Đang tải... (xem toàn văn)
Luận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk LăkLuận văn thạc sĩ: Nghiên cứu vi sinh vật nội sinh đối kháng nấm gây bệnh thực vật trên cây Hồ tiêu tại Đăk Lăk
1 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Hoàn NGHIÊN CỨU VI SINH VẬT NỘI SINH ĐỐI KHÁNG NẤM GÂY BỆNH THỰC VẬT TRÊN CÂY HỒ TIÊU Ở ĐẮK LẮK LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội- 2019 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Hoàn NGHIÊN CỨU VI SINH VẬT NỘI SINH ĐỐI KHÁNG NẤM GÂY BỆNH THỰC VẬT TRÊN CÂY HỒ TIÊU Ở ĐẮK LẮK Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 842 0114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Lê Gia Hy Hà Nội- tháng năm 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan viết luận văn tìm tịi, học hỏi thân hướng dẫn tận tình PGS.TS Lê Gia Hy ThS NCS Vũ Thị Hạnh Nguyên Mọi kết nghiên cứu ý tưởng tác giả khác, có trích dẫn cụ thể Đề tài luận văn chưa bảo vệ hội đồng bảo vệ luận văn thạc sĩ chưa công bố phương tiện Tôi xin chịu trách nhiệm lời cam đoan Hà Nội, ngày 19 tháng 04 năm 2019 Người cam đoan Nguyễn Thị Hồn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới PGS TS Lê Gia Hy ThS NCS Vũ Thị Hạnh Nguyên trực tiếp định hướng, tận tình hướng dẫn tơi hồn thành luận văn Tôi xin cảm ơn động viên giúp đỡ bảo tận tình anh chị Phịng Cơng nghệ lên men, Viện Cơng nghệ sinh học, tạo điều kiện điều kiện thuận lợi giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin trân gửi lời cảm ơn tới ban lãnh đạo thầy cô giáo trường Khoa Công nghệ sinh học, Học viện Khoa học Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam truyền đạt kiến thức giúp đỡ tơi suốt q trình học tập thực luận văn Cuối xin bày tỏ lịng biêt ơn đến gia đình, người thân, bạn bè đồng nghiệp – người ln động viên, tạo điều kiện cho tơi hồn thành khóa học Học viên Nguyễn Thị Hồn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung DNA Axit deoxyribonucleic KB King’B RI Relative inhibition (Phần trăm ức chế tăng trưởng sợi nấm) RPM Revolutions per minute (Tốc độ lắc vòng/phút) v/v Đơn vị thể tích/thể tích VKNS Vi khuẩn nội sinh VSVNS Vi sinh vật nội sinh VSV Vi sinh vật w/v Đơn vị khối lượng/thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tiêu đề Trang 1.1 Các tác nhân gây bệnh gây bênh chết nhanh, chết chậm thán thư hồ tiêu 2.1 Trình tự cặp mồi sử dụng phản ứng PCR khuếch đại gen 16S rDNA 27 3.1 Kết phân lập vi sinh vật nội sinh từ mẫu rễ, thân, hồ tiêu Đắk Lắk 30 3.2 Số lượng chủng phân lập môi trường khác 33 3.3 Khả kháng nấm gây bệnh vi khuẩn nội sinh hồ tiêu 33 3.4 Khả kháng nấm hồ tiêu chủng nội sinh hồ tiêu Đắk Lắk 37 3.5 Khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn nội sinh hồ tiêu Đắk Lắk 38 3.6 Ảnh hưởng nồng độ NaCl, nhiệt độ, pH đến khả phát triển chủng HDL34 40 3.7 Khả đồng hóa nguồn carbon nitơ chủng HDL3 41 3.8 Phân tích trình tự gen 16S rDNA chủng HDL34 42 3.9 Ảnh hường nguồn cacbon nitơ đến khả sinh chất kháng sinh chủng HDL34 44 3.10 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp chất kháng khuẩn chủng HDL34 45 3.11 Ảnh hưởng tỷ lệ tiếp giống đến khả sinh tổng hợp chất kháng khuẩn chủng HDL34 nội sinh 46 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Tiêu đề Hình Trang 1.1 Cây hồ tiêu 1.2 Hình dạng khuẩn lạc (A) bào tử nấm (B) nấm Fussarium gây bệnh hồ tiêu 1.3 Bệnh thối rễ hồ tiêu nấm Phytophthora 1.4 Nấm Phytophthora công dây lươn hồ tiêu 3.1 Vi sinh vật nội sinh theo vị trí phân lập hồ tiêu 31 3.2 Khả kháng nấm gây bệnh vi sinh vật nội sinh phân lập 35 3.3 Khả đối kháng nấm gây bệnh chủng vi sinh vật nội sinh hồ tiêu 37 3.4 Khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn nội sinh 38 3.5 Ảnh nhuộm Gram chủng HDL34 (A) hình ảnh khuẩn lạc chủng HDL34 (B) môi trường MPA 39 3.6 Điện di đồ sản phẩm PCR khuếch đại gen 16S rDNA gel agarose 1,0% 42 3.7 