Đang tải... (xem toàn văn)
Duong Thi Lien c ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ LIÊN Tên đề tài NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY NHÂN SÂM (Panax ginseng C A Meyer) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGH[.]
c ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ LIÊN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY NHÂN SÂM (Panax ginseng C.A Meyer) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 - 2014 Thái Nguyên, năm 2014 n ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM DƯƠNG THỊ LIÊN Tên đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG CÂY NHÂN SÂM (Panax ginseng C.A Meyer) BẰNG PHƯƠNG PHÁP IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2010 - 2014 Giảng viên hướng dẫn : ThS Nguyễn Thị Tình Khoa CNSH - CNTP - Đại học Nơng Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2014 n LỜI CẢM ƠN Được trí Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm em tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu khả nhân giống Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) phương pháp in vitro” Qua thời gian làm việc phịng ni cấy mơ Khoa Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm đến em hoàn thành đề tài Để đạt kết ngày hôm em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa thầy cô giáo môn tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: ThS Nguyễn Thị Tình tận tình bảo, hướng dẫn em trình học tập thực đề tài Cuối cùng, em xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lịng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần để em hồn thành đề tài Do thời gian thực đề tài có hạn nên đề tài khơng tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp ý kiến thầy cô bạn để đề tài em hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn ! Thái Nguyên, ngày 05 tháng 06 năm 2014 Sinh viên thực Dương Thị Liên n DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1: Kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau ngày nuôi cấy) 26 Bảng 4.2: Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 20 ngày nuôi cấy) 29 Bảng 4.3: Kết ảnh hưởng nồng độ BA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 32 Bảng 4.4: Kết ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.5: Kết ảnh hưởng nồng độ BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 41 Bảng 4.7: Kết ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau 30 ngày nuôi cấy) 44 Bảng 4.8: Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau nuôi cấy mô vườn ươm (sau 30 ngày theo dõi) 49 n DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1: Sơ đồ q trình phân hố phản phân hố tế bào thực vật Hình 4.1: Biểu đồ kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) (sau ngày nuôi cấy) 27 Hình 4.2.a: Tỷ lệ tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường MS, B5, WPM (sau 20 ngày ni cấy) 29 Hình 4.2.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 20 ngày nuôi cấy môi trường MS, B5, WPM 30 Hình 4.3.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung nồng độ BA khác 32 Hình 4.3.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung BA (sau 30 ngày nuôi cấy) nồng độ khác 33 Hình 4.4.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung Kinetin 35 Hình 4.4.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) nuôi cấy nồng độ Kinetin khác sau 30 ngày 36 Hình 4.5.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA (sau 30 ngày nuôi cấy) 39 Hình 4.5.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng CA Meyer) môi trường kết hợp BA (0,5mg/l) với nồng độ IBA, NAA IAA sau 30 ngày nuôi cấy 39 Hình 4.6.a: Hệ số nhân chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung hàm lượng nước dừa (sau 30 ngày nuôi cấy) 42 n Hình 4.6.b: Chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) môi trường bổ sung hàm lượng nước dừa khác (sau 30 ngày nuôi cấy) 42 Hình 4.7.a: Số rễ trung bình tạo thành từ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày nuôi cấy môi trường bổ sung NAA than hoạt tính 45 Hình 4.7.b: Chất lượng rễ tạo thành từ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) bổ sung NAA than hoạt tính vào mơi trường ni cấy sau 30 ngày 46 Hình 4.8.a: Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm (sau 30 ngày theo dõi) 49 Hình 4.8.b: Cây Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) sau 30 ngày trồng giá thể khác 50 n DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT AND : Acid deoxyribonucleic B1 : Thiamin HCl B3 : Nicotinic acid B5 : Gamborg’s B6 : Pyridoxine HCl BA : 6-Benzyladenin CV : Coefficient of Variation Đ/C : Đối chứng IAA : Indol-3- axetic acid Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Significant Difference Test MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphthalene axetic acid CT : Công thức WPM : Woody Plant Medium IBA : Indol-3- butyric acid THT : Than hoạt tính Cồn : C2H5OH HSN : Hệ số nhân TLMSKN : Tỷ lệ mẫu sống không nhiễm Số rễ TB/cây : Số rễ trung bình/cây n MỤC LỤC Trang PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích đề tài 1.2.