i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆPVÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN THỊ HUẾ NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN BỘ CHỦNG VI SINH VẬT HỮU HIỆU SỬ DỤNG CHO CÂY CHÈ SHAN (Camellia sinensis Var Shan)[.]
i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆPVÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN THỊ HUẾ NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN BỘ CHỦNG VI SINH VẬT HỮU HIỆU SỬ DỤNG CHO CÂY CHÈ SHAN (Camellia sinensis Var Shan) Ở YÊN BÁI LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI, 2017 ii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM TRẦN THỊ HUẾ NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN BỘ CHỦNG VI SINH VẬT HỮU HIỆU SỬ DỤNG CHO CÂY CHÈ SHAN (Camellia sinensis Var Shan) Ở YÊN BÁI Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Mã số : 62 42 02 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PSG TS Lê Nhƣ Kiểu PSG TS Tống Kim Thuần HÀ NỘI, 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan, số liệu kết nghiên cứu đƣợc trình bày luận án trung thực chƣa đƣợc sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan, giúp đỡ cho việc thực hiên luận án đƣợc cám ơn thông tin trích dẫn luận án đƣợc rõ nguồn gốc Tác giả Trần Thị Huế ii LỜI CẢM ƠN Luận án đƣợc thực Viện Thổ nhƣỡng Nơng hóa – Viện Khoa học Nơng nghiệp Việt Nam Luận án đƣợc hoàn thành nhờ giúp đỡ, hƣớng dẫn tận tình TS Lê Nhƣ Kiểu PGS.TS Tống Kim Thuần, với góp ý Giáo sƣ, Tiến sĩ, nhà khoa học lĩnh vực công nghệ sinh học, vi sinh vật, đất, phân bón, trồng đồng nghiệp Cho phép tơi đƣợc bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc chân thành đến Giáo sƣ, Tiến sĩ, nhà khoa học, bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ tơi q trình thực luận án Nhân dịp này, xin đƣợc gửi lời cảm ơn đến Lãnh đạo Viện Thổ nhƣỡng Nơng hóa, Lãnh đạo Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Học viện Nông nghiệp Việt Nam, Trƣờng Đại học Quốc gia Hà Nội, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung Ƣơng, tạo điều kiện giúp đỡ cho việc hoàn thiện nội dung luận án Cuối cùng, với tất lịng kính trọng biết ơn vô hạn, xin gửi lời cảm ơn tới gia đình ngƣời thân tơi động viên, tạo động lực cho suốt q trình thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng Tác giả Trần Thị Huế năm 2016 iii MỤC LỤC Nội dung TT Trang MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục đích, yêu cầu đề tài 2.1 Mục đích 2.2 Yêu cầu 3 Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 4.1 Ý nghĩa khoa học 4.2 Ý nghĩa thực tiễn Điểm luận án CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU Tình hình sản xuất tiêu thụ chè 1.1 1.1.1 Tình hình sản xuất tiêu thụ chè giới 1.1.2 Tình hình sản xuất tiêu thụ chè Việt Nam 1.2 Tình trạng đất trồng chè 10 1.2.1 Tình trạng đất trồng chè giới 10 1.2.2 Tình trạng đất trồng chè Việt Nam 12 1.3 Đặc điểm phân bố chè Shan 14 1.3.1 Đặc điểm phân bố chè Shan Việt Nam 14 1.3.2 Đặc điểm phân bố chè Shan Yên Bái 17 Nghiên cứu, sử dụng phân vi sinh vật cho chè 19 1.4 1.4.1 Nhu cầu dinh dƣỡng chè 19 1.4.