bệnh 11 1.6.1 Sản phẩm nọc ong dự kiến nghiên cứu 11 1.6.2 Các nghiên cứu liên quan đến độc tính nọc ong 12 1.6.3 Các nghiên cứu ứng dụng chế phẩm chứa nọc ong điều trị bệnh 13 1.7 Phƣơng pháp thủy châm ứng dụng thủy châm điều trị bệnh Error! Bookm Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Xây dựng mơ hình viêm thối hóa khớp gối động vật thực nghiệm 17 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 17 2.1.2 Phân nhóm nghiên cứu 17 2.1.3 Phƣơng pháp gây viêm thối hóa khớp gối 17 2.1.4 Các tiêu đánh giá 18 2.2 Đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau cải thiện vận động chế phẩm chứa nọc ong 19 2.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.2.2 Hóa chất, phƣơng tiện dụng cụ 20 2.2.3 Phân nhóm nghiên cứu 20 2.2.4 Phƣơng pháp thủy châm điều trị 21 2.2.5 Các tiêu đánh giá 21 2.3 Cách xác định số nghiên cứu 22 2.4 Phân tích số liệu Error! Bookmark not defined Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 28 3.1 Kết gây mơ hình thực nghiệm 28 3.1.1 Nhiệt độ chỗ 28 3.1.2 Ngƣỡng đau 28 3.1.3 Tầm vận động 29 3.1.4 Khả phối hợp vận động chuột 30 3.1.5 Xét nghiệm huyết học cytokin viêm 31 3.1.6 Hình ảnh mô học ổ khớp 34 3.2 Đánh giá tác dụng giảm đau, chống viêm, cải thiện vận động thủy châm chế phẩm chứa nọc ong chuột gây viêm thối hóa khớp 36 3.2.1 Nhiệt độ vùng khớp gối gây thối hóa 36 3.2.2 Ngƣỡng đau trƣớc sau điều trị 38 3.2.3 Sự thay đổi khả vận động 39 3.2.4 Tầm vận động 40 3.2.5 Khả phối hợp vận động 43 3.2.6 Sự thay đổi số lƣợng bạch cầu 45 3.2.7 Sự thay đổi nồng độ cytokin huyết tƣơng 45 3.2.8 Sự thay đổi hình ảnh mô học vùng khớp gối 50 Chƣơng BÀN LUẬN 51 4.1 Về kết mơ hình gây viêm thối hóa khớp gối chuột 51 4.2 Về đánh giá tác dụng chống viêm, giảm đau cải thiện vận động thủy châm chế phẩm chứa nọc ong mơ hình động vật gây viêm thối hóa khớp gối 55 Chƣơng KẾT LUẬN 62 Chƣơng KIẾN NGHỊ 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 65 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các mơ hình gây thối hóa khớp gối Bảng 3.1 Nhiệt độ chỗ nhóm nghiên cứu 28 Bảng 3.2 Ngƣỡng đau hai nhóm nghiên cứu 29 Bảng 3.3 Độ gấp khớp gối chuột nhóm nghiên cứu 29 Bảng 3.4 Độ duỗi khớp gối chuột nhóm nghiên cứu 30 Bảng 3.5 Thời gian chuột rơi xuống tập rotarod 31 Bảng 3.6 Số lƣợng bạch cầu trƣớc sau gây thoái hóa khớp gối 32 Bảng 3.7 Nồng độ TNF-α huyết tƣơng trƣớc sau gây thối hóa 32 Bảng 3.8 Nồng độ IL-1β huyết tƣơng trƣớc sau gây thối hóa 33 Bảng 3.9 Nồng độ IL-10 huyết tƣơng trƣớc sau gây thoái hóa 34 Bảng 3.10 Nhiệt độ trƣớc sau điều trị nhóm nghiên cứu 37 Bảng 3.11 Ngƣỡng đau trƣớc sau điều trị 38 Bảng 3.12 Khả vận động trƣớc sau điều trị 39 Bảng 3.13 Góc duỗi khớp gối trƣớc sau điều trị 40 Bảng 3.14 Góc gấp khớp gối trƣớc sau điều trị 42 Bảng 3.15 Thời gian chuột rơi xuống trƣớc sau điều trị 43 Bảng 3.16 Sự thay đổi số lƣợng bạch cầu trƣớc sau điều trị 45 Bảng 3.17 Sự thay đổi nồng độ TNF-α huyết tƣơng trƣớc sau điều trị 46 Bảng 3.18 Sự khác biệt nồng độ IL-1β huyết tƣơng trƣớc sau điều trị 47 Bảng 3.19 Sự khác biệt nồng độ IL-10 huyết tƣơng trƣớc sau điều trị 49 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 chế phẩm chứa nọc ong nghiên cứu 12 Hình 2.1 Tiêm CFA vào khớp gối chuột 18 Hình 2.2 Lấy máu xét nghiệm Error! Bookmark not defined Hình 2.3 Bộ Kit ELISA TNF-alpha, IL-10, IL-1beta 19 Hình 2.4 Đo nhiệt độ khớp gối 23 Hình 2.5 Đánh giá ngƣỡng đau hệ thống Analgesy-Meter 24 Hình 2.6 Phần mềm Anymaze ghi lại hoạt động chuột 24 Hình 2.7 Đánh giá tầm vận động chuột 25 Hình 3.1, 3.2 Mô học khớp gối sau gây viêm thối hóa 38 Hình 3.3 Hình ảnh khớp gối tổ chức cạnh khớp sau tuần điều trị 50