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu Nhân Sâm 2.1.1 Nguồn gốc, phân loại phân bố Nhân Sâm 2.1.2 Đặc điểm hình thái Nhân Sâm 2.1.3 Đặc điểm thích nghi 2.1.4 Thành phần hóa học 2.1.5 Công dụng Nhân Sâm 2.2 Khái quát nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3 Các giai đoạn nhân giống in vitro 2.4 Các chất điều hòa sinh trưởng nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.4.1 Auxin 10 2.4.2 Cytokinin 11 2.5 Tình hình nghiên cứu Nhân Sâm giới nước 12 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 12 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 13 PHẦN 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 16 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 3.1.2 Phạm vi nghiên cứu 16 n 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 16 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng 16 3.3.1 Hóa chất 16 3.3.2 Thiết bị 17 3.4 Nội dung phương pháp nghiên cứu 17 3.4.1 Nội dung nghiên cứu 17 3.4.2 Phương pháp nghiên cứu nội dung 18 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 4.1 Kết ảnh hưởng phương pháp khử trùng đến khả tạo vật liệu nấm vi khuẩn từ đoạn thân Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 26 4.2 Kết ảnh hưởng môi trường MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 28 4.3 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nước dừa tới khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 30 4.3.1 Kết ảnh hưởng nồng độ BA Kinetin đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 31 4.3.2 Kết ảnh hưởng nồng độ BA (0,5mg/l) kết hợp với nồng độ IBA, NAA IAA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 37 4.3.3 Kết ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 41 4.4 Kết ảnh hưởng nồng độ NAA than hoạt tính đến khả rễ chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) 43 4.5 Kết ảnh hưởng số loại giá thể đến khả sinh trưởng phát triển Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) giai đoạn sau ni cấy mơ ngồi vườn ươm 48 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 n PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nhân Sâm có tên khoa học Panax ginseng C.A Meyer loại dược thảo quý hiếm, Nhân Sâm có chứa hàm lượng saponin triterpen cao, đặc biệt nhóm dammaran với hợp chất saponin mà đại diện ginsenosides Rb1, Rb2, Rh2, Rg1, Rg3 [48] Nhân Sâm có vai trị quan trọng cung cấp nguyên liệu cho ngành dược liệu, mỹ phẩm, thực phẩm chức Theo nghiên cứu khoa học, ngồi tác dụng bổ dưỡng Nhân Sâm cịn nhiều tác dụng đáng ghi nhận như: ngăn chặn trình lão hóa, kích thích hoạt động não, tăng cường chức hệ thống miễn dịch, chống oxy hóa, chống stress, chống viêm, kháng khuẩn, chống khối u [27], [41], giảm lượng glucose - kích thích tiết insulin tế bào B [42], chống trầm cảm, bảo vệ gan, giảm cholesterol lipit máu, điều hòa tim mạch [6] Chính vậy, Nhân Sâm dùng phổ biến Tuy nhiên, Nhân Sâm có thời gian sinh trưởng dài, phạm vi phân bố hẹp bị khai thác mức Phương pháp nhân giống truyền thống hạt, đầu mầm thân rễ hiệu không cao, tỷ lệ nảy mầm hạt kém, thường xảy biến dị gây khó khăn cho việc phát triển diện tích trồng trọt, khơng đáp ứng đủ nhu cầu sử dụng thị trường [5], [11] Ngoài ra, việc điều khiển loại dịch bệnh, kháng loại thuốc trừ sâu vấn đề nghiêm trọng [18] Do đó, phương pháp ni cấy mơ tế bào phương pháp hiệu để nhân giống, sản xuất số lượng lớn giống mà đảm bảo chất lượng giống bệnh, đồng mặt di truyền, đồng thời khắc phục nhược điểm phương pháp nhân giống truyền thống [23] Nhận thức vấn đề bảo tồn phát triển loài dược liệu quý nên tiến hành đề tài: “Nghiên cứu khả nhân giống Nhân Sâm (Panax ginseng C.A Meyer) phương pháp in vitro” n ... ngh? ?a khoa h? ?c - Kết nghiên c? ??u đề tài đ? ?a kỹ thuật nhân giống Nhân Sâm (Panax ginseng C. A Meyer) phương pháp in vitro Đánh giá t? ?c động số chất kích thích sinh trưởng nhân giống Nhân Sâm (Panax. .. độ IBA, NAA IAA đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C. A Meyer) (sau 30 ngày nuôi c? ??y) 38 Bảng 4.6: Kết ảnh hưởng hàm lượng nư? ?c d? ?a đến khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng. .. MS, B5 WPM đến khả tái sinh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C. A Meyer) 28 4.3 Kết ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng nư? ?c d? ?a tới khả nhân nhanh chồi Nhân Sâm (Panax ginseng C. A Meyer) 30 4.3.1