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng phân bón vi sinh vật cho chè giới 22 iv 1.4.3 Tình hình nghiên cứu sử dụng phân bón vi sinh vật cho chè 1.5 Việt Nam 23 Vi sinh vật phân giải phốt phát khó tan 24 1.5.1 Các dạng phốt đất vai trò vi sinh vật vịng tuần hồn phốt 24 1.5.2 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật phân giải phốt phát khó tan nƣớc ngồi 1.5.3 Những nghiên cứu vi sinh vật phân giải phốt phát khó tan Việt Nam 1.6 Vi sinh vật cố định nitơ 28 31 34 1.6.1 Vi khuẩn cố định nitơ tự 34 1.6.2 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật cố định nitơ giới 35 1.6.3 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật cố định nitơ Việt Nam 37 1.7 Vi sinh vật kích thích sinh trƣởng thực vật 1.7.1 IAA - Indole axetic axit 39 39 1.7.2 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật kích thích sinh trƣởng thực vật giới 40 1.7.3 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật kích thích sinh trƣởng thực vật Việt Nam 43 CHƢƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP 2.1 NGHIÊN CỨU 45 Vật liệu nghiên cứu 45 2.1.1 Vật liệu môi trƣờng nghiên cứu phòng 45 2.1.2 Giống chè Shan thí nghiệm 47 2.1.3 Phân bón 47 2.2 Nội dung nghiên cứu 47 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 47 v 2.3.1 Phƣơng pháp đánh giá số đặc điểm lý, hóa học vi sinh vật đất vùng trồng chè Shan Yên Bái 47 2.3.2 Phƣơng pháp phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật hữu ích sử dụng cho chè Shan Yên Bái 50 2.3.3 Phƣơng pháp lựa chọn tổ hợp chủng vi sinh vật sử dụng cho chè Shan Yên Bái 62 2.3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh vật sử dụng cho chè Shan Yên Bái 64 2.3.5 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến sinh trƣởng, phát triển chè Shan SG1 tuổi 2.3.6 Phƣơng pháp xử lý số liệu CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 70 71 Đánh giá số đặc điểm lý, hóa học vi sinh vật đất vùng trồng chè Shan Yên Bái 3.2 67 71 Phân lập, tuyển chọn chủng vi sinh vật hữu hiệu sử dụng cho chè Shan Yên Bái 76 3.2.1 Phân lập chủng vi sinh vật hữu hiệu đất trồng chè Shan Yên Bái 76 3.2.2 Tuyển chọn chủng vi sinh vật hữu hiệu sử dụng cho chè Shan Yên Bái 3.3 81 Nghiên cứu lựa chọn tổ hợp chủng vi sinh vật hữu hiệu sử dụng cho chè Shan Yên Bái 113 3.3.1 Nghiên cứu khả tổ hợp chủng vi sinh vật phƣơng pháp định tính 113 3.3.2 Nghiên cứu khả tổ hợp chủng vi sinh vật phƣơng pháp định lƣợng 114 3.3.3 Đánh giá tác động hỗn hợp chủng vi sinh vật lên sinh lý, sinh hóa sinh trƣởng chè Shan SG1 tuổi 115 vi 3.4 Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh vật sử dụng cho chè Shan Yên Bái 3.4.1 Nghiên cứu điều kiện nhân sinh khối chủng vi sinh vật 121 121 3.4.2 Nghiên cứu lựa chọn chất mang cho sản xuất chế phẩm vi sinh vật 129 3.4.3 Nghiên cứu tỷ lệ phối trộn dịch vi sinh vật với chất mang 130 3.4.4 Sản xuất thử nghiệm chế phẩm vi sinh vật cho chè Shan Yên Bái 131 3.4.5 Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh vật sử dụng cho chè Shan Yên Bái 3.5 132 Nghiên cứu ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến sinh trƣởng, phát triển chè Shan SG1 tuổi 135 3.5.1 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến số lƣợng tế bào vi sinh vật hữu ích đất trồng chè Shan Yên Bái 135 3.5.2 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến thành phần hóa học đất trồng chè Shan Yên Bái 137 3.5.3 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến khả sinh trƣởng chè Shan SG1 tuổi 139 