Nghiên cứu bào chế liposome berberin ứng dụng dùng đường uống

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DƯƠNG THỊ THUẤN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ LIPOSOME BERBERIN ỨNG DỤNG DÙNG ĐƯỜNG UỐNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2022 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI DƯƠNG THỊ THUẤN NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ LIPOSOME BERBERIN ỨNG DỤNG DÙNG ĐƯỜNG UỐNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH MÃ SỐ : CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC 9720202 Người hướng dẫn khoa học : GS.TS Phạm Thị Minh Huệ GS.TS Jyrki Tapio Heinämäki HÀ NỘI, NĂM 2022 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu phần kết đề tài khoa học công nghệ cấp thành phố Hà Nội mã số 01C- 06/04-2020-3 GS.TS Phạm Thị Minh Huệ chủ nhiệm thư ký khoa học đề tài Các số liệu, kết nêu luận án trung thực chưa khác cơng bố cơng trình Dương Thị Thuấn LỜI CẢM ƠN Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn: GS.TS Phạm Thị Minh Huệ GS.TS Jyrki Tapio Heinämäki Là người thầy nhiệt tình hướng dẫn, định hướng truyền cảm hứng cho để đủ niềm tin sức mạnh đương đầu với thách thức nghiên cứu khoa học suốt thời gian thực luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn PGS.TS Nguyễn Đăng Hòa, TS Nguyễn Trần Linh, TS Trần Thị Hải Yến đóng góp ý kiến quý báu để xây dựng đề cương nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn thầy, cô anh chị kỹ thuật viên môn Bào chế, môn Dược lý, môn Vật lý – Hóa lý, mơn Cơng nghiệp Dược, Viện cơng nghệ dược phẩm Quốc gia - trường Đại học Dược Hà Nội nhiệt tình hỗ trợ tơi q trình thực nghiên cứu Xin cảm ơn GS.TS Ain Raal thầy, cô, nhà nghiên cứu Viện nghiên cứu Dược- Đại học Tartu-Estonia, khoa Y Sinh - trường Đại học Helsinki Phần Lan, Viện Vật lý - Viện hàn lâm khoa học Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi cho để thực thử nghiệm Cảm ơn đồng nghiệp môn Bào chế, khoa Dược trường Đại học Duy Tân tạo điều kiện thuận lợi thời gian để tập trung thực đề tài Xin chân thành cám ơn bạn bè thân thiết bên tôi, động viên cổ vũ tinh thần suốt thời gian lưu trú Hà Nội để thực luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại học Dược Hà Nội thầy phịng Đào tạo Sau đại học quan tâm giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu Cuối cùng, xin cảm ơn thành viên gia đình ln bên cạnh, động viên kịp thời mặt vật chất lẫn tinh thần để tơi vượt qua khó khăn suốt thời gian học tập nghiên cứu Hà Nội, năm 2022 Dương Thị Thuấn MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN DANH MỤC ĐỒ THỊ, HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN .3 1.1 BERBERIN 1.1.1 Nguồn gốc .3 1.1.2 Công thức 1.1.3 Tính chất lý hóa .3 1.1.4 Định tính định lượng 1.1.5 Độ ổn định .4 1.1.6 Tác dụng dược lý 1.1.7 Sinh khả dụng 1.2 LIPOSOME 1.2.1 Khái niệm, thành phần cấu tạo 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Ưu, nhược điểm liposome 10 1.2.4 Phương pháp bào chế liposome 12 1.2.5 Phương pháp đánh giá 13 1.2.6 Một số thách thức biện pháp khắc phục bào chế liposome dùng đường uống 17 1.3 PROLIPOSOME 21 1.3.1 Khái niệm 21 1.3.2 Thành phần 21 1.3.3 Phương pháp bào chế 21 1.3.4 Đánh giá proliposome 22 1.3.5 Một số nghiên cứu proliposome dùng đường uống 24 1.4.1 Các nghiên cứu bào chế liposome berberin 25 1.4.2 Các nghiên cứu bào chế proliposome berberin 26 1.5 CÁC NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VÀ TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU IN-VIVO CỦA BERBERIN, LIPOSOME BERBERIN VÀ PROLIPOSOME BERBERIN DÙNG ĐƯỜNG UỐNG 26 1.5.1 Đánh giá sinh khả dụng in-vivo dùng đường uống berberin .26 1.5.2 Đánh giá sinh khả dụng in-vivo đường uống liposome berberin proliposome berberin 29 1.5.3 Mơ hình đánh giá tác dụng hạ lipid máu nội sinh berberin động vật thực nghiệm 29 Chương NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 31 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ, ĐỘNG VẬT NGHIÊN CỨU 31 2.1.1 Nguyên vật liệu 31 2.1.2 Thiết bị 32 2.1.3 Động vật thí nghiệm 34 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 34 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 35 2.3.1 Thẩm định phương pháp định lượng 35 2.3.2 Phương pháp nghiên cứu tiền công thức .43 2.3.3 Phương pháp bào chế liposome berberin 45 2.3.4 Phương pháp bào chế proliposome berberin .46 2.3.5 Phương pháp đánh giá số đặc tính liposome BBR 46 2.3.6 Phương pháp đánh giá số đặc tính proliposome BBR 49 2.3.7 Đánh giá sinh khả dụng in-vivo liposome BBR chuột cống 53 2.3.8 Đánh giá tác dụng hạ lipid máu nội sinh liposome BBR chuột nhắt 54 2.3.9 Phương pháp xử lý số liệu 55 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 56 3.1 KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG .56 3.1.1 Thẩm định khoảng nồng độ tuyến tính phương pháp định lượng berberin quang phổ hấp thụ UV-Vis 56 3.1.2 Thẩm định phương pháp định lượng berberin HPLC 57 3.1.3 Thẩm định phương pháp định lượng berberin huyết tương chuột sắc ký lỏng kết hợp khối phổ (LC-MS/MS) .58 3.2 NGHIÊN CỨU TIỀN CÔNG THỨC 63 3.2.1 Kết đánh giá số đặc tính dược chất 63 3.2.2 Kết nghiên cứu tương tác dược chất với tá dược 65 3.3 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ LIPOSOME BERBERIN 66 3.3.1 Thiết kế công thức .66 3.3.2 Bào chế liposome berberin phương pháp tiêm ethanol 67 3.3.3 Bào chế liposome berberin phương pháp hydrat hóa film 74 3.3.4 So sánh ảnh hưởng phương pháp bào chế lên đặc tính liposome berberin 79 3.4 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ PROLIPOSOME BERBERIN 87 3.4.1 Xác định số thơng số quy trình lựa chọn công thức bào chế proliposome berberin 88 3.4.2 Đánh giá ảnh hưởng số yếu tố công thức thơng số quy trình đến đặc tính proliposome berberin 89 3.4.3 Đánh giá số đặc tính proliposome berberin 94 3.4.4 Xây dựng cơng thức quy trình bào chế proliposome berberin quy mơ phịng thí nghiệm 103 3.4.5 Nghiên cứu nâng cấp quy mô bào chế proliposome berberin 200 g/mẻ 105 3.4.6 Nghiên cứu độ ổn định proliposome berberin 111 3.5 ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG IN VIVO CỦA LIPOSOME BERBERIN 116 3.6 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU NỘI SINH CỦA LIPOSOME BERBERIN 121 3.6.1 So sánh ảnh hưởng nồng độ cholesterol toàn phần huyết liposome BBR hỗn dịch quy ước BBR chuột gây tăng lipid máu nội sinh 121 3.6.2 So sánh ảnh hưởng liposome berberin hỗn dịch quy ước berberin nồng độ cholesterol tỉ trọng thấp chuột gây tăng lipid máu nội sinh 123 3.6.3 So sánh ảnh hưởng liposome berberin hỗn dịch quy ước berberin nồng độ cholesterol tỉ trọng cao chuột gây tăng lipid máu nội sinh 124 3.6.4 So sánh ảnh hưởng liposome berberin hỗn dịch quy ước berberin nồng độ triglycerid chuột gây tăng lipid máu nội sinh 125 Chương BÀN LUẬN .127 4.1 VỀ NGHIÊN CỨU TIỀN CÔNG THỨC 127 4.2 VỀ BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ LIPOSOME BERBERIN 128 4.2.1 Yếu tố công thức .128 4.2.3 Phương pháp bào chế 133 4.2.4 Phương pháp đánh giá .134 4.3 VỀ BÀO CHẾ VÀ ĐÁNH GIÁ PROLIPOSOME BERBERIN 139 4.3.1 Yếu tố công thức .139 4.3.2 Về phương pháp bào chế 140 4.3.3 Về thông số quy trình bào chế độ ổn định proliposome berberin .140 4.3.4 Về phương pháp đánh giá 142 4.4 VỀ ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG IN VIVO CỦA LIPOSOME BERBERIN 147 4.4.1 Phương pháp đánh giá .147 4.4.2 Kết đánh giá 149 4.5 VỀ TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU NỘI SINH CỦA LIPOSOME BERBERIN 150 4.5.1 Mơ hình dược lý, đối tượng thử liều thử 150 4.5.2 Chứng dương .151 4.5.3 Mẫu đối chiếu kết đánh giá 151 4.6 ĐÓNG GÓP MỚI CỦA ĐỀ TÀI 153 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 154 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ 156 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt AFM AUC BBR Cho CI CLSM Cmax Cryo-EM CV DDAB DLS DMPG DOPE DQAPEG2000DSPE DSPC DSPE DSPG ĐV EE EMA EPC ESI FDA FTIR GUV HDL-C HEPC HSPC KTTP Chữ viết đầy đủ Atomic force microscopy (Kính hiển vi lực nguyên tử) Area under the curve (Diện tích đường cong) Berberin Cholesterol Confidence interval (Khoảng tin cậy) Confocal laser scanning microscopy (Kính hiển vi quét lase đồng tiêu) Nồng độ đỉnh huyết tương Cryogenic electron microscopy (Kính hiển vi điện tử đông lạnh) Coefficient variation (Hệ số tương quan) Didodecyldimethylammonium bromid Dynamic light scattering (Nhiễu xạ ánh sáng động) Dimyristoyl phosphatidylglycerol Dioleyl phosphatidyl ethanolamin Dequalinium and carboxyl polyethylen glycoldistearoylphosphatidylethanolamin Distearoyl phosphatidylcholin Distearoyl phosphatidyl ethanolamin Distearoyl phosphatidylglycerol Động vật Entrapment efficency (Hiệu suất nạp) European Medicines Agency (Cơ quan Y tế Châu Âu) Egg phosphatidylcholin Electrospray ionazation (Ion hóa phun điện trường) Food and Drug Administration (Cục quản lý thực phẩm dược phẩm Hoa Kỳ) Fourier transform infrared spectroscopy (Phổ hồng ngoại Fourier) Giant unilamelar vesicle (Liposome lớp khổng lồ) High density lipoprotein cholesterol (Cholesterol tỉ trọng cao) Hydrogenated egg phosphatidylcholin Hydrogenated soy phosphatidylcholin Kích thước tiểu phân