Khả kháng nấm bệnh chủng HDL34 môi trường khác 43 3.8 Ảnh hưởng độ thơng khí đến khả sinh tổng hợp chất kháng nấm chủng HDL34 46 3.9 Khả kháng nấm bệnh P capsici VTN chủng HDL34 47 MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY HỒ TIÊU, BỆNH NẤM TRÊN CÂY HỒ TIÊU 1.1.1 Cây hồ tiêu tiềm phát triển hồ tiêu Việt 1.1.2 Hiện trạng canh tác trồng hồ tiêu Đăk Lăk 1.1.3 Bệnh ảnh hưởng bệnh nấm trồng 1.1.4 Khả đối kháng vi sinh vật nấm gây bệnh thực vật 1.1.5 Các loại bệnh gây hại hồ tiêu biện pháp phòng chống Tây Nguyên 1.1.6 Nghiên cứu sử dụng vi sinh vật đối kháng đấu tranh sinh học phòng chống bệnh cho trồng 13 1.2 VI SINH VẬT NỘI SINH TRÊN CÂY HỒ TIÊU VÀ KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KHÁNG NẤM GÂY BỆNH THỰC VẬT 16 1.2.1 Vi sinh vật nội sinh (endophylic microorganisms) hồ tiêu 16 1.2.2 Sự đa dạng vi sinh vật nội sinh kháng nấm gây bệnh hồ tiêu 16 1.2.3 Khả ứng dụng vi sinh vật nội sinh phòng chống nấm gây bệnh hồ tiêu 18 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ VI SINH VẬT NỘI SINH VÀ ỨNG DỤNG TRONG PHÒNG TRỪ NẤM GÂY BỆNH CÂY HỒ TIÊU Ở VIỆT NAM 18 Nam 1.3.1 Nghiên cứu bệnh gây hại hồ tiêu 18 1.3.2 Biện pháp phòng trừ bệnh hồ tiêu biện pháp sinh học 20 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 22 2.1.1 Các mẫu hồ tiêu chủng giống vi sinh vật kiểm 22 2.1.2 Hóa chất thiết bị 22 2.1.3 Môi trường nuôi cấy 23 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 định 2.2.1 Phương pháp thu mẫu 23 2.2.2 Khử trùng bề mặt phân lập vi sinh vật nội sinh 24 2.2.3 Phương pháp phân lập vi sinh vật nội sinh 24 2.2.4 Xác định hoạt tính đối kháng chủng vi sinh vật nội sinh với nấm bệnh 24 2.2.5 Xác định khả ức chế nấm bệnh dịch lọc vi sinh vật nội sinh 25 2.2.6 Đánh giá hoạt tính kháng nấm bệnh 2.2.7 Nghiên cứu đặc điểm sinh học định danh chủng lựa chọn 25 26 2.2.8 Đánh giá khả sinh enzyme ngoại bào 27 2.2.9 Lựa chọn môi trường điều kiện nnuooi cấy thích hợp 28 2.2.10 Thử nghiệm khả phòng trừ nấm Phytophthora capsici 28 2.2.11 Xử lý số liệu 29 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 ĐÁNH GIÁ SỰ ĐA DẠNG VI SINH VẬT NỘI SINH CĨ 30 HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY HỒ TIÊU Ở ĐĂK LĂK 3.1.1 Kết phân lập chủng vi sinh vật nội sinh từ mẫu hồ tiêu 30 3.1.2 Sơ phân nhóm vi sinh vật nội sinh hồ tiêu phân lập 31 3.1.3 Phân bố vi sinh vật nội sinh theo môi trường phân lập 32 3.1.4 Khả đối kháng với nấm gây bệnh hồ tiêu nhóm vi sinh vật phân lập 33 3.2 TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG VI SINH VẬT NỘI SINH CÓ KHẢ NĂNG DIỆT NẤM GÂY BỆNH TRÊN CÂY HỒ TIÊU CAO Ở ĐẮK LẮK 36 3.2.1 Hoạt tính đối kháng nấm gây bệnh hồ tiêu chủng vi khuẩn nội sinh phân lập từ hồ tiêu tỉnh Đắk Lắk 36 3.2.2 Khả sinh enzyme ngoại bào chủng vi khuẩn nội sinh phân lập từ hồ tiêu tỉnh Đắk Lắk 37 3.3 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC, PHÂN LOẠI VÀ AN TOÀN SINH HỌC CỦA CHỦNG HDL34 39 3.3.1 Đặc điểm sinh học 3.3.2 Phân loại chủng HDL34 dựa phân tích trình tự gen 16S rDNA 3.3.3 Độ an toàn sinh học chủng HDL34 3.4 NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY VÀ THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM CỦA CÁC CHỦNG CHỦNG HDL34 39 41 42 43 ... 1.2 VI SINH VẬT NỘI SINH TRÊN CÂY HỒ TIÊU VÀ KHẢ NĂNG ỨNG DỤNG KHÁNG NẤM GÂY BỆNH THỰC VẬT 16 1.2.1 Vi sinh vật nội sinh (endophylic microorganisms) hồ tiêu 16 1.2.2 Sự đa dạng vi sinh vật nội sinh. .. CÂY HỒ TIÊU, BỆNH NẤM TRÊN CÂY HỒ TIÊU 1.1.1 Cây hồ tiêu tiềm phát triển hồ tiêu Vi? ??t 1.1.2 Hiện trạng canh tác trồng hồ tiêu Đăk Lăk 1.1.3 Bệnh ảnh hưởng bệnh nấm trồng 1.1.4 Khả đối kháng vi. .. sinh kháng nấm gây bệnh hồ tiêu 16 1.2.3 Khả ứng dụng vi sinh vật nội sinh phòng chống nấm gây bệnh hồ tiêu 18 1.3 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ VI SINH VẬT NỘI SINH VÀ ỨNG DỤNG TRONG PHÒNG TRỪ NẤM GÂY