3.5.4 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến tăng trƣởng chiều dài búp chè Shan SG1 tuổi 140 3.5.5 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến diện tích chè Shan SG1 tuổi 141 3.5.6 Ảnh hƣởng chế phẩm Vi sinh vật đến suất yếu tố cấu thành suất chè Shan SG1 tuổi 142 3.5.7 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến tiêu chất lƣợng sản phẩm chè Shan SG1 tuổi 144 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 148 Kết luận 148 Đề nghị 149 vii DANH MỤC CÁC BÀI BÁO ĐƢỢC CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 150 TÀI LIỆU THAM KHẢO 151 Tiếng Việt 151 Tiếng Anh 157 PHỤ LỤC 165 viii DANH MỤC VIẾT TẮT cs Cộng CSDTL Chỉ số diện tích CV% Sai số thí nghiệm FAO Food and Agriculture Organization (Tổ chức Liên hiệp quốc lƣơng thực nông nghiệp) HCVS Hữu vi sinh KHKT Khoa học kỹ thuật LSD0,05 Giới hạn sai khác có ý nghĩa mức tin cậy 95% TCVN Tiêu chuẩn Việt Nam TG Thế giới vk Vi khuẩn VN Việt Nam VSV Vi sinh vật 166 Phụ lục Hình ảnh đánh giá khả phân giải phốt phát chủng vi sinh vật phƣơng pháp Xanh molipdate Mẫu dựng đƣờng chuẩn cho phép phân tích Phân tích mẫu thực Phụ lục Hình ảnh đánh giá khả cố định nitơ tự chủng vi sinh vật phƣơng pháp Nessler Mẫu dựng đƣờng chuẩn cho phép phân tích Phân tích mẫu thực Phụ lục Hình ảnh đánh giá khả sinh IAA chủng vi sinh vật tuyển chọn phƣơng pháp so màu Salkowski Mẫu dựng đƣờng chuẩn cho phép phân tích Phân tích mẫu thực 167 Phụ lục Kết giải trình ADNr 16S chủng vi khuẩn lựa chọn Chủng PFe-1 TGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAACGGTAGCACAGAGAGCT TGCTCTCGGGTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCCGATGGAGGGGG ATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGTGGGGGACCTTCG GGCCTCACACCATCGGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAG GCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGA CTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCC GCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGCGGTGGAGTT AATAACTTCACCGATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGC GGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCT GTCAAGTCGGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTCGAAACTGGCAGGCTAG AGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAAT ACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCA AACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTCCCTTG AGGAGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAA AACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGCAAC GCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCACAGAATTTAGCAGAGATGCTTTGGTGCCTTCGGG AACTGTGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAAATGTTGGGTTAAGTCCC GCAACGAGCGCAACCCTTATCCTTTGTTGCCAGCGGTTCGGCCGGGAACTCAAAGGAGACTGCC AGTGATAAACTGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGAGTAGGGCTA CACACGTGCTACAATGGCGCATACAAAGAGAAGCGACCTCGCGAGAGCAAGCGGACCTCATAA AGTGCGTCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATC GTAGATCAGAATGCTACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGG GAGTGGGTTGCAAAAGAAGTAGGTAGCTTAACCTTCGGGAGGGCGCTTACCACTTTGTGATTCA Trình tự ADNr 16S chủng PFe-1 tƣơng đồng 100% với Enterobacter ludwigii Chủng PAl – CCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAG CTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGG GATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAA AAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACG GCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGAC ACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACG GAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACA AGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGT GCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCT CGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAAC TGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGA TGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAG CGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTG TTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGG TCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTA ATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGAC GTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTT GGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTA AGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTAT GACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGC CAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAAT CGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCG TCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTATGGAGCCAGCCGCCGA AGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGA TCACCTCCTTT Trình tự ADNr 16S chủng PAl-1 tƣơng đồng 100% với Bacillus subtilis 168 Chủng C5 AGAAGCTTGCTTCTATGACTGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCTGTA AGACTGGGATAACTTCGGGAAACCGAAGCTAATACCGGATAGGATCTTCTCCTTCATGGGAATG ATTGAAAGATGGTTTCGGCTATCACTTACAGATGGGCCCGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGG TAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACT GAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTC TGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTAGGGAA GAACAAGTACAAGAGTAACTGCTTGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACT ACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAA GCGCGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGTAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATT GGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGAAAAGCGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCG TAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTTTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCG CGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGC TAAGTGTTAGAGGGTTTCCGCCCTTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGA GTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGT GGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAACTCTAGAGA TAGAGCGTTCCCCTTCGGGGGACAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGT GAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGG GCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATG CCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAAAGGGCTGCAAGACCGCGA GGTCAAGCCAATCCCATAAAACCATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAA GCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACAC ACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGGAGTAACCGTAAGGAGCTA GCCGCCTAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGT Trình tự gen rARN 16S chủng C5 tƣơng đồng 100% với Bacillus megaterium Chủng TS4 GGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAA TACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAG ATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGC CGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCA GCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAG GTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCT TGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGT GGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTG AAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAG AGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGC GACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATAC CCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTG CAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATT GACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTAC CAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGG TGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAAC CCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAG GAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATG GACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCG GATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCG CGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCG AAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAG TCGTAACAAGGTAGCCGTATCGGAAGGTGCGGCTGGGATCACCTCCTTT Trình tự rARN 16S chủng TS4 tƣơng đồng 100% với Bacillus amyloliquefaciens 169 Phụ lục Hình ảnh rễ chè SG1 tuổi trƣớc thí nghiệm Phụ lục Ảnh hƣởng hỗn hợp chủng vi sinh vật đến sinh hóa, sinh trƣởng rễ chè SG1 tuổi Phụ lục Hình ảnh ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến phát triển chè Shan SG1 tuổi 170 Phụ lục Khả phân giải phốt phát sắt phốt phát nhôm chủng vi sinh vật sau ngày ni cấy Nhóm chủng Phốt phát nhơm Phốt phát sắt Canxi Phốt phát Kí hiệu chủng PAl -1 PAl - PAl - PAl - PAl - PFe - PFe - PFe - PFe - PFe - PFe - PFe - PAl -1 PAl - PAl - PAl - PAl - PFe - PFe - PFe - PFe - PFe - PFe - PFe - Độ cao lấy mẫu (m) 1.200 1.200 900 600 600 1.200 900 900 600 600 600 600 1.200 1.200 900 600 600 1.200 900 900 600 600 600 600 Hoạt tính sinh học (mg PO4-/l) Lần Lần Lần 6,04 5,73 2,54 2,57 1,34 5,14 4,89 3,18 1,49 1,58 1,85 3,02 10,48 9,28 5,08 4,57 4,65 9,41 9,35 5,39 3,7 3,17 2,84 5,29 6.1 5,61 2,59 2,43 1,21 5,52 4,84 3,05 1,4 1,52 1,91 3,12 10,4 9,4 5,24 4,52 4,68 9,46 9,26 5,28 3,68 3,26 2,9 5,45 6,12 5,68 2,48 2,48 1,38 5,25 4,94 3,07 1,47 1,57 1,92 3,05 10,37 9,37 5,18 4,64 4,73 9,37 9,41 5,38 3,76 3,11 2,88 5,33 trung bình 6,09 5,67 2,54 2,49 1,31 5,30 4,89 3,10 1,45 1,56 1,89 3,06 10,42 9,35 5,17 4,58 4,69 9,41 9,34 5,35 3,71 3,18 2,87 5,36 171 Phụ lục Khả tổng hợp NH4+ 37 chủng vi sinh vật có hoạt tính cố định nitơ sau ngày nuôi cấy STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Kí hiệu chủng D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 D9 D10 D11 D12 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 C11 C12 C13 C14 C15 C16 C17 Độ cao lấy mẫu (m) 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 900 900 900 900 900 900 900 900 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 600 Hoạt tính cố định nitơ (mgNH4+/l) Lần Lần Lần trung bình 0,65 0,58 0,61 0,61 0,66 0,64 0,64 0,64 1,60 1,65 1,63 1,63 1,44 1,47 1,47 1,46 0,70 0,68 0,67 0,68 0,36 0,41 0,38 0,38 1,52 1,50 1,55 1,52 0,84 0,85 0,86 0,85 1,32 1,32 1,30 1,31 0,20 0,22 0,20 0,20 0,43 0,43 0,44 0,43 2,10 2,04 2,05 2,06 0,64 0,61 0,62 0,62 0,45 0,42 0,44 0,43 1,18 1,22 1,21 1,20 0,70 0,68 0,71 0,70 0,84 0,82 0,82 0,82 1,43 1,44 1,44 1,43 1,27 1,29 1,30 1,28 0,26 0,26 0,24 0,25 1,60 1,61 1,62 1,61 1,11 1,09 1,10 1,10 1,30 1,28 1,32 1,30 0,53 0,52 0,53 0,52 2,24 2,18 2,01 2,14 0,23 0,22 0,24 0,23 0,71 0,70 0,70 0,70 1,42 1,40 1,44 1,42 0,36 0,34 0,35 0,35 1,66 1,66 1,69 1,67 0,28 0,26 0,29 0,28 1,18 1,11 1,15 1,15 1,05 1,01 1,02 1,03 0,27 0,28 0,28 0,27 0,22 0,24 0,25 0,23 1,56 1,58 1,60 1,58 1,08 1,00 1,04 1,04 172 Phụ lục 10 Khả kích thích sinh trƣởng thực vật 16 chủng vi khuẩn sau ngày nuôi STT 10 11 12 13 14 15 16 Kí hiệu chủng TD1 TD2 TD3 TD4 TD5 TD6 TS1 TS2 TS3 TS4 TC1 TC2 TC3 TC4 TC5 TC6 Độ cao lấy mẫu (m) 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 1.200 900 900 900 900 600 600 600 600 600 600 Lần 9,452 6,190 13,841 4,372 6,398 1,282 16,037 8,295 5,660 16,927 8,831 14,325 2,379 10,924 4,427 13,836 Hoạt tính IAA (µg IAA/ml) Lần Lần Trung bình 9,328 9,261 9,347 6,072 6,205 6,156 13,925 13,867 13,878 4,391 4,325 4,363 6,401 6,391 6,397 1,305 1,294 1,294 16,162 16,351 16,183 8,312 8,305 8,304 5,681 5,623 5,655 16,154 16,521 16,534 8,697 8,782 8,770 14,172 14,226 14,241 2,367 2,355 2,367 11,002 10,873 10,933 4,183 4,372 4,327 12,857 13,277 13,323 173 Phụ lục 11 Khả tồn chủng vi sinh vật tổ hợp than bùn khử trùng theo thời gian Ký hiệu chủng PFe - PAl -1 C5 TS4 Mật độ tế bào (x107 CFU/g) Công thức Trƣớc bảo quản Sau tháng Sau tháng Sau tháng L1 L2 L3 TB L1 L2 L3 TB L1 L2 L3 TB L1 L2 L3 TB Đơn lẻ 61 74 70 68 51 63 58 57 32 45 40 39 22,6 20,8 21,5 21,6 Hỗn hợp 67 62 74 68 43 56 53 51 30 37 34 34 9,8 11,5 11,0 10,8 Đơn lẻ 69 61 62 64 58 67 55 60 45 52 40 46 44 45 36 42 Hỗn hợp 70 67 62 66 56 65 60 60 38 42 46 42 37 46 41 41 Đơn lẻ 73 75 68 72 67 70 58 65 60 57 63 60 52 68 60 60 Hỗn hợp 74 67 73 71 54 63 62 60 44 56 50 50 34 44 45 41 Đơn lẻ 75 84 82 80 58 67 53 59 32 37 29 33 18,9 20,4 20,8 20,0 Hỗn hợp 76 83 80 80 48 56 59 54 26 33 35 31 13,0 15,3 13,8 14,0 174 Phụ lục 12 Ảnh hƣởng hai chủng vi khuẩn PAl - PAl - đến số tiêu sinh lý, sinh hóa sinh trƣởng chè SG1 tuổi Công thức ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 Lần nhắc Lần Hàm lƣợng N (%) 1,448 1,527 1,765 1,701 1,542 1,623 Hàm lƣợng P205 (%) 0,190 0,200 0,231 0,208 0,217 0,195 Hàm lƣợng K20 (%) 0,216 0,253 0,271 0,265 0,249 0,253 Chlorophylla (mg/g lá) 0,421 0,388 0,529 0,506 0,478 0,421 Chlorophyllb (mg/g lá) 0,349 0,332 0,572 0,528 0,507 0,492 Tổng diệp lục (mg/g lá) 0,770 0,720 1,101 1,034 0,985 0,913 Carotenoit (mg/g lá) 0,255 0,206 0,339 0,319 0,296 0,281 Chiều cao (cm) 26,800 25,200 28,000 30,000 26,200 27,200 Đƣờng kính thân (cm) 0,350 0,350 0,400 0,400 0,350 0,400 Khối lƣợng chất khô (g/cây) 19,726 18,927 24,478 25,920 21,291 20,934 Lần CT1 (ĐC): Khơng bón phân + 20 ml dịch mơi trường chứa Al - P CT2 : Khơng bón phân + 20 ml dịch vk PAl - chứa 108 CFU/ml CT3: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk PAl - chứa 108 CFU/ml Lần Trung bình 1,512 1,792 1,698 1,496 1,753 1,621 0,197 0,225 0,213 0,196 0,221 0,208 0,234 0,253 0,241 0,234 0,263 0,248 0,409 0,485 0,452 0,406 0,507 0,450 0,393 0,539 0,462 0,358 0,546 0,487 0,802 1,024 0,914 0,764 1,053 0,937 0,219 0,307 0,272 0,227 0,322 0,283 24,700 27,800 28,300 25,567 28,600 27,233 0,400 0,450 0,400 0,367 0,417 0,383 19,379 25,527 22,491 19,344 25,308 21,572 175 Phụ lục 13 Ảnh hƣởng chủng vi khuẩn PFe-1 PFe-2 đến số tiêu sinh lý, sinh hóa sinh trƣởng chè SG1 tuổi Công thức Lần ĐC CT1 CT2 1,528 1,784 1,572 ĐC CT1 CT2 0,192 0,213 0,213 ĐC CT1 CT2 0,211 0,239 0,231 ĐC CT1 CT2 0,419 0,482 0,432 ĐC CT1 CT2 0,461 0,545 0,492 ĐC CT1 CT2 0,880 1,027 0,924 ĐC CT1 CT2 0,205 0,298 0,240 ĐC CT1 CT2 26,000 28,700 28,500 ĐC CT1 CT2 0,350 0,420 0,400 ĐC CT1 CT2 20,829 25,872 22,917 Lần nhắc Lần Lần Hàm lƣợng N (%) 1,413 1,513 1,726 1,742 1,649 1,634 Hàm lƣợng P205 (%) 0,205 0,200 0,226 0,217 0,197 0,208 Hàm lƣợng K20 (%) 0,232 0,218 0,254 0,243 0,223 0,235 Chlorophylla (mg/g lá) 0,392 0,385 0,505 0,511 0,484 0,401 Chlorophyllb (mg/g lá) 0,391 0,402 0,521 0,548 0,490 0,482 Tổng diệp lục (mg/g lá) 0,783 0,787 1,026 1,059 0,974 0,883 Carotenoit (mg/g lá) 0,215 0,193 0,282 0,269 0,262 0,251 Chiều cao (cm) 27,600 27,200 28,400 29,700 27,000 29,300 Đƣờng kính thân (cm) 0,350 0,400 0,400 0,470 0,400 0,380 Khối lƣợng chất khô (g/cây) 18,463 19,051 26,092 24,810 20,984 22,984 Đ/C: Khơng bón phân + 20 ml dịch mơi trường ni cấy CT1: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk PFe - chứa 108 CFU/ml CT2: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk PFe - chứa 108 CFU/ml Trung bình 1,485 1,751 1,618 0,199 0,219 0,206 0,220 0,245 0,230 0,399 0,499 0,439 0,418 0,538 0,488 0,817 1,037 0,927 0,204 0,283 0,251 26,933 28,933 28,267 0,367 0,430 0,393 19,448 25,591 22,295 176 Phụ lục 14 Ảnh hƣởng chủng vi khuẩn D12 C5 đến số tiêu sinh lý, sinh hóa sinh trƣởng chè Shan SG1 tuổi Công thức ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 Lần nhắc Lần Lần Hàm lƣợng N (%) 1,410 1,370 1,300 1,530 1,460 1,590 1,710 1,620 1,760 Hàm lƣợng P205 (%) 0,218 0,197 0,208 0,210 0,210 0,230 0,235 0,223 0,230 Hàm lƣợng K20 (%) 0,255 0,240 0,231 0,259 0,274 0,248 0,283 0,260 0,273 Chlorophylla (mg/g lá) 0,430 0,470 0,405 0,468 0,544 0,483 0,563 0,589 0,513 Chlorophyllb (mg/g lá) 0,369 0,378 0,374 0,427 0,418 0,452 0,491 0,528 0,505 Tổng diệp lục (mg/g lá) 0,799 0,848 0,779 0,895 0,962 0,935 1,054 1,117 1,018 Carotenoit (mg/g lá) 0,215 0,184 0,194 0,227 0,245 0,223 0,275 0,278 0,271 Chiều cao (cm) 24,100 26,800 25,000 26,400 25,200 27,000 27,000 28,700 28,100 Đƣờng kính thân (cm) 0,400 0,350 0,420 0,420 0,350 0,450 0,500 0,450 0,450 Khối lƣợng chất khô (g/cây) 19,321 19,839 19,755 23,582 21,185 22,658 24,098 24,198 24,551 Lần Đ/C: Khơng bón phân + 20 ml dịch môi trường nuôi cấy CT1: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk D12 chứa 108 CFU/ml CT2: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk C5 chứa 108 CFU/ml Trung bình 1,360 1,527 1,697 0,208 0,217 0,229 0,242 0,260 0,272 0,435 0,498 0,555 0,374 0,432 0,508 0,809 0,931 1,063 0,198 0,232 0,275 25,300 26,200 27,933 0,390 0,407 0,467 19,638 22,475 24,282 177 Phụ lục 15 Ảnh hƣởng chủng vi khuẩn TS1 TS4 đến số tiêu sinh lý, sinh hóa sinh trƣởng chè SG1 tuổi Công thức ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 ĐC CT1 CT2 Lần nhắc Lần Lần Hàm lƣợng N (%) 1,428 1,608 1,536 1,821 1,745 1,920 1,940 1,876 1,731 Hàm lƣợng P205 (%) 0,197 0,218 0,203 0,228 0,220 0,235 0,235 0,225 0,231 Hàm lƣợng K20 (%) 0,253 0,268 0,261 0,291 0,312 0,289 0,297 0,292 0,318 Chlorophylla (mg/g lá) 0,493 0,528 0,487 0,561 0,522 0,552 0,570 0,543 0,562 Chlorophyllb (mg/g lá) 0,472 0,488 0,483 0,512 0,493 0,528 0,543 0,544 0,516 Tổng diệp lục (mg/g lá) 0,965 1,016 0,970 1,073 1,015 1,080 1,113 1,087 1,078 Carotenoit (mg/g lá) 0,208 0,228 0,215 0,247 0,236 0,251 0,251 0,248 0,237 Chiều cao (cm) 27,500 29,000 26,500 30,800 31,000 32,400 31,200 33,800 32,400 Đƣờng kính thân (cm) 0,350 0,400 0,350 0,400 0,500 0,500 0,450 0,500 0,500 Khối lƣợng chất khô (g/cây) 19,805 21,053 20,618 27,837 26,542 25,933 27,005 26,527 28,041 Lần Đ/C: Không bón phân + 20 ml dịch mơi trường ni cấy CT1: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk TS1 chứa 108 CFU/ml CT2: Khơng bón phân + 20 ml dịch vk TS4 chứa 108 CFU/ml Trung bình 1,524 1,829 1,849 0,206 0,228 0,230 0,261 0,297 0,302 0,503 0,545 0,558 0,481 0,511 0,534 0,984 1,056 1,093 0,217 0,245 0,245 27,667 31,400 32,467 0.367 0.467 0.483 20,492 26,771 27,191 178 Phụ lục 16 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến sinh trƣởng thân cành chè Shan Suối Giàng tuổi Công thức CT1 (ĐC) CT2 CT3 CT1 (ĐC) CT2 CT3 CT1 (ĐC) CT2 CT3 CT1 (ĐC) CT2 CT3 Lần nhắc Lần Lần Đƣờng kính thân (cm) 3,30 3,83 3,52 3,95 3,96 3,62 Cao (cm) 87,82 84,98 88,73 89,38 94,43 95,38 Rộng tán (cm) 78,62 81,27 85,79 81,53 87,20 88,14 Cành cấp (cành) 18,75 22,36 24,03 23,31 25,71 27,79 CT1(ĐC): 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O CT2: 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O + 15 kg chế phẩm CT3: 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O + 20 kg chế phẩm Lần Trung bình 3,59 3,78 3,86 3,57 3,75 3,81 85,23 90,46 92,67 86,01 89,52 94,16 82,02 82,59 84,23 80,64 83,30 86,52 19,78 24,56 28,93 20,30 23,97 27,48 179 Phụ lục 17 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến hàm lƣợng số chất hóa học búp chè Công thức Lần CT1 (ĐC) CT2 CT3 36,67 37,10 37,00 CT1 (ĐC) CT2 CT3 46,65 46,93 47,30 CT1 (ĐC) CT2 CT3 2,40 2,67 2,63 CT1 (ĐC) CT2 CT3 2,74 2,81 2,87 CT1 (ĐC) CT2 CT3 2,26 2,32 2,34 Lần nhắc Lần Lần Tanin % 37,43 37,02 37,55 36,82 37,45 37,55 Chất hoà tan (%) 47,31 46,50 47,55 47,42 47,21 47,80 Axit amin (%) 2,57 2,45 2,76 2,51 2,86 2,64 Đƣờng khử (%) 2,89 2,77 2,96 2,90 3,16 3,03 Đạm tổng số (%) 2,43 2,37 2,42 2,38 2,47 2,37 CT1(ĐC): 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O CT2: 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O + 15 kg chế phẩm CT3: 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O + 20 kg chế phẩm Trung bình 37,04 37,16 37,33 46,82 47,30 47,44 2,47 2,65 2,71 2,80 2,89 3,02 2,35 2,37 2,39 180 Phụ lục 18 Ảnh hƣởng chế phẩm vi sinh vật đến chất lƣợng cảm quan chè thành phẩm Công thức Lần CT1 (ĐC) CT2 CT3 3,95 4,15 4,30 CT1 (ĐC) CT2 CT3 4,00 4,60 4,85 CT1 (ĐC) CT2 CT3 3,60 4,60 4,65 CT1 (ĐC) CT2 CT3 3,50 4,65 4,75 Lần nhắc Lần Ngoại hình 4,05 4,20 4,27 Màu nƣớc 4,25 4,75 4,90 Mùi 3,65 4,70 4,80 Vị 3,45 4,75 4,80 CT1(ĐC): 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O CT2: 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O + 15 kg chế phẩm CT3: 100 kg N + 40 kg P2O5 + 60 kg K2O + 20 kg chế phẩm Trung bình Lần 4,00 4,30 4,20 4,00 4,22 4,26 4,27 4,63 4,75 4,17 4,66 4,83 3,70 4,65 4,75 3,65 4,65 4,73 3,40 4,80 4,82 3,45 4,73